Orientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Gisela Rita Monteiro Marques / Banca: Antonio Luiz Caldas Júnior / Banca: Wanderlei Pedro Tadei / Banca: Maria Anice Sallun Mured / Resumo: A necessidade de se controlar dengue com uso de inseticidas tem acarretado o desenvolvimento de resistência aos produtos mais utilizados em âmbito mundial. No Brasil, o Ministério da Saúde monitora anualmente o nível de susceptibilidade de populações de Aedes aegypti aos inseticidas. Este estudo objetivou analisar os dados disponíveis para o estado de São Paulo visando avaliar não só o impacto das estratégias de manejo adotadas nos níveis de resistência das populações, mas também o papel de resistência metabólica como um mecanismo da resistência detectada em larvas. Foram analisados os dados do período de 1996 a 2009, relativos à caracterização biológica da resistência de larvas e insetos adultos e os resultados de provas de efetividade em campo. Para avaliação do papel atividade de enzimas metabólicas na resistência observada em larvas, foi feito um experimento em laboratório com medida de atividade enzimática durante o processo de incremento da resistência em população originada do campo. Os dados foram confrontados com os resultados da atividade enzimática das populações de campo. Os dados do Programa de Monitoramento demonstraram ao longo do tempo um aumento do número de populações resistentes ao principal larvicida utilizado (temephos); que a resistência a adulticidas da classe dos piretróides é disseminada em todo o estado desde 2000 e que há comprometimento do controle em campo nas populações resistentes. Enzimas do grupo das esterases foram caracterizadas como envolvidas no mecanismo de resistência a temephos, embora tenham sido caracterizadas alterações em outras classes de enzimas em populações resistentes dificultando a interpretação pontual de atividade enzimática. A caracterização do vínculo genético apontou para um baixo fluxo gênico entre as populações justificando a manutenção da avaliação e manejo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The need to control dengue transmission with insecticides has led to the development of resistance to the most used products all over the world. In Brazil the Ministry of Health monitors annually the level of susceptibility of Aedes aegypti populations to insecticides. This study aimed to evaluate data from São Paulo State in order to evaluate the impact of management of resistance on resistance levels in vector populations and also evaluate the role of metabolic enzymes on larval resistance to temephos. Data of larval and adults resistance from 1996 to 2009 were analyzed together with field efficacy tests response. In order to evaluate the role of metabolic enzymes on resistance of larvae to temephos, an experiment for increasing resistance and measurement of enzyme activity were compared with enzyme profile from field populations. Results showed, along the period, a decrease in susceptibility to the temephos-based larvicide in all populations; resistance to pyrethroids, observed in adult stage, was disseminated in the state since 2000 and that in resistance impacts on field activities. Enzymes from the esterase class were involved on temephos resistance of larvae, although other classes of enzymes show alterations in resistant populations making it difficult the interpretation of enzyme activity on single population. The characterization of the genetic link pointed to a low gene flow among populations. This justifies the maintenance of the assessment and management of sentinel regardless of their geographical origin. The study concludes that there is a general trend for loosing susceptibility of Aedes aegypti to the most used insecticides. To date management strategies adopted were not enough to avoid this process. There is impact of field control on "resistant" populations showing that management should be trigged on populations with "Decreased Susceptibility" status. Insecticide use self imitating tool which should de preserved / Doutor

Orientador: Paulo Eduardo Marins Ribolla / Banca: Sérgio Luiz Bessa Luz / Banca: Maria Anice Mured Sallum / Banca: Sérgio Russo Matioli / Banca: Denise Selivon Schepmaker / Resumo: Aedes aegypti é o principal vetor dos vírus dengue e representa cada vez mais um problema de saúde pública. O uso de inseticidas de origem orgânica ou inorgânica é uma das metodologias mais adotadas como parte do controle de vetores, entretanto, processos de resistência têm sido detectados freqüentemente. O desenvolvimento de ferramentas moleculares tem facilitado o entendimento das relações entre o vetor, patógeno e o homem. Os marcadores genéticos mais utilizados em estudos de genética de populações geralmente representam um trabalho laboratorial intenso e, em alguns casos, são limitados pela quantidade de DNA genômico extraído por indivíduo. Recentemente, a tecnologia disponível, permitiu o desenvolvimento dos marcadores SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) que correspondem a diferenças de um único nucleotídeo na seqüência de DNA. Assim, o presente trabalho objetivou desenvolver marcadores SNPs localizados em genes nucleares, do mosquito Ae. aegypti, para aplicação na genotipagem de populações deste vetor no Brasil. Para tanto, foram investigada seqüencias em dezoito genes nucleares de dezesseis populações do Ae. aegypti, e nove destes genes foram selecionados para a presença de SNPs. Os oito marcadores mais polimórficos foram utilizados na caracterização de três populações do mosquito anteriormente analisadas utilizando-se as técnicas de RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) e seqüenciamento de genes mitocondriais. Os resultados obtidos com os SNPs mostraram um alto grau de polimorfismo intra e inter populacional, mais significativo quando comparado com os estudos realizados anteriormente, além da presença de duas diferentes linhagens genéticas entre as populações geográficas estudadas. / Abstract: Aedes aegypti is the primary vector of dengue fever virus and it represents a major problem of Public Health. The use of insecticides of organic or inorganic origin is one of the more accepted methodologies as part of this control, however, resistance processes have been detected constantly. The development of molecular tools has made possible the understanding of the relationships among vector, pathogen and man. The genetic markers more used in studies of genetics populations usually represent an intense laboratorial work and in some cases they are limited for the amount of genomic DNA extracted by individual. Recently, the available technology, allowed the development of the markers SNPs (Single Nucleotide Polymorphism) that correspond to differences of a single nucleotide in the sequence of DNA. Thus, this work aims to develop of SNPs markers in nuclear genes of the Ae. aegypti for application in genotyping of populations of this vector in Brazil. For so much, were investigated sequences in eighteen nuclear genes of sixteen populations of Ae. aegypti, and nine of this genes were selected to presence of the SNPs. Eight more polymorphic markers were used in the characterization of three populations of the mosquito previously analyzed using the techniques of RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) and sequencing of mitochondrial genes. Results obtained with the SNPs showed a high degree of polymorphic intra and interpopulations, more significantly when compared with the prior studies, besides the presence of two different genetic lineages distributed among the studied geographical populations. / Doutor