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Contribuição para o levantamento da frequencia populacional da persistencia hereditaria da hemoglobina fetal no Brasil

Costa, Vania Aparecida da 27 July 2001 (has links)
Orientador : Carmen Silvia Bertuzzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T02:12:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_VaniaAparecidada_M.pdf: 13368648 bytes, checksum: eca403fb65f796da1239e2b47f6894a4 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Persistência hereditária de hemoglobina fetal (PHHF)é uma condição clinicamente benigna caracterizada pela síntese contínua da HbF na vida adulta, sem alterações hematológicas. A PHHF funciona como um modulador de gravidade em várias hemoglobinopatias ,sendo assim, torna-se importante conhecera sua freqüência em nosso meio. Desse modo, através da análise de 1.846 doadores voluntários de sangue da região de Bragança Paulista, procuramos contribuir para o levantamento dessa frequência populacional. Realizou-se uma análise qualitativa das hemoglobinas pela eletroforese em gel de agarose.A análise qualitativa das cadeias ?G e ? A foi realizada pela eletroforese em gel de poliacrilamida-Triton-Uréia. Foram encontrados 2 indivíduos com alto índice de fetal . Em um dos indivíduos encontramos um percentual de HbF de 17% e no outro de 18%. Nos dois casos a eletroforese de cadeias mostrou uma ausência da cadeia gama G. Os casos triados indicaram pelas características laboratoriais, pertencerem ao grupo de Persistência hereditária Pancelular do tipo Gama A, por mutação de ponto. Portanto, a freqüência encontrada em nossa amostra foi de 1/1000 indivíduos / Abstract: Hereditary persistence of fetal hemoglobin (HPFH) is a benign clinical condition which is characterized by the synthesis of HbF and continues without hematological changes during adult life.Aslhe function of HPFH in many hemoglobinopathies is that of a severity modulator, it is important to find out its frequency. In order to obtain this information, a study was conducted on 1,846 blood donors from Bragança Paulista. The hemoglobin was qualitatively analyzed by having hemolytic electrophoresis in the agarose gel tapes. The qualitative analysis of the ? G and ? A chains was performed by electrophoresis in polyacrylamide-triton - urea. Two individuaIs were found to have a high fetal index (O.l%).The percentage of FHbin one individual was 17% and in the other 18%. The gamma A chain was found to be missing in both electrophoretic chains. The cases screened according to laboratory characteristics were of the hereditary persistence type Gamma A Pancellular due to mutation. Therefore, the frequency obtained in this sample was 1/1000 individuais / Mestrado / Mestre em Farmacologia
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Expressão diferencial de Xanthomonas axonopodis pv. citri na interação com Citrus sinensis utilizando eletroforese bidimensional de proteinas e cDNA RDA ("Representational Difference Analysis")

Mehta, Angela 09 December 2002 (has links)
Orientador : Yoko Bomura Rosato / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T09:40:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mehta_Angela_D.pdf: 14092017 bytes, checksum: 5a83411e669684c095655596bfa85ee6 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: No presente estudo, a expressão diferencial de X. axonopodis pv. citri em resposta a diferentes condições de cultura foi analisada através de eletroforese bidimensional (2-DE) de proteínas e cDNA RDA ("Representational Difference Analysis"). Para a análise de proteínas, a bactéria foi cultivada no meio basal MMl e na presença de extrato de folhas de urna planta suscetível (Citrus sinensis) assim como de urna resistente (Citrus reticulata) e urna não hospedeira (Passiflorae edulis). O perfil de proteínas revelou 12 "spots" diferenciais no tratamento com extrato de citros (hospedeiro suscetível) quando comparado àquele do MM 1. O perfil da bactéria cultivada em meio complexo NYG foi também analisado e a comparação com aquele do meio MM 1 revelou 36 proteínas diferenciais. Cinco proteínas dos diferentes tratamentos tiveram a região N-terrninal seqüenciada, incluindo 2 proteínas constitutivarnente expressas, 2 induzidas na presença de extrato de citros e 1 induzi da no meio complexo. Um método para a recuperação da bactéria de folhas da planta hospedeira foi também desenvolvido e validado através da análise de proteínas e RNA. O perfil de proteínas obtido através de 2-DE foi semelhante ao obtido pela bactéria cultivada na presença de extrato de folhas de Citrus sinensis. RNA total foi analisado através de eletroforese em gel de agarose e reações de RT -PCR utilizando primers para genes de X. axonopodis pv. citri confirmaram a qualidade do RNA obtido. O emprego desta técnica permitirá estudos de expressão in planta de diversas espécies de fitopatógenos. Com a técnica de cDNA RDA foram identificados cDNAs expressos na presença de extrato de folhas da planta hospedeira, assim como in vivo após hibridizações subtrativas contra cDNA da bactéria cultivada em MM1. Uma hibridização subtrativa de cDNAs da bactéria cultivada no meio NYG contra cDNAs expressos em MMl foi também efetuada. Um total de 37 genes distintos foi identificado através de busca de homologia no genoma de X. axonopodis pv. citri, incluindo genes que codificam proteínas hipotéticas (12), genes relacionados ao metabolismo (13), processos celulares (6) e patogenicidade (4), e elementos genéticos móveis (2) / Abstract: The present study reports the differentiaJ expression of X. axonopodis pv. citri in response to different growth conditions by two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) of proteins and cDNA RDA (Representational Difference Analysis). For the protein anaJysis, the bacterium was cultured in the basal medi um MM1 and in the presence of leaf extracts from a susceptible host plant (sweet orange) as well as a resistant (ponkan) and a non-host plant (passion fruit). The protein profiles revea1ed 12 differentiaJ spots in the citrus extract treatment (susceptible host) when compared to that of MM1. The 2-DE protein profile of the bacterium grown in the complex medium NYG was also obtained and the comparison with that of MM 1 revealed 36 differential spots. Five proteins from the different treatments were successful1y N-terminally sequenced and inc1uded 2 constitutively expressed proteins, 2 proteins up-regulated in the presence of citrus extracts and 1 up-regulated in the complex medium. A method for the recovery of bacterial cells from the host plant leaves was also developed and validated by the analysis of protein and RNA extracted from the recovered ce1ls. The protein pattem obtained by 2-DE was similar to that obtained for the bacterium grown in the presence of leaf extract of Citrus sinensis. Total RNA was analysed by agarose gel electrophoresis and RT -PCR reactions using specific primers for X. axonopodis pv. citri genes confirmed the quality af the RNA obtained. This method will be useful for in planta expression studies of several phytopathogenic species. In the cDNA RDA technique, cDNAs expressed in the presence of leaf extract of the host plant, as well as in vivo were identified after subtractive hybridizations against cDNAs of the bacterium cultured in the basal medium MM1. Also, a subtractive hybridization of cDNAs of the 3 bacterium grown in complex media against cDNAs expressed in the minimal medium was performed. A total of 37 distinct genes were identified by homology searches in the genome of X. axonopodis pv. citri, including genes that encode hypothetical proteins (12), genes involved in metabolism (13), cellular processes (6) and pathogenicity (4), and mobile genetic elements (2) / Doutorado / Genetica de Microorganismos / Doutor em Genetica e Biologia Molecular
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Desenvolvimento de um novo método de pré-concentração em linha em eletroforese capilar através de gradientes térmicos

Mandaji, Marcos January 2005 (has links)
Nos últimos dez anos, milhares de trabalhos foram publicados somente no desenvolvimento da técnica de eletroforese capilar (CE) e suas aplicações em ciências biológicas, química e em outras áreas. Apesar disto, muitos tópicos de pesquisa básica da CE ainda continuam sendo desenvolvidos. Algumas vantagens da CE sobre as demais técnicas de separação são marcantes, tais como: possibilidade de automação, rapidez na obtenção dos resultados e alto poder de resolução. A pequena quantidade de amostra que é necessária para uma análise é uma característica muito interessante no estudo de sistemas biológicos, sendo que normalmente são injetados no capilar, volumes de 5 a 50 nl de amostra. Por outro lado, esta reduzida quantidade de amostra utilizada, a pequena janela de detecção e as baixas concentrações dos analitos nas amostras biológicas, são fatores que desafiam os pesquisadores nesta área. Para contornar este problema diversos métodos de pré-concentração de amostra foram desenvolvidos. Neste trabalho, foi desenvolvido um método inédito de pré-concentração de amostras através de gradientes térmicos em CE. O princípio do método é concentrar o analito quando ele passa de uma zona de alta temperatura para uma zona de baixa temperatura. Um modelo teórico foi desenvolvido para auxiliar o planejamento experimental no que diz respeito à determinação das condições em que a corrida deve ser realizada (pH, tipo de tampão, temperatura) para aplicar a compressão térmica em um analito. Foi utilizado L-Lisina derivatizada com naftaleno 2,3-dicarboxialdeído (Lys/NDA) como analito modelo. Uma diferença de temperatura de 58 °C entre as duas zonas térmicas foi suficiente para comprimir em 2,5 vezes a banda da Lys/NDA em um tampão de baixo coeficiente térmico com o pH ajustado para 8,7. O método de compressão de banda por gradientes térmicos proposto neste trabalho é uma nova opção para aumentar a sensibilidade e a resolução em CE. Ao contrário dos métodos clássicos de pré-concentração, esse novo método pode ser aplicado em amostras tanto com alta ou baixa condutividade iônica, comprimir bandas de analitos aniônicos ou catiônicos e ser aplicado em corridas em solução livre ou não. Além disso, considerando que o controle de temperatura seja realizado de maneira automatizada, pode apresentar altas taxas de reprodutibilidade, além de ser de simples e de fácil aplicação, podendo ser empregado em análises de rotina. Diferentes LEDs (Light Emitting Diode) foram testado em detector por fluorescência induzida por LED. Além disso, um novo sistema de aquisição de dados e tratamento de sinal utilizando a placa de som de um PC (Personal Computer) e um amplificador Lock-in emulado por software foi montado e comparado com um sistema de aquisição de dados convencional. O equipamento de CE utilizado neste trabalho com esses componentes, apresentou uma elevada sensibilidade, na faixa de 0,5 à 1 fmol para os peptídeos e aminoácidos testados e foi superior ao sistema convencional em vários aspectos como: sensibilidade de detecção, faixa linear de detecção em concentração do analito, facilidade de operação e custo do sistema.
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Estudo comparativo do perfil proteico do fluido intersticial testicular de espécies de valor zootécnico / Comparative study of the protein profile of testicular interstitial fluid of species of zootechnical value

Melo, Révila Bianca Ferreira de January 2017 (has links)
MELO, Révila Bianca Ferreira de. Estudo comparativo do perfil proteico do fluido intersticial testicular de espécies de valor zootécnico. 2017. 63 f. Dissertação (Mestrado em Zootecnia)–Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Francisca Gomes (francisbeserra@yahoo.com.br) on 2017-09-13T18:37:20Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_ rbfmelo.pdf: 1100069 bytes, checksum: aaad6fa2df65b3120bad73c18b577398 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-09-19T21:51:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_ rbfmelo.pdf: 1100069 bytes, checksum: aaad6fa2df65b3120bad73c18b577398 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-19T21:51:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_ rbfmelo.pdf: 1100069 bytes, checksum: aaad6fa2df65b3120bad73c18b577398 (MD5) Previous issue date: 2017 / The testicular interstitial fluid (FIT) is located in the interstitial region of the testis, which is synthesized by Leydig cells, lymphatic and blood cells and connective tissue. FIT performs several functions, such as: transport of hormones and nutrients to the seminiferous epithelium, transport of spermatozoa and has influence on endocrine and gametogenic functions of the testis. In the constitution of FIT it is possible to find proteins synthesized by several cell types, such as Sertoli cells, Leydig cells and germ cells. The volume and concentration of certain FIT proteins are sensitive to changes in the endocrine hormones and changes in the local testicular environment, thus, the protein constitution of FIT may reflect the status of spermatogenesis. From the information above, the objective of the present work was to build the protein profile of FIT, in addition to performing a comparative analysis of the protein profile with different species that present zootechnical value (bovine, ovine, rabbit and quail). The FIT was collected by percolation and the proteins were precipitated with cold ethanol (4 ° C). Subsequently, the proteins were sepals by one-dimensional electrophoresis with a 4% mesh in the stacking gel and 10% in the running gel. Then, the protein bands obtained on the gel were analyzed through the QuantityOne® program and compared through the unpaired T-test (p <0.05) through Statview®. 263 bands were detected in the triplicate of bovines, 317 proteins in triplicate of TIF geis of sheep, 218 bands in rabbits and 217 bands in TIF of quail. It was observed that there are 9 bands in common with all species and while in the mammals adopted in the study it was observed that there are 10 bands in common, however, the statistical difference in relation to these bands. Comparing the pattern of the gels made with other studies it was observed that TIF proteins have several origins, such as: blood plasma, seminiferous tubules, seminal plasma and others, and that most TIF proteins are synthesized by the Sertoli cells. Leydig and germinating. From the construction of the protein profile, it was observed that the electrophoresis technique is effective for the detection of protein bands. However, it is necessary to identify mass spectrometry to amplify the information about TIF proteins: origin of these proteins and how they can act under the spermatogenesis. / O fluido intersticial testicular (FIT) é localizado na região intersticial do testículo, ao qual é sintetizado pelas células de Leydig, células linfáticas e sanguineas e tecido conectivo. O FIT desempenha diversas funções, como: transporte de hormônios e nutrientes para o epitélio seminífero, transporte de espermatozoides e apresenta influência em funções endócrinas e gametogênicas do testículo. Na constituição do FIT é possível encontrar proteínas sintetizadas por diversos tipos celulares, como as células de Sertoli, células de Leydig e as células germinativas. O volume e a concentração de determinadas proteínas do FIT são sensíveis a mudanças dos hormônios endócrinos e alterações do ambiente local testicular, dessa maneira, a constituição proteica do FIT pode refletir o status da espermatogênese. A partir das informações acima, o objetivo do presente trabalho foi construir o perfil proteico do FIT, além de realizar uma análise comparativa do perfil protéico com diferentes espécies que apresentam valor zootécnico (bovino, ovino, coelho e codorna). O FIT foi coletado por percolação e, as proteínas foram precipitadas com etanol frio (4°C). Posteriormente, as proteínas foram separdas por eletroforese unidimensional ao qual apresentava uma malha de 4% no gel de empilhamento e 10% no gel de corrida. Em seguida, as bandas proteicas obtidas no gel foram analisadas através do programa QuantityOne® e comparadas através do teste T não pareado (p< 0,05) através do Statview®. Foram detectadas na triplicata 263 bandas na triplicata de bovinos, 317 proteínas na triplicata de geis de TIF de ovinos, 218 bandas em coelhos e 217 bandas em TIF de codorna. Foram observados que existe 9 bandas em comum com todas as espécies e enquanto nos mamíferos adotados no estudo se observou que existe 10 bandas em comum, entretanto, a diferença estatística em relação a essas bandas. Comparando o padrão dos géis confeccionados com outros estudos notou-se que as proteínas do TIF apresentam diversas origens, como: plasma sanguíneo, túbulos seminíferos, plasma seminal e dentre outros e que grande maioria das proteínas do TIF são sintetizada pelas células de Sertoli, de Leydig e germinativas. A partir da construção do perfil protéico, foi observado que a técnica de eletroforese é eficaz para detecção das bandas protéicas. Entretanto, é necessária a identificação da espectrometria de massa para ampliar as informações sobre as proteínas do TIF: origem dessas proteínas e como elas podem atuar sob a espermtogênese.
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Estudo longitudinal do perfil salivar proteico de crianças nos primeiros meses de vida / Longitudinal study of salivary protein profile of children in the first months of life

Damasceno, Juliana Ximenes January 2015 (has links)
DAMASCENO, Juliana Ximenes. Estudo longitudinal do perfil salivar proteico de crianças nos primeiros meses de vida. 2015. 67 f. Tese (Doutorado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-17T10:54:36Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_jxdamasceno.pdf: 562016 bytes, checksum: 312d86a630dd2a904b8c35a626ceafaa (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-17T11:30:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_jxdamasceno.pdf: 562016 bytes, checksum: 312d86a630dd2a904b8c35a626ceafaa (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-17T11:30:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_jxdamasceno.pdf: 562016 bytes, checksum: 312d86a630dd2a904b8c35a626ceafaa (MD5) Previous issue date: 2015 / Studies on the development of salivary composition in the first year of life can promote the information about the immune maturation in children. Saliva is the most easily available and accessible body fluid, which makes it one of the most sought after tools in diagnostic and biomarks. In this context, this thesis, constituted by 01 article aimed to characterize salivary proteins in the first months of life using unidimensional electrophoresis. On this study, stimulated whole saliva was obtained from 79 babies, both genders at first and third months of life. Supernatants were analyzed, salivary flow rate (mL/min) was calculated for each child and total protein concentration determined by the Bicinchoninic Acid Protein (BCA) method. Proteins were characterized according to their molecular weights within the unidimensional electrophoresis. The results showed salivary flow rates significantly different (p = 0.000) between the first and third months of life, being the flow rate of whole saliva at third month (Median: 0.10, min-max: 0.02-0.2 mL/ min) higher than at first month (Median: 0.02, min-max: 0.02-0.06mL/min). The weight in Kg showed significant differences (p = 0.000) between the first month (Median: 3.32, Min-Max: 2.02-4.03) and third months (Median: 6.26, Min-Max: 4.49-9.30).This study also showed difference concerning to total protein concentration between saliva of the first and third months (p = 0.000), being higher concentrations found in first (Median: 1.293, min-max: 0.427-3.931 μg/mL) than in third (Median: 0.720, min-max: 0.164-2.244 μg/mL). Bands with 150 (p=0.004), 100 (p=0.000), 42 (p=0.001), 30 (p=0.039), 25 (p=0.001), 20 (p=0.009), 15 (p=0.011) and 13 kDa (p=0.002) presented higher intensity in whole saliva of the first month. A band with 218 kDa was expressed exclusively during the third month of life. Apgar at 1 min was positively correlated with the total number of bands expressed in the first (p = 0.019) and third months (p = 0.014). In conclusion, the concentration of total salivary proteins decreases between the first and third months, and the expression of the salivary proteins changes depending on the age, where the expression of specific protein bands is specific to certain developmental stages during the first 3 months. / Estudos sobre o desenvolvimento da composição salivar no primeiro ano de vida podem promover informações a cerca da maturação imunológica em crianças. A saliva é o fluido humano mais disponível e de fácil acesso, o que faz dela uma das ferramentas mais pesquisadas no campo de diagnóstico e biomarcadores. Nesse contexto, essa tese, constituída de 1 artigo objetivou caracterizar proteínas salivares nos primeiros meses de vida, utilizando eletroforese unidimensional. Nesse estudo, saliva total estimulada e foram obtidas de 79 bebês de ambos os gêneros no primeiro e terceiro meses de vida. Os sobrenadantes foram analisados, o fluxo salivar foi calculado (mL/min) para cada criança e a concentração de proteínas totais foi determinada pelo Método do Ácido Bicinconínico (BCA). Proteínas foram caracterizadas de acordo com o peso molecular através de eletroforese unidimensional. Os resultados demonstraram fluxos salivares significativamente diferentes entre o primeiro e terceiro meses de vida (p = 0,000), sendo o fluxo salivar no terceiro mês maior (Mediana = 0,10; Min-Max = 0,02-0,20 mL/ min) do que no primeiro mês (Mediana = 0,02; Min-Max = 0,02-0,06 mL/min).O peso em kg mostrou diferença significante (p = 0,000) entre o primeiro mês (Mediana: 3,32; Min-Max: 2,02-4,03) e o terceiro (Mediana: 6,26; Min-Max: 4,49-9,30). O presente trabalho também demonstrou diferença estatisticamente significante entre as concentrações de proteínas totais do primeiro e terceiro meses de vida (p < 0,001), onde a concentração de proteínas totais foi maior na saliva total do primeiro mês (Mediana = 1,29; Min-Max = 0,43-3,93 μg/mL) que no terceiro (Mediana: 1,293; Min-Max: 0,427-3,931 μg/mL). Bandas com 150 (p=0,004), 100 (p=0,000), 42 (p=0,001), 30 (p=0,039), 25 (p=0,001), 20 (p=0,009), 15 (p=0,011) e 13 kDa (p=0,002) apresentaram maior intensidade na saliva total durante o primeiro mês. A banda com 218 kDa foi observada exclusivamente durante o terceiro mês de vida. O Apgar no primeiro minuto se correlacionou positivamente com o número total de bandas expressas no primeiro (p = 0,019) e terceiro mês (p = 0,014). Em conclusão, a concentração de proteínas totais salivares reduz entre o primeiro e o terceiro meses de vida, e a expressão de proteínas salivares muda em função da idade, onde a expressão de determinadas bandas proteicas é específica a determinados períodos de desenvolvimento durante os primeiros 3 meses de vida.
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Desenvolvimento de métodos para determinação de cátions inorgânicos em leites, nitrito e nitrato em alface e histamina em peixes utilizando eletroforese capilar

Manoel, Rafael Vanderson Gomes January 2011 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T03:06:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 294799.pdf: 830384 bytes, checksum: f528d88199a46962e40af127abe1337a (MD5) / O primeiro capítulo pretende descrever a fundamentação teórica inerente a eletroforese capilar (CE) aplicada à análise de alimentos, de forma a facilitar o compreendimento do restante da dissertação. Procura-se também esclarecer algumas equações, que descrevem o fluxo eletrosmótico, definições de termos usuais como solução tampão e aditivos, além de termos de validação de métodos como linearidade, curva de calibração, limite de detecção, limite de quantificação e precisão. Há também uma descrição básica dos programas Peakmaster®, utilizado na otimização dos parâmetros necessários à obtenção de separações adequadas, e Statistica®, utilizado no tratamento estatístico dos dados obtidos nas diversas análises realizadas. Nele também se encontram conceitos básicos para alguns termos de validação de métodos, além dos tratamentos estatísticos utilizados. Já o capítulo 2 tem como objetivo desenvolver um método por eletroforese capilar (CE) para comparar quantidades de potássio, sódio, cálcio e magnésio entre leites de soja e de vaca, utilizando o software Peakmaster® como ferramenta de otimização auxiliar dos parâmetros de separação. Nos resultados obtidos pôde-se observar uma eficiente separação dos analitos em menos de 1,5 minutos. A faixa linear da curva de calibração para ambos os analitos foi de 2 - 10 mg L-1. Os valores de R² foram 0,997 para o potássio; 0,982 para o cálcio; 0,998 para o sódio e 0,999 para o magnésio. Todas as amostras de Leite apresentaram concentração entre 1126 e 1826 mg L-1 para o potássio, 739 a 1023 mg L-1 para o sódio, 1097 a 1422 mg L-1 para o cálcio e 253 a 289 mg L-1 para o magnésio. O método desenvolvido mostrou-se simples, rápido e eficiente para a determinação de cátions inorgânicos em diferentes matrizes de leite, com um simples pré-tratamento da amostra. Para o capítulo 3, o objetivo foi o desenvolvimento de um método rápido para análise de nitrato e eventualmente nitrito, buscando facilidade operacional, robustez e baixa geração de resíduos, para sua utilização em análises de rotina. Após diferenças na resolução obtida para as bandas do nitrito e nitrato entre os dados simulados no software Peakmaster® e os obtidos nas análises foi proposto um novo método para determinação de mobilidade eletroforética. Os dados de mobilidade iônica para os ácidos nítrico e nitroso foram verificados utilizando a equação da reta da curva obtida através da corrida eletroforética de uma amostra, realizada em quadruplicata, contendo uma mistura de sete padrões, em um eletrólito Tris/HCl. O método apresentou linearidade igual a 0,9964 e 0,9997 e faixa linear de 10 - 80 mg L-1 e de 70 - 560 mg L-1, para nitrito e nitrato, respectivamente. O tempo total de corrida foi inferior a 1,5 minutos. Foram analisadas amostras de alface, da variedade mimosa, cultivadas em quatro formulações distintas de solução hidropônica, fornecidas pelo Centro de Ciências Agrárias da Universidade Federal de Santa Catarina (Florianópolis/SC), para determinação de sistema ideal de cultivo e período ideal de colheita das plantas. Ao fim do trabalho, um método simples, rápido e confiável para a determinação de nitrito e nitrato pode ser obtido. No quarto e ultimo capítulo, o objetivo foi desenvolver e validar um método analítico para análises de rotina, alternativo ao método oficial, por eletroforese capilar, para identificação e quantificação de histamina em pescado. O método escolhido para extração teve como base o preparo proposto para o método fluorimétrico, recomendado pela Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL, porém com modificações realizadas após estudos em relação ao tempo, solvente e temperatura de extração, visando redução de custos e toxicidade. O método ainda foi validado segundo os parâmetros recomendados pelos órgãos responsáveis no país (ANVISA e INMETRO), dentre eles, linearidade (0,998), repetibilidade (inferior a 2,5%), exatidão (recuperação média de 102%), limite de quantificação (1 mg L-1) e de detecção (0,3 mg L-1), o tempo de corrida foi inferior a 1 minuto. As principais vantagens apresentadas pelo método desenvolvido foram o tempo reduzido e o baixo custo por análise, além do baixo consumo de solventes, minimizando custos com tratamento de resíduos tornando o método ecologicamente mais correto.
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Preparação, caracterização e aplicação de capilares modificados com quitosana e sal de quitosana quaternizada em eletroforese capilar

Vitali, Luciano January 2012 (has links)
Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química / Made available in DSpace on 2012-10-26T09:07:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 302353.pdf: 6545449 bytes, checksum: 332ff7705f7abcf0480505045bdf9786 (MD5) / O objetivo do presente estudo foi modificar internamente capilares de sílica fundida com quitosana (QTS) e sal de quitosana quaternizada (SAQQ), além do uso do polímero aniônico ?-carragena e do agente reticulante glutaraldeído empregado na reticulação da QTS e do SAQQ, e explorar algumas de suas aplicações em eletroforese capilar. Os capilares foram revestidos por simples lavagem com solução dos modificadores de interesse, nos quais se observaram diferentes perfis de mobilidade do fluxo eletrosmótico (EOF) em função do pH. A preparação dos revestimentos em diferentes capilares apresentou uma boa reprodutibilidade e o teste de desempenho realizado em meio ácido (pH 2,4) e básico (pH 8,9) mostrou bons resultados de estabilidade dos EOF medidos. Os diferentes revestimentos com QTS reticulada, SAQQ reticulado e ?-carragena, e SAQQ somente lavando o capilar com solução polimérica (sem reticulação), foram aplicados no desenvolvimento de métodos rápidos de separação por eletroforese capilar. Os métodos desenvolvidos incluíram: determinação de nitrato e tiocianato em saliva humana; determinação de iodeto, betaína e metionina em formulações farmacêuticas; e determinação de creatinina, histidina, ácido hipúrico e ácido mandélico em urina. Alguns dos parâmetros analíticos avaliados nos métodos foram linearidade, limites de detecção e quantificação, precisão e seletividade.
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Desenvolvimento de método rápido para análise simultânea de metil, etil, propil e butilparabeno em amostras cosméticas e farmacêuticas e estudos de interação com macromoléculas biológicas utilizando eletroforese capilar

Dolzan, Maressa Danielli January 2012 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química / Made available in DSpace on 2013-03-04T20:41:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 304097.pdf: 1264975 bytes, checksum: a56d0892da9b2ed92c98f5a649e64982 (MD5) / Os p-hidroxibenzoatos de alquila, ou parabenos, fazem parte de uma classe de compostos com atividade antimicrobiana mais utilizada em todo o mundo. Desde os anos 20 eles são adicionados às formulações. Entretanto, o avanço científico e tecnológico levantou a hipótese destes apresentarem atividade cancerígena, entre outros malefícios. Por isto este trabalho propõe tanto o controle da concentração destes compostos em produtos comerciais (capítulo 1), quanto um maior entendimento da sua ação biológica (capítulo 2). O primeiro capítulo aborda o desenvolvimento de um método simples e rápido por eletroforese capilar para análises de rotina de metil, etil, propil e butilparabeno em produtos comerciais, com preparo simples de amostra. O pH e os constituintes do eletrólito foram selecionados usando curvas de mobilidade efetiva versus pH e simulações com o software Peakmaster®. Ácido cinâmico foi usado como padrão interno. O eletrólito foi composto por 20 mmol L-1 de ácido 2-hidroxiisobutírico (HIBA), 30 mmol L-1 de trietilamina (TEA) e 0,3 mmol L-1 de brometo de hexano-1,6-bis(trimetilamônio) (HMB), pH = 10,6. Os experimentos foram realizados em um equipamento de eletroforese capilar modelo HP 7100 CE equipado com detector UV em 297 nm.. As separações eletroforéticas foram conduzidas em um capilar com 32 cm de comprimento total, 8,5 cm de tamanho efetivo e 50 m de diâmetro interno (d.i.). O tempo de corrida foi cerca de 1 minuto. O método apresenta R2 > 0,99 num intervalo entre ~ 0,5 e 30 mg L-1, limite de detecção de 0,1 mg L-1 e de quantificação 0,3-0,4 mg L-1, exatidão avaliada pela adição interna de padrão e pela técnica de HPLC/MS/MS com aplicação em amostras cosméticas e farmacêuticas diversas. O segundo capítulo desta dissertação é o estudo in vitro da interação dos parabenos com albumina do soro bovino (BSA) e o ácido desoxirribonucléico (DNA), utilizando para ambos a técnica de eletroforese capilar. Foram aplicados dois métodos para os estudos de interação com BSA e cálculos das constantes de associação (Kass): eletroforese capilar de afinidade (ACE), e o método baseado no preenchimento parcial do capilar (PF-ACE). Os experimentos foram realizados em um equipamento de eletroforese capilar modelo HP3D CE com detector UV a 270 nm. As separações foram conduzidas em um capilar de sílica fundida com 32 cm de comprimento total, 8,5cm de tamanho efetivo e 50 m de d.i. As condições eletroforéticas foram escolhidas com base nas condições biológicas: o eletrólito de corrida foi composto por 30 mmol L-1 de fosfato e 50 mmol L-1 de Na+, pH = 7,3, 70 mmol L-1 de força iônica e temperatura do capilar mantida em 36,5ºC. Os resultados qualitativos convergiram em ambos os métodos. Quando estudados simultaneamente, as interações paralelas não apresentaram interferência em cada interação específica. As constantes de associação foram calculadas pelo modelo não-linear e pelo modelo linear do duplo-recíproco, e comparadas. O modelo não-linear demonstrou maior confiabilidade apresentando resultados na ordem de 103 e 104, crescentes com o crescimento da hidrofobicidade dos compostos. O estudo de interação com o DNA, por sua vez, foi realizado apenas para o composto propilparabeno, utilizando-se também dois métodos: PF-ACE e outro, offline, por ultrafiltração. Não foi possível observar interação em nenhum dos métodos empregados. / The alkyl p-hydroxybenzoates or parabens, belong to a class of compounds with antimicrobial activity most used around the world. They have been added to several formulas since 1920. However, the scientific and technological progress opened the possibility of cancer activity and other evils. Therefore, this paper proposes both the control of the concentration of these compounds in commercial products (Chapter 1), and a greater understanding of its biological action (Chapter 2). The first chapter discusses the development of a simple and rapid method by capillary electrophoresis for routine analysis of methyl, ethyl, propyl and butylparaben in commercial products with simple sample preparation. The pH and the background electrolyte (BGE) constituents were selected using effective mobility-versus-pH curves and simulations using PeakmasterR software. Cinnamic acid was used as internal standard. The BGE was composed of 2-hidroxiisobutirico acid 20 mmol L-1, triethylamine 30 mmol L-1 and methyl hexane-1,6-bis(trimethylammonium) 0.3 mmol L-1, pH = 10.6. The experiments were performed on a capillary electrophoresis device model HP 7100 with UV detector at 297 nm. CE separations conducted in a 32 cm long capillary with 8.5 cm effective length and 50 um internal diameter (i.d.). The run time was about 1 minute. The method developed had R2> 0.99 in a range between ~ 0.5 and 30 mg L-1, detection limit of 0.117-0.127 mg L-1 and quantification limit of 0.3- 0.4 mg L-1, accurately assessed by internal standard addition and by LC-MS/MS technique, and application in several cosmetic and pharmaceutical samples. The second chapter of this dissertation is in vitro interaction of parabens study with bovine serum albumin (BSA) and deoxyribonucleic acid (DNA), using both the capillary electrophoresis technique. Were applied two methods for BSA interaction studies and association constants calculation (Kass): affinity capillary electrophoresis (ACE), and the method based on capillary partial filling (PF-ACE). The experiments were performed on a capillary electrophoresis device model HP3D CE with UV detector at 270 nm. The separations were conducted in a 32 cm long fused silica capillary with 8.5 cm effective length and 50 um internal diameter (i.d.) The electrophoretic conditions were chosen based on biological conditions. The BGE composed of phosphate 30 mmol L-1, pH 7.3, ionic strength 70 mmol L-1 and capillary temperature maintained at 36.5 C. The qualitative results in both methods converged. When studied simultaneously, parallel interactions showed no interference in each specific interaction. The association constants were calculated by nonlinear model and by the linear model of the double-reciprocal, and compared. The non-linear model showed a higher reliability results presented in the order of 103 and 104, increasing with the growth of the compounds hydrophobicity. The DNA- interaction study, in turn, was made only for propylparaben, also using two methods: PF-ACE and the other, offline, by ultrafiltration. Interaction was not observed in any methods employed.
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Interação e clivagem de DNA por complexos binucleares de cobre (II) com ligantes contendo o grupo triazina e cadeias laterais funcionalizadas

Saibert, Cristine January 2015 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-09-15T04:08:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334289.pdf: 1843746 bytes, checksum: e5da958e00b18037414cca2111320c49 (MD5) Previous issue date: 2015 / O estudo de moléculas sintéticas ou biológicas que possam interagir e clivar o DNA de forma específica se faz essencial na busca por novas aplicações biotecnológicas, na descoberta de terapias antitumorais menos invasivas ou no auxílio a um melhor entendimento dos mecanismos de ação do DNA. O presente trabalho teve como objetivo investigar a interação e clivagem de DNA por três complexos binucleares de cobre, cuja síntese foi inspirada no sítio ativo da enzima catecol oxidase: [Cu2(2-X-4,6-bis(di-2-picolilamino)-1,3,5-triazina], onde X= cloro (1), butanodiamina (2) ou N-metilpirenilbutanodiamina (3), de modo a relacionar as alterações estruturais de 2 e 3 a possíveis ganhos na atividade em relação ao complexo 1. Complexos contendo centros binucleares de cobre são amplamente descritos na literatura como nucleases artificiais eficientes, dessa forma, a atividade catalítica dos complexos foi avaliada. Os complexos apresentaram bons resultados de clivagem de DNA plasmidial, sob condições brandas e tempos de reação moderados. As constantes catalíticas (kcat) apresentadas foram de 0,0611; 0,1526 e 0,1702 h-1 para 1, 2 e 3, respectivamente, indicando que a adição de butanodiamina e pireno está relacionado a um aumento na atividade dos complexos. Os valores de kM obtidos corroboram os valores de kcat observados e sugerem um aumento na afinidade DNA/complexo de 1 para 3, já que os valores decrescem conforme a relação 1 > 2 > 3. O mecanismo de clivagem parece ser de caráter misto, apesar de apresentar uma forte componente oxidativa, e ensaios com bloqueadores de sulco e de dicroísmo circular indicam que os três complexos têm preferência pelo sulco menor do DNA. Ensaios de clivagem direta de alta resolução, com sondas marcadas com fluoresceína (FAM), forneceram informações sobre o mecanismo de ação dos complexos no DNA e indicam que o complexo 2 é capaz de clivar de forma específica regiões do tipo hairpin.<br> / Abstract : The study of synthetic or biological molecules able to interact and cleave DNA in a specific way is essential in the search for new biotechnological applications, discovery of less invasive anti-tumor therapies or to help in the elucidation of the mechanisms of action toward DNA. The present work aimed to investigate the DNA interaction and cleavage by three copper(II) binuclear complexes, whose synthesis was inspired in the active site of the enzyme catechol oxidase: [Cu2(2-X-4,6-bis(di-2-picolylamino)-1,3,5-triazi ne], where X= chloro (1), diaminobutane (2) or N-methylpyrenyldiamino butane (3), trying to relate structural changes of 2 and 3 with possible activity gains in comparison to complex 1. Complexes containing a dinuclear center of copper are largely described as efficient synthetic nucleases in literature, thereby, the catalytic activity of the complexes was evaluated. The complexes showed good results for plasmid DNA cleavage under mild conditions and moderate time of reaction. The rate of cleavage reaction (kcat) was 0,0611; 0,1526 e 0,1702 h-1 for 1, 2 e 3, respectively, indicating that the addition of diaminobutane and pyrene shows activities gains for the complexes. kM values obtained corroborates kcat values observed and suggests an enhancement of complex/DNA affinities from 1 to 3, since the values decreases accordingly. The reaction mechanism seems to be have oxidative and hydrolytic features and assays with groove binder and circular dichroism indicate that all the complexes have preference for the minor groove of DNA. Assays of high resolution direct-cleavage with probes 5?-labeled with fluorescein (FAM) provides information about the mechanism of action by the complexes upon DNA and indicated that complex 2 is capable to cleave DNA in the vicinity of a hairpin structure.
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Estudo do comportamento eletroforético e reológico de argilas em meio aquoso para processamento eletroforético de barbotinas

Piccinini, Carlos Alberto January 2013 (has links)
O presente estudo propõe uma metodologia para caracterizar o comportamento eletroforético e reológico de argilas em meio aquoso para visando ao processamento eletroforético de barbotinas. Para tanto, foram utilizadas seis argilas com características cauliníticas, caulinítica-esmectítica e esmectíticas de diferentes procedências. Foram desenvolvidos três dispositivos que permitiram analisar suspensões aquosas dessas argilas, obtendo-se informações que dizem respeito à corrente elétrica, viscosidade relativa e mobilidade eletroforética de barbotinas em fluxo, além de dispositivos de conformação eletroforética de amostras de argilas. As suspensões de argilas, com e sem adição de silicato de sódio, foram feitas em água deionizada. Foram determinados ainda o potencial zeta, a viscosidade aparente e o índice de azul de metileno dessas suspensões. O principal resultado em destaque, no presente trabalho, foi o comportamento singular da variação da corrente elétrica quando da adição de silicato de sódio às suspensões aquosas de argila. A quantidade relativa de silicato de sódio e argila determinada por essa singularidade levou à realização de experimentos associados à viscosidade e mobilidade eletroforética. Os resultados obtidos para a corrente elétrica, viscosidade relativa e mobilidade eletroforética a partir de experimentos com suspensões aquosas de argila sem e com silicato de sódio foram analisados e correlacionados sob o enfoque do fenômeno eletroforético. A metodologia desenvolvida apresenta as correlações das três propriedades eletroforéticas citadas, além do potencial zeta e índice de azul de metileno (que é uma medida da capacidade de troca catiônica da argila), com as análises das propriedades físicas, como área superficial e distribuição do tamanho de partícula. O método mostrou-se eficaz na interpretação dessas correlações, determinando com precisão o ponto em que a suspensão aquosa de argila atinge sua melhor estabilidade pela adição de silicato de sódio. O conhecimento exato desta estabilidade é de suma importância nos processos de conformação eletroforética de barbotinas. / The present study shows experiments with aqueous suspensions of clays. It was studied six kaolinitics clays from different sources, but mainly a kaolinite-smectite and smectite clay. Three devices have been developed that allowed the analysis of aqueous suspensions of these clays, obtaining information concerning the electrical conductance, viscosity and electrophoretic mobility of the slips in flow. It was also built a device for electrophoretic conformation of pieces. Aqueous suspensions and solution of sodium silicate were made with deionized water. Laboratory tests were also performed of zeta potential, viscosity and methylene blue index. The main result highlighted in this study, was the singular behavior of the variation of the electric current when the addition of sodium silicate to an aqueous suspensions of clay. The relative amounts of sodium silicate and clay determined by of the uniqueness of the performed experiments were associated with viscosity and electrophoretic mobility. The results for the electrical conductance, relative viscosity and electrophoretic mobility from these tests, i.e., experiments with clay aqueous suspensions with and without sodium silicate, were correlated and analyzed under the approach of electrophoretic phenomena. The developed method showed the correlation of these three properties, electrophoresis, zeta potential and methylene blue index, with the physical properties of the clays such as surface area and particle size distribution. Thus, the method was effective in interpreting these correlations, and determining the precise point where the aqueous clay suspension reaches its improved stability by the addition of sodium silicate. Accurate knowledge of this stability is of paramount importance in electrophoretic process and slip casting.

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