O presente trabalho teve como principal objetivo a detecção e caracterização dos genes plasmideais de resistência às quinolonas qnr, aac(6’)-Ib-cr e qepA, , e ainda, os genes blaTEM, blaSHV e blaCTX-M, codificadores de -lactamases de espectro estendido (ESBL) em coleções de enterobactérias isoladas a partir de amostras clínicas obtidas em dois hospitais do estado de Minas Gerais. No período de junho a outubro de 2010, foram isoladas 873 enterobactérias das quais 106 (12%) foram triadas para este estudo por apresentarem diminuição de sensibilidade ao ácido nalidíxico. A identificação bacteriana foi realizada através de testes bioquímicos convencionais e pelo sistema automatizado MicroScan - autoSCAN®-4. O perfil de sensibilidade aos antimicrobianos foi determinado pelo método de disco difusão e a concentração inibitória mínima foi determinada por microdiluição em caldo, como descrito e recomendado pelo “Clinical Laboratory Standards Institute - CLSI”, para os isolados produtores do gene qnr e seus respectivos transconjugantes. A detecção dos genes associados aos mecanismos de resistência estudados e a análise das mutações presentes nos genes cromossômicos gyrA e parC foram realizadas por PCR e sequenciamento. A extração de plasmídeos das bactérias e seus transconjugantes, contendo os determinantes qnr, foi realizada segundo a técnica de Kieser. Os resultados obtidos pela eletroforese em campo pulsado foram interpretados segundo os critérios estabelecidos por Tenover et al., 1995. A coleção bacteriana foi composta por: Escherichia coli (n=61; 57,6%), Enterobacter cloacae (n=23; 21,7%), Klebsiella pneumoniae (n=16; 15,1%), Proteus mirabilis (n=3; 2,8%), Serratia marcescens (n=2; 1,9%) e Proteus vulgaris (n=1; 0,9%). A maioria das enterobactérias (82%) foi isolada de infecções do trato urinário seguido de hemoculturas, swab de secreções, aspirado traqueal e ponta de cateter. De acordo com os critérios do CLSI, 94% (n=100) das enterobactérias foram resistentes ao ácido nalidíxico, 71% (n=75) foram resistentes à ciprofloxacina e 76% (n=81) apresentaram diminuição de sensibilidade a ceftazidima e/ou cefotaxima. A pesquisa de qnr resultou na detecção dos genes qnrB e qnrS em treze isolados, incluindo E. cloacae (n=6), K. pneumoniae (n=5) e E. coli (n=2). O gene qnrB1 foi o mais prevalente, seguido de qnrS1, qnrB2 e qnrB19. Nas amostras qnr positivas, foram detectados 4 isolados positivos para o gene aac(6’)-Ib-cr, 6 isolados para blaSHV, 11 isolados para blaCTX-M e 11 isolados para o gene blaTEM. O determinante qepA não foi detectado. Este trabalho indica a disseminação de mecanismos de resistência às quinolonas mediados por plasmídeos (PMQR) em amostras clínicas no Brasil. A coexistência de genes ESBL e PMQR demonstra a complexidade dos plasmídeos carreando determinantes de resistência entre os membros da família Enterobacteriaceae. / The main objective of this work was to characterize the qnr, aac(6')-Ib-cr and qepA plasmid genes, and also the blaTEM, blaSHV and blaCTX-M genes, encoding for extended spectrum β-lactamases - ESBL in a collection of Enterobacteriacecae isolated from clinical samples obtained in two hospitals in the state of Minas Gerais, Brazil. A total of 873 Enterobacteriaceae were isolated in the period of June to October 2010 of which 106 (12%) were screened for this study showing decreased susceptibility to nalidixic acid. The bacterial identification was performed by conventional biochemical tests and by the automated system MicroScan autoSCAN®-4. The antimicrobial susceptibility profile was determined by diffusion disk and the minimum inhibitory concentration was determined by broth microdilution for the isolates carrying the qnr genes e their respective transconjugantsaccording with the recommendations of the "Clinical Laboratory Standards Institute - CLSI". PCR and sequencing were performed to detect plasmid-mediated quinolone resistant (PMQR) genes as well as the analysis of mutations in chromosomal encoded genes, gyrA and parC by. The extraction of plasmids and their transconjugants containing qnr determinants was performed using the technique of Kieser. The results obtained by pulsed field gel electrophoresis were interpreted according with Tenover et al., 1995. The collection was composed as follow: Escherichia coli (n = 61, 57.6%), Enterobacter cloacae (n = 23, 21.7%), Klebsiella pneumoniae (n = 16, 15.1%), Proteus mirabilis (n= 3, 2.8%), Serratia marcescens (n = 2, 1.9%) and Proteus vulgaris (n = 1, 0.9%). Most of the enterobacteria (82%) was isolated from urinare followed by blood, swab of secretions, tracheal aspirate and catheter tip. A total of 100 (94%) isolates were resistant to nalidixic acid, 75 (71%) were resistant to ciprofloxacin and 81 (76%) showed reduced susceptibility to ceftazidime and/or cefotaxime. The qnr plasmidic determinant research resulted in the detection of qnrB and qnrS genes in 13 isolates, including E. cloacae (n=6), K. pneumoniae (n=5) andE. coli (n=2). QnrB1 was the most prevalent gene, followed by qnrS1, qnrB2 and qnrB19. In four qnr positive isolates also carried the aac(6')-Ib-cr gene, to blaSHV-like (n=6), blaCTX-M (n=11) and blaTEM gene (n=11). The qepA gene was not detected. This work indicates the dissemination of PMQR in clinical specimens in Brazil. The coexistence of ESBL and PMQR genes demonstrate the complexity of plasmids carrying resistant genesamong members of the family Enterobacteriaceae.

O meloxicam é um fármaco antiinflamatório não-esteroidal (AINE) usado para aliviar os sinais e sintomas da osteoartrite e artrite reumatóide em adultos. Não há método oficial para quantificação do fármaco em formulações farmacêuticas. O objetivo deste estudo foi desenvolver e validar métodos analíticos para quantificação de meloxicam em comprimidos e ainda estabelecer condições para realização do teste de dissolução de comprimidos de meloxicam 15 mg. Um método espectrofotométrico foi proposto, empregando-se dois solventes: metanol e hidróxido de sódio 0,1M. As leituras das absorvâncias foram efetuadas a 356 nm e 362 nm, respectivamente. Além do método espectrofotométrico, um método por CLAE foi desenvolvido, para determinação de meloxicam em comprimidos (mistura de tampão fosfato de potássio pH 4,5 e acetonitrila 60:40, v/v como fase móvel, coluna C18, 3 mm, a 30ºC, vazão de 1 mLmin-1 e tempo de retenção em torno de 2,6 min). Para estabelecer as condições para o teste de dissolução, empregou-se o medicamento referência e dois produtos teste A e B. Vários parâmetros foram testados, o uso de tampão fosfato 0,02 M, pH 7,5 (900mL, a 37ºC ± 0.5ºC) como meio de dissolução, aparato 2 (pá) e velocidade de agitação do meio de dissolução de 100 rpm, foram consideradas satisfatórias. As amostras foram quantificadas por espectrofotometria no UV a 362 nm. Em relação à cinética de dissolução, todos os produtos apresentaram cinética de primeira ordem. Os valores obtidos para a eficiência de dissolução foram de 83,25 %, 83,73 % e 88,10 % para os medicamentos A, B e de referência, respectivamente. Os fatores f1 e f2 foram calculados e demonstraram haver similaridade entre os medicamentos avaliados. O procedimento de dissolução nas condições selecionadas apresentou-se seletivo, linear, preciso e exato. Tanto o procedimento de dissolução nas condições selecionadas, quanto os métodos propostos podem ser utilizados para quantificação de meloxicam em comprimidos, com seletividade, linearidade, precisão, exatidão e robustez. / Meloxicam is a nonsteroidal anti-inflammatory drug (NSAID) used to relieve the signs and symptoms of osteoarthritis and rheumatoid arthritis in adults. No official method is available for the assay of drug in pharmaceutical formulations. The aim of this study was to develop and validate analytical methods for meloxicam quantification in tablets and then establish conditions for accomplishment of the test of dissolution of meloxicam tablets 15 mg. A spectrophotometric method was proposed employing two solvents: methanol and 0.1 M sodium hydroxide. Absorbances were performed at 356nm and 362nm, respectively. In addiction to spectrophotometric, an HPLC method was proposed for the estimation of meloxicam in tablets (mixture of pH 4.5 potasium phosphate buffer and acetonitrile 60:40, v/v, as mobile phase, UV detection at 364 nm, C18, 3 mm column, to 30ºC, run at a flow rate of 1 mLmin-1 and retention time around 2.6 min). To establish the conditions for accomplishment of the test of meloxicam dissolution were employed the reference product and products tests A and B. Several parameters were tested, the use of pH 7.5, 0.02 M phosphate buffer (900mL, to 37 ºC ± 0.5 ºC) as dissolution medium, paddle method (apparatus 2) and stirring speed of agitation of the dissolution medium of 100 rpm and collect time in 60 minutes were considered satisfactory. The samples were quantified by UV spectrophotometric method at 362 nm. In relation to the dissolution kinetics all of the products presented kinetics of first order. For the dissolution efficiency values were of 83.25 %, 83.73 % and 88.10 % for the A, B and reference products, respectively. The factors f1 and f2 were calculated demonstrating there to be similarity of the appraised medicines. The dissolution procedure in the conditions selected and the proposed methods can be used for quantification of meloxicam in tablets with selectivity, linearity, precision, accuracy and robustness.

Estudos de pré-formulação compreendem uma etapa relevante do processo de pesquisa e desenvolvimento de medicamentos. Englobam ensaios de caracterização físico-química e avaliação da estabilidade do fármaco. No presente trabalho foram avaliadas a estabilidade polimórfica do fármaco fosamprenavir cálcio e sua estabilidade química através de ensaios de degradação forçada e estudos de compatibilidade fármaco-excipiente. O fosamprenavir cálcio foi obtido a partir do medicamento Telzir® e caracterizado pelas técnicas de ressonância magnética nuclear (RMN), espectroscopia no infravermelho (FTIR), espectrometria de massas (EM), difratometria de raios X em pó (PXRD), difratometria de raios X em monocristal (SXRD), termogravimetria (TG), calorimetria exploratória diferencial (DSC) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Em seguida foi desenvolvido um método indicativo de estabilidade por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para verificar a pureza do fármaco obtido, avaliar sua estabilidade intrínseca através de estudos de degradação forçada e ser utilizado nos ensaios de compatibilidade. O fármaco obtido apresentou pureza cromatográfica de 99,95%, compatível para ser utilizado como padrão de trabalho. Nos estudos de degradação forçada, o fosamprenavir demonstrou ser estável às condições avaliadas de calor, umidade, luz e hidrólise neutra. Apresentou degradação significativa quando submetido à hidrólise ácida, básica e solução oxidativa. Dentre os produtos de degradação detectados, dois tiveram suas estruturas determinadas através de experimentos de espectrometria de massas sequencial e seus mecanismos reacionais foram propostos. Nos estudos de compatibilidade fármaco-excipiente as amostras foram analisadas imediatamente após o seu preparo empregando as técnicas de FTIR e CLAE. Posteriormente foram incubadas em câmara de estabilidade a 40ºC ± 2ºC e 75% ± 5% de umidade relativa e analisadas novamente após 3 e 6 meses de incubação. O fosamprenavir cálcico demostrou ser compatível quimicamente com os excipientes povidona K-30, crospovidona, croscarmelose sódica, opadry rosa, amido glicolato de sódio, estearato de magnésio e sílica anidra coloidal. Na avaliação da estabilidade polimórfica do fármaco, os resultados das amostras 3 e 6 meses de incubação foram comparados com os resultados iniciais. Foram empregadas as técnicas de FTIR e PXRD. Os resultados demostraram que a forma cristalina I do fosamprenavir cálcico é estável nas condições avaliadas. / Preformulation studies comprise a relevant stage of the drug research and development process. They include solid-state physical-chemical characterization and evaluation of drug stability. The present study evaluated the polymorphic stability of the drug fosamprenavir calcium and its chemical stability through forced degradation tests and drug-excipient compatibility studies. Fosamprenavir calcium was obtained from Telzir® and characterized by nuclear magnetic resonance (NMR), spectroscopy Fourier Transform infrared (FTIR), mass spectrometry (MS), powder X-ray diffraction (PXRD), single X-ray diffraction (SXRD), thermogravimetry (TG), differential scanning calorimetry (DSC) and scanning electron microscopy (SEM). A stability indicating high performance liquid chromatography (HPLC) method was development and used to verify the purity of fosamprenavir calcium obtained, to evaluate its intrinsic stability through forced degradation studies and to be employed in the compatibility tests. The obtained drug showed a chromatographic purity of 99.95%, compatible to be used as working standard. On forced degradation studies, fosamprenavir was stable under thermal, humidity, photolysis and neutral hydrolysis. Significant degradation was observed when the drug was subject to acid and base hydrolysis and oxidative conditions. Two degradation products were characterized by tandem mass spectrometry and their reactional mechanisms were proposed. On the drug-excipient compatibility studies the samples were analyzed immediately after preparation using FTIR and HPLC. Afterwards they were incubated in a stability chamber at 40ºC ± 2ºC and 75% ± 5% of relative humidity and analyzed again after 3 and 6 months of incubation. Fosamprenavir calcium has shown to be chemically compatible with the excipients povidone K-30, crospovidone, croscarmellose sodium, opadry, starch, magnesium stearate and colloidal anhydrous silica. For the evaluation of the polymorphic stability of the drug, the results of incubated samples were compared with the initial results by FTIR and PXRD. The results demonstrated that the crystalline form I of fosamprenavir calcium is stable under the conditions evaluated. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O chá das cascas do caule de Byrsonima intermedia A. Juss. é utilizado popularmente no tratamento de diarreias e disenterias. Suas cascas contêm polifenóis a que podem ser atribuídas atividades antimicrobiana, anti-hemorrágica, antidiarreica e anti-inflamatória. Neste estudo, o extrato liofilizado de cascas de Byrsonima intermedia foi caracterizado através de ensaios químicos para avaliação da presença de metabólitos secundários, quantificação de seu conteúdo fenólico e flavonoídico e da determinação do perfil cromatográfico por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foram avaliados os efeitos antinociceptivo, anti-inflamatório e antidiarreico do extrato liofilizado de cascas de Byrsonima intermedia (ELBi), para tornar mais segura sua utilização como planta medicinal. Os testes de formalina, placa quente e filamentos de von Frey foram utilizados para avaliar a atividade antinociceptiva em camundongos. Para avaliar o efeito anti-inflamatório, foram realizados os testes de granuloma, peritonite induzida por lipopolissacarídeo (LPS) e edema de pata, induzido por carragenina, em ratos. Para a avaliação do efeito antidiarreico, o extrato foi testado “in vivo”, pelo teste de trânsito intestinal e “in vitro”, pelo teste de banho isolado de órgãos. O extrato liofilizado de cascas de Byrsonima intermedia revelou a presença de 37,3 mg de ácido gálico/g de amostra e 6,3 mg de quercetina/g de amostra. No teste da formalina, o extrato mostrou efeito antinociceptivo significativo, quando comparado com o controle, nas doses de 100 e 300 mg/kg, na primeira fase e nas três doses de 30-300 mg/kg, na segunda fase. No teste da placa quente, o ELBi, em doses de 30-300 mg/kg, aumentou o tempo de latência em comparação ao grupo controle, assim como a morfina, de forma significativa. No teste com filamentos de Von Frey, observou-se diminuição significativa no limiar da retirada da pata nas três doses de 30-300 mg/kg de ELBi, assim como no tratamento com indometacina 10 mg/kg. Na avaliação do efeito anti-inflamatório, o extrato, nas doses de 30, 100 e 300 mg/kg, diminuiu o peso do granuloma em 37,9%; 36,9% e 45,4%, respectivamente, no teste de granuloma. No teste de peritonite, os valores de inibição no recrutamento de leucócitos foram de 21,4; 32,3 e 40,12%, para extrato nas doses de 30, 100 e 300 mg/kg, respectivamente. Já para o edema de pata induzido por carragenina, os valores de inibição foram de 11,8; 31,06 e 25,2%, para doses de 30, 100 e 300 mg/kg de extrato, respectivamente. Para a avaliação do efeito antidiarreico no teste de trânsito intestinal, foi observado que o comprimento médio percorrido pelo carvão, quando os animais foram pré-tratados com ELBi na dose de 300 mg/kg, diminui significativamente quando comparado ao controle. Nos estudos “in vitro”, a contratilidade do tecido foi diminuída significativamente diante de mediadores como acetilcolina, Ca+2 e K+. Diante dos resultados, podemos inferir que o extrato aquoso de cascas de Byrsonima intermedia exerce efeito antinociceptivo, anti-inflamatório e antidiarreico. / Tea made from the stem bark of Byrsonima intermedia A. Juss. is popularly used to treat diarrhea and dysentery. Their shells contain polyphenols which can be attributed to antimicrobial, anti-hemorrhagic, anti-diarrheal and anti-inflammatory. In this study the extract lyophilized bark of Byrsonima intermedia was characterized by chemical tests to assess the presence of secondary metabolites, quantification of phenolic and flavonoid content and chromatographic profiles by high performance liquid chromatography (HPLC) were evaluated antinociceptive, anti-inflammatory and antidiarrheal effects lyophilized extract of bark of Byrsonima intermedia (ELBi) to make their use safer as a medicinal plant. The formalin test, hot plate and von Frey filaments were used to evaluate the antinociceptive activity in mice. To evaluate the anti-inflammatory tests were conducted granuloma, peritonitis induced by LPS (lipopolysaccharide) and paw edema induced by carrageenin in rats. To evaluate the antidiarrheal effect of the extract was tested in vivo, the test of intestinal transit and in vitro, the isolated organ bath. The aqueous extract of bark of Byrsonima intermedia revealed the presence of 37.3 mg gallic acid/g sample and 6.3 mg quercetin/g of sample. In the formalin test the extract showed a significant antinociceptive effect when compared with the control at doses of 100 and 300 mg/kg in the first phase, and three doses 30-300 mg/kg in the second phase. In the hot plate test ELBi at doses of 30-300 mg/kg increased the latency time compared to the control group, as well as morphine significantly. In testing with von Frey filaments was observed a significant decrease in paw withdrawal threshold of the three doses 30-300 mg/kg ELBi, as well as treatment with indomethacin 10 mg/kg. In the evaluation of anti-inflammatory extract at doses of 30, 100 and 300 mg/kg reduced the weight of granuloma in 37.9%, 36.9% and 45.4% respectively in the granuloma test. In the test of peritonitis inhibition values in the recruitment of leukocytes were 21.4, 32.3 and 40.12% for the extract at doses of 30, 100 and 300 mg/kg, respectively. As for the paw edema induced by carrageenin inhibition values were 11.8, 31.6 and 25.2% for doses of 30, 100 and 300 mg/kg of extract, respectively. To evaluate the antidiarrheal effect in the test of intestinal transit was observed that the average length traveled by the charcoal when the animals were pretreated with ELBi at a dose of 300 mg/kg significantly decreased when compared with control. In studies in vitro contractility of the tissue was decreased significantly in front of mediators such as acetylcholine, Ca+2 and K+. With the results we can infer that the aqueous extract of bark of Byrsonima intermedia exerts antinociceptive, anti-inflammatory and antidiarrheal. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A espécie Garcinia brasiliensis Mart. (sinonímia: Rheedia brasiliensis Planch e Triana) é uma planta também conhecida como “bacuri”. É uma espécie muito utilizada por suas propriedades farmacológicas. O presente estudo tem a finalidade de caracterizar quimicamente e avaliar a atividade biológica dos extratos etanólicos e aquosos das folhas, cascas e sementes da G. brasiliensis. O teor de compostos fenólicos totais, flavonoides e atividade antioxidante foram avaliados. O extrato que apresentou maior teor de compostos fenólicos foi o extrato aquoso da folha, com 343,98 ± 4,8 mg AG/g. O teores de flavonoides mais expressivos encontrados foram no extrato etanólico da semente e no extrato aquoso da folha, com valores respectivamente de 47,10 ± 0,2 e 45,62 ± 0,7 mg quercetina/g de extrato. Quanto à atividade antioxidante, o que apresentou maior atividade foi o extrato etanólico da semente, com 86,57 % de sequestro de radical DPPH. A atividade antimicrobiana foi avaliada pelo teste de microdiluição em placa para bactérias e fungos. Considerando a CIM50, o extrato que se mostrou mais ativo foi o extrato aquoso da folha, com uma CIM50 de 1 μg/mL, atividade bem próxima ao do padrão cloranfenicol, que possui CIM50 de 0,975 μg/mL contra a bactéria S. aureus. Quanto à atividade antifúngica, constatou-se que nenhum extrato apresentou atividade contra a C. albicans na faixa de concentração testada e com exceção do extrato etanólico da folha, os outros extratos foram considerados bioativos contra a C. krusei. A caracterização química por cromatografia líquida de alta eficiência foi realizada no extrato aquoso da folha e detectou a presença da fukugetina-7’’-O-β-D-glicosídeo (fukugesídeo) e da fukugetina. Com este mesmo extrato realizou-se testes de citotoxicidade em fibroblastos humanos e linhagens tumorais, não apresentando toxicidade para as culturas celulares testadas. Foram preparadas formulações contendo este extrato aquoso de G. brasiliensis e com elas foram realizados testes de permeação e retenção cutânea em “Célula de Franz”. Por ser um produto natural oriundo de uma fonte renovável como as folhas, este extrato é um potencial candidato ao desenvolvimento de novos fármacos para tratar lesões da pele causados pelos microrganismos testados. / The species Garcinia brasiliensis Mart. (synonym: Rheedia brasiliensis Planch and Triana) is a plant also known as "bacuri”. It is a specie commonly used for its pharmacological property. The present study aims to chemically characterize and evaluate the biological activity of ethanol and aqueous extracts of leaves, bark and seeds of G. brasiliensis. The contents of total phenolics, flavonoids and antioxidant activity were evalueted. The leaf aqueous extract showed a high content of phenolic compounds with 343.98 ± 4.8 mg GA / g. The most significant amounts of flavonoids were found in the seed’s ethanolic extract and leaf’s aqueous extract, respectively, with values of 47.10 ± 0.2 and 45.62 ± 0.7 mg of quercetin / g of extract. For antioxidant activity, the most active was the seed’s ethanolic extract, with 86.57 % of scavenging activity. The antimicrobial activity was evaluated by microdilution plate test for bacteria and fungi. Considering the MIC50, the leaf’s aqueous extract was the most active, with a MIC50 of 1 mg / mL, activity very close to chloramphenicol as standard, which showed a MIC50 of 0.975 mg / mL against the bacteria S. aureus. For antifungal activity, no extract showed activity against C. albicans in the range of tested concentrations. Excluding the leaf’s ethanolic extract, all other extracts were considered bioactive against C. krusei. The chemical characterization by high performance liquid chromatography was performed on the leaf’s aqueous extract and it was detected the presence of fukugetin-7''-O-β-D- glucoside (fukugeside) and fukugetin. With this same extract it was carried out cytotoxicity tests in human fibroblasts and tumor cell lines, showing no toxicity of the cell’s cultures tested. Formulations containing G. brasiliensis aqueous extract were prepared and skin permeation and retention tests on "Franz cell" were performed. For being a natural product derived from a renewable source like leaves, this extract is a potential candidate of new drugs development for skin lesions treatment caused by microorganisms tested. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Nas últimas décadas, muito interesse tem sido dado aos materiais poliméricos anfifílicos pela sua capacidade de formação de partículas micelares em diversos solventes, inclusive aquosos, podendo ser usados como sistema para entrega e liberação controlada de fármacos e diversas outras aplicações. O presente estudo tem como objetivos principais a síntese e caracterização de um copolímero em bloco, anfifílico, para a formação de partículas poliméricas para a incorporação de fármacos. A síntese do copolímero foi realizada utilizando-se a técnica RAFT (Reversible Addiction Fragmentation Transfer), que é um sistema de polimerização radicalar controlada que possibilita a síntese de polímeros, com considerável controle do peso molecular e baixa polidispersão das cadeias, além de facilitar a obtenção de copolímeros do tipo dibloco. A vantagem da RAFT está baseada nos agentes de transferência de cadeia, que permitem à polimerização radicalar seguir como uma polimerização por condensação, ou seja, todas as cadeias crescendo ao mesmo tempo. A caracterização do material foi feita usando-se, principalmente, SEC multidetecção, RMN, espectrofotometria de UV/VIS e microscopia óptica. Os resultados da caracterização demonstram êxito na síntese e obtenção do copolímero, sendo obtido um copolímero anfifílico, solúvel em água e respondente ao pH. A dissolução desse material em água levou à formação de partículas da ordem de nanômetros, com potencial aplicação para a incorporação de fármacos. Também foram obtidos outros copolímeros anfifílicos, podendo vir a ser úteis em outras aplicações, tais como estabilização de emulsões e/ou em sistemas transdérmicos de liberação controlada. Os resultados obtidos demonstram também a vantagem da técnica RAFT sobre a chamada polimerização radicalar livre, no que diz respeito ao controle da polimerização e à baixa polidispersão das cadeias, fazendo dessa técnica uma fonte importante de materiais para essa aplicação em particular. / In the last decades, a great appeal has been given to amphiphilic polymeric materials for their property of self-assembly in micelles when in selective solvents. They can be used, for instance, as systems for drug delivery and several other applications. The present study aims at the synthesis and characterization of amphiphilic block copolymers, for the formation of polymer particles as potential drug delivery systems. The copolymers were synthetysed by the RAFT technique (Reversible Addiction Fragmentation Transfer), which is a variant of controlled radical polymerization. The RAFT is based on agents of chain transfer, which allow all the chains to grow at the same time during the polymerization, by this means the polydispersity is kept very low, as in a stepwise type polymerization. Additionally, the homopolymers made by RAFT can be easily elongated with different monomers, forming well-defined copolymers. The polymeric material characterization was made mainly by SEC multidetection, NMR, spectroscopy of UV/VIS, and optical microscopy. The results of the characterization show the synthesis was successful in obtaining the copolymer, being selected an amphiphilic copolymer, soluble in water and responsive to pH. The dissolution of the polymer in water results in nanosized particles with potencial application as drug deliverer. Other amphiphilic copolymers were obtained and they could become useful for other applications, such as stabilization of emulsions and transdermic drug delivery, to mention few. The results also demonstrate the advantage of RAFT technique on the so called free radical polymerization, in what concerns the control of polymerization and low polydispersity of the chains.

A polifenoloxidase (PFO) é uma enzima cúprica que catalisa a oxidação de difenóis em quinonas e tem ampla distribuição entre os vegetais. A atividade dessa enzima foi medida para a construção de um biossensor, para determinação de adrenalina, e os melhores resultados foram obtidos com a banana (Musa sp.). O cálculo da atividade enzimática proporcionou um valor de 974 UA (Unidades de Atividade). O biossensor foi construído com pasta de carbono, 50 UA em tampão fosfato (pH= 7,00) suportada em agulha de aço inoxidável ou tubo de polietileno. Constatou-se morosidade no restabelecimento da linha base a qual foi corrigida com a adição de H2O2 na solução diminuindo o tempo para 10 minutos. O biossensor (com polietileno) apresentou resposta linear para adrenalina, em solução tampão, entre 8,00x10-9 e 8,00x10-4 mol L-1 (LD = 8,00x10-9 mol L-1). Para amostras de medicamentos os resultados obtidos com o método proposto e com o método descrito na Farmacopéia Brasileira (1977) foram concordantes. Para amostras de sangue, usando calibração por ajuste de matriz, a faixa linear foi de 8,00x10-7 a 8,00x10-3 mol L-1 (LD = 8,00x10-7 mol L-1). Obteve-se 89,4 % nos testes de recuperação. Testes in vivo, onde os eletrodos foram inseridos na veia jugular de ratos Wistar, apresentaram resultados promissores. / Polyphenoloxidase (PPO) is a cupric enzyme that catalyzes the oxidation of diphenols in quinones and is widely distributed among the vegetables. The activity of this enzyme was measured for a biosensor construction for adrenaline determination, and the banana (Musa sp.) extract presented better results. The calculation of the enzymatic activity provided a value of 974 UA (Units of Activity). It was constructed biossensor with: carbon paste containing 50 UA in phosphate buffer (pH=7,00), into stainless steel needles or polyethylene tube. Slow reestablishment of the baseline was evidenced and it was corrected with the addition of H2O2 to the solution, decreasing the return time to 10 minutes. The biosensor (with polyethylene) provides a linear range from 8,00x10-9 to 8,00x10-4 mol L-1 (LOD = 8,00x10-9 mol L-1) in buffer solution for adrenalin. The results obtained with the proposed method and the Farmacopéia Brasileira (1977) was in agreement. For blood samples, using matrix matching calibration, the linear range was from 8,00x10-7 to 8,00x10-3 mol L-1 (LOD = 8,00x10-7). In the recovery tests, 89,4% of the added value was obtained. In vivo studies, electrodes were inserted in the jugular vein of the Wistar rat and showed promising results.

O captopril é anti-hipertensivo e vasodilatador utilizado na insuficiência cardíaca congestiva e encontra-se disponível, no mercado brasileiro, sob a forma de comprimidos e cápsulas magistrais. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil de dissolução do captopril na forma farmacêutica cápsulas magistrais, quando submetidas a diferentes condições de pH, aparelhagens, velocidades de agitação do meio de dissolução e métodos para quantificação. A validação do procedimento de dissolução e do método de análise foram alvo deste estudo. No desenvolvimento do teste de dissolução, diversas condições foram testadas: dois meios de dissolução HCl 0,1 M e HCl 0,01 M, aparelhagens pá e cesta e velocidade de agitação do meio de 50 rpm e 100 rpm. Foram retiradas alíquotas nos tempos de 5, 10, 15, 20 e 45 minutos. As concentrações do fármaco no meio foram determinadas por cromatografia líquida alta eficiência (CLAE), com fase móvel constituída de ácido fosfórico 0,11% (V/V) e metanol (45:55), C18, vazão da fase móvel de 1 mL/minuto e detecção a l 212 nm. Nestas condições o tempo de retenção obtido foi de 1,76 minutos. E por espectrofotometria com detecção também a l 212 nm. Os resultados mostraram que o método cromatográfico foi o mais adequado para avaliação de captopril na forma farmacêutica cápsulas, enquanto a técnica espectrofotométrica (recomendado pelas Farmacopéias Brasileira e Americana) apresentou baixa seletividade. O método cromatográfico é o único das técnicas estudadas capaz de identificar e quantificar o produto de degradação dissulfeto de captopril presente nas formulações de captopril. O procedimento de dissolução nas condições selecionadas foi preciso (farmácia A DPR=4,05%, farmácia B DPR=3,60% e farmácia C DPR=2,85%), exato (farmácia A=98,48%, farmácia B=98,80% e farmácia C=99,04%), específico. Na faixa de concentração de 15 mg/mL a 30 mg/mL houve linearidade (r=0,9996). Após avaliação estatística dos resultados obtidos sugerem-se as seguintes condições selecionadas para o teste de dissolução de captopril cápsulas meio HCl 0,01 M 900 mL, cesta, 50 rpm por 20 minutos e por CLAE, que demonstraram melhor capacidade de liberação do fármaco. Todas as cápsulas apresentaram resultados satisfatórios nos testes de qualidade a que foram submetidas das farmácias magistrais participantes. / Captopril is an anti-hypertensive and vasodilator agent utilized in the congestive cardiac insufficiency. Can be commercially found in Brazil in the form of tablets and compounded capsules. The aim of this study was to evaluate the dissolution profile of captopril in capsules obtained from compounded pharmacies (denominated A, B and C), when submitted to different conditions of pH, apparatus, stirring speed of dissolution media and analytical method. The validation of the dissolution procedure and the quantitation method were also evaluated. In the development of the dissolution test, several experimental conditions were tested: two dissolution media (0.1 M HCl and 0.01 M HCl, 900 ml), USP apparatus 1 and 2 and stirring speeds 50 and 100 rpm. Sample aliquots were withdrawn at 5, 10, 15, 20 and 45 minutes. The drug concentrations in dissolution medium were determined by liquid chromatography (HPLC) mobile phase mixture of phosphoric acid 0,11% (V/V) and methanol (45:55), UV detection at l 212 nm, C18 column, 5 mm, 25 ºC, at 1 ml/min flow rate and Rt around 1.76 min) and ultraviolet spectrophotometry (l 212 nm). The results showed that the chromatographic method was most suitable for captopril capsules evaluation, while the spectrophometric method (recommended by the Brazilian and the United States Pharmacopeias) presented low specificity. The chromatographic method is it possible to identify and to quantify the degradation product captopril disulfide, which may be present in captopril dosage forms. The dissolution procedure in the selected conditions was precise (pharmacy A RSD=4.05%, pharmacy B RSD=3.60% and pharmacy C RSD=2.85%), accurate (pharmacy A= 98.48%, pharmacy B= 98.80% and pharmacy C=99.04%), specific. The method was linear in the concentration range 15 mg/ml to 30 mg/ml (r=0,9996). With base in the statistical results pointed the selected conditions of dissolution test for capsules using, 900 ml of 0.01M HCl, basket apparatus, stirring speed 50 rpm, for 20 minutes showed better capacity of release drug assessed by HPLC. All capsules from participating compounding pharmacies presented satisfactory results in all tests assessed.

Os dispositivos transdérmicos de liberação controlada apresentam diversas vantagens em relação à administração oral ou parenteral de fármacos, principalmente no controle prolongado da ação de fármacos. Nesse contexto, as formulações baseadas em quitosana, um polímero natural, têm apresentado grande potencial devido principalmente às suas características de atoxicidade, efeito promotor de absorção cutânea e propriedade de controle da liberação de fármacos. Os hidrogéis de quitosana são sistemas que permitem a difusão de água e moléculas através das cadeias poliméricas promovendo um controle na liberação de fármacos. A nicotina é um fármaco que possui a maioria das características físicoquímicas favoráveis para administração através da pele, no entanto existe a dificuldade na obtenção de sistemas que controlem a liberação transdérmica da nicotina por mais de 24 horas. Neste trabalho, hidrogéis de quitosana reticulados ou não, hidratados ou parcialmente secos, foram desenvolvidos e avaliados como sistemas para controlar a liberação transdérmica de nicotina. Todos os hidrogéis avaliados foram capazes de controlar a permeação cutânea in vitro da nicotina através da pele de orelha de porco por um período de 48 horas, seguindo cinética de ordem zero. O hidrogel de quitosana não reticulado e parcialmente seco liberou quantidades maiores de nicotina para a pele. Estudos de intumescimento dos géis parcialmente secos demonstraram que a reticulação diminuiu o grau de intumescimento e a difusão da água no sistema e desta forma o gel não reticulado foi capaz de absorver uma maior quantidade de água, favorecendo a difusão da nicotina para a pele. Através das análises térmicas foi possível prever a estabilidade térmica dos hidrogéis. Os géis também foram caracterizados por espectroscopia no Infravermelho que foi capaz de demonstrar a reticulação do gel de quitosana com o glutaraldeído. Foi possível concluir que os hidrogéis de quitosana não reticulados e parcialmente secos são promissores no controle da permeação cutânea in vitro da nicotina, apresentando grande potencial como sistemas para liberação transdérmica de nicotina. / The transdermal delivery systems present several advantages over oral or parenteral drug administration mainly at extend control of drug action. In this context, the formulations chitosan-based, a natural polymer, have shown great potential mainly due to its characteristics of low toxicity, on permeation enhancing properties and control of drug release. Nicotine is a drug that has the most favorable physicochemical characteristics for transdermal administration; however there is the difficulty in obtaining systems that control the transdermal delivery of nicotine over 24 hours. In the present work, chitosan hydrogels crosslinked or uncrosslinked, hydrated or partially dried, were developed and evaluated as transdermal delivery systems of nicotine. All hydrogels evaluated were able to control the in vitro skin permeation of nicotine through pig ear skin for a period of 48 hours following zero order kinetics. The chitosan hydrogel uncrosslinked partially dried released higher amounts of nicotine to the skin. Swelling studies of the partially dried gels showed that the crosslinking decreased the degree of swelling and the diffusion of water into the system and therefore the uncrosslinked gel was able to absorb a larger amount of water, favoring the diffusion of nicotine to the skin. By the thermal analysis was possible to provide for the thermal stability of the hydrogels. The gels were also characterized by infrared spectroscopy that was able to demonstrate the crosslinking of chitosan gel with glutaraldehyde. It was concluded that the partially dried chitosan hydrogels are promising in the control of nicotine permeation in vitro skin, showing great potential as systems for transdermal delivery of nicotine. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

As abelhas sem ferrão, ou meliponíneos, são assim chamadas por apresentarem este instrumento de defesa atrofiado. Pertencem à ordem Hymenoptera, à sub-família Meliponinae e são agrupadas em três tribos distintas: Meliponini, Trigonini e Lestrimelitini. Estão distribuídas nas zonas tropical e subtropical, nas Américas do Sul e Central, Malásia, Indonésia, África e Austrália. Possuem tamanho, forma e coloração variada e um nível de organização social comparável ao das abelhas Apis mellifera. Para a construção do ninho estas abelhas utilizam cera pura, cerume (mistura de cera e própolis) ou ainda o batume (mistura de própolis e barro, conhecida como geoprópolis). As espécies brasileiras são divididas em Meliponas e Trigonas, sendo uma das representantes mais populares a Uruçu (Melipona scutellaris). O objetivo deste trabalho foi analisar a própolis de uruçu (Melipona scutellaris) proveniente do estado da Bahia quanto a suas características físicas e químicas e algumas propriedades biológicas. A própolis analisada apresentou coloração marrom escura, flexível e odor acre. O teor de fenólicos totais pelo método de Folin-Ciocalteu foi de 0,105 mg /mg de própolis em equivalentes de ácido gálico. O extrato bruto da própolis demonstrou significativa atividade antimicrobiana contra Staphylococcus aureus nos testes de antibiograma em difusão em ágar com diâmetro de halo de 27 mm e na determinação da concentração inibitória mínima (CIM), de 3,12 a 1,56 ppm. O extrato foi fracionado, fornecendo quatro frações, numeradas em ordem decrescente de polaridade (0- mais polar e 3- menos polar). Estas frações também foram avaliadas quanto à atividade antimicrobiana e antioxidante. A fração 3 demonstrou atividade antioxidante em relação ao radical DPPH menor que a observada para o extrato, sendo de 67,36% na concentração de 90 ppm. Avaliou-se ainda a atividade citotóxica do extrato bruto sobre nove linhagens de células tumorais humanas, tendo apresentado toxicidade para todas as linhagens de maneira dose-dependente. / The stingless bees are so called because they presented this defense tool atrophied. They belong to the order Hymenoptera, sub-family Meliponinae and are grouped into three distinct tribes: Meliponini, Trigonini and Lestrimelitini. They are distributed in tropical and subtropical areas in Central and South America, Malaysia, Indonesia, Africa and Australia. They have size, shape and color variation and a level of social organization comparable to that of bee Apis mellifera. For the construction of the nests some of these bess use the geopropolis (mixture of plant resins, wax and soil). The Brazilian species are divided into Melipona and Trigona and one of the most popular specie is Uruçu (Melipona scutellaris). The purpose of this study was to nalyse some physical, chemical and biological properties of Uruçu (Melipona scutellaris) propolis from the state of Bahia, Brazil.Propolis examined showed dark brown color, flexible and pungent odor. The content of phenolic compounds by the method of Folin-Ciocalteu was 0,105 mg/mg of propolis. The crude extract of propolis has significant antimicrobial activity against Staphylococcus aureus in the test of antibiogram by agar diffusion and in the determination of minimum inhibitory concentration (MIC), with a diameter of 27 mm of inhibition zone and MIC from 3.12 to 1.56 ppm. The most apolar fraction showed higher antimicrobial activity, with a diameter of 33 mm of inhibition zone for the fraction 5 and the MIC obtained was from 1.56 to 0.78 ppm. Was also evaluated the antioxidant activity using the DPPH radical scavenging activity and crude extract showed dose-dependent response, and 89.05% in the concentration of 90 ppm. The less apolar fraction showed the higher antioxidant activity against DPPH, it was 67.36% for the concentration of 90 ppm. We also evaluated the cytotoxic activity of the crude extract on eight cancer cell lines, and it showed toxicity in a dose-dependent manner. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES