A aterosclerose tem ocupado um lugar de destaque entre os fatores de risco para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares, que por sua vez, constituem uma das principais causas de morte no mundo. As dislipedimas, o estresse oxidativo e a ativação plaquetária são importantes fatores de risco para aterosclerose. Sendo assim, o uso de hipolipemiantes em associação com antioxidantes, anticoagulantes, antiagregantes plaquetários, anti-inflamatórios ou vasodilatadores, têm sido sugerido no controle e até mesmo na prevenção do processo aterosclerótico. Assim como a bebida de café, as folhas do cafeeiro apresenta uma composição química diversificada, contendo diferentes substâncias químicas, alguns associados com a saúde humana, como o ácido clorogênico. O presente trabalho tem como objetivo geral avaliar o potencial antioxidante do extrato seco de folhas de Coffea arabica bem como seus possíveis efeitos sobre o perfil lipídico, função hepática, função renal e a agregação plaquetária em ratos dislipidêmicos. As folhas coletadas foram submetidas à secagem em estufa, pulverizadas em moinho de facas e o extrato foi obtidos através do método de extração exaustivo de percolação simples em solução hidroalcoólica 70% (V/V), seguida de evaporação sob pressão reduzida e liofilização. A triagem fitoquímica foi realizada através da determinação da concentração de fenóis método de Folin & Ciocaulteau e da análise do extrato por espectrometria de massas, com ionização por electrospray, no modo negativo e positivo. O potencial antioxidante in vitro foi avaliado através da determinação da capacidade sequestrante de radicais DPPH. Ratos “Wistars” machos (300 ± 25g), foram divididos em quatro grupos: controle, extrato, dislipidêmico e dislipidêmico-extrato, sendo que os dois últimos receberam Triton WR-1339, via i.p. para indução da dislipidemia. Os níveis séricos de uréia, colesterol total, triglicerídeos e colesterol HDL foram determinados por métodos enzimáticos e a concentração de creatinina foi determinada pelo método do pricrato alcalino. A atividade de AST e ALT foi determinado pelo método de Reitman e Frankel e a atividade de fosfatase alcalina pelo método de Roy modificado. A peroxidação lipídica foi determinada no plasma e em homogeneizados de aorta por meio da determinação da concentração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) por fluorimetria. A agregação plaquetária foi avaliada em plasma rico em plaquetas por turbidimetria. A concentração de fenóis totais foi igual a 6,817 ± 0,133 g EAG/100 g de extrato. O conjunto de dados fornecidos pelo espectro de massas sugeriu que o extrato em estudo possui em sua composição compostos fenólicos como o ácido quínico, a rutina e o ácido clorogênico. O extrato apresentou atividade sequestrante de radicais DPPH máxima de 90,1%, na concentração de 0,16 mg/ml, comparável aos padrões BHT (95,5%) e ácido gálico (88,2%). Nenhuma alteração significativa foi observada nos níveis de uréia e creatinina bem como nas atividades de AST, ALT e fosfatase alcalina. Os animais tratados com Triton WR 1339 apresentaram um aumento nos níveis séricos de colesterol (CT) e de triglicerídeos, na concentração de TBARS no plasma e na aorta bem como na agregação plaquetária. O grupo de animais tratados com o extrato não foi capaz de induzir alterações no perfil lipídico, mas apresentou uma redução significativa na concentração de TBARS e na agregação plaquetária em comparação com os animais dislipidêmicos não tratados com o extrato. Estes resultados sugerem que o extrato em estudo pode apresentar um efeito benéfico sobre a prevenção da aterosclerose, por prevenir o aumento da peroxidação lipídica no plasma e na aorta bem como a agregação plaquetária em ratos dislipidêmicos. / Atherosclerosis has occupied a prominent place among the risk factors for developing cardiovascular disease, which in turn, constitute a major cause of death worldwide. Dyslipidemias, oxidative stress and platelet activation are important risk factors for atherosclerosis. Thus, the use of statins in combination with antioxidants, anticoagulants, antiplatelet, antiinflammatory or vasodilators has been suggested to control and even prevent atherosclerotic processes. As the coffee beverage, its leaves has a diversified chemical composition, containing different chemicals, some associated with human health, such as chlorogenic acid. This work has as main objective to evaluate the antioxidant potential of dried extract of leaves of Coffea arabica and its possible effects on the lipid profile, liver function, renal function and platelet aggregation in dyslipidemic mice. The collected leaves were dried in an oven, pulverized in a Wiley mill and the extract was obtained by the method of exhaustive extraction of simple percolation in water-alcohol solution 70% (V / V), followed by evaporation under reduced pressure and lyophilization. Phytochemical screening was done by determining the concentration of phenols Folin & Ciocaulteau and analysis of the extract by mass spectrometry with electrospray ionization in negative and positive ways. The antioxidant potential in vitro was assessed by determining the ability of scavenging DPPH radicals. Rats "Wistar" rats (300 ± 25g) were divided into four groups: control, extract, extract-dyslipidemic and dyslipidemic, with the latter two received Triton WR-1339, ip To induce dyslipidemia. Serum urea, total cholesterol, triglycerides and HDL cholesterol were determined by enzymatic methods and creatinine concentration was determined by the alkaline pricrate method. The activity of AST and ALT were determined by the method of Reitman and Frankel and alkaline phosphatase activity by the method of Roy with modifications. Lipid peroxidation was determined in plasma and aortic homogenates by determining the concentration of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) by fluorimetry substances. Platelet aggregation was evaluated in platelet-rich plasma by turbidimetry. The concentration of total phenols was equal to 6.817 ± 0.133 g EAG/100 g of extract. The data set provided by the mass spectrum suggested that the extract under study has in its phenolic composition as quinic acid, rutin and chlorogenic acid. The extract showed maximum scavenging activity of DPPH radicals of 90.1% at a concentration of 0.16 mg / ml, comparable to BHT standards (95.5%) and gallic acid (88.2%). No significant change was observed in the levels of urea and creatinine as well as in AST, ALT and alkaline phosphatase activities. The animals treated with Triton WR 1339 showed an increase in serum levels of cholesterol (TC) and triglycerides in TBARS concentration in plasma and aorta as well as platelet aggregation. The group of animals treated with the extract was not able to induce changes in the lipid profile, but showed a significant decrease in TBARS concentration and platelet aggregation compared with dyslipidemic animals not treated with the extract. These results suggested that the extract study has a beneficial effect on the prevention of atherosclerosis by preventing the increase in lipid peroxidation in plasma and aorta as well as platelet aggregation in dyslipidemcs rats.

A busca de plantas medicinais com potencial para o alívio de dores e até mesmo a cura de doenças tem se expandido em diversos países, inclusive no Brasil. O Brasil é um grande produtor de maracujá, que além do seu valor nutricional de seus frutos, tem sido utilizado também com finalidade terapêutica, na medicina popular. Além das diversas aplicações do chá das folhas de maracujá na medicina popular, alguns autores têm sugerido também as atividades hipoglicemiante, antioxidante, anti-glicante e antiagregante de plaquetas para extratos de folhas obtidos de diferentes espécies de maracujá. No entanto, o papel modulatório do extrato bruto seco de folhas P. edulis Sims sobre a glicação proteica e ativação plaquetária não está totalmente esclarecido. O diabetes mellitus é considerado como um importante problema de saúde pública, devido à sua elevada prevalência, ao desenvolvimento de complicações crônicas incapacitantes e ao alto custo econômico gerado pelo seu tratamento. Estudos desenvolvidos com diferentes modelos experimentais têm demonstrado que o DM leva à ativação de plaquetas com consequente aumento de sua agregação bem como ao aumento da glicação de proteínas, sendo estas alterações diretamente envolvidas nas vias bioquímicas que levam ao desenvolvimento das principais complicações crônicas induzidas pelo DM. Sendo assim, o presente trabalho teve como objetivo geral determinar o teor de polifenóis totais e avaliar os efeitos do extrato seco das folhas de Passiflora edulis Sims sobre marcadores bioquímicos, a glicação de colágeno, a ativação e a agregação plaquetária em ratos diabéticos. Ratos machos Wistar (300 ± 25g) foram tratados com aloxano (150mg/Kg de peso corporal dissolvido em salina 0,9%, via intraperitoneal). As folhas secas de Passiflora edulis Sims foram coletadas no município de Alfenas-MG (21° 27’ 33’’ S; 46° 01’ 59’’ w; Altitude 789 m) e identificadas na Universidade Federal de Lavras-MG. O extrato seco foi obtido por maceração em solução hidroetanólica 70%(V/V), seguida de evaporação sob pressão reduzida e de liofilização. O extrato seco foi diluído em água e administrado por gavagem durante 90 dias após a indução do diabetes (200mg do extrato seco/Kg de peso do animal). O grupo controle recebeu apenas água. A agregação plaquetária foi avaliada em agregômetro da marca PA-04 Qualiterm Eletronica à 37°C. Os marcadores bioquímicos (glicemia, ureia, colesterol total e frações ) foram dosados no soro por métodos enzimáticos e a creatinina foi determinada no soro dos animais pelo método de jaffé modificado ( rastreável ao IDMS). O conteúdo de colágeno glicado foi dosado por fluorescência. A produção de espécies oxidantes foi monitorada por quimiluminescência. A administração do extrato seco de folhas de Passiflora edulis Sims reduziu a glicemia em jejum bem como os níveis de HbA1C no sangue dos animais diabéticos. A administração do extrato seco das folhas de Passiflora edulis Sims impediu o aumento dos níveis de creatinina no soro dos animais diabéticos. O extrato seco das folhas de Passiflora edulis Sims foi capaz de reduzir a concentração de lipoproteínas aterogênicas no soro dos animais tratados. Os animais diabéticos apresentaram maior produção basal de oxidantes e a agregação plaquetária em relação aos animais não diabéticos. O tratamento dos animais diabéticos com o extrato de Passiflora edulis Sims atenuou os efeitos do diabetes sobre a produção de oxidantes e a agregação plaquetária. Os níveis de AGEs determinados em amostras de colágeno obtido do tendão de animais diabéticos foi maior que nos animais não diabéticos e o tratamento dos animais diabéticos com o extrato seco levou a uma redução da glicação do colágeno. / The search for medicinal plants with potential for pain relief and even cure diseases has expanded in several countries, including Brazil. Brazil is a major producer of passion fruit, which is beyond the nutritional value of its fruit, also been used for therapeutic purposes in folk medicine. In addition to the various applications of tea leaves passion in folk medicine, some authors have also suggested the hypoglycemic activity, antioxidant, antiplatelet and anti-platelet glicante for leaf extracts obtained from different species of passion fruit. However, the modulatory role of dry crude extract of leaves P. edulis Sims on protein glycation and platelet activation is not fully understood. Diabetes mellitus is considered as a major public health problem due to its high prevalence, the development of disabling chronic complications and the high economic costs generated by their treatment. Studies carried out with different experimental models have shown that DM leads to platelet activation with consequent increase of aggregation as well as increased glycation of proteins, and these changes directly involved in the biochemical pathways leading to the development of major chronic complications induced by DM . Thus, the present work had as main objective to determine the content of total polyphenols and evaluate the effects of dry extract of Passiflora edulis Sims on biochemical markers of collagen glycation, activation and platelet aggregation in diabetic rats. Male Wistar rats (300±25g) were treated with alloxan (150mg/kg body weight dissolved in 0.9% saline) intraperitoneally. The fresh leaves of passion fruit were collected in Alfenas-MG (21° 27’ 33’’ S; 46° 01’ 59’’ w; Altitude 789 m) and identified at the Federal University of Lavras-MG. The dry extract was obtained by grinding in a hydroethanolic solution 70% (V/V), followed by evaporation under reduced pressure and lyophilization and administered (200mg dry extract / kg) to normal and diabetic rats, for ninety days. The control group received water only. Platelet aggregation was performed in aggregometer PA-04 Qualiterm Eletronica to 37°C. Biochemical markers were determined in serum by enzymatic method. The collagen glycation content will be performed by fluorescence. The oxidant species production was monitored by chemiluminescence. The administration of dry extract of Passiflora edulis Sims leaves reduced fasting glucose and HbA1C levels in the blood of diabetic animals . The dry extract administration of Passiflora edulis Sims prevented the increase of serum creatinine levels of diabetic animals. The dry extract of Passiflora edulis Sims was able to reduce the concentration of atherogenic lipoproteins in the serum of treated animals. Diabetic animals had higher basal production of oxidants and platelet aggregation compared to non-diabetic animals. Treatment of diabetic animals with the extract of Passiflora edulis Sims attenuated the effects of diabetes on oxidant production and platelet aggregation. The AGEs levels determined in samples obtained from tendon collagen from diabetic rats was higher than in non- diabetic animals and the treatment of diabetic animals with dry extract led to a reduction of collagen glycation. / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq

As espécies da família Brassicaceae são amplamente utilizadas na medicina popular para diversos fins terapêuticos. Pesquisas têm demonstrado que o rabanete (Raphanus sativus L.) contém muitas classes de fitoquímicos biologicamente ativos com propriedades anti-inflamatória, antimicrobiana, antioxidante e antimutagênica. Neste contexto, este estudo teve por objetivos: fornecer parâmetros de qualidade para a droga vegetal; realizar as análises químicas e avaliar as atividades antimicrobiana, leishmanicida e citotóxica do extrato seco e das frações das folhas de Raphanus sativus var. oleiferus Metzg. Inicialmente, realizou-se a triagem fitoquímica preliminar, por meio de testes qualitativos e Cromatografia em Camada Delgada no extrato seco, que permitiram a detecção de compostos como: flavonoides, taninos e terpenos. Posteriormente, o extrato seco e as frações foram analisados em espectrômetro de massas, o que possibilitou a identificação de alguns constituintes químicos, baseando-se na massa molecular e nos mecanismos de fragmentação das moléculas. As análises químicas quantitativas demonstraram que os teores de fenóis nas frações foram superiores à concentração obtida no extrato seco, sendo que os fenóis ficaram mais concentrados na fração butanólica (121,27 mg EAG/g). Os teores de flavonoides nas frações, exceto na fração aquosa, também foram superiores ao obtido no extrato seco, sendo que os flavonoides ficaram mais concentrados na fração acetato de etila (98,02 mg EQ/g). Nas avaliações da atividade antioxidante in vitro, observou-se que a atividade antirradicalar e o poder redutor das frações demonstraram resultados mais significativos em relação ao extrato seco, sendo que a fração acetato de etila apresentou os melhores resultados em ambos os experimentos, com porcentagem de sequestro de radicais DPPH de 83,45% e com porcentagem de redução de íons férrico de 11,34%. A análise da atividade antimicrobiana revelou que o extrato seco teve maior média de halos de inibição frente ao Bacillus subtilis (18,67 mm), sendo considerada uma média estatísticamente superior as produzidas pelas frações (p<0,05). Entretanto, os menores valores da concentração inibitória mínima (CIM) foram obtidos para Micrococcus luteus, sendo que a fração acetato de etila demonstrou menor concentração inibitória mínima (0,1 mg/mL) para esse micro-organismo, sendo considerada a fração mais ativa (80%). A bactéria Micrococcus luteus foi inibida por 50% das frações testadas com concentração inibitória mínima inferior ou igual a 1 mg/mL. O extrato seco e as frações não demonstraram atividade contra as bactérias Gram-negativas, as micobactérias e os fungos, e também não foram ativos contra os parasitos de Leishmania amazonensis. Os estudos demonstraram uma moderada correlação entre os mais baixos valores da CIM e as maiores quantidades de fenóis e de flavonoides, sugerindo que a atividade antimicrobiana não está relacionada somente com esses compostos, porém houve uma forte correlação entre os melhores valores da atividade antioxidante in vitro (pelo método do radical DPPH e pelo método do poder redutor) e as maiores quantidades de fenóis e de flavonoides no extrato e frações avaliados, sugerindo que os compostos fenólicos, especialmente os flavonoides, sejam os principais responsáveis pela atividade antioxidante in vitro da espécie vegetal em estudo. / The species of the Brassicaceae family are widely used in folk medicine for various therapeutic purposes. Research has shown that the radish (Raphanus sativus L.) contains many classes of biologically active phytochemicals with anti-inflammatory, antimicrobial, antioxidant and antimutagenic properties. In this context, this study aimed: to provide the quality parameters for plant drug; perform chemical analyzes and evaluate antimicrobial, antileishmanial and cytotoxic dry extract and fractions from the leaves of Raphanus sativus var. oleiferus Metzg. Initially, there was the preliminary phytochemical screening using qualitative tests and Thin Layer Chromatography in dry extract, which allowed the detection of compounds such as flavonoids, tannins and terpenes. Subsequently, the dry extract and fractions were analyzed in a mass spectrometer, which allowed the identification of some chemical constituents, based on the molecular mass and fragmentation mechanisms of molecules. Quantitative chemical analysis showed that the levels of phenolics in the fractions obtained were higher than the concentration in dry extract, and phenols were more concentrated in the butanol fraction (121,27 mg GAE/g). The content of flavonoids in the fractions, except the aqueous fraction, were also higher than those reported in dry extract, and flavonoids were more concentrated in the ethyl acetate fraction (98,02 mg EQ/g). The evaluation of the antioxidant activity in vitro, it was observed that the antiradical activity and reducing power of the fractions showed most significant results on the dry extract, and the ethyl acetate fraction showed the best results in both experiments, with percentage of sequestration DPPH radical of 83,45% and a percentage reduction of ferric ions 11,34%. The analysis of antimicrobial activity revealed that the dry extract had higher mean inhibition zones against Bacillus subtilis (18,67 mm) and is considered a statistically higher mean those produced by the fractions (p<0,05). The lowest values of minimum inhibitory concentration (MIC) were obtained for Micrococcus luteus, and the ethyl acetate fraction showed lowest minimum inhibitory concentration (0,1 mg/mL) for this micro-organism, is considered the most active fraction (80%). The bacterium Micrococcus luteus was inhibited by 50% of the tested fractions with lower or equal minimum 1 mg/mL inhibitory concentration. The dry extract and fractions do not show activity against Gram-negative bacteria, mycobacteria and fungi, and also were not active against the parasite Leishmania amazonensis. The studies showed a moderate correlation between the lowest MIC values and the highest amounts of phenolics and flavonoids, suggesting that the antimicrobial activity is not related only to these compounds, however there was a strong correlation between the best values antioxidant activity in vitro (by the method DPPH radical and by the method of reducing power) and higher amounts of phenolics and flavonoids in the extract and fractions evaluated, suggesting that phenolic compounds, especially flavonoids, are mainly responsible for the antioxidant activity in vitro plant species under study.

A esquistossomose é uma doença parasitária crônica causada por parasitos do gênero Schistosoma e apresenta um significativo impacto social e econômico. Atualmente, o praziquantel (PZQ) é o medicamento utilizado para o tratamento da doença, indicado pela Organização Mundial da Saúde. No entanto, a dependência de um único fármaco é preocupante, pois com reinfecções constantes e repetição de tratamento pode ocorrer a seleção de cepas resistentes. Sendo assim, a busca por novas substâncias com atividade esquistossomicida é essencial. O gênero Senna é alvo de muitos estudos devido ao reconhecimento de sua grande diversidade biológica e propriedades farmacológicas. No presente trabalho foi avaliada a atividade esquistossomicida in vitro do extrato etanólico (EEt), frações do extrato (FAE e FDm), e de alcaloides majoritários obtidos das flores de Senna spectabilis. Dos alcaloides piperidínicos também foi avaliada a atividade cercaricida e seu efeito em interação com PZQ. Os vermes adultos de S. mansoni foram expostos a diferentes concentrações do EEt, FAE e FDm, e mistura de substância cassina/ espectalina para avaliação de viabilidade dos parasitos e cálculo de concentração inibitória de 50%. Foi avaliada a atividade excretora e lesões de tegumento dos vermes adultos de S. mansoni expostos à mistura de alcaloides cassina/espectalina por meio de marcação com sondas fluorescentes. A viabilidade celular foi avaliada utilizando células mononucleares do sangue periférico humano (PBMC) por ensaio de redução de MTT. O extrato etanólico e a fração acetato de etila de S. spectabilis, em concentrações elevadas provocam diminuição da ovoposição, paralisação de sistema excretor e lesões de tegumento. A fração diclorometano exerce atividade significativa quando comparada ao controle, visto que tal atividade é resultado da maior concentração de alcaloides nesta fração. A mistura (cassina/ espectalina) causou paralisia total dos vermes adultos de S. mansoni além de inibir a atividade excretora e provocar lesões de tegumento consideráveis no parasito na concentração de 50,0 µg/mL. Em relação à atividade cercaricida, os alcaloides supracitados provocaram paralisação e perda de cauda a partir da concentração de 50,0 µg/mL, e exibiram resultados relevantes em sinergismo com PZQ. A mistura de alcaloides também exibiu baixo valor de DL50 34,7 µg/mL; e apresentou potencial citotóxico moderado CC50 132,1 µg/mL. Estes resultados são promissores quanto à atividade esquistossomicida, portanto requerem estudos mais aprofundados. / Schistosomiasis is a chronic parasitic disease caused by parasites of the genus Schistosoma and presents a significant social and economic impact. Currently, praziquantel (PZQ) is the drug used for the treatment of the disease, indicated by the World Health Organization. However, the dependence on a single drug is concerning, since with constant reinfections and retreatment the emergence of resistant strains can occur. Therefore, the search for new compounds with schistosomicidal activity is essential. The genus Senna is the subject of many studies due to the recognition of its great biological diversity and pharmacological properties. In the present study, in vitro schistosomicidal activity was evaluated of the ethanolic extract, fractions from the extract and majoritarian alkaloids obtained from Senna spectabilis flowers. From the last two compounds, the cercaricidal activity and its effect in interaction with PZQ were also evaluated. The adult worms of S. mansoni were exposed to different concentrations of ethanolic extract (EEt), ethyl acetate (FAE) and dichloromethane (FDm) fractions, and mixtures of compounds cassina/espectalina for the assessment of parasites viability and calculation of the inhibitory concentration of 50%. The excretory activity and tegument lesions of adult worms of S. mansoni exposed to the mixture of alkaloids cassina/espectalina were evaluated through staining with fluorescent probes. Cell viability was assessed using human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) by MTT reduction assay. The (EEt) and (FAE) of S. spectabilis, in high concentrations, cause decrease in oviposition, excretory system shutdown and tegument lesions. FDm fraction has significant activity when compared to the control, as this activity is result of higher concentration of alkaloids in this fraction. The mixture (cassina/espectalina) caused complete paralysis of adult worms of S. mansoni, in addition to inhibit the excretory activity and lead to considerable tegument lesions in the concentration of 50.0µg/mL. Regarding cercaricidal activity, the above-mentioned alkaloids caused paralysis and tail loss starting at a concentration of 50.0 µg/mL, and relevant results were obtained in the synergism with PZQ. The alkaloids mixture also showed low DL50 value 34.7µg/mL; and presented potential moderate cytotoxic CC50 132.1µg/mL. These results are promising regarding the schistosomicidal activity, therefore require further study. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

A busca de novos princípios ativos de microrganismos é uma das áreas em que mais se investe nos países desenvolvidos. Entre estes microrganismos, os fungos têm grande destaque por sua produção de diversos metabólitos de interesse farmacológico. Endófitos são todos os microrganismos, cultiváveis ou não, que habitam o interior dos tecidos vegetais, sem causar danos ao hospedeiro e sem desenvolver estruturas externas, excluindo, dessa forma, bactérias noduladoras e micorrizas. Considerando a importância da cultura do café no estado de Minas Gerais, pesquisas com fungos endófitos de café, permitem a ampliação do conhecimento da diversidade desses fungos. Neste estudo, um total de 22 fungos endófitos isolados de café (Coffea arabica L.) foi cultivado in vitro. O screening foi conduzido usando o método de difusão em agar contra bactérias Gram-positivas, Gram-negativas e leveduras. O isolado mais efetivo contra todos os microrganismos testados foi a linhagem Alternaria alternata e posteriormente, seu extrato bruto foi analisado. A concentração de fenólicos totais do extrato bruto do endófito foi de 3,44 μgEAG/mg de extrato. Para os testes de atividade antimicrobiana, a concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida e fungicida mínima (CBFM) conta Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Candida albicans foram determinadas. Os valores de CIM variaram entre 50-100 μg/mL para S. aureus e 400-800 μg/mL para E. coli. O extrato não apresentou atividade nas concentrações testadas para C. albicans. Além destes testes, foi avaliada a atividade antioxidante pela capacidade sequestrante de radicais DPPH e pela oxidação do sistema β-caroteno/ácido linoleico, as quais não apresentaram resultados significativos. A atividade antitumoral foi avaliada pelo teste do MTT. À diluição de 400 μg/mL, o extrato apresentou atividade de aproximadamente 50% sobre células HeLa in vitro. Esses resultados demonstram que fungos endófitos podem ser uma promissora fonte de compostos antimicrobianos necessitando de estudos posteriores. / The search for new active components of microorganisms is one of the areas of greatest investment in developed countries. Among these microorganisms, fungi are distinguished by their ability to produce diverse metabolites for pharmacological purposes. Endophytes are all microorganisms, cultivated or not, that live inside plant tissue, without causing harm to the host and without developing external structures, excluding nodule bacteria and mycorrhiza. Considering the importance of coffee production in the state of Minas Gerais, studies of endophytic fungi in coffee allow for greater understanding of the diversity of these fungi. In this study, a total of 22 endophytic fungi isolated from coffee (Coffea arabica L.) were cultivated in vitro. The screening was conducted using the agar diffusion method against Gram-positive and Gram-negative bacteria and yeast. The most effective isolated fungus among all of the tested microorganisms was the lineage Alternaria alternata, and subsequently, its extract was assayed. The total phenolic content was 3.44 μgGAE/mg of the crude extract. For the antimicrobial activity assays, the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal and fungicidal concentration (MBFC) against Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Candida albicans were determined. The ranges of MIC values were 50-100 μg/mL for S. aureus and 800-1000 μg/mL for E. coli. The crude extract did not show activity in the tested concentrations for C. albicans. Through these tests, the antioxidant activity of the fungus was assayed through its ability to scavenge DPPH radicals and through β-carotene/linoleic acid system oxidation, both of which were not significant. Antitumour activity was studied by the MTT assay. At a dilution of 400 μg/mL, the extract displayed a cytotoxic activity of approximately 50% towards HeLa cells in vitro. These results indicate that endophytic fungi could be a promising source of antimicrobial compounds and are worthy of further study.

A criptococose é infecção fúngica oportunista causada pelo Cryptococcus neoformans com alta incidência em indivíduos imunodebilitados, principalmente entre pacientes com Aids, sendo o número de casos registrados da doença no Brasil, 474.279, de 1980 a junho de 2007. Para melhor compreensão do agente etiológico, da criptococose e dos fatores associados à virulência são necessários estudos adicionais sobre a patogênese deste microrganismo. Dentre os fatores relacionados à virulência, a melanina é um dos principais e sua síntese ocorre por ação da lacase. Assim sendo, foram realizados estudos para avaliar a produção do pigmento entre amostras clínicas e ambientais de C. neoformans sob diferentes condições de pH (5, 6 e 7) e temperatura (25 °C, 30 °C e 35°C). A relação do pigmento com o perfil de sensibilidade aos antifúngicos fluconazol e anfotericina B também foi avaliada. Os resultados mostraram que não houve comportamento uniforme de melanização entre as amostras. As maiores alterações de pigmentação e crescimento das leveduras foram observadas nos meios de cultura com pH 7 incubados a 35 °C. A técnica de eletroforese em gel PAGE nãodesnaturante mostrou-se uma ferramenta útil na análise da lacase produzida pelas amostras de C. neoformans com posterior quantificação de melanina por densitometria das bandas após reação com o substrato L-dopa. As amostras ambientais apresentaram os maiores valores de intensidade de melanina e ampla faixa de variação. Mais da metade das amostras clínicas (56,2 %) apresentaram as menores intensidades de melanina. A amostra clínica ICB 88 revelou duas bandas de melanina no gel indicando a presença de duas isoformas da lacase. Os testes de sensibilidade aos antifúngicos fluconazol e anfotericina B, através das metodologias de difusão em agar por disco e fita (E-test®), mostraram que a leitura após 72 h de incubação pode levar a erro na classificação quanto ao perfil de sensibilidade, tanto nos testes com ou sem adição de melanina. Adição de melanina pareceu não interferir nos resultados frente ao fluconazol nas metodologias de difusão em agar a partir de disco e fita (E-test®). Para anfotericina B houve aumento de CIMs para 90,9 % das amostras, sendo 45,4 % superior a 2 diluições com adição de melanina nos testes de sensibilidade na metodologia de difusão em agar a partir de fita (E-test®). / Cryptococcosis is an opportunistic fungal infection caused by Cryptococcus neoformans that has presented increased incidence with the great number of immunocompromised patients, mainly AIDS ones, being 474.273, the number of cases registered in Brazil since 1980 to june 2007. Additional studies about microorganism’s pathogenesis is necessary for better comprehension about the aethyological agent, criptococosis and associated factors to virulence. Among virulence’s factors, melanin is one of the mainly and its synthesis occurs by laccases action. So, some studies were performed to evaluate the melanin pigment’s production between clinical and environmental strains of C. neoformans under different conditions of pH (5, 6 and 7) and temperatures (25 °C, 30 °C and 35 °C). The pigment and susceptibility to fluconazole and amphotericin B relation’s was also evaluated. The results showed that there wasn’t comparable behaviour of melanization among the strains. The higher alterations on yeast’s pigmentation and growth were noted under pH 7 and at 35 °C. The electrophoresis technique on non-denaturant PAGE gel showed to be an useful tool to the analysis of laccase produced by C. neoformans strains and posterior quantification of melanin by spot’s densitometry after reaction with L-dopa substrate. The environmental strains showed the higher values of melanin intensities and large variation range. Over than a half of clinical strains (56.2 %) showed the lower melanin’s intensities. The clinical strain, ICB 88 revealed two melanin spots on gel indicating the presence of two laccase isoforms. The susceptibility antifungal tests with fluconazole and amphotericin B through disk diffusion and E-test® methods showed that reading after 72 hours can induce to mistakes on the susceptibility profile of strains, either in presence or absence of melanin. Addition of melanin on medium surface appears not change the results of susceptibility to fluconazole in disk diffusion and E-test®, but to amphotericin B was observed increase of MICs to 90.9 % of strains, been 45.4 % upper to 2 dilutions after addition of melanin in Etest ® methodology.

A leishmaniose tegumentar americana (LTA), uma das formas clínicas das leishmanioses, está em expansão no Brasil e representa importante causa de morbidade para populações residentes em áreas endêmicas. Avaliações do perfil epidemiológico, dos serviços de diagnóstico e tratamento são necessárias para o estabelecimento de estratégias de controle da doença, assim como o emprego de novas ferramentas laboratoriais, como a PCR. Neste trabalho foram avaliados os aspectos epidemiológicos, de diagnóstico e tratamento de pacientes com LTA de diferentes regiões de Minas Gerais, além do uso de diferentes técnicas de extração de DNA e de iniciadores na PCR para a identificação e diferenciação do agente etiológico. Adicionalmente, foi comparada a positividade dos iniciadores dirigidos para a região conservada (150/152) e variável (13Y/13Z) do minicírculo do kDNA de Leishmania em amostras biológicas de pacientes sugestivos para LTA. Foi realizado levantamento epidemiológico, de diagnóstico e tratamento de 824 pacientes portadores de LTA, sendo 261 da região sul e sudoeste do estado de Minas Gerais (SSMG) e 563 do Vale do Rio Doce (VRD). Os dados foram obtidos através das fichas de notificação das Gerências Regionais de Saúde (GRS) do SSMG e do ambulatório de Leishmanioses “Dr. Paulo Araújo Magalhães” de Caratinga (VRD) entre 2002 e 2006. Trinta e nove pacientes com lesões sugestivas para LTA, provenientes destas regiões foram submetidos a exames laboratoriais, além da PCR. As amostras de DNA foram extraídas por aquecimento, pela técnica do fenol/clorofórmio, proteinase K e kit Wizard, e posteriormente usadas na PCR e PCR-RFLP. No período analisado, foi observada diminuição de 59,7% dos casos de LTA no SSMG e de até 25,7% no VRD. A forma clínica cutânea foi a predominante, com 91,9 e 93,6% no SSMG e VRD respectivamente. No SSMG, a maioria dos pacientes (51,7%) tem residência urbana, enquanto que no VRD a rural foi predominante (95,7%). No SSMG houve positividade em 55,6, 10,7 e 19,5% dos casos de LTA no Teste de Montenegro (TM), nos exames parasitológico e histopatológico, respectivamente. No VRD a positividade dos casos de LTA foi de 84,0 no TM e 73,0% no exame parasitológico. A alta por cura com a medicação empregada variou de 71,8 a 92,0% no SSMG e chegou a 78,0% no VRD. Dos 39 pacientes sugestivos, 32 foram confirmados para LTA. As extrações permitiram observar que mesmo a partir de DNA total degradado foi possível detectar kDNA de Leishmania. Nas amostras sugestivas, a positividade com 13Y/13Z e 150/152 foi de 56,4 e 76,9% respectivamente. Nos pacientes confirmados para LTA, a positividade com 13Y/13Z foi de 68,7% e com 150/152 foi de 93,7%. O emprego dos iniciadores 150/152 foi mais viável, o que não descarta o uso de 13Y/13Z, dada a expressiva positividade alcançada em amostras que requerem extração simplificada de DNA e com baixo custo. A PCR-RFLP possibilitou a identificação de L. (V.) braziliensis nas amostras biológicas dos pacientes com LTA. Os dados do presente trabalho também reforçam a necessidade de ações que estabeleçam um centro de referência no diagnóstico e tratamento da LTA no SSMG. / The american tegumentary leishmaniasis, (ATL), one of clinic forms of leishmaniasis, is in expansion in Brazil and represent important cause of morbidity for populations who live in endemic areas. Profile epidemiological studies, health services and treatment are needs to establish strategies of disease control, as well as to employ new tools laboratorials, like PCR ones. This research evaluated the epidemiological aspects, diagnoses and treatment from patients with ATL from different regions Minas Gerais, beyond to use varied extraction techniques DNA and different primers in PCR to make possible the identification and differentiation of the etiological agents. Additionally, it compared the positivity of the primers addressed to the conserved (150/152) and variable (13Y/13Z) region of the Leishmania kDNA minicircle in biological samples of patients suggestive to ATL. It was to carried out epidemiological studies, diagnoses and treatment of 824 patients with ATL, being 261 from Southern and Southwestern regions of Minas Gerais state (SSMG) and 563 from river Doce valley (VRD). The data were obtained from notification files Regional Health Authorities – RHA of SSMG and from Leishmaniasis ambulatory “Dr. Paulo Araújo Magalhães” at Caratinga city (VRD) between 2002 and 2006. Thirty nine patients from these regions and with suggestive ATL lesions were submitted to laboratorial exams, beyond of the PCR. The DNA samples extracted by heating, phenol/ chloroform technique, proteinase K and by Wizard kit, and later used in the PCR and PCR-RFLP. In the period analyzed, it was observed decrease of 59.7% of ATL cases in SSMG and of up to 25.7% in VRD. The cutaneous clinic form was predominant with 91.9 and 93.6% in SSMG and VRD respectively. The greatest part of the patients from SSMG has urban residence (51.7%) while in VRD the rural was predominant (95.7%). In the SSMG there was positivity in 55.6, 10.7 and 19.5% of ATL cases in the Montenegro test (MT), parasitological and histopatological exams, respectively. In the VRD the positivity was 84.0 in the MT and 73.0% in the parasitological exam. Discharge from the treatment due to cure varied of 71.8 to 92.0% in the SSMG and reached 78.0% in VRD. From the 39 suggestive patients, 32 were confirmed to ATL. The DNA extractions allowed observing that even starting from total degraded DNA was possible to detect kDNA of Leishmania. In the suggestive samples, the positivity of DNA with 13Y/13Z and 150/152 was about 56.4 and 76.9% respectively. In the confirmed patients to ATL, the positivity to 13Y/13Z was about 68.7% and to 150/152 was of 93.7%. The employment of the primers 150/152 was viable, what doesn't discard the use of 13Y/13Z, given the expressive positivity reached in samples that request simplified extraction of DNA and with low cost. PCR-RFLP made possible the identification of L. (V.) braziliensis in the patients' biological samples with LTA. The data of the present work they also reinforce the need of actions that establish a reference center in the diagnosis and treatment of LTA in SSMG. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Nos últimos anos o aumento na incidência de candidose superficial e invasiva causada por espécies emergentes resistentes tem sido atribuído a disseminação do uso de antibióticos e agentes imunossupressores. O aumento de Candida não-albicans deve-se ao incremento de pacientes imunodeprimidos, neutropênicos, recém nascidos de baixo peso, procedimentos invasivos e iatrogenia. Todos esses fatores permitem que agentes pouco virulentos, causem doenças. Vários estudos bioquímicos e moleculares foram realizados no sentido de elucidar as causas da resistência a antifúngicos em leveduras. Os objetivos do presente estudo foram: estudar leveduras do gênero Candida isoladas da cavidade bucal de pacientes com e sem HIV; comparação de métodos de identificação dos isolados; determinar o perfil de sensibilidade aos antifúngicos anfotericina B e fluconazol pelas metodologias de microdiluição CLSI, AFSTEUCAST e difusão em agar Etest e obter amostras heterorresistentes à anfotericina B e ao fluconazol por indução e seleção. Foram identificados 22 isolados de C. albicans, 3 de C. tropicalis, 3 de C. parapsilosis e 2 de C. glabrata segundo o método clássico. A identificação por métodos morfológicos e bioquímicos foi 100% concordante com o método molecular (PCR), tanto pela amplificação dos primers espécies-específicos (C. albicans e C. dubliniensis) quanto pela comparação do tamanho do fragmento amplificado pelos primers da região ITS2. A correlação entre a metodologia Etest e os dois métodos de microdiluição foi alta. Todas as amostras selvagens foram sensíveis a anfotericina B (CIM£2,0μg/mL) e apenas um isolado (3,33%) de C. tropicalis foi resistente ao fluconazol (CIM³64,0μg/mL por CLSI e CIM³64,0μg/mL por AFST-EUCAST). Foram selecionadas amostras heteroresistentes através da pressão seletiva utilizando meio adicionado de fluconazol (8μg/mL) e em seguida com anfotericina B (1,0μg/mL). A pressão seletiva também foi feita iniciando-se com anfotericina B e em seguida fluconazol. Paralelamente, as amostras selvagens foram submetidas à indução de resistência através do cultivo primeiro em concentrações crescentes de fluconazol (16,0; 32,0; 64,0; 128 e 256mg/mL) e em seguida com anfotericina B (0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 e 3,0mg/mL). Os testes também foram feitos invertendo-se os antifúngicos, iniciando com anfotericina B e depois fluconazol. Foram obtidas três amostras heterorresistentes a fluconazol, das quais duas foram por indução (C. glabrata e C. tropicalis) e uma por seleção (C. tropicalis.). Ambas amostras de C. tropicalis foram originadas de um mesmo isolado selvagem. Nenhuma amostra mudou seu perfil de sensibilidade para anfotericina B, apesar de alguns isolados apresentarem capacidade de crescimento em várias concentrações deste antifúngico (1,0 a 3,0μg/mL). Após cultivos sucessivos em meio livre de droga, somente a cepa obtida por seleção manteve seu fenótipo de resistência. As cepas selvagens e suas mutantes apresentaram o mesmo perfil quando comparadas pela amplificação da região ITS2. Conclui-se que, embora a maior parte das espécies estudadas seja C. albicans (73,33%) todas as amostras heteroresistentes ao fluconazol obtidas foram Candida nãoalbicans (10%). As duas cepas mutantes obtidas pelo mesmo isolado inicial possuem, possivelmente, mecanismos múltiplos e distintos de resistência que, associado ao isolado, conferem resistência e/ou adaptabilidade à levedura frente ao antifúngico. / In the last years the increase in the incidence of superficial and invasive candidosis caused by resistant species has been attributed to the use of antibiotics and immunosuppression drugs. The increase do Candida non-albicans isolate due to the increment of patient immunocompromised, immunodeficiency virus infection, neutropenic, newly born of low weight, procedures invasives and iatrogenic. All those factors allow that agents a little virulent, caused diseases. Several biochemical and molecular studies have been accomplished for elucidating the causes of resistance in yeasts. The aims of the present research were: to study yeasts of the gender Candida isolated of the buccal cavity patients with and without HIV; comparison of methods of identification of isolates ; to determine the sensibility profile to the amphotericin B and fluconazole antifungals by microdilution methodologies CLSI, AFST-EUCAST and Etest difusion agar and acquisition of heteroresistent samples to amphotericin B and to fluconazole by induction and selection experiments. Were identifications 22 C. albicans, 3 C. tropicalis, 3 C. parapsilosis and 2 C. glabrata through the classic methods. The identification by morphologic and biochemisth was 100% agreement with the results obtained by the molecular method (PCR), them by the amplification of the species with specific primers (C. albicans and C. dubliniensis) as for the comparison of the size of the fragment amplified by the primers of region ITS2. The correlation among the methodology Etest and the two microdilution methods (CLSI and AFST-EUCAST) was higth. All samples wilds were suscetibility to amphotericin B (CIM£2,0μg/mL) and just one isolate (3,33%) of C. tropicalis was resistent to fluconazole (CIM³64,0μg/mL por CLSI e CIM³ 64,0μg/mL por AFST-EUCAST). Resistant strains were obtained by selective pressure using a medium amended with Fluconazole (8 μg/mL) and after that a medium with Amphothericin B (1.0 μg/mL). The selective pressure was also performed using Amphothericin B at first followed by Fluconazole. Similarly, wild samples were submitted to the induction of resistance by culturing in increasing concentrations of Fluconazole (16.0; 32.0; 64.0; 128 e 256mg/mL) followed by culturing in increasing concentrations of Amphotericin B (0.5; 1.0; 1.5; 2.0; 2.5 e 3.0mg/mL) and, after that, inverting the antifungal agents: Amphotericin B at first, followed by Fluconazole. Three samples heteroresistant to Fluconazole were obtained, two of which obtained by induction (C. glabrata and C. tropicalis) and one by selection (C. tropicalis.). Both C. tropicalis samples were originated from te same wild strain.None sample chamged its susceptibility profile to amphotericin B, in spite of some isolates that presented capacity of growth in several concentrations of this antifungals (1,0 a 3,0μg/mL). After successive cultivations in medium free of drugs, only the sample obtained by selection maintained your resistance phenotype. The wild samples and their mutants presented the same profile when compared by the amplification of the region ITS2. In conclusion, although most of the studied species were C. albicans (73,33%), all the fluconazol-heteroresistant samples obtained were Candida no-albicans (10%). The two mutant samples obtained from the same initial isolate possibly possess multiple and different mechanisms of resistance that, associated to the isolate, confer resistance and/or adaptability to the yeast in front to antifungal. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A hérnia incisional (HI) é uma das complicações tardias das laparotomias, podendo acometer até 20% dos pacientes operados. A utilização de próteses representou um avanço sem precedentes no reparo da HI. Contudo, não há ainda tratamento ideal para o reparo e prevenção desse mal. A membrana de látex da seringueira demonstrou atividade cicatrizante e angiogênica em estudos in vitro e in vivo. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da membrana de látex sobre o reparo da parede abdominal lesada de ratos. Foram utilizados ratos machos Wistar com peso de 340 ± 20 g, nos quais foi induzido um defeito na parede abdominal de 1 x 2 cm, tendo a linha alba ao centro. Os animais foram divididos em dois grupos experimentais: Controle (sem reparo) e Látex (reparo com a membrana) e submetidos à eutanásia aos 3, 5, 7 e 28 dias após a indução do defeito. Os fragmentos da parede abdominal foram retirados, divididos em duas partes e utilizados para análise histológica e bioquímica. A análise histológica revelou que o látex induziu a proliferação de vasos sangüíneos, o aumento de fibras musculares novas e a regeneração tecidual. Observou-se ainda o aumento da densidade de fibroblastos e deposição de colágeno, o que é importante para determinar o aumento da resistência a forças tensoras no tecido cicatricial, evitando a deiscência da ferida e a instalação da HI. Houve aumento gradual de deposição e organização das fibras colágenas durante o período de estudo. O látex induziu ainda a expressão dos fatores de crescimento celular, FGF-2 e TGFb; a diminuição da expressão de IGF e PDGF e não alterou a expressão de TGFa. A regeneração tecidual requer a influência de fatores de crescimento celular e uma seqüência de eventos celulares, que resultam na regulação celular, com proliferação, sobrevivência e diferenciação. Assim, a modulação de fatores de crescimento pela membrana de látex, parece ter contribuído positivamente para a regeneração do defeito da parede abdominal. Conclui-se que a membrana de látex da seringueira, quando usada para reconstrução da parede abdominal de ratos, permite a regeneração tecidual, a formação de tecido conjuntivo fibroso de reparação, podendo ser utilizada efetivamente na hernioplastia. / The incisional hernia (IH) formation is one complication after abdominal surgery, affecting up to 20% of the reoperated patients. The use of prosthesis increased the repair of IH, however there is not yet an ideal treatment to repair or prevent the IH. The latex membrane from rubber tree has demonstrated to be cicatrizing and angiogenic, both in in vitro and in vivo studies. The aim of this work was to evaluate the effect of the latex membrane on the repair of the injuried abdominal wall of rats. Male Wistar rats with 340 ± 20 g were used and it was induced an abdominal wall defect with 1 x 2 cm and the alba line at the centre. The animals were divided into two experimental groups: Control (without repair) and Latex (with membrane repair) and were euthanized at 3, 5, 7 e 28 days after the defect induction. The abdominal wall fragments were removed, divided into two parts and used for histological and biochemical analysis. The histological analysis revealed that the latex membrane induced blood vessels proliferation, new muscle fiber formation and tissue regeneration. It was also observed a fibroblast density and collagen deposition increasing that is important to increase the resistance to tension forces and prevent the incision dehisce and IH formation. There was also a gradual increasing on the deposition and organization of collagen fibers during the experiment. The latex membrane induced the expression of cellular growth factors, FGF-2 and TGFb; decreased the expression of IGF and PDGF and did not alter the TGFa expression. Tissue regeneration requires the influence of growth factors in a sequence of cellular events that results on the cell regulation, proliferation, surviving and differentiation. The modulation of growth factor by the latex membrane may have contributed positively to the abdominal wall defect regeneration. It can be concluded that the latex membrane from rubber tree, when used to reconstruct the rat abdominal wall, allows tissue regeneration, fiber connective tissue formation and may be used effectively in hernioplasty. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

A procura por novos agentes com ação antifúngica está se intensificando nos últimos anos. A incidência de infecções fúngicas causadas por espécies do gênero Candida sp tem aumentado consideravelmente, principalmente em pacientes imunocomprometidos, nos quais podem apresentar gravidade. Por esse motivo, há uma intensa busca por novas substâncias com atividade antifúngica concomitante com pesquisa de novos alvos farmacológicos. A proteína H+-ATPase presente na membrana plasmática dos fungos é um novo alvo promissor, já que é exclusiva de células fúngicas. O Ebselen, mostrou ser um bom inibidor de H+-ATPase, sendo utilizado em alguns estudos como padrão de inibição dessa enzima. O eugenol, presente nos óleos essenciais de várias espécies vegetais é conhecido por apresentar diversas propriedades biológicas, incluindo ação antifúngica, a qual também parece estar relacionada à inibição desta ATPase microbiana. Soma-se a isso, o fato das 1,2-benzisoxazolin-3-onas, serem uma classe pouco explorada quanto ao seu perfil de ação biológica. Nesse contexto, foram planejados e sintetizados por hibridização molecular seis derivados benzisoxazolinônicos do eugenol e substâncias correlatas. Destes, quatro são inéditos, sendo que nenhum deles foi explorado quanto ao potencial antifúngico. Os produtos planejados foram sintetizados por meio de procedimentos sintéticos clássicos, tendo em comum as etapas finais de formação de intermediários do tipo ácido hidroxâmico seguido de ciclização às benzisoxazolinonas via reação de Mitsunobu. Os produtos finais foram caracterizados pelos métodos espectrométricos usuais. Na sequência, os produtos finais, bem como intermediários de síntese, foram avaliados quanto à sua atividade antifúngica in vitro frente a espécies de Candida spp. por meio de testes de microdiluição. Adicionalmente, os produtos mais promissores tiveram avaliados seus perfis de citotoxidade para determinação do índice de seletividade. Os testes revelaram que todos os compostos sintetizados apresentam atividade antifúngica superior à do eugenol. As N-fenilbenzisoxazolinonas (18, 19 e 20) foram as mais promissoras, apresentando, em alguns casos, valores de IC50 comparáveis ou até igual ao do fármaco fluconazol contra as espécies C. krusei e C. glabrata. O composto 19 apresentou um IC50 de 142 M frente a C. krusei, valor esse bem próximo ao alcançado pelo fluconazol (104 µM), sendo também o único híbrido planejado que se mostrou fungicida. O produto de hibridização 18, alvo do planejamento desse trabalho, foi o mais ativo contra C. glabrata com um CI50 de 53 µM. Ele obteve um índice seletividade bom (IS 3,4) e sua potência foi igual à do fluconazol (CI50 52 µM). Essa classe de heterociclos é ainda pouco explorada e mostrou ter atividade antifúngica, sendo passível de alterações estruturais para otimização dessa atividade biológica. / The incidence of fungal infections caused by Candida spp. has increased considerably, especially in immunocompromised patients, who may present gravity. The most widely used antifungal agents in the treatment of these infections are amphotericin B and azole. However, resistence to drugs and severe side effects limit the success of therapeutics. For these reasons, there is an intensive search for new substances with antifungal activity, mainly those acting in new molecular targets. Ebselen, a seleno-organic compound is a good inhibitor of H+-ATPase, an essential and unique yeast enzime. On the other hand, eugenol is a natural product present in the essential oils of several plant species, especially in clove, is and it known for its various biological properties, including antifungal action, which also seems to be related to inhibition of this microbial ATPase. Likewise, of benzisoxazolinones, are heterocycles chemically similar to ebselen, but relatively little explored as bioactive compounds. In this context, we describe here the design and synthesis of benzisoxazolinones derived from eugenol (our related substances) and ebselen, planned according to molecular hybridization strategy. They were synthesized by classical synthetic procedures and the final step consisted cyclization in hydroxamic acids into benzisoxazolinone via Mitsunobu reaction. The final products were obtained with yields ranging from 5 to 70% and were characterized by standard spectroscopic methods. Next, the final products, and synthetic intermediates were evaluated for their in vitro antifungal activity against Candida spp. by microdilution tests. In addition, the most promising products were evaluated for their cytotoxicity profiles for determining the selectivity indexes. Tests have shown that all synthesized compounds have antifungal activity higher than eugenol. The N-phenylbenzisoxazolinones (18, 19 and 20) were the most promising ones showing in some instances IC50 values comparable oe equal to those of fluconazole against C. krusei and C. glabrata. Compound 19 showed an IC50 of 142 µM against C. krusei, very close to that achieved by fluconazole (104 µM) and was the only hybrid with fungicidal activity. Product 18, eugenol-ebselen hybrid, was the most active one against C. glabrata with an IC50 of 53 µM, good selectivity index (3.4) and potency equal to that of fluconazole (IC50 52 µM). These results highlight these derivatives as good compounds for structural optimization and further studies, as investigations on its molecular mechanism of antifungal action. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES