Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2008. / Submitted by Luis Felipe Souza (luis_felas@globo.com) on 2009-03-11T19:28:11Z
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2008_Tese_LilianiVieira.PDF: 2837811 bytes, checksum: f0bb9858dbc033e0333c69a65c3b3ea5 (MD5) / A Fibrose Cística (FC) é uma doença hereditária autossômica, recessiva e letal que
apresenta certas dificuldades na realização do diagnóstico precoce e preciso. Devido ao
comprometimento patológico essa doença assume grande importância e o diagnóstico
precoce é decisivo para um melhor prognóstico. Este estudo teve por objetivo determinar a
composição inorgânica e análise proteômica da saliva total de indivíduos com FC e
identificar biomarcadores para uso no diagnóstico da doença.
Foram coletadas amostras de saliva de habitantes da região Centro Oeste do
Brasil: 12 indivíduos homozigotos para a mutação ?•F 508 (4 mulheres, 8 homens), 12
heterozigoto para ?ýF 508 (5 mulheres, 7 homens), 13 indivíduos com FC com mutações não
identificadas (6 mulheres, 7 homens), 8 indivíduos com diagnóstico duvidosos para FC ( 5
mulheres, 3 homens) e 43 indivíduos saudáveis (23 mulheres e 20 homens). Indivíduos com
dúvida no diagnóstico para FC ou que não cumpriram os requisitos para compor o grupo
controle foram excluídos das análises. Os teores dos elementos traço Al, As, B, Ba, Ca, Cd,
Co, Cr, Cu, Fe, Hg, K, Mg, Mn, Mo, Na, Ni, Pb, Se, Si, Sr, Ti, V e Zn na saliva foram
avaliados por espectrometria de massa com plasma de argônio acoplado indutivamente
(ICP-MS), espectrometria de emissão óptica com plasma de argônio acoplado indutivamente
(ICP-OES) e espectrometria de absorção atômica (AAS). O perfil protéico foi estudado por
eletroforese em gel de poliacrilamida na presença de Sodium Dodecyl Sulfate (SDS-PAGE),
por eletroforese bidimensional (2-DE) e análise de bases peptídicas por espectrometria de
massa (MS/MS).
Os elementos Na e K apresentaram, em média, teores mais elevados, enquanto, V,
Cr e Se menos elevado quando comparados a indivíduos saudáveis, o elemento As foi
detectado apenas no grupo de indivíduos saudáveis (p<0,05). Nas análises por eletroforese,
o grupo com FC apresentou uma banda nítida de massa molecular de 38 kDa, não
visualizada nos indivíduos sem a doença. A espectrometria de massa identificou a uma
imunoglobulina (IgA), a qual esta visivelmente expressa nos indivíduos com FC.
Existe diferença significante entre a saliva de indivíduos com FC e às de indivíduos
saudáveis. Foi também identificado diferenças no perfil protéico. Com os resultados deste
trabalho podemos inferir que a saliva total estimulada é uma fonte potencial para estudos
que possam corroborar no desenvolvimento de um método de diagnóstico precoce e preciso da FC.
______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cystic Fibrosis (CF) is an autossomic recessive lethal inherited disease that
presents certain difficulties for an early and accurate diagnosis. Due to its pathological
character this disease assumes great importance and early diagnosis is of paramount
importance for a good prognostic. The objective of this study was to determine the inorganic
composition and the proteomic analysis of stimulated whole saliva obtained from CF and
identify biomarkers for CF diagnosis.
Samples were collected from individuals living in the Brazilian West Central Region:
12 homozygous for mutation ?•F 508 (4 females; 8 males); 12 heterogeneous for mutation ?•F
508 (4 females; 8 males); 13 with unidentified CF mutations (6 females; 7 males); 8 with
doubtful CF diagnosis (5 females; 3 males); and 43 healthy individuals (23 females; 20
males) for the control group. Samples from individuals with doubtful diagnosis as well as
from those that did not fulfill the basic requirements to compose the control group were
discarded. Concentration of trace elements Al, As, B, Ba, Ca, Cd, Co, Cr, Cu, Fe, Hg, K, Mg,
Mn, Mo, Na, Ni, Pb, Se, Si, Sr, Ti, V e Zn were evaluated using mass spectrometer with
inductively coupled argonium plasma (ICP-MS), optical emission spectrometer with
inductively coupled argonium plasma (ICP-OES), and atomic absorption spectrometer (AAS).
Protein profile was accessed by polyacrylamide gel electrophoresis 15% in presence of
Sodium Dodecyl Sulfate (SDS-PAGE), by bidimensional electrophoresis (2D), and analysis
of the peptide bases by mass spectrometry (MS)
In every analyses, results obtained for CF individuals were compared to those for
healthy subjects. Average concentration values for Na and K were higher in CF patients as
compared to healthy individuals. In contrast, V, Cr, and Se, were lower. Element As was
detected only in the healthy group (p<0,05). In the SDS-PAGE analysis CF patients
presented a distinct band with molecular mass between 30 and 45 kDa not visualized in the
healthy subjects. By 2D electrophoresis associated with mass spectrometry it was possible
to identify a heavy chain immunoglobulin (C region) of Iga¥(IgA) clearly visible in CF patients.
There were significant differences between saliva from healthy and CF individuals
as well as in their protein profile. Results obtained in the present study indicate that
stimulated whole saliva is a potential source for studies that may corroborate the
development of an early and accurate screening method.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/1462 |
| Date | January 2008 |
| Creators | Vieira, Liliani Aires Candido |
| Contributors | Bezerra, Ana Cristina Barreto, Feijó, Gilvânia Coutinho Silva |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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