O presente trabalho teve como objetivo investigar o tipo de morte induzida nas linhagens de
carcinoma mamário humano MCF-7 (ER+) e MDA-MB-435 (ER-), pela fração isolada do
extrato de folhas de barbatimão. As folhas de Stryphnodendron adstringens (Martius) Coville
(Fabaceae) foram coletadas, secas e utilizadas para o preparo do extrato acetônico, que foi
particionado com acetato de etila. A fração aquosa remanescente foi liofilizada e fracionada por
cromatografia em Sephadex LH 20. As frações coletadas foram submetidas à cromatografia em
camada delgada e a fração eluída com metanol a 100% foi utilizada nos experimentos, por
apresentar o maior conteúdo de proantocianidinas. A análise por HPLC permitiu verificar que a
fração isolada contem procianidina dimérica B1, epigalocatequina-3-O-galato e ácido gálico. As
células de adenocarcinoma mamário MCF-7 (ER+) e MDA-MB-435 (ER-) foram tratadas por 24
h com diferentes concentrações da fração (5 – 160 μg/mL) e com ciclofosfamida a 550 μg/mL. O
tratamento das células com a fração isolada induziu redução da viabilidade celular e alterações
morfológicas nas duas linhagens, incluindo perda da morfologia celular típica, condensação da
cromatina e diminuição da área das colônias e das células. A DE50 para células MCF-7 foi de
12,35 μg/mL e para as células MDA-MB-435 foi de 34,43 μg/mL, sendo as células MCF-7 mais
sensíveis ao tratamento. A análise por Western blotting mostrou que tratamento o com a fração
induziu aumento da expressão de Bax e diminuição de Bcl-2 nas células, indicando apoptose.
Houve ainda aumento da expressão de caspase-9, caspase-3-ativa e caspase-8, além da
diminuição da expressão da caspase-3 e pró-caspase-8. Estas proteínas estão envolvidas na via
intrínseca de indução da apoptose. Foi observado também aumento de proteínas marcadoras da
autofagia, LC-3 nas duas linhagens e beclin-1 nas células MDA-MB-435. Assim, os resultados
do presente trabalho permitem concluir que a fração isolada do extrato de folhas de barbatimão
induziu a morte por apoptose com autofagia nas células MCF-7 e MDA-MB-435. Estes
resultados são importantes, pois foram demonstradas a citotoxicidade e indução de morte das
células MDA-MB-435, que são ER-, além das células MCF-7 (ER+). Tendo em vista que não há
tratamento curativo para tumor mamário ER-, bem como para ER+ em estágio avançado, a fração
isolada parece ser candidata promissora para o desenvolvimento de fármaco para o tratamento e
prevenção do câncer de mama. / The aim of the present work was to investigate the type of cell death induced in the MCF-7
(ER+) and MDA-MB-435 (ER-) human mammary carcinoma cell lineages by the fraction
isolated from the barbatimão leaf extract. Stryphnodendron adstringens (Martius) Coville
(Fabaceae) leaves were collected, dried and the acetone extract was prepared. It was partitioned
with ethyl acetate and the remaining aqueous solution was lyophilized and fractioned by
Sephadex LH 20 chromatography. The collected fractions were analyzed by thin layer
chromatography and the fraction eluted with 100 % methanol was used in the experiments,
because it showed the highest proanthocyanidin content. The HPLC analysis showed that the
isolated fraction is composed by procyanidin dimmer B1, epigallocatechin-3-O-gallate and gallic
acid. The MCF-7 (ER+) and MDA-MB-435 (ER-) cells were treated for 24 h with different
concentrations of the fraction (5 – 160 μg/mL) and with 550 μg/mL cyclophosphamide. The cell
treatment with the isolated fraction induced cell viability reduction and morphologic alterations
in both cell lines, including cell typical shape loss, chromatin condensation and a decrease in the
colony and cell area. The ED50 dose for MCF-7 cells was 12.35 μg/mL and the ED50 dose for
MDA-MB-435 cells was 34.43 μg/mL, being the MCF-7 cells more sensitive to the fraction
treatment. The Western blotting analysis showed that the fraction treatment induced an increase
in the Bax and a decrease in the Bcl-2 cell expression that is indicative of apoptosis. There were
also an increase in the caspase-9, caspase-3-active and caspase-8 expression and a decrease in the
caspase-3 and pro-caspase-8 expression. These proteins are involved in induction of the intrinsic
apoptosis pathway. It was also observed an increase in the expression of autophagy protein
markers: LC-3 expression increased in both cell lines and beclin-1 expression increased only in
the treated MDA-MB-435. The results of the present work allowed the conclusion that the
isolated fraction from barbatimão leaf extract induced apoptotic death with autophagy in both cell
lines, MCF-7 and MDA-MB-435. These results are important because it was demonstrated the
cytotoxic effect and the ER- MDA-MB-435 cell death induction, besides the cytotoxicity to ER+
MCF-7 cells. As there is no a curative treatment for ER- mammary tumors as well as ER+ tumors
in an advanced stage, the isolated fraction seems to be a promising candidate to a drug
development for breast cancer treatment and prevention. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:10.254.254.39:tede/178 |
| Date | 25 February 2010 |
| Creators | SABINO, Ana Paula de Lima |
| Contributors | GOUVÊA, Cibele Marli Cação Paiva, http://lattes.cnpq.br/4071942459412262, FIORINI, João Evangelista, CHAVASCO, Jorge Kleber |
| Publisher | Universidade Federal de Alfenas, Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Brasil, UNIFAL-MG, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UNIFAL, instname:Universidade Federal de Alfenas, instacron:UNIFAL |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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