Tese (doutorado) - Universidad de Buenos Aires. Faculdad de Ciencias Exactas y Naturales / Made available in DSpace on 2016-01-08T16:43:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 1990

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-08T17:47:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Angelo Souto de Santana.pdf: 681995 bytes, checksum: f79118dc36301256e207d858eb698a5b (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-16T21:57:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Angelo Souto de Santana.pdf: 681995 bytes, checksum: f79118dc36301256e207d858eb698a5b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T21:57:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Angelo Souto de Santana.pdf: 681995 bytes, checksum: f79118dc36301256e207d858eb698a5b (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / CAPES / Os fungos micorrízicos arbusculares (FMA) promovem vários benefícios para as plantas, desde o incremento no crescimento vegetal à tolerância ao ataque de patógenos radiculares. Nesse contexto, faz-se necessário produzir inoculantes do fungo que venham a ser comercializados no mercado ou mesmo produzidos e utilizados diretamente por agricultores na própria área de cultivo. O objetivo geral desta tese foi definir tecnologia economicamente viável para produção de inoculante micorrízico arbuscular, com capacidade infectiva e efetiva adequadas. No primeiro experimento, inóculos de FMA (Claroideoglomus etunicatum e Glomus clarum) foram produzidos em aeroponia e a infectividade testada após armazenamento por três, seis e 10 meses, em temperatura ambiente (28 ºC) ou a 4 ºC, em três substratos: a) areia; b) areia + vermiculita; c) areia + argila expandida. No segundo experimento os inoculantes (C. etunicatum e Acaulospora longula) foram produzidos em canteiros de alvenaria, construídos em locais com clima tropical úmido (Recife) e semiárido (Petrolina), distantes 756 km entre si. Os canteiros foram divididos em parcelas com 50 cm × 48,5 cm × 28 cm e preenchidos com os substratos: T1) areia + argila; T2) areia + argila + bagaço de cana; T3) areia + argila + leucena triturada; T4) areia + argila + leucena triturada + bagaço de cana. Em todas as parcelas foram plantadas mudas de sorgo (36 plântulas pré-colonizadas); as avaliações foram realizadas ao final de dois ciclos de cultivo (três meses cada). O sistema aeropônico para a produção de inoculante de FMA é adequado, com elevada proliferação de propágulos de Claroideoglomus etunicatum e Glomus clarum e, relativamente, de menor custo, especialmente para C. etunicatum. Os inóculos produzidos em sistema aeropônico e armazenados a 4 ºC permanecem viáveis, por pelo menos 10 meses, em substrato composto de areia adicionado de argila ou vermiculita, sendo recomendado para uso como bioinoculantes. A tecnologia para produção de inoculante em canteiro de alvenaria utilizando como substrato areia + argila expandida adicionado de leucena triturada é promissora como alternativa de biofertilizante tanto para áreas tropicais úmidas quanto semiáridas. / The arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) promote several benefits to plants, since the increase in plant growth to tolerance to attack by root pathogens. In this context, it is necessary to produce inoculants fungus that may be marketed or produced and used directly by farmers in their own growing area. The overall objective of this thesis was to define economically viable technology for producing arbuscular mycorrhizal inoculant with high infectivity and efficiency. In the first experiment, inoculum of AMF (Claroideoglomus etunicatum and Glomus clarum) were produced in aeroponic , and thereafter the inoculum infectivity was tested after storage for three, six and 10 months at room temperature (28 °C) or at 4 °C in three substrates: a) sand; b) sand, vermiculite; c) sand + expanded clay. In the second experiment the inoculants (C. etunicatum and Acaulospora longula) were produced in masonry beds, built in locations with humid tropical climate (Recife) and semiarid (Petrolina), 756 km distant from each other. The masonry beds were divided into plots with 50 cm × 48.5 cm × 28 cm and filled with the substrates: T1) sand + expanded clay; T2) sand + expanded clay + cane bagasse; T3) sand + expanded clay + chopped leucaena; T4) sand + expanded clay + cane bagasse + chopped leucaena. In each plot were planted sorghum (36 pre-colonized seedlings); the evaluations were carried out after two crop cycles (three months each). The aeroponic system for the production of AMF inoculum is adequate, with high proliferation of propagules of Claroideoglomus etunicatum and Glomus clarum and relatively low cost, especially for C. etunicatum. The inocula produced in the aeroponic system and stored at 4 8C remains viable for at least 10 months in substrates composed of sand added of clay or vermiculite, being recommended for use as bioinoculants. The technology for production of inoculum in horticultural beds using sand as substrate + expanded clay + chopped leucaena is a alternative of biofertilizers for both humid and semi-arid tropical areas.

Orientador: Ivanhoe Rodrigues Baracho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T05:11:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Baracho_MartadosSantos_D.pdf: 3820349 bytes, checksum: d2aa9a8cb833c515719af294c7cf4a0e (MD5) Previous issue date: 1999 / Doutorado

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2015. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-23T18:43:23Z No. of bitstreams: 1 2015_DeboraLoSciuto.pdf: 2930905 bytes, checksum: 5a066e6e45c40ffdadd632e863375380 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-06-23T20:01:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_DeboraLoSciuto.pdf: 2930905 bytes, checksum: 5a066e6e45c40ffdadd632e863375380 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-23T20:01:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_DeboraLoSciuto.pdf: 2930905 bytes, checksum: 5a066e6e45c40ffdadd632e863375380 (MD5) / O fungo filamentoso Clonostachys byssicola foi cultivado por sete dias em meio líquido contendo casca de soja 1 % (m/v) como única fonte de carbono. A capacidade do fungo em secretar enzimas holocelulolíticas foi avaliada, sendo observadas atividades de CMCase, FPase, mananase, pectinase e xilanase no extrato bruto. CMCase (0,904 UI/mL) foi escolhida como principal alvo de investigação. O extrato bruto foi concentrado por ultrafiltração em membrana com retenção de 10 kDa, e CMCase presente no extrato concentrado foi parcialmente purificada utilizando coluna cromatográfica de exclusão molecular (Sephacryl S100) e de troca iônica (Q Sepharose e DEAE Sepharose Fast Flow). CMCase presente no extrato concentrado e frações reunidas oriundas das colunas de troca iônica foram caracterizadas. A enzima semi purificada apresentou maior atividade a 60-70 °C e pH 5,0, sendo termoestável a 40 °C e 50 °C e possui massa molecular de aproximadamente 48 kDa. Compostos fenólicos (vanilina, ácidos tânico, 4-hidroxibenzóico, ferúlico, ρ-coumárico e cinâmico) não tiveram efeito inibitório e de desativação sobre a atividade celulolítica. Os íons Cu2+, Fe2+, Fe3+ e Zn2+ na concentração de 10 mM inibiram atividade de CMCase em até 70 %, 94 %, 100 % e 44 %, respectivamente; o íon Co2+ (10 mM) ativou a atividade enzimática das frações Cel-QFF e Cel-DEAE em 21 % e 25 %, respectivamente. Os valores de kM e Vmáx de CMCase foram 24,93 mg/mL e 2,14 UI/mL (no extrato concentrado); e 15,81 mg/mL e 0,59 UI/mL (na fração Cel-DEAE), respectivamente. Foram realizados ensaios de hidrólise enzimática de avicel, CMC, papel de filtro, manana e xilana e substratos lignocelulósicos (casca de soja e bagaço de cana de açúcar) com enzimas do extrato concentrado e fração Cel-QFF. Os principais produtos de hidrólise enzimática de CMC e papel de filtro foram glicose, celopentaose e celohexaose. A hidrólise enzimática de casca de soja liberou maior quantidade de açúcar que a hidrólise de bagaço de cana de açúcar, sugerindo que as enzimas secretadas durante o crescimento de C. byssicola possuem atividade enzimática mais proeminente sobre o substrato utilizado como fonte de carbono. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The filamentous fungus Clonostachys byssicola was cultivated for seven days in liquid medium containing soybean hulls 1 % (w/v) as the sole carbon source. The fungus's ability to secrete holocellulolytic enzymes was evaluated and activities of CMCase, FPase, mannanase, pectinase and xilanase were observed in the crude extract. CMCase (0.904 IU/mL) was chosen as the main target of research. The crude extract was concentrated by ultrafiltration membrane with retention of 10 kDa, and CMCase present in the concentrated fraction was partially purified using molecular exclusion (Sephacryl S100) and ion exchange chromatography columns (Q Sepharose and DEAE Sepharose Fast Flow). CMCase present in the concentrated fraction and pooled fractions from the ion exchange columns were characterized. The semi purified enzyme exhibited higher activity at 60-70 °C and pH 5.0, being thermostable at 40 °C and 50 °C and has a molecular mass of approximately 48 kDa. Phenolic compounds (vanillin, tannic, 4-hydroxybenzoic, ferulic, ρ-coumaric and cinnamic acids) had no inhibitory and deactivation effects on cellulolytic activity. Cu2+, Fe2+, Fe3+ and Zn2+ at a concentration of 10 mM inhibited CMCase activity by 70 %, 94 %, 100 % and 44 %, respectively; Co2+ (10 mM) activated enzyme activity of the Cel-QFF and Cel-DEAE fractions by 21 % and 25 %, respectively. KM and Vmax values of CMCase were found to be 24.93 mg/mL and 2.14 IU/mL (concentrated fraction); and 15.81 mg/mL and 0.59 IU/mL (Cel-DEAE fraction), respectively. Enzymatic hydrolysis of avicel, CMC, filter paper, xylan and mannan and lignocellulosic substrates (soybean hulls and sugar cane bagasse) were performed with enzymes of the concentrated fraction and Cel-QFF fraction. The main enzymatic hydrolysis products of CMC and filter paper were glucose, cellopentaose and cellohexaose. Enzymatic hydrolysis of soybean hulls released higher sugar amount than the hydrolysis of sugarcane bagasse, suggesting that the enzymes secreted during the growth of C. byssicola have more prominent enzyme activity on the substrate used as a carbon source.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-09-14T12:26:54Z No. of bitstreams: 1 2012_RobsonWillianMeloMatos.pdf: 6258233 bytes, checksum: 0e725cb3ceb56998a968102c211ad496 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2012-09-18T12:22:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_RobsonWillianMeloMatos.pdf: 6258233 bytes, checksum: 0e725cb3ceb56998a968102c211ad496 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-18T12:22:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_RobsonWillianMeloMatos.pdf: 6258233 bytes, checksum: 0e725cb3ceb56998a968102c211ad496 (MD5) / Neste trabalho foi analisado, por microscopia eletrônica de varredura, o crescimento do fungo filamentoso Penicillium echinulatum sobre bagaço de cana-de-açúcar e características morfológicas foram descritas. Essa espécie apresentou hifas ramificadas e com septação. Os conídios apresentaram formato globoso a subgloboso e diâmetro entre 3,5 a 5m. O crescimento do microrganismo sobre o bagaço causou a ruptura parcial desse substrato, observada a partir do aspecto quebradiço e esfarelado das fibras, assim como pela propagação das hifas entremeando as fibrilas. Por meio de estudos de qRT-PCR, foi comparado o nível de acúmulo de transcritos dos genes egl, cbh, bgl e swo de P. echinulatum, cultivado em condições indutoras ou repressoras para genes do complexo celulolítico e em diferentes tempos de crescimento. Em condição indutora, esse fungo apresentou um pico de acúmulo de transcritos dos genes egl, cbh e swo, após 48h de cultivo. Após 24h, foi observado por microscopia eletrônica de trasmissão alterações ultraestruturais condizentes com células com elevada função de produção e secreção de proteínas. O gene bgl, por sua vez, não apresentou indução do nível de transcritos comparável aos demais genes, mesmo quando cultivado em fonte celulósica. A análise quantitativa do acúmulo de transcritos desses genes também foi investigada na presença de drogas com ação inibitória da atividade de histonas desacetilases (Tricostatina A - TSA e butirato de sódio - NaBut), ou inibidoras da atividade de DNA metiltransferases (5-aza-2’-deoxicitidina – 5-AZA). A droga 5-AZA não causou alteração do acúmulo de transcritos de genes de celulases. Com as drogas NaBut e TSA, observou-se a redução do nível de transcritos para os genes egl, swo e cbh, em comparação a condição controle (ausência de droga). Utilizando-se concentrações menores desses dois compostos, somente foi observada a redução do acúmulo de transcritos dos genes egl e swo sob a ação de TSA. Não foi observada influência dos moduladores epigenéticos sobre a atividade enzimática dos sobrenadantes de culturas desse fungo sobre substratos celulósicos. Adicionalmente, o perfil proteico dos sobrenadantes de cultura não apresentou alteração sob efeito dessas drogas. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Penicillium echinulatum morphological characteristics and its growth on sugarcane bagasse were evaluated by scanning electron microscopy. This species presented septated and branched hyphae. P. echinulatum conidia presented globose/subglobose shape and diameter between 3.5 and 5m. The growth of this microorganism on sugarcane bagasse caused partial rupture of the substrate structure. The influence of different carbon sources (swollen cellulose or glucose) on the accumulation of transcripts of bgl, egl, swo and cbh genes were determined using real-time quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR). Under induction conditions, transcription of egl, cbh and the swo genes was hyper induced after 48h incubation. On the other hand, the transcription of bgl gene was not induced to the same level of the other genes, even under induction conditions. Moreover, after 24h, mycelial ultrastructure revealed features of a typical protein production and secretion cell. The impact of epigenetic modifiers Trichostatin A (TSA), sodium butyrate (NaBut) and 5-aza-2’-deoxycitidine (5-AZA) on the transcription of bgl, egl, swo and cbh genes were determined using qRT-PCR. The level of P. echinulatum celulase transcripts was not altered by 5-AZA. On the other hand, TSA and NaBut reduced egl, swo and cbh transcripts levels in comparison with the control condition (drug absence). Lower concentrations of these two compounds were used and only TSA had effect on transcripts levels of egl and swo genes. No difference in enzyme activity towards cellulosic substrates and also in the secreted proteins electrophoretic profile was observed under the influence of these epigenetic modifiers.

Tese (doutorado)— Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-04-15T15:56:47Z No. of bitstreams: 1 2012_AdelsonJoelSilva.pdf: 3485894 bytes, checksum: fadc62357304c46ebd85bf90f278ae40 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-04-17T13:09:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_AdelsonJoelSilva.pdf: 3485894 bytes, checksum: fadc62357304c46ebd85bf90f278ae40 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-17T13:09:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_AdelsonJoelSilva.pdf: 3485894 bytes, checksum: fadc62357304c46ebd85bf90f278ae40 (MD5) / As enzimas que degradam parede celular vegetal produzidas por micro-organismos possuem aplicações biotecnológicas importantes, incluindo a produção de bioetanol. Algumas batérias anaeróbicas são capazes de produzir complexos multi-enzimáticos chamados de celulosomos, enquanto os fungos filamentosos normalmente secretam enzimas hidrolíticas individuais que atuam sinergisticamente no processo de degradação de polissacarídeo. Neste trabalho, nós mostramos que os fungos filamentosos Trichoderma harzianum e Trichoderma reesei, secretam complexos multi-enzimáticos ativos quando cultivados em meio contendo o resíduo agrícula bagaço de cana-de-açucar e lactose (ou galactose), respectivamente. O secretoma de ambos os fungos foram analisadas primeiramente por 1D-BN (blue native)-PAGE. Bandas eletroforéticas correspondendo a possíveis complexos foram submetidas à separação eletroforética usando sistema Tricina-SDS-PAGE para demonstrar que são constituídas de componentes menores. Ensaios zimográficos foram realizados usando 1D-BN-PAGE e 2D-BN/BN-PAGE para verificar atividades celulolítica e xilanolítica em um mesmo complexo. Finalmente, os complexos foram digeridas por tripsina e analisadas separadamente por LC-MS/MS e os programas MASCOT e MS-BLAST para identificação das proteínas constituintes. Os resultados mostraram que ambos os fungos produzem complexos constituídos por enzimas celulolítica e xilanolítica e outras proteínas, as quais apresentam uma complementariedade funcional no processo de degração de substratos polissacaridícos. Em T. harzianum foram analisados três complexos, os quais apresentaram os seguintes componentes: celobiohidrolase I, celobiohidrolase I-II, alfa-L-arabinofuranosidase, xilana 1,4- -xilosidase (complexo I); acetilxilan esterase, ndoquitinase, arabinogalactana, endo-1,4- -galactosidase, celobiohidrolase I, cutinase, ?-N-arabinofuranosidase e endo- -1,4-xilanase (complexo II); glucoamilase, endo-beta-1,4- glucanase, swollenina, beta-endoglucanase ancorado a GPI, alfa-L-arabinofuranosidase, ?-1,3-glucanase (complexo III). T. reesei produziu mais complexos multi-enzimáticos quando cultivado em meio contendo lactose que galactose. A composição dos complexos I e II em lactose parece torná-los melhores equipados para biodegradação. Os componentes dos complexos do meio com lactose são: glicosil hidrolases 20, 36, beta-1,3-endoglucanase, alfa-alactosidase, exo-beta-1,4-glucanase, aril-alcool oxidase, "predicted protein" 43, "predicted protein" 20 (complexo I); beta-1,3-endoglucanase, "predicted protein" 20, 48, 44, 61, 52, 42, glicosil hidrolase 37, quitinase (complexo II). Os complexos do meio com galactose são: glicosil hidrolases 16, 36, 54, 55, beta-1,3-endoglucanase, catalase/peroxidase bifuncional, "predicted protein" 20 (complexo I); "predicted protein" 20, 44, 61, 52, beta-1,3-endoglucanase, glicosil hidrolase 3, 37, quitinase, amidase (complexo II). Além disso, o complexo I é mais expresso em meio contendo lactose que galactose, ocorrendo inversamente com o complexo II. Juntos, esses dados mostram que a fonte de carbono influi na composição dos complexos multi-enzimáticos em T. reesei. A cooperatividade funcional entre os elementos dos complexos dos fungos são discutidos. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Plant cell degrading enzymes produced by microorganisms possess important biotechnological applications; including the production of bioethanol . Some anaerobic bacteria are abl e to produce multienzymatic complexes called cellulosomes whilst filamentous fungi normally secrete individual hydrolytic enzymes that act synergically in the process of polysaccharide degradation. I n the present work we demonstrated that the filamentous fungi Trichoderma harzianum and Trichoderma reesei secrete active multienzymatic complexes when culti vated i n culture media suppl emented with the agricultural residue sugarcane bagasse and lactose (gal actose), respecti vely. The secret ome of bot h f ungi were analysed by 1D-BN (blue native) PAGE. Protein bands corresponding to possible complexes were submitted to electrophoretic separation using a Tricine-SDS system in order to demonstrate that they were constituted by smaller components. Zymogr aphic assays were performed using 1D-BN-PAGE and 2D-BN/BN-PAGE o verify cellulolytic and cellulolytic activities in the complexes. Finally, the complexes were trypsin di gested, subjected to LC-MS/MS and the results analyzed using the soft ware MASCOT and MS-BLAST to identify t hei r component s. The results demonstrated t hat both organisms produced complexes constituted by cellulolytic and xylanolytic enzymes as well as other protei ns relat ed to polysacchari de degradation. Three T. harzianum complexes that were analyzed presented the following components: cellobiohydrolase I, cellobiohydrolase I-II, al pha-L-arabinofuranosidase, xylan 1,4- - xylosidase (compl ex I); acetilxylan esterase, endochitinase, arabinogalactan, endo-1, 4- -galactosidase, cellobiohydrolase I, cutinase, -N-arabi nofuranosidase e endo- -1,4-xylanase (complex II); glucoamilase, endo-beta-1,4-glucanase, swollenin, GPI-anchored beta-endoglucanase, alpha-L-arabinofuranosi dase and -1,3-glucanase (compl exo III). T. reesei produced more multienzymatic compl exes when grown in lactose than in galactose containi ng medium. The composition of compl exes I and II in lactose possibly make them more suitable for biodegradation. The component s of t he compl exes produced i n t he l act ose medium are: glycosyl hydrolases 20, 36, beta-1,3-endogl ucanase, alpha-gal actosidase, exo-bet a-1, 4-glucanase, aryl - 1, 3- ex II). The compl exes produced in the gal actose medi um are glycosil hydrolases 16, 36, 54, 55, bet a-1, 3- 20, 44, 61, 52, bet a-1, 3-endoglucanase, glycosyl hydrolase 3, 37, chitinase and ami dase (complex II). In addition, compl ex I is more expressed in l actose than in gal actose medium whil e compl ex II is more expressed in galactose. Overall, the dat a show that the carbon source infl uence the composition of T. reesei multienzimatic complexes. The functional cooperativity between the elements of the complexes are discussed.

Orientador : Claudio Luiz Messias / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T07:27:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lugli_Juverlande_M.pdf: 2361566 bytes, checksum: 66289e18433c71d51b1d736f0d409180 (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: o objetivo do presente trabalho foi reunir duas linhagens diferentes de Metarhizium anisopliae, e através do ciclo parassexual obter diplóides e segregantes, os quais pudessem ser estudados quanto a produção de destruxlnas, utilizando-se decromatografta de camada delgada (CCD) e gasosa, sendo esta última acoplada ao espectrômetro de massa (GC-MS). Para isto foram utilizadas duas linhagens: uma de origem norte-americana (F-84) e a outra brasileira (E-9). Estas foram submetidas à ação da luz ultra-vloleta, de maneira a obter-se mutantes morfológicos e auxotróficos. Os mutantes obtidos foram: E-9 am-pir, F-84 vio-tia e F-84 vio-nic, os quais apresentaram-se bastante estáveis com uma frequência de reversão menor que 10-6 conídios. Testes de complementação de pigmentos dos mutantes foram conduzidos e pode-se verificar que os mesmos não produzem a enzima lacase, que tem ação na formação do pigmento selvagem, e assim sendo os diplóides não apresentaram pigmentação verde. Os diplódes foram formados dos cruzamentos de E-9 am-pir x F-84 vio-tia e E-9 ampir x F-84 vto-nic. Ambos apresentaram coloração de um dos parentais (amarelo); estes foram haploidizados com Cloroneb (150µg/ml), surgindo setores amarelos e violetas de formato irregular. Para as destruxinas, foram utilizados os extratos das linhagens selvagens, mutantes, diplóides e segregantes, que foram cromatografados em CCD, apresentando um Rf próximo ao padrão 0,50. Um deles demonstrou Rr abaixo do padrão, (O,44). Na espectrometria de massa, os íons formados determinaram a presença das destruxinas A e B dada pelas frações 576, 7-577,6 e 592,7-593,b respectivamente. Todos os extratos das linhagens analisadas produziram destruxinas, com excecão de dois segregantes S/B-1a e S/B-1b, em cujos extratos não encontradas as duas destruxinas B e A e B. respectivamente / Abstract: In this work the main object was the study of destruxlns production, by diploids and segregants obtained through parasexual cycle in Metarhizium anisopliae. The two parantal strains utilized were E-9 (Brazil) and F-84 (USA), which after induction with UV-radiation produced conidial color and auxotrophic mutants. The mutants E-9 am-pir, F-84 vio-tia and F-84 vio-nic were utilized because they showed a reversion frequency of auxotrophlc markers lower than 10-6 conidia. The diploids Isolated (E-9 am-pir x F-84 vio-tia and E-9 am-pir x F-84 vio-nic) were all yellow conidiating and showed yellow and violet irregular segregants on Chloroneb (150µg/ml) . As only yellow conidia diploids were isolated it can be suggested that they are not able to produce laccase, which Is the enzyme responsible for wild type (green) pigment formation. Additional tests for laccase production were made with color mutants growing together in a same Petri dish and tt could be deduced that leccase was absent. Destruxtins were analyzed by Thin-layer chromatography (TLC), showing Rf close to the pattern 0,50 and gas chromatography combined with mass spectrography. The mass spectrography showed the presence of destruxins A and B by lons formation in fractions 576,7-577,6 and 592,7-593,6 respectively. One of them showed Rf below to the pattern (0,44). Mass spectrography showed the presence of the destruxin A and B by fractions 576,7-577,& and 592,7-593,6 respectively. AI) the strains analysed produced destruxins, but the sectors S/B-la and S/B-lb, which extracts didn't have destruxlns B and A and B, respectively / Mestrado / Mestre em Biologia

Este trabalho teve em mira estudar, com dados locais, a ocorrência de linhagens de Staphylococcus aureus Rosenbach, 1884 produtores de enterotoxinas. Para isso, obtiveram-se amostras de fossa nasal de 122 pessoas da cidade de Piracicaba (SP), no ano de 1988. Destas amostras foram isoladas 34 culturas de S. aureus. Trabalhou-se também com 30 culturas clínicas cedidas pelo laboratório do Prev-Lab (Centro de Patologia Clínica Preventiva) de Piracicaba e ainda com 3 culturas cedidas pela Coleção de Culturas Tropical da Fundação Tropical de Pesquisa e Tecnologia André Tosello, de Campinas, SP, estas sabidamente produtoras de enterotoxinas dos Tipos A, B e D. A identificação foi feita pelos métodos seguintes: microscopia com coloração de Gram, prova de coagulase, prova de termonuclease e"Staphy-Test". Realizou-se a seguir prova de produção de enterotoxina, que, posteriormente também foi identificada pelo"Optimum Sensitivity Plate". Das 30 amostras clínicas, 16 se revelaram produtoras de enterotoxina, sendo 4 do tipo A, 8 do tipo B, 3 do tipo A e B simultaneamente, e uma do tipo C3, além de 14 que não produziram enterotoxina desses tipos. Dos 34 isolados de amostras de fossa nasal, 5 foram produtoras de enterotoxina de tipo A e uma do tipo D. À vista deste resultado, o autor salienta a necessidade de medidas sanitárias adequadas para impedir a contaminação de alimentos por pessoas portadoras de S. aureus com capacidade de causar surtos de intoxicação alimentar / This dissertation had the aim of studying, with local data, the occurrence of strains of Staphylococcus aureus Rosenbach, 1884 producing enterotoxins. Samples of the anterior nares of 122 persons from the city of Piracicaba, State of S. Paulo, Brazil, were collected. From these samples 34 cultures of S. aureus were isolated. The author studied also 30 clinical cultures furnished by the Prev-Lab ("Centro de Patologia Clínica Preventiva") laboratory, from Piracicaba, and further with 3 cultures received from the"Coleção de Culturas Tropicais da Fundação Tropical de Pesquisa e Tecnologia André Tossello", from Campinas, State of S. Paulo, Brazil, these known to produce enterotoxins of the types A, B and D. The identification of organisms was carried out by the following methods. Microscopy with Gram staining, coagulase test, thermonuclease test and"Staphy-Test". Afterwards a test of production of enterotoxinn was carried out, which was identified by the"Optimum Sensitivity Plate", among the 30 clinical samples, 16 produced enterotoxin, being 4 type A, 8 of type B, 3 of type A and B simultaneously, and one of type 'C IND.3', besides 14 wich did not produce enterotoxins of these types. Among the 34 strains originated from samples of anterior nares, 5 produced enterotoxins of type A, and one of type D. Having in view these results, the author recommends that suitable sanitary measures should by taken to avoid the contamination of food by carriers of S.|aureus capable of giving origin outbreaks of food poisoning

Este trabalho teve em mira estudar, com dados locais, a ocorrência de linhagens de Staphylococcus aureus Rosenbach, 1884 produtores de enterotoxinas. Para isso, obtiveram-se amostras de fossa nasal de 122 pessoas da cidade de Piracicaba (SP), no ano de 1988. Destas amostras foram isoladas 34 culturas de S. aureus. Trabalhou-se também com 30 culturas clínicas cedidas pelo laboratório do Prev-Lab (Centro de Patologia Clínica Preventiva) de Piracicaba e ainda com 3 culturas cedidas pela Coleção de Culturas Tropical da Fundação Tropical de Pesquisa e Tecnologia André Tosello, de Campinas, SP, estas sabidamente produtoras de enterotoxinas dos Tipos A, B e D. A identificação foi feita pelos métodos seguintes: microscopia com coloração de Gram, prova de coagulase, prova de termonuclease e"Staphy-Test". Realizou-se a seguir prova de produção de enterotoxina, que, posteriormente também foi identificada pelo"Optimum Sensitivity Plate". Das 30 amostras clínicas, 16 se revelaram produtoras de enterotoxina, sendo 4 do tipo A, 8 do tipo B, 3 do tipo A e B simultaneamente, e uma do tipo C3, além de 14 que não produziram enterotoxina desses tipos. Dos 34 isolados de amostras de fossa nasal, 5 foram produtoras de enterotoxina de tipo A e uma do tipo D. À vista deste resultado, o autor salienta a necessidade de medidas sanitárias adequadas para impedir a contaminação de alimentos por pessoas portadoras de S. aureus com capacidade de causar surtos de intoxicação alimentar / This dissertation had the aim of studying, with local data, the occurrence of strains of Staphylococcus aureus Rosenbach, 1884 producing enterotoxins. Samples of the anterior nares of 122 persons from the city of Piracicaba, State of S. Paulo, Brazil, were collected. From these samples 34 cultures of S. aureus were isolated. The author studied also 30 clinical cultures furnished by the Prev-Lab ("Centro de Patologia Clínica Preventiva") laboratory, from Piracicaba, and further with 3 cultures received from the"Coleção de Culturas Tropicais da Fundação Tropical de Pesquisa e Tecnologia André Tossello", from Campinas, State of S. Paulo, Brazil, these known to produce enterotoxins of the types A, B and D. The identification of organisms was carried out by the following methods. Microscopy with Gram staining, coagulase test, thermonuclease test and"Staphy-Test". Afterwards a test of production of enterotoxinn was carried out, which was identified by the"Optimum Sensitivity Plate", among the 30 clinical samples, 16 produced enterotoxin, being 4 type A, 8 of type B, 3 of type A and B simultaneously, and one of type 'C IND.3', besides 14 wich did not produce enterotoxins of these types. Among the 34 strains originated from samples of anterior nares, 5 produced enterotoxins of type A, and one of type D. Having in view these results, the author recommends that suitable sanitary measures should by taken to avoid the contamination of food by carriers of S.|aureus capable of giving origin outbreaks of food poisoning

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-02-07Bitstream added on 2014-06-13T18:44:35Z : No. of bitstreams: 1 jesus_ma_dr_rcla.pdf: 1601022 bytes, checksum: bee039203c726c8ffc04c5ab24879df5 (MD5) / Extratos etanólicos do ritidoma, da casca do caule e do fruto e da semente de Swartzia argentea, S. laevicarpa, S. panacoco, S. polyphylla e de S. sericea foram testados para os fungos degradadores de madeira. O volume de 10 mL de cada extrato nas concentrações de 0, 1; 0,01 e 0,001 mg/ L foi adicionado a 90 mL de meio de cultura agar-malte e inoculado com Pycnoporus sanguineus (L.:Fr.) Murr., Trametes villosa (Fr.) Ryv. e Lenzites trabea Pers.:Fr. A área (cm2) da colônia do fungo e o índice antifúngico (IAF) dos extratos foram calculados. A diferença significativa entre as médias do crescimento dos fungos (cm2) foi observada nos extratos do ritidoma, da casca do fruto e da semente, independente da espécie de Swartzia, mas para os extratos da casca do caule não houve diferença significativa para S. laevicarpa e para S. sericea. Houve variação significativa entre as médias da área micelial (cm2) dos fungos para cada concentração do extrato. Os extratos dos ritidomas de S. argentea, S. polyphylla e de S. sericea e da casca do caule de S. panacoco apresentaram o índice antifúngico de 100% para as três espécies de fungos. Estes extratos foram submetidos à partição líquido-líquido com solventes de polaridade crescente, obtendo-se as frações: hexânica, diclorometano, acetato de etila e aquosa, visando a atividade antifúngica das frações em ensaio de bioautografia. As frações: diclorometano, acetato de etila e aquosa, foram aplicadas em concentrações diferentes para cada espécie de Swartzia em cromatofolha de gel de sílica GF254, sendo que a fração aquosa foi eluída com a fase móvel butanol:etanol:agua (4,0;1,1;1,9), a fração acetato de etila com o sistema de solvente diclorometano:acetato de etila:metanol (5:3:2), acrescido de 0,01 mL de ácido acético, e a fração diclorometano com os sistema de solventes diclorometano:acetato de etila (7:3)... / Ethanolic extracts from the ritidome, the barks of the stem and of the fruit, and the seed of Swartzia argentea, S. laevicarpa, S. panacoco, S. polyphylla and S. sericea were tested for decay fungi. Pycnoporus sanguineus (L.:Fr.) Murr., Trametes villosa (Fr.) Ryv. and Lenzites trabea Pers.:Fr. were inoculated in 90 mL of Malt Agar plus 10 mL of each extract, in the concentrations of 0,1, 0.01 and 0,001 mg/mL. Colony area (cm2) and antifungal index of the extracts were calculated. Significant difference among the fungal growth average (cm2) was observed in the extracts of the ritidome, the barks of the fruit and of the seed, despite the species studied. However, there was no difference in the extracts of the barks of the stem in S. laevicarpa and S. sericea. There was significant variation among the averages of the fungal mycelial area (cm2) in each extract concentration. The extract of the ritidome of S. argentea, S. polyphylla, and S. sericea, besides one from the barks of the stem of S. panacoco, resulted in 100% antifungal index for all fungal species. These extracts were submitted to liquid-liquid partition with solvents of increasing polarity resulting the following fractions: hexanic, dichloromethane, ethyl acetate and water, aiming the fraction antifungal activity in thin layer cromatography TLC. Dichloromethane, ethyl acetate and the watery fraction were applied in different concentrations on each Swartzia species studied, in TLC GF254. The watery fraction was eluted with butanol:ethanol:water (4,0; 1,1; 1,9), the fraction ethyl acetate with the solvent system dichloromethane:ethyl acetate: methanol (5:3:2) plus 0,01mL acetic acid, and the dichloromethane fraction with the solvent system dichloromethane: ethyl acetate (7:3). The chromatograms were inoculated with P. sanguineus, T. villosa and L. trabea in Malt Agar, and chromatographic strips with no fractions...(Complete abstract click electronic access below)