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Previous issue date: 2008-02-22 / In this work three Brazilian B. rhodina, and also two strains from Cuba, selected for their ability to produce jasmonate compounds, were submitted to molecular analysis of internal transcribed spacers- ITS regions of rDNA to characterize their genetic variability. rDNA extraction procedures were conducted according classic protocols followed by amplification, via the PCR technique, of conserved ITS regions with the primers ITS1 and ITS4. The PCR products were purified using the GFX purification kit (GE-Healthcare), resolved in “MegaBace” 1000 – DNA Analysis System (GE-Healthcar) and further identified by comparative analysis with ITS regions of rDNA sequences from the databases available at the National Center for Biotechnology Information (NCBI). Analyses were performed with the BLAST tool and the multiple alignments of sequences with Clustal W program from the computational package BioEdit. Moreover, analysis using the TCS program resulted in the identification of nine haplotypes separated by ten polymorphic sites. AFLP analyses were also implemented using four combinations of oligonucleotide primers which resulted in the generation of 300 polymorphic markers. The mean number of amplified fragments by primer pair was 79 with up to 95% of polymorphic bands. The genetic distance between B. rhodina strains was estimated in 29.19%. Dendogram constructed with Jaccard’s coefficient of similarity showed that analyzed strains were assembled in four groups with high genetic variability found in all strains. / Os microrganismos produzem substâncias químicas como resultado do metabolismo primário e secundário. No metabolismo secundário estão envolvidas vias metabólicas para a síntese de produtos naturais que não são essenciais para o crescimento do organismo produtor. O fungo Botryosphaeria rhodina, tem despertado um interesse crescente devido à produção de uma serie de ácidos graxos ciclopentanos, do tipo ácido jasmônico (AJ), com propriedades reguladoras do crescimento de plantas superiores. Usualmente o AJ é um regulador de crescimento vegetal endógeno, sintetizado de maneira natural por uma grande variedade de plantas, pertence aos reguladores de crescimento vegetal (RCV) denominados jasmonatos, sendo os mais representativos o ácido (-)-jasmônico (-)-AJ e o ácido(+)-7-isojasmônico [(+)-7-isoAJ] os quais se encontram amplamente distribuídos nas plantas. AJ tem inúmeras aplicações conhecidas tais como a utilização do AJ na fabricação de perfumes; na produção do chá preto; na redução do consumo de estimulador de crescimento; na produção de malte em indústrias de cerveja; no aumento da produção de taxol; na produção de flavorizantes alimentícios, entre outros. Os microrganismos produzem substâncias químicas como resultado do metabolismo primário e secundário. No metabolismo secundário estão envolvidas vias metabólicas para a síntese de produtos naturais que não são essenciais para o crescimento do organismo produtor. O fungo B. rhodina, tem despertado um interesse crescente devido à produção de uma serie de ácidos graxos ciclopentanos, do tipo AJ, com propriedades reguladoras do crescimento de plantas superiores. A importância crescente do uso de microrganismos na biotecnologia nos levou a propor a prospecção dos metabólitos produzidos pelos microrganismos existentes em espécies vegetais da Amazônia. Desse modo, foram obtidos isolados de B. rhodina capazes de produzir o ácido jasmônico e seus derivados os quais foram caracterizados geneticamente por meio de seqüenciamento do DNA ribossomal e pela técnica de AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism ou Polimorfismo de Comprimento de Fragmentos Amplificados). Trinta e quatro linhagens de B. rhodina isoladas como patógenos de plantas tropicais, tais como: citros, manga, mogno africano, mamão, cupuaçu e madeira cortada foram analisadas para verificar a capacidade de produção de AJ utilizando-se a metodologia de Miersch et al., 1989. Os ensaios para produção de AJ e seus derivados foram realizados em meio Miersch (M1) e Miersch Modificado (M2) e,
avaliados em placas de Cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC) e quantificados por meio de Cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Após a avaliação da produção de jasmonatos as linhagens foram submetidas à análise molecular de regiões ITS do rDNA para avaliação da diversidade genética. A extração do DNA foi realizada por métodos clássicos, seguido da amplificação das regiões conservadas ITS do rDNA por meio da técnica de PCR, onde foram utilizados os oligonucleotídeos ITS1 e ITS4. A distância genética entre as linhagens variou de 0 a 1,6%. A taxa de transição/transversão foi de 1,2. Os alinhamentos foram submetidos ainda ao Programa TCS, resultando na identificação de nove haplótipos e 10 sítios polimórficos. A matriz de distância genética assim como a árvore filogenética resultante mostrou pouca divergência genética nas regiões de DNA analisadas. Também foi feita a analise das linhagens de B. rhodina por meio de marcadores moleculares AFLP. Para a obtenção dos resultados foram utilizadas quatro combinações de iniciadores nas reações AFLP, possibilitando a geração de 300 marcadores polimórficos. O número médio de bandas obtidas por iniciador foi de 79% e a porcentagem de bandas polimóficas foi de 95%. A distância genética entre as linhagens de B. rhodina foi de 29,19%, e a porcentagem de loci polimórfico foi de 0,95%. Todas as linhagens investigadas foram agrupadas em quatro grupos e foram obtidos indicadores de alta variabilidade genética entre todos os isolados.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/5871 |
| Date | 22 February 2008 |
| Creators | Galvão, Rozana de Medeiros Sousa, 92-99126-3410 |
| Contributors | ppgbiotec@ufam.edu.br, Pereira, José Odair |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFAM, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 32215883775770440, 600, 500, 1984485651082134923 |
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