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Poliporos (Basidiomycotina) xilofilos de la Ilha de Santa Catarina, Santa Catarina, Brasil

Leite, Clarice Loguercio January 1990 (has links)
Tese (doutorado) - Universidad de Buenos Aires. Faculdad de Ciencias Exactas y Naturales / Made available in DSpace on 2016-01-08T16:43:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 1990
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Produção de inóculo de fungos micorrízicos arbusculares

SANTANA, Angelo Souto de 28 February 2014 (has links)
Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-08T17:47:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Angelo Souto de Santana.pdf: 681995 bytes, checksum: f79118dc36301256e207d858eb698a5b (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-16T21:57:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Angelo Souto de Santana.pdf: 681995 bytes, checksum: f79118dc36301256e207d858eb698a5b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T21:57:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Angelo Souto de Santana.pdf: 681995 bytes, checksum: f79118dc36301256e207d858eb698a5b (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / CAPES / Os fungos micorrízicos arbusculares (FMA) promovem vários benefícios para as plantas, desde o incremento no crescimento vegetal à tolerância ao ataque de patógenos radiculares. Nesse contexto, faz-se necessário produzir inoculantes do fungo que venham a ser comercializados no mercado ou mesmo produzidos e utilizados diretamente por agricultores na própria área de cultivo. O objetivo geral desta tese foi definir tecnologia economicamente viável para produção de inoculante micorrízico arbuscular, com capacidade infectiva e efetiva adequadas. No primeiro experimento, inóculos de FMA (Claroideoglomus etunicatum e Glomus clarum) foram produzidos em aeroponia e a infectividade testada após armazenamento por três, seis e 10 meses, em temperatura ambiente (28 ºC) ou a 4 ºC, em três substratos: a) areia; b) areia + vermiculita; c) areia + argila expandida. No segundo experimento os inoculantes (C. etunicatum e Acaulospora longula) foram produzidos em canteiros de alvenaria, construídos em locais com clima tropical úmido (Recife) e semiárido (Petrolina), distantes 756 km entre si. Os canteiros foram divididos em parcelas com 50 cm × 48,5 cm × 28 cm e preenchidos com os substratos: T1) areia + argila; T2) areia + argila + bagaço de cana; T3) areia + argila + leucena triturada; T4) areia + argila + leucena triturada + bagaço de cana. Em todas as parcelas foram plantadas mudas de sorgo (36 plântulas pré-colonizadas); as avaliações foram realizadas ao final de dois ciclos de cultivo (três meses cada). O sistema aeropônico para a produção de inoculante de FMA é adequado, com elevada proliferação de propágulos de Claroideoglomus etunicatum e Glomus clarum e, relativamente, de menor custo, especialmente para C. etunicatum. Os inóculos produzidos em sistema aeropônico e armazenados a 4 ºC permanecem viáveis, por pelo menos 10 meses, em substrato composto de areia adicionado de argila ou vermiculita, sendo recomendado para uso como bioinoculantes. A tecnologia para produção de inoculante em canteiro de alvenaria utilizando como substrato areia + argila expandida adicionado de leucena triturada é promissora como alternativa de biofertilizante tanto para áreas tropicais úmidas quanto semiáridas. / The arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) promote several benefits to plants, since the increase in plant growth to tolerance to attack by root pathogens. In this context, it is necessary to produce inoculants fungus that may be marketed or produced and used directly by farmers in their own growing area. The overall objective of this thesis was to define economically viable technology for producing arbuscular mycorrhizal inoculant with high infectivity and efficiency. In the first experiment, inoculum of AMF (Claroideoglomus etunicatum and Glomus clarum) were produced in aeroponic , and thereafter the inoculum infectivity was tested after storage for three, six and 10 months at room temperature (28 °C) or at 4 °C in three substrates: a) sand; b) sand, vermiculite; c) sand + expanded clay. In the second experiment the inoculants (C. etunicatum and Acaulospora longula) were produced in masonry beds, built in locations with humid tropical climate (Recife) and semiarid (Petrolina), 756 km distant from each other. The masonry beds were divided into plots with 50 cm × 48.5 cm × 28 cm and filled with the substrates: T1) sand + expanded clay; T2) sand + expanded clay + cane bagasse; T3) sand + expanded clay + chopped leucaena; T4) sand + expanded clay + cane bagasse + chopped leucaena. In each plot were planted sorghum (36 pre-colonized seedlings); the evaluations were carried out after two crop cycles (three months each). The aeroponic system for the production of AMF inoculum is adequate, with high proliferation of propagules of Claroideoglomus etunicatum and Glomus clarum and relatively low cost, especially for C. etunicatum. The inocula produced in the aeroponic system and stored at 4 8C remains viable for at least 10 months in substrates composed of sand added of clay or vermiculite, being recommended for use as bioinoculants. The technology for production of inoculum in horticultural beds using sand as substrate + expanded clay + chopped leucaena is a alternative of biofertilizers for both humid and semi-arid tropical areas.
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Mutações espontaneas relacionadas ao gene methG1, de Aspergillus nidulans

Baracho, Marta dos Santos, 1967- 25 July 2018 (has links)
Orientador: Ivanhoe Rodrigues Baracho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T05:11:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Baracho_MartadosSantos_D.pdf: 3820349 bytes, checksum: d2aa9a8cb833c515719af294c7cf4a0e (MD5) Previous issue date: 1999 / Doutorado
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Produção de holocelulases por Clonostachys byssicola cultivado em casca de soja : purificação parcial e caracterização de uma endoglicanase

Sciuto, Débora Lo 26 March 2015 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2015. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-23T18:43:23Z No. of bitstreams: 1 2015_DeboraLoSciuto.pdf: 2930905 bytes, checksum: 5a066e6e45c40ffdadd632e863375380 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-06-23T20:01:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_DeboraLoSciuto.pdf: 2930905 bytes, checksum: 5a066e6e45c40ffdadd632e863375380 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-23T20:01:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_DeboraLoSciuto.pdf: 2930905 bytes, checksum: 5a066e6e45c40ffdadd632e863375380 (MD5) / O fungo filamentoso Clonostachys byssicola foi cultivado por sete dias em meio líquido contendo casca de soja 1 % (m/v) como única fonte de carbono. A capacidade do fungo em secretar enzimas holocelulolíticas foi avaliada, sendo observadas atividades de CMCase, FPase, mananase, pectinase e xilanase no extrato bruto. CMCase (0,904 UI/mL) foi escolhida como principal alvo de investigação. O extrato bruto foi concentrado por ultrafiltração em membrana com retenção de 10 kDa, e CMCase presente no extrato concentrado foi parcialmente purificada utilizando coluna cromatográfica de exclusão molecular (Sephacryl S100) e de troca iônica (Q Sepharose e DEAE Sepharose Fast Flow). CMCase presente no extrato concentrado e frações reunidas oriundas das colunas de troca iônica foram caracterizadas. A enzima semi purificada apresentou maior atividade a 60-70 °C e pH 5,0, sendo termoestável a 40 °C e 50 °C e possui massa molecular de aproximadamente 48 kDa. Compostos fenólicos (vanilina, ácidos tânico, 4-hidroxibenzóico, ferúlico, ρ-coumárico e cinâmico) não tiveram efeito inibitório e de desativação sobre a atividade celulolítica. Os íons Cu2+, Fe2+, Fe3+ e Zn2+ na concentração de 10 mM inibiram atividade de CMCase em até 70 %, 94 %, 100 % e 44 %, respectivamente; o íon Co2+ (10 mM) ativou a atividade enzimática das frações Cel-QFF e Cel-DEAE em 21 % e 25 %, respectivamente. Os valores de kM e Vmáx de CMCase foram 24,93 mg/mL e 2,14 UI/mL (no extrato concentrado); e 15,81 mg/mL e 0,59 UI/mL (na fração Cel-DEAE), respectivamente. Foram realizados ensaios de hidrólise enzimática de avicel, CMC, papel de filtro, manana e xilana e substratos lignocelulósicos (casca de soja e bagaço de cana de açúcar) com enzimas do extrato concentrado e fração Cel-QFF. Os principais produtos de hidrólise enzimática de CMC e papel de filtro foram glicose, celopentaose e celohexaose. A hidrólise enzimática de casca de soja liberou maior quantidade de açúcar que a hidrólise de bagaço de cana de açúcar, sugerindo que as enzimas secretadas durante o crescimento de C. byssicola possuem atividade enzimática mais proeminente sobre o substrato utilizado como fonte de carbono. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The filamentous fungus Clonostachys byssicola was cultivated for seven days in liquid medium containing soybean hulls 1 % (w/v) as the sole carbon source. The fungus's ability to secrete holocellulolytic enzymes was evaluated and activities of CMCase, FPase, mannanase, pectinase and xilanase were observed in the crude extract. CMCase (0.904 IU/mL) was chosen as the main target of research. The crude extract was concentrated by ultrafiltration membrane with retention of 10 kDa, and CMCase present in the concentrated fraction was partially purified using molecular exclusion (Sephacryl S100) and ion exchange chromatography columns (Q Sepharose and DEAE Sepharose Fast Flow). CMCase present in the concentrated fraction and pooled fractions from the ion exchange columns were characterized. The semi purified enzyme exhibited higher activity at 60-70 °C and pH 5.0, being thermostable at 40 °C and 50 °C and has a molecular mass of approximately 48 kDa. Phenolic compounds (vanillin, tannic, 4-hydroxybenzoic, ferulic, ρ-coumaric and cinnamic acids) had no inhibitory and deactivation effects on cellulolytic activity. Cu2+, Fe2+, Fe3+ and Zn2+ at a concentration of 10 mM inhibited CMCase activity by 70 %, 94 %, 100 % and 44 %, respectively; Co2+ (10 mM) activated enzyme activity of the Cel-QFF and Cel-DEAE fractions by 21 % and 25 %, respectively. KM and Vmax values of CMCase were found to be 24.93 mg/mL and 2.14 IU/mL (concentrated fraction); and 15.81 mg/mL and 0.59 IU/mL (Cel-DEAE fraction), respectively. Enzymatic hydrolysis of avicel, CMC, filter paper, xylan and mannan and lignocellulosic substrates (soybean hulls and sugar cane bagasse) were performed with enzymes of the concentrated fraction and Cel-QFF fraction. The main enzymatic hydrolysis products of CMC and filter paper were glucose, cellopentaose and cellohexaose. Enzymatic hydrolysis of soybean hulls released higher sugar amount than the hydrolysis of sugarcane bagasse, suggesting that the enzymes secreted during the growth of C. byssicola have more prominent enzyme activity on the substrate used as a carbon source.
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Detecção e caracterização de complexos multi-enzimáticos em secretoma de fungos filamentosos

Silva, Adelson Joel da 20 November 2012 (has links)
Tese (doutorado)— Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-04-15T15:56:47Z No. of bitstreams: 1 2012_AdelsonJoelSilva.pdf: 3485894 bytes, checksum: fadc62357304c46ebd85bf90f278ae40 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-04-17T13:09:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_AdelsonJoelSilva.pdf: 3485894 bytes, checksum: fadc62357304c46ebd85bf90f278ae40 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-17T13:09:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_AdelsonJoelSilva.pdf: 3485894 bytes, checksum: fadc62357304c46ebd85bf90f278ae40 (MD5) / As enzimas que degradam parede celular vegetal produzidas por micro-organismos possuem aplicações biotecnológicas importantes, incluindo a produção de bioetanol. Algumas batérias anaeróbicas são capazes de produzir complexos multi-enzimáticos chamados de celulosomos, enquanto os fungos filamentosos normalmente secretam enzimas hidrolíticas individuais que atuam sinergisticamente no processo de degradação de polissacarídeo. Neste trabalho, nós mostramos que os fungos filamentosos Trichoderma harzianum e Trichoderma reesei, secretam complexos multi-enzimáticos ativos quando cultivados em meio contendo o resíduo agrícula bagaço de cana-de-açucar e lactose (ou galactose), respectivamente. O secretoma de ambos os fungos foram analisadas primeiramente por 1D-BN (blue native)-PAGE. Bandas eletroforéticas correspondendo a possíveis complexos foram submetidas à separação eletroforética usando sistema Tricina-SDS-PAGE para demonstrar que são constituídas de componentes menores. Ensaios zimográficos foram realizados usando 1D-BN-PAGE e 2D-BN/BN-PAGE para verificar atividades celulolítica e xilanolítica em um mesmo complexo. Finalmente, os complexos foram digeridas por tripsina e analisadas separadamente por LC-MS/MS e os programas MASCOT e MS-BLAST para identificação das proteínas constituintes. Os resultados mostraram que ambos os fungos produzem complexos constituídos por enzimas celulolítica e xilanolítica e outras proteínas, as quais apresentam uma complementariedade funcional no processo de degração de substratos polissacaridícos. Em T. harzianum foram analisados três complexos, os quais apresentaram os seguintes componentes: celobiohidrolase I, celobiohidrolase I-II, alfa-L-arabinofuranosidase, xilana 1,4- -xilosidase (complexo I); acetilxilan esterase, ndoquitinase, arabinogalactana, endo-1,4- -galactosidase, celobiohidrolase I, cutinase, ?-N-arabinofuranosidase e endo- -1,4-xilanase (complexo II); glucoamilase, endo-beta-1,4- glucanase, swollenina, beta-endoglucanase ancorado a GPI, alfa-L-arabinofuranosidase, ?-1,3-glucanase (complexo III). T. reesei produziu mais complexos multi-enzimáticos quando cultivado em meio contendo lactose que galactose. A composição dos complexos I e II em lactose parece torná-los melhores equipados para biodegradação. Os componentes dos complexos do meio com lactose são: glicosil hidrolases 20, 36, beta-1,3-endoglucanase, alfa-alactosidase, exo-beta-1,4-glucanase, aril-alcool oxidase, "predicted protein" 43, "predicted protein" 20 (complexo I); beta-1,3-endoglucanase, "predicted protein" 20, 48, 44, 61, 52, 42, glicosil hidrolase 37, quitinase (complexo II). Os complexos do meio com galactose são: glicosil hidrolases 16, 36, 54, 55, beta-1,3-endoglucanase, catalase/peroxidase bifuncional, "predicted protein" 20 (complexo I); "predicted protein" 20, 44, 61, 52, beta-1,3-endoglucanase, glicosil hidrolase 3, 37, quitinase, amidase (complexo II). Além disso, o complexo I é mais expresso em meio contendo lactose que galactose, ocorrendo inversamente com o complexo II. Juntos, esses dados mostram que a fonte de carbono influi na composição dos complexos multi-enzimáticos em T. reesei. A cooperatividade funcional entre os elementos dos complexos dos fungos são discutidos. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Plant cell degrading enzymes produced by microorganisms possess important biotechnological applications; including the production of bioethanol . Some anaerobic bacteria are abl e to produce multienzymatic complexes called cellulosomes whilst filamentous fungi normally secrete individual hydrolytic enzymes that act synergically in the process of polysaccharide degradation. I n the present work we demonstrated that the filamentous fungi Trichoderma harzianum and Trichoderma reesei secrete active multienzymatic complexes when culti vated i n culture media suppl emented with the agricultural residue sugarcane bagasse and lactose (gal actose), respecti vely. The secret ome of bot h f ungi were analysed by 1D-BN (blue native) PAGE. Protein bands corresponding to possible complexes were submitted to electrophoretic separation using a Tricine-SDS system in order to demonstrate that they were constituted by smaller components. Zymogr aphic assays were performed using 1D-BN-PAGE and 2D-BN/BN-PAGE o verify cellulolytic and cellulolytic activities in the complexes. Finally, the complexes were trypsin di gested, subjected to LC-MS/MS and the results analyzed using the soft ware MASCOT and MS-BLAST to identify t hei r component s. The results demonstrated t hat both organisms produced complexes constituted by cellulolytic and xylanolytic enzymes as well as other protei ns relat ed to polysacchari de degradation. Three T. harzianum complexes that were analyzed presented the following components: cellobiohydrolase I, cellobiohydrolase I-II, al pha-L-arabinofuranosidase, xylan 1,4- - xylosidase (compl ex I); acetilxylan esterase, endochitinase, arabinogalactan, endo-1, 4- -galactosidase, cellobiohydrolase I, cutinase, -N-arabi nofuranosidase e endo- -1,4-xylanase (complex II); glucoamilase, endo-beta-1,4-glucanase, swollenin, GPI-anchored beta-endoglucanase, alpha-L-arabinofuranosi dase and -1,3-glucanase (compl exo III). T. reesei produced more multienzymatic compl exes when grown in lactose than in galactose containi ng medium. The composition of compl exes I and II in lactose possibly make them more suitable for biodegradation. The component s of t he compl exes produced i n t he l act ose medium are: glycosyl hydrolases 20, 36, beta-1,3-endogl ucanase, alpha-gal actosidase, exo-bet a-1, 4-glucanase, aryl - 1, 3- ex II). The compl exes produced in the gal actose medi um are glycosil hydrolases 16, 36, 54, 55, bet a-1, 3- 20, 44, 61, 52, bet a-1, 3-endoglucanase, glycosyl hydrolase 3, 37, chitinase and ami dase (complex II). In addition, compl ex I is more expressed in l actose than in gal actose medium whil e compl ex II is more expressed in galactose. Overall, the dat a show that the carbon source infl uence the composition of T. reesei multienzimatic complexes. The functional cooperativity between the elements of the complexes are discussed.
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O sistema celulolítico de Penicillium echinulatum : análise da ultraestrutura miceliana e influência de moduladores epigenéticos

Matos, Robson Willian de Melo 13 May 2012 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-09-14T12:26:54Z No. of bitstreams: 1 2012_RobsonWillianMeloMatos.pdf: 6258233 bytes, checksum: 0e725cb3ceb56998a968102c211ad496 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2012-09-18T12:22:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_RobsonWillianMeloMatos.pdf: 6258233 bytes, checksum: 0e725cb3ceb56998a968102c211ad496 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-18T12:22:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_RobsonWillianMeloMatos.pdf: 6258233 bytes, checksum: 0e725cb3ceb56998a968102c211ad496 (MD5) / Neste trabalho foi analisado, por microscopia eletrônica de varredura, o crescimento do fungo filamentoso Penicillium echinulatum sobre bagaço de cana-de-açúcar e características morfológicas foram descritas. Essa espécie apresentou hifas ramificadas e com septação. Os conídios apresentaram formato globoso a subgloboso e diâmetro entre 3,5 a 5m. O crescimento do microrganismo sobre o bagaço causou a ruptura parcial desse substrato, observada a partir do aspecto quebradiço e esfarelado das fibras, assim como pela propagação das hifas entremeando as fibrilas. Por meio de estudos de qRT-PCR, foi comparado o nível de acúmulo de transcritos dos genes egl, cbh, bgl e swo de P. echinulatum, cultivado em condições indutoras ou repressoras para genes do complexo celulolítico e em diferentes tempos de crescimento. Em condição indutora, esse fungo apresentou um pico de acúmulo de transcritos dos genes egl, cbh e swo, após 48h de cultivo. Após 24h, foi observado por microscopia eletrônica de trasmissão alterações ultraestruturais condizentes com células com elevada função de produção e secreção de proteínas. O gene bgl, por sua vez, não apresentou indução do nível de transcritos comparável aos demais genes, mesmo quando cultivado em fonte celulósica. A análise quantitativa do acúmulo de transcritos desses genes também foi investigada na presença de drogas com ação inibitória da atividade de histonas desacetilases (Tricostatina A - TSA e butirato de sódio - NaBut), ou inibidoras da atividade de DNA metiltransferases (5-aza-2’-deoxicitidina – 5-AZA). A droga 5-AZA não causou alteração do acúmulo de transcritos de genes de celulases. Com as drogas NaBut e TSA, observou-se a redução do nível de transcritos para os genes egl, swo e cbh, em comparação a condição controle (ausência de droga). Utilizando-se concentrações menores desses dois compostos, somente foi observada a redução do acúmulo de transcritos dos genes egl e swo sob a ação de TSA. Não foi observada influência dos moduladores epigenéticos sobre a atividade enzimática dos sobrenadantes de culturas desse fungo sobre substratos celulósicos. Adicionalmente, o perfil proteico dos sobrenadantes de cultura não apresentou alteração sob efeito dessas drogas. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Penicillium echinulatum morphological characteristics and its growth on sugarcane bagasse were evaluated by scanning electron microscopy. This species presented septated and branched hyphae. P. echinulatum conidia presented globose/subglobose shape and diameter between 3.5 and 5m. The growth of this microorganism on sugarcane bagasse caused partial rupture of the substrate structure. The influence of different carbon sources (swollen cellulose or glucose) on the accumulation of transcripts of bgl, egl, swo and cbh genes were determined using real-time quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR). Under induction conditions, transcription of egl, cbh and the swo genes was hyper induced after 48h incubation. On the other hand, the transcription of bgl gene was not induced to the same level of the other genes, even under induction conditions. Moreover, after 24h, mycelial ultrastructure revealed features of a typical protein production and secretion cell. The impact of epigenetic modifiers Trichostatin A (TSA), sodium butyrate (NaBut) and 5-aza-2’-deoxycitidine (5-AZA) on the transcription of bgl, egl, swo and cbh genes were determined using qRT-PCR. The level of P. echinulatum celulase transcripts was not altered by 5-AZA. On the other hand, TSA and NaBut reduced egl, swo and cbh transcripts levels in comparison with the control condition (drug absence). Lower concentrations of these two compounds were used and only TSA had effect on transcripts levels of egl and swo genes. No difference in enzyme activity towards cellulosic substrates and also in the secreted proteins electrophoretic profile was observed under the influence of these epigenetic modifiers.
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Parassexualidade e produção de destruxinas em linhagens de metarhizim anisopliae var. anisopliae (Metsch.) sorokin

Lugli, Juverlande 22 January 1988 (has links)
Orientador : Claudio Luiz Messias / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T07:27:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lugli_Juverlande_M.pdf: 2361566 bytes, checksum: 66289e18433c71d51b1d736f0d409180 (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: o objetivo do presente trabalho foi reunir duas linhagens diferentes de Metarhizium anisopliae, e através do ciclo parassexual obter diplóides e segregantes, os quais pudessem ser estudados quanto a produção de destruxlnas, utilizando-se decromatografta de camada delgada (CCD) e gasosa, sendo esta última acoplada ao espectrômetro de massa (GC-MS). Para isto foram utilizadas duas linhagens: uma de origem norte-americana (F-84) e a outra brasileira (E-9). Estas foram submetidas à ação da luz ultra-vloleta, de maneira a obter-se mutantes morfológicos e auxotróficos. Os mutantes obtidos foram: E-9 am-pir, F-84 vio-tia e F-84 vio-nic, os quais apresentaram-se bastante estáveis com uma frequência de reversão menor que 10-6 conídios. Testes de complementação de pigmentos dos mutantes foram conduzidos e pode-se verificar que os mesmos não produzem a enzima lacase, que tem ação na formação do pigmento selvagem, e assim sendo os diplóides não apresentaram pigmentação verde. Os diplódes foram formados dos cruzamentos de E-9 am-pir x F-84 vio-tia e E-9 ampir x F-84 vto-nic. Ambos apresentaram coloração de um dos parentais (amarelo); estes foram haploidizados com Cloroneb (150µg/ml), surgindo setores amarelos e violetas de formato irregular. Para as destruxinas, foram utilizados os extratos das linhagens selvagens, mutantes, diplóides e segregantes, que foram cromatografados em CCD, apresentando um Rf próximo ao padrão 0,50. Um deles demonstrou Rr abaixo do padrão, (O,44). Na espectrometria de massa, os íons formados determinaram a presença das destruxinas A e B dada pelas frações 576, 7-577,6 e 592,7-593,b respectivamente. Todos os extratos das linhagens analisadas produziram destruxinas, com excecão de dois segregantes S/B-1a e S/B-1b, em cujos extratos não encontradas as duas destruxinas B e A e B. respectivamente / Abstract: In this work the main object was the study of destruxlns production, by diploids and segregants obtained through parasexual cycle in Metarhizium anisopliae. The two parantal strains utilized were E-9 (Brazil) and F-84 (USA), which after induction with UV-radiation produced conidial color and auxotrophic mutants. The mutants E-9 am-pir, F-84 vio-tia and F-84 vio-nic were utilized because they showed a reversion frequency of auxotrophlc markers lower than 10-6 conidia. The diploids Isolated (E-9 am-pir x F-84 vio-tia and E-9 am-pir x F-84 vio-nic) were all yellow conidiating and showed yellow and violet irregular segregants on Chloroneb (150µg/ml) . As only yellow conidia diploids were isolated it can be suggested that they are not able to produce laccase, which Is the enzyme responsible for wild type (green) pigment formation. Additional tests for laccase production were made with color mutants growing together in a same Petri dish and tt could be deduced that leccase was absent. Destruxtins were analyzed by Thin-layer chromatography (TLC), showing Rf close to the pattern 0,50 and gas chromatography combined with mass spectrography. The mass spectrography showed the presence of destruxins A and B by lons formation in fractions 576,7-577,6 and 592,7-593,6 respectively. One of them showed Rf below to the pattern (0,44). Mass spectrography showed the presence of the destruxin A and B by fractions 576,7-577,& and 592,7-593,6 respectively. AI) the strains analysed produced destruxins, but the sectors S/B-la and S/B-lb, which extracts didn't have destruxlns B and A and B, respectively / Mestrado / Mestre em Biologia
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Estudo das atividades xilanásicas produzidas pelo fungo Aspergillus caespitosus /

Sandrim, Valéria Cristina. January 2003 (has links)
Orientador: Maria de Lourdes Teixeira de Moraes Polizeli / Banca: Eleni Gomes / Banca: Rosa dos Prazeres Melo Furriel Inocentes / Resumo: A parede celular de planta é constituída por três componentes principais: celulose, hemicelulose e lignina. Entre as hemicelulose, xilana é o heteropolissacarídeo mais comum, e a principal enzima responsável por sua degradação é por Aspergillus caespitosus cultivado em fermentações submersa (FSM) ou semi-sólida (FSS). As xilanases foram purificadas, caracterizadas e testadas no branqueamento da polpa de celulose. Em relação a FSM, o melhor meio de produção xilanásica foi o SR suplementado com 1% de farelo de trigo (FT) ou bagaço de cana-de-açúcar (BCA), mais peptona 0,25% ou 0,1%, respectivamente. As fermentações foram realizadas a 40ºC durante 48 horas em meios com pH iniciais de 8,0 (BCA) ou 6,0 (FT). Não houve ativação enzimática com a adição de íons metálicos, principalmente com as amostras obtidas dos meios com BCA. As xilanases obtidas do meio com BCA foram inativadas termicamente a 55ºC e 65ºC, mais rápido do que as xilanases presentes nos filtrados das culturas com FT. Adição de diferentes concentrações de glicose no meio suplementado com BCA ou FT reduziu a produção de xilanases, mas de diferente modo, considerando que a repressão foi retardada na primeira condição. FSS foram realizadas também com FT ou BCA, mais 4 ou 8 mL de água por grama de substrato, respectivamente, a 30ºC durante 3 ou 6 dias. Os meios contendo FT e BCA foram suplementados com nitrato de amônio ou peptona, respectivamente. Não foi observada repressão catabólica por glicose nessas fermentações. Duas xilanases, xyl 1 e xyl 2, foram purificadas usando Sephadex G-100. Xyl 2 exibiu maior conteúdo de carboidrato (41%) do que xyl 1 (29%), o que pode explicar sua maior estabilidade a temperatura e pH... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The plant cell wall is constituted by three main compounds: cellulose, hemicellulose and lignin. Among the hemicelluloses, xylan is the heteropolysaccharide most common, and the principal enzyme responsible for its degradation is xylanase. This study investigated some optimal culture conditions for xylanase production by the filamentous fungus Aspergillus caespitosus cultivated in submerged fermentation (SMF), or solid-state-fermentation (SSF). The xylanases were purified, biochemical characterized and assayed in pulp bleaching. With regard to SMF, several media were tested, but the best results for xylanase production were obtained with SR medium supplemented with 1% (w/v) wheat bran (WB) or sugar cane bagasse (SCB), and with 0.25% (w/v) or 0.1% (w/v) peptone, respectively. Fermentation was carried out at 40oC, for 48 hours, in media with initial pH of 8.0 (SCB) or 6.0 (WB). There was no enzymatic activation by the addition of metallic ions, mainly for the samples obtained from SCB medium. The xylanase obtained from SCB crude extracts was thermally inactivated at 55oC and 65oC, faster than that of the xylanase obtained from WB culture filtrates. Addition of different glucose concentrations to media supplemented with SCB or WB reduced xylanase production, but in a different way, considering that the repression was retarded in the first condition. SSF were carried out also with 2 g WB or SCB, plus 4 mL or 8 mL water, respectively, at 30oC for 3 or 6 days. The WB and SCB media were supplemented with ammonium nitrate or peptone, respectively. It was not observed repression by glucose for these fermentations. Two xylanases, xyl 1 and xyl 2, were purified using Sephadex G-100. Xyl 2 exhibited higher carbohydrate content (41%) than xyl 1 (29%), which might explain its higher stability for temperature and pH. Furthermore, this property probably caused a carbohydrate-carbohydrate... (Compete abstract, click electronic address below) / Mestre
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Produção de ligninases por basidiomicetos através de fermentação em estado sólido, caracterização e aplicação das enzimas /

Carvalho, Caio Cesar de. January 2005 (has links)
Orientador: Eleni Gomes / Banca: Maria de Lourdes Teixeira de Moraes Polizeli / Resumo: As ligninases atualmente têm sido consideradas de grande importância para indústria papeleira no branqueamento da polpa e em processos de tratamento de resíduos contendo compostos recalcitrantes como aromáticos derivados de corantes e organoclorados. Neste trabalho foi estudada a produção de três ligninases (manganês peroxidase, lignina peroxidase e lacase) por três linhagens de basiodiomicetos: Coriolopsis byrsina 16, Gloephylum cf. striatum 40 e Lentinus sp 48. por um período de cultivo de seis semanas. Foram avaliados cinco diferentes resíduos agrícolas (casca de amendoim, palha de arroz, farelo de trigo, palha de milho e bagaço de cana) e produção de enzimas para os três fungos, além da influência de três fontes de nitrogênio ((NH4)2SO4, (NH4)2HPO4 e (NH4)2SO4 + (NH4)2HPO4) no crescimento e produção de ligninases. Entre as condições de fermentação testadas, a melhor produção de lacase (49011 U/g) foi obtida a partir do Coriolopsis byrsina 16, cultivado em farelo de trigo por três semanas, suplementado com solução de (NH4)2HPO4 + (NH4)2SO4. O Lentinus sp. 48 apresentou uma produção de 15080 U/g, quando cultivado em meio de farelo de trigo suplementado com solução de (NH4)2SO4, por três semanas de cultivo. A lacase de Coriolopsis byrsina 16 apresentou temperatura ótima de 60°C, e a lacase de Lentinus sp. 48 a 65°C. Os pHs ótimos das lacases foram de 3,5 para o Coriolopsis byrsina 16 e 3,0 para o Lentinus sp. 48. Foi avaliado o potencial de descoloração dos extratos enzimáticos brutos sobre oito corantes sintético. O corante Cibacron Blue foi descolorado em 69, 3% e o cristal violeta em 63% com o extrato enzimático de Coriolopsis byrsina. O corante Orange II perdeu 63,5% da cor após o tratamento com solução enzimática de Lentinus sp. 48 / Abstract: Nowadays, the ligninases are considered very important to the paper industry in the pulp whitening and in the residual treatment processes, containing recalcitrant compounds acting as aromatics derived from colorings and organochlorine. In this study, it was analyzed, in a culture period of six weeks, the production of three ligninases (manganese peroxidase, lignin peroxidase and laccase) per three lineages of basiodiomycetes: Coriolopsis byrsina 16, Gloephylum cf. striatum 40 e Lentinus sp 48. It was evaluated five different agricultural residues (peanut shell, rice straw, wheat bran, corn straw and sugar-cane bagasse) and the production of enzymes for three fungi, besides the influence of three nitrogen sources ((NH4)2SO4, (NH4)2HPO4 and (NH4)2SO4+(NH4)2HPO4) in the ligninases growth and production. In the fermentation conditions tested, the best production of laccase (49011 U/g) was obtained from Coriolopsis byrsina 16, cultivated in wheat bran for three weeks, and supplemented with a solution of (NH4)2HPO4 + (NH4)2SO4. The Lentinus sp. 48 had a production of 15808 U/g when cultivated in wheat bran for three weeks, and supplemented with a solution of (NH4)2SO4. The Coriolopsis byrsina 16 laccase demonstrated an excellent temperature of 60°C, and the Lentinus sp. 48 laccase of 65°C. The considerable pHs of the laccases were 3,5 for the Coloriopsis byrsina 16 and 3,0 for the Lentinus sp. 48. It was evaluated the discoloration potential of the raw enzymatic extracts in eight synthetic colorings. The coloring Cibacron Blue was discolored in 69, 3% and the crystal violet in 63% with the enzymatic extract of Coriolopsis byrsina. The coloring Orange II lost 63,5% of its color after the treatment with the enzymatic solution of Lentinus sp. 48 / Mestre
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Produção de ligninases por basidiomicetos através de fermentação em estado sólido, caracterização e aplicação das enzimas

Carvalho, Caio Cesar de [UNESP] 25 February 2005 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-02-25Bitstream added on 2014-06-13T18:56:07Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_cc_me_rcla.pdf: 943839 bytes, checksum: b3f2d7ccaee9f0c2374d9679adeb7d9b (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / As ligninases atualmente têm sido consideradas de grande importância para indústria papeleira no branqueamento da polpa e em processos de tratamento de resíduos contendo compostos recalcitrantes como aromáticos derivados de corantes e organoclorados. Neste trabalho foi estudada a produção de três ligninases (manganês peroxidase, lignina peroxidase e lacase) por três linhagens de basiodiomicetos: Coriolopsis byrsina 16, Gloephylum cf. striatum 40 e Lentinus sp 48. por um período de cultivo de seis semanas. Foram avaliados cinco diferentes resíduos agrícolas (casca de amendoim, palha de arroz, farelo de trigo, palha de milho e bagaço de cana) e produção de enzimas para os três fungos, além da influência de três fontes de nitrogênio ((NH4)2SO4, (NH4)2HPO4 e (NH4)2SO4 + (NH4)2HPO4) no crescimento e produção de ligninases. Entre as condições de fermentação testadas, a melhor produção de lacase (49011 U/g) foi obtida a partir do Coriolopsis byrsina 16, cultivado em farelo de trigo por três semanas, suplementado com solução de (NH4)2HPO4 + (NH4)2SO4. O Lentinus sp. 48 apresentou uma produção de 15080 U/g, quando cultivado em meio de farelo de trigo suplementado com solução de (NH4)2SO4, por três semanas de cultivo. A lacase de Coriolopsis byrsina 16 apresentou temperatura ótima de 60°C, e a lacase de Lentinus sp. 48 a 65°C. Os pHs ótimos das lacases foram de 3,5 para o Coriolopsis byrsina 16 e 3,0 para o Lentinus sp. 48. Foi avaliado o potencial de descoloração dos extratos enzimáticos brutos sobre oito corantes sintético. O corante Cibacron Blue foi descolorado em 69, 3% e o cristal violeta em 63% com o extrato enzimático de Coriolopsis byrsina. O corante Orange II perdeu 63,5% da cor após o tratamento com solução enzimática de Lentinus sp. 48. / Nowadays, the ligninases are considered very important to the paper industry in the pulp whitening and in the residual treatment processes, containing recalcitrant compounds acting as aromatics derived from colorings and organochlorine. In this study, it was analyzed, in a culture period of six weeks, the production of three ligninases (manganese peroxidase, lignin peroxidase and laccase) per three lineages of basiodiomycetes: Coriolopsis byrsina 16, Gloephylum cf. striatum 40 e Lentinus sp 48. It was evaluated five different agricultural residues (peanut shell, rice straw, wheat bran, corn straw and sugar-cane bagasse) and the production of enzymes for three fungi, besides the influence of three nitrogen sources ((NH4)2SO4, (NH4)2HPO4 and (NH4)2SO4+(NH4)2HPO4) in the ligninases growth and production. In the fermentation conditions tested, the best production of laccase (49011 U/g) was obtained from Coriolopsis byrsina 16, cultivated in wheat bran for three weeks, and supplemented with a solution of (NH4)2HPO4 + (NH4)2SO4. The Lentinus sp. 48 had a production of 15808 U/g when cultivated in wheat bran for three weeks, and supplemented with a solution of (NH4)2SO4. The Coriolopsis byrsina 16 laccase demonstrated an excellent temperature of 60°C, and the Lentinus sp. 48 laccase of 65°C. The considerable pHs of the laccases were 3,5 for the Coloriopsis byrsina 16 and 3,0 for the Lentinus sp. 48. It was evaluated the discoloration potential of the raw enzymatic extracts in eight synthetic colorings. The coloring Cibacron Blue was discolored in 69, 3% and the crystal violet in 63% with the enzymatic extract of Coriolopsis byrsina. The coloring Orange II lost 63,5% of its color after the treatment with the enzymatic solution of Lentinus sp. 48.

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