Este trabalho teve em mira estudar, com dados locais, a ocorrência de linhagens de Staphylococcus aureus Rosenbach, 1884 produtores de enterotoxinas. Para isso, obtiveram-se amostras de fossa nasal de 122 pessoas da cidade de Piracicaba (SP), no ano de 1988. Destas amostras foram isoladas 34 culturas de S. aureus. Trabalhou-se também com 30 culturas clínicas cedidas pelo laboratório do Prev-Lab (Centro de Patologia Clínica Preventiva) de Piracicaba e ainda com 3 culturas cedidas pela Coleção de Culturas Tropical da Fundação Tropical de Pesquisa e Tecnologia André Tosello, de Campinas, SP, estas sabidamente produtoras de enterotoxinas dos Tipos A, B e D. A identificação foi feita pelos métodos seguintes: microscopia com coloração de Gram, prova de coagulase, prova de termonuclease e"Staphy-Test". Realizou-se a seguir prova de produção de enterotoxina, que, posteriormente também foi identificada pelo"Optimum Sensitivity Plate". Das 30 amostras clínicas, 16 se revelaram produtoras de enterotoxina, sendo 4 do tipo A, 8 do tipo B, 3 do tipo A e B simultaneamente, e uma do tipo C3, além de 14 que não produziram enterotoxina desses tipos. Dos 34 isolados de amostras de fossa nasal, 5 foram produtoras de enterotoxina de tipo A e uma do tipo D. À vista deste resultado, o autor salienta a necessidade de medidas sanitárias adequadas para impedir a contaminação de alimentos por pessoas portadoras de S. aureus com capacidade de causar surtos de intoxicação alimentar / This dissertation had the aim of studying, with local data, the occurrence of strains of Staphylococcus aureus Rosenbach, 1884 producing enterotoxins. Samples of the anterior nares of 122 persons from the city of Piracicaba, State of S. Paulo, Brazil, were collected. From these samples 34 cultures of S. aureus were isolated. The author studied also 30 clinical cultures furnished by the Prev-Lab ("Centro de Patologia Clínica Preventiva") laboratory, from Piracicaba, and further with 3 cultures received from the"Coleção de Culturas Tropicais da Fundação Tropical de Pesquisa e Tecnologia André Tossello", from Campinas, State of S. Paulo, Brazil, these known to produce enterotoxins of the types A, B and D. The identification of organisms was carried out by the following methods. Microscopy with Gram staining, coagulase test, thermonuclease test and"Staphy-Test". Afterwards a test of production of enterotoxinn was carried out, which was identified by the"Optimum Sensitivity Plate", among the 30 clinical samples, 16 produced enterotoxin, being 4 type A, 8 of type B, 3 of type A and B simultaneously, and one of type 'C IND.3', besides 14 wich did not produce enterotoxins of these types. Among the 34 strains originated from samples of anterior nares, 5 produced enterotoxins of type A, and one of type D. Having in view these results, the author recommends that suitable sanitary measures should by taken to avoid the contamination of food by carriers of S.|aureus capable of giving origin outbreaks of food poisoning

Este trabalho teve em mira estudar, com dados locais, a ocorrência de linhagens de Staphylococcus aureus Rosenbach, 1884 produtores de enterotoxinas. Para isso, obtiveram-se amostras de fossa nasal de 122 pessoas da cidade de Piracicaba (SP), no ano de 1988. Destas amostras foram isoladas 34 culturas de S. aureus. Trabalhou-se também com 30 culturas clínicas cedidas pelo laboratório do Prev-Lab (Centro de Patologia Clínica Preventiva) de Piracicaba e ainda com 3 culturas cedidas pela Coleção de Culturas Tropical da Fundação Tropical de Pesquisa e Tecnologia André Tosello, de Campinas, SP, estas sabidamente produtoras de enterotoxinas dos Tipos A, B e D. A identificação foi feita pelos métodos seguintes: microscopia com coloração de Gram, prova de coagulase, prova de termonuclease e"Staphy-Test". Realizou-se a seguir prova de produção de enterotoxina, que, posteriormente também foi identificada pelo"Optimum Sensitivity Plate". Das 30 amostras clínicas, 16 se revelaram produtoras de enterotoxina, sendo 4 do tipo A, 8 do tipo B, 3 do tipo A e B simultaneamente, e uma do tipo C3, além de 14 que não produziram enterotoxina desses tipos. Dos 34 isolados de amostras de fossa nasal, 5 foram produtoras de enterotoxina de tipo A e uma do tipo D. À vista deste resultado, o autor salienta a necessidade de medidas sanitárias adequadas para impedir a contaminação de alimentos por pessoas portadoras de S. aureus com capacidade de causar surtos de intoxicação alimentar / This dissertation had the aim of studying, with local data, the occurrence of strains of Staphylococcus aureus Rosenbach, 1884 producing enterotoxins. Samples of the anterior nares of 122 persons from the city of Piracicaba, State of S. Paulo, Brazil, were collected. From these samples 34 cultures of S. aureus were isolated. The author studied also 30 clinical cultures furnished by the Prev-Lab ("Centro de Patologia Clínica Preventiva") laboratory, from Piracicaba, and further with 3 cultures received from the"Coleção de Culturas Tropicais da Fundação Tropical de Pesquisa e Tecnologia André Tossello", from Campinas, State of S. Paulo, Brazil, these known to produce enterotoxins of the types A, B and D. The identification of organisms was carried out by the following methods. Microscopy with Gram staining, coagulase test, thermonuclease test and"Staphy-Test". Afterwards a test of production of enterotoxinn was carried out, which was identified by the"Optimum Sensitivity Plate", among the 30 clinical samples, 16 produced enterotoxin, being 4 type A, 8 of type B, 3 of type A and B simultaneously, and one of type 'C IND.3', besides 14 wich did not produce enterotoxins of these types. Among the 34 strains originated from samples of anterior nares, 5 produced enterotoxins of type A, and one of type D. Having in view these results, the author recommends that suitable sanitary measures should by taken to avoid the contamination of food by carriers of S.|aureus capable of giving origin outbreaks of food poisoning

Orientador: Glaci Ribeiro da Silva / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T13:54:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_IvaniAparecidade_D.pdf: 9611057 bytes, checksum: e64f053a3b3e7af073c8beca9d70fe7f (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Este trabalho descreve a participação de macrófagos sobre o influxo de neutrófilos, induzido pelas enterotoxinas estafilocócicas A (SEA) e B (SEB) em cavidades peritoneais de camundongos. Nossos resultados demonstraram que estas toxinas induzem influxo de neutrófilos, dose e tempo-dependente, para a cavidade peritoneal de camundongos. Este fenômeno foi quantitativamente menor, quando estas SEs foram injetadas em uma cavidade artificial, desprovida de células residentes, tal como a bolsa de ar subcutânea. A migração de neutrófilos, induzi da por estas toxinas, foi potencializada em cavidades peritoneais com o número basal de macrófagos aumentado pelo prétratamento com Tg, e, reduzida em cavidades com número de macrófagos diminuído, através da lavagem prévia com salina estéril, confirmando a hipótese de que a habilidade destas toxinas em induzir migração de neutrófilos in vivo está correlacionada com o número de macrófagos. O influxo de neutrófilos induzido por estas SEs, na cavidade peritoneal, foi reduzido em animais pré-tratados com os seguintes inibidores e antagonistas farmacológicos: dexametasona; inibidor de lipoxigenase (BW A4C); antagonista de PAF (BN52021); antagonista H2 de histamina (cimetidina); depletor de neuropeptídeos de fibras C sensoriais (capsaicina), mas não foi reduzido com o uso de um inibidor da ciclooxigenase (indometacina). Estes dados sugerem que os mediadores inflamatórios envolvidos na infiltração de neutrófilos produzida por estas SEs incluem metabólitos da LO, PAF, histamina e neuropeptídeos de fibras C sensoriais. Os sobrenadantes resultantes da incubação in vitro de macrófagos peritoneais de camundongos com SEA (SM-SEA) ou com SEB (SM-SEB), induzem migração de neutrófilos in vivo. A liberação das substâncias quimiotáticas para neutrófilos nestes sobrenadantes depende de pH e temperatura próximos ao fisiológico e da presença de cálcio, magnésio e da glicose no meio de incubação, sugerindo que estas substâncias são secretadas por um processo ativo. A ciclohexemida, um inibidor de síntese proteíca, inibe a liberação destas substâncias quimiotáticas para neutrófilos. Além disto, a atividade quimiotática do SM-SEA ou do SM-SEB é reduzida após o aquecimento a 100°C. Estes resultados sugerem que as substâncias quimiotáticas para neutrófilos, descritas neste trabalho, são proteínas termolábeis. A liberação destas proteínas, foi dose e tempo-dependente e foi inibida pelo pré-tratamento dos macrófagos com dexametasona mas não com indometacina ou com BW755C. A proteína presente no SM-SEA possui peso molecular maior que 100.000, enquanto que a proteína presente no SM-SEB possui peso molecular entre 1.000-3.000. A migração de neutrófilos induzida pelo SM-SEB envolve mediadores tais como metabólitos da LO, PAF e histamina, enquanto que estes mediadores não participam da resposta migratória induzida pelo SM-SEA sugerindo que estas proteínas possuem características distintas e induzem acúmulo de neutrófilos por mecanismos distintos. Em ambos os casos, a migração de neutrófilos foi reduzida em animais prétratados com capsaicina ou com SR140333 (antagonista seletivo de receptores de taquicininas NK1), mas não em animais pré-tratados com SR48968 (antagonista seletivo de receptores de taquicininas NK2), sugerindo que estas proteínas induzem migração via liberação de substância P. Nossos resultados contribuem para o melhor esclarecimento do mecanismo de ação das SEs e sugerem que produtos de macrófagos modulam o influxo neutrófilos induzido por estas toxinas / Abstract: In this study, the role role of macrophages in the neutrophil migration induced by staphylococcal enterotoxins A (SEA) and B (SEB) into the mouse peritoneal cavity was investigated. SEA and SEB induced dose- and timedependent neutrophil migration into the mouse peritoneal cavity. This migration was potentiated when the macrophage population was increased by pre-treating the mice with thioglycolate, and was reduced when the peritoneal cavities were washed with sterile saline. These results indicated that the neutrophil recruitment induced by these toxins was dependent on the number of resident macrophages. Dexamethasone inhibited the neutrophil migration induced by SEA and SEB. A similar response was observed with the P AF receptor antagonist (BN52021), the histamine H2 receptor (cimetidine), the lipoxygenase inhibitor (BW A4C) and a sensory C-fiber neuropeptide depletor (capsaicin). In contrast, indomethacin had no effect on the neutrophil chemotaxis. Thus, lipoxygenase metabolites, P AF, histamine and neuropeptides from sensory neurons play an important role in the neutrophil migration induced by SEA and SEB. When stimulated with SEA or SEB in vitro, mouse peritoneal macrophages secreted thermolabile proteins which induced neutrophil migration into the peritoneal cavities of naive mice. The release of these proteins was dose- and time-dependent and was inhibited by dexamethasone but not by indomethacin or BW755C The molecular mass of the neutrophil chemotactic protein secreted by SEB-stimulated macrophages was 1-3 kDa while that of the protein secreted by SEA was > 100 kDa. The neutrophil migration induced by supematants from SEB-stimulated macrophages involved inflammatory mediators such as lipoxygenase metabolites, P AF and histamine. In contrast, these same mediators had no role in the neutrophil migration induced by supematants from SEA-stimulated macrophages, suggesting that the neutrophil chemotactic proteins described above, induce neutrophil accumulation by different mechanisms. Capsaicin and neurokinin1 (NKl) receptor antagonist SR140333 reduced the neutrophil recruitment induced by supematants from macrophage monolayers stimulated with SEA or SEB. In contrast, the neurokinin2 (NK2) receptor antagonist SR48968 had no effect on the neutrophil migratory response of the supematants. These results suggest that the neutrophil migration induced by these chemotactic proteins may involve the release of neuropeptides such as SP from sensory neurons. lu conc1usion, macrophage products may play an important role in the neurogenic inflammation .induced by SEA and SEB by releasing specific chemotactic proteins / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Antonio Fernando Pestana de Castro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T13:42:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ricci_LucilaCostallat_M.pdf: 2722787 bytes, checksum: c585e33db089b8eb3bc8c6a18857706c (MD5) Previous issue date: 1980 / Resumo: Para posteriores estudos das propriedades e efeitos biológicos da enterotoxina ST de Escherichia coli, contribuindo desta forma para elucidação do mecanismo de ação da mesma, este trabalho teve como objetivo, purifica-la ou semi-purifica-la a partir de sobrenadantes de cultura em meio de CAYE. Assim sendo, com um único preparado bruto de sobrenadante de cultura obtido a partir de uma amostra de origem humana, foram estudadas as características físico-químicas da molécula de ST. A partir desta análise desenvolvemos uma seqüência de purificação da mesma, tendo sido obtido os segintes resultados e conclusões: 1) Os métodos clássicos de precipitação por sulfato de amônio; TCA e acetona, não foram eficientes para a separação da toxina, podendo entretanto, serem utilizados para eliminação de contaminantes. 2) Ultrafiltração em membranas que permitam a separação de moléculas com peso molecular de até 10.000, não tiveram utilidade na purificação da enterotoxina ST, uma vez que a mesma e a maioria dos constituintes do meio de CAYE, apresentaram peso molecular inferior a este limite. 3) Filtração em resinas de Sephadex G-15 e G-25, parecem adequadas para a purificação da enterotoxina ST, desde que resolvidos problemas da interação de substâncias do meio de CAYE e da própria toxina com a matriz do gel... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Jose Luiz Pereira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-19T06:55:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Yoshimoto_Yuko_M.pdf: 3012278 bytes, checksum: ced1881a2c13827665e16f720cb5c047 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: O principal objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de um método (modificação do método de Chang e Bergdoll (29)) para a purificação da enterotoxina estafilocócia tipo D (EED); assim como um método de obtenção de antissoro especifico, modificação do método recomendado pelo Food Research Institue (FRI). o método proposto de purificação permitiu uma maior recuperação de toxina em relação ao método de Chang e Bergdoll. O método de imunização de coelhos diminui sensivelmente tanto a quantidade de toxina utilizada como o período de inoculação necessário para atingir o valor pico de anticorpos específicos; em relação ao método do FRI. A enterotoxina foi produzida pela linhagem Staphylococcus aureus 1151m obtido do FRI incubada em frascos de Fernbach de 2,8 litros contendo o meio caldo de triptona 3%, adicionado de extrato de levedura a 1%, sendo o pH final do meio 6,8. o processo de purificação foi monitorado pelo método de eletroforese vertical em gel e pelos métodos sorológicos de precipitação em gel simples (Oudin) e dupla (Ouchterlony modificado - OSP). O método de eletroforese, através do uso de padrões de peso molecular conhecido permitiu constatar em cada etapa de purificação que a proteína purificada era efetivamente a enterotoxina D. Os métodos de precipitação em gel foram utilizados para a quantificação da toxina juntamente com a determinação de proteína pelo método de Lowry. A primeira cromatografia em Amberlite CG-50 teve um rendimento de 72%. A modificação da metodologia foi introduzida na segunda cromatografia onde a CM-Celulose foi substituída por CM-Sepharose CL-6B. Nesta etapa o rendimento foi de 46%. A terceira cromatografia em Sephadex G-75, apresentou um rendimento de 77%. O rendimento final de toxina após o processo completo de purificação foi de 25%. Para a obtenção de antissoro especifico utilizou-se um grupo de 5 coelhos, inoculados em duas etapas com um total de 100µg de toxina durante um período de 35 dias. Pelo método do FRI seria gasta uma quantidade maior que 230µg de toxina, e um período de 3 meses, para se atingir o nível máximo de anticorpos. A toxina foi administrado na coxa posterior por via subcutânea em duas etapas, sendo a primeira com adjuvante completo e a segunda, 21 dias após com adjuvante incompleto de Freund. Os animais foram submetidos à sangria branca por punção cardíaca na segunda semana após a ultima injeção - quando o titulo do soro atingiu valores compreendidos entre 1:16 e 1:32. A atividade imunológica do soro foi monitorada pelo método de 05P que permitiu além da dosagem do anticorpo a determinação da pureza da toxina, evidenciada pelo aparecimento de uma única linha de precipitação em presença do soro polivalente. / Abstract: In this work at was development a new method - modification of the method of Chang and Bergdoll (29) - for de purification of staphylococcal enterotoxin D (SED), and a new method of rabbit's immunization for the preparation of specific SED antisserum. The proposed immunization procedure is faster and uses considerably less toxin than the method used by the Food Research Institute (FRIJ. The enterotoxin was produced by Strain Staphylococcus aureus 1151m, from the FRI, incubated in Fernbach flasks of 2,8 liters of capacity, containing tryptone broth 3%, added of yeast extrat to a final concentration of 1%. The medium final pH was adjusted to 6,8. The enteroroxin purification was monitored by vertical gel eletroforesis in the presence of molecular weight standards. This procedure allowed to control each stage of the purification process. On the others side serological method of the precipitation simple (Oudin) and double (modified Ouchterlony - OSP) allowed to determine toxin concentration. The total protein was determined by the Lowry method. The first chromatography through Amberlite CG-50 had a yield of 72%. The modification introduced in this work was at the second chromatography, where CM-Celulose was substituted by CM-Sepharose CL-6B, and the toxin recovery in this step was 46%. The third chromatography through Sephadex G-75 had ayield of 77%. The total yield of SED purification was 25%. To obtain the specific antisserum, a lot of 5 rabbits was inoculated, each animal in two steps, with a total toxin concentration of 100 µg, for a total 35 days period. This procedure has the advantage of using less oxin and less time that the procedure recommended in the literature. The antiserum titers are lower than the titers obtained by the traditional methodology, but high enough to be used as reagents for the sorological quantification of the toxin. The toxin was inoculated in the rabbit tight by the subcutaneous route in two steps, in the first injection 50 µg toxin was inoculated with complete Freund adjuvant, and 21 days later, 50 µg of toxin with incomplete Freund adjuvante. The animals were bleeded to death by cardiac puncture on the second week after the second injection or after the level of antibodies was high enough (above 16) to follow the procedure. The highers titer obtained was 32. The serum titer was determined by the OSP method which allowed al so to determine the toxin purity, this one by the appearance of a single precipitation line - against antisserum produced with crude toxin. / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Wanderley Dias da Silveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T07:55:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brocchi_Marcelo_D.pdf: 8487777 bytes, checksum: 192086b273682a8f977bba57f3aaed07 (MD5) Previous issue date: 1997 / Doutorado / Genetica de Microorganismos / Doutor em Genetica

Orientador: Mauro Faber de Freitas Leitão / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-26T21:03:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cardoso_AngelaLibiadeMeloPereira_D.pdf: 20823767 bytes, checksum: 5b289d4fe013d02acbc9f807e1155470 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Nesta pesquisa foi avaliada a ocorrência de Bacillus cereus em amostras de leite comercial pasteurizado, bem como seu potencial de deterioração em função da temperatura de incubação e a capacidade de produção de enterotoxina diarréica nesse substrato. Numa etapa inicial foram analisadas 240 unidades de amostras de leite comercial pasteurizado dos tipos A, B e C, estudando-se a presença e os níveis de contaminação por células vegetativas e esporos de B. cereus mesófilo e psicrotrófico. Os resultados revelaram a presença da bactéria em 116 (48,3%) das unidades de amostra analisadas, com maiores incidências nos leites tipo C comparativamente ao B e A (67,5 50 e 27,5 % de positividade nos tipos C, B e A respectivamente). Predominaram níveis baixos de contaminação, na faixa de 102UFC/rnL,com maiores contagens nas amostras de leite tipo C, comparativamente aos outros tipos. Em nenhuma das amostras analisadas constatou-se a presença de cepas psicrótroficas de B. cereus. Nos ensaios envolvendo a inoculação experimental de amostras de leite seguido de incubação às temperaturas de 5°, 10°, 15° 20° e 30°C, verificou-se a ausência de alterações nas temperaturas mais baixas (5° e 10°C)e o rápido crescimento e deterioração nas amostras mantidas acima de 15°C.As alterações mais pronunciadas foram evidenciadas pela coagulação do leite, nítida separação de fases com reduzidas modificações nos valores de pH e acidez titulável. Comprovou-se a possibilidade seleção de gradativa de cepas capazes de crescimento em temperatura de refrigeração (7°C), partindo-se de cepas originalmente mesófilas; no entanto, o processo de seleção foi lento, sendo que somente após 21 dias de incubação as culturas apresentaram multiplicação mais rápida, com tempo de geração (G) mínimo de 2,17 dias. Quanto à capacidade de produção de enterotoxina por teste imunoenzimático, na maioria das cepas isoladas e testadas foram observados resultados positivos, tanto em meios de cultura como utilizando o leite como substrato. No entanto, nas amostras de leite inoculadas experimentalmente, a produção de enterotoxina somente foi constatada em temperaturas acima de 15°C, não sendo observada nas amostras mantidas sob refiigeração (7° e 5°C), mesmo após 12 dias de incubação. / Abstract: The incidence of Bacillus cereus, its spoilage potential in relation to the incubation temperature and the capacity of diarrheic enteroxin prodution were evaluated in commercial pasteurized milk samples. A total of 240 samples of pasteurized milk types A, B and C were analysed for the incidence and counts of mesophilic and psycrotrophic B. cereus. The results showed the occurrence of B. cereus in the 116 (48.3%) of the examined samples with higher incidence in type C when compared to the types B and A (67,5, 50.0 and 27,5% of positive samples for types C, B and respectively). In most ofthe samples prevaled counts around '10 POT.2' CFU/mL,with higher values in type C milk when compared to types B and A. No sychrotrophic strains were isolated in the examined samples. In the experiments envolving inoculation of B. Bereus in mi1k samples followed by incubation at different temperatures it was noticed that B.cereus was not able to grow at refrigeration temperatures (5° and 10°C) but with fast growth and spoilage activity at higher temperatures (15°, 20° e 30°). The main evidences of spoilage were characterized by coagulation and clear separation of phases but without remarkable changes in pH and total acidity values. In an other experiment it was shown the possibility of gradual selection of psycrotrophic B. cereus strains originating from originally mesophilic cultures. However this selection was gradual and only afier an incubation period of 21 days the selected strains showed multiplication with a minimum "G" value of 2.17 days. Most of the tested strains originaly isolated from commercial milk samples showed capacity of diarrheic enterotoxin production both in culture media and milk samples. However in the inoculated milk samples the enterotoxin prodution was observed only in incubation temperatures above 15°C, without production at 7°C and 5°C even after 12 days of incubation. / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Jose Luiz Pereira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-25T04:03:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_AnaMariade_D.pdf: 3069235 bytes, checksum: f0a8111e03cfb7d351f7c22d8385682f (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Devido ao aumento crescente de surtos de intoxicação alimentar provocados pela contaminação de alimentos por diferentes microrganismos ou seus metabólitos, esta pesquisa foi realizada com o objetivo de investigar o comportamento e a produção de enterotoxinas, em alimentos, por estafilococos coagulase negativos. Há algum tempo, acreditava-se que somente S.aureus fosse capaz de produzir enterotoxinas em alimentos, mas pesquisas recentes demonstrando a capacidade enterotoxigênica em meios de cultura laboratorial, por linhagens de estafilococos coagulase negativas, instigaram a busca de comprobatoriedade com essa mesma capacidade em alimentos. Assim, cinco linhagens de estafilococos coagulase negativas, de origem bovina, e cinco de origem humana, foram utilizadas para o estudo. Essas linhagens foram selecionadas por sua comprovada produção de enterotoxinas em meio de cultura. As linhagens teste então identificadas foram assim discriminadas: (2) S.wameri, (1) S.hyicus, (1) S.chromogenes, (3) S.epiderrnidis, (2) S.xy/osus, (1) S.hominis . Leite em pó desnatado e presunto cozido adquiridos comercialmente e creme de confeitaria, preparado no laboratório, caracterizaram os alimentos selecionados para a experimentação, que se realizou a temperaturas diferenciadas de 25°C, 30°C e 37°C, seguindo tempos diferentes de incubação de 12, 24, 48 e 72 h. Concomitantemente, amostras previamente tratadas termicamente destes substratos, foram também estudadas, a fim de se apurar possível interferência da microbiota pré-existente. O desenvolvimento das dez linhagens teste foi observado em todos os alimentos, com destaque para S.chromogenes (origem bovina), desenvolvendo-se muito bem em todas as amostras analisadas. A temperatura ótima de crescimento foi evidenciada a 37°C e o período de incubação de 12 a 24 horas, o melhor para o crescimento da população. Após esse tempo foi verificada uma tendência a constância e, em alguns casos, ocorreu uma queda na contagem de microrganismos. Para presunto cozido houve um melhor desenvolvimento dos estafilococos, quando as amostras eram tratadas termicamente. A análise estatística dos dados encontrados referentes ao desenvolvimento dos estafilococos coagulase negativos nos três alimentos estudados, indicou que o tempo de incubação foi significativo para todos os alimentos. Em uma segunda análise, a análise de variância a três vias em cada um dos tempos de coleta, onde as variáveis analisadas foram temperatura de incubação (25°C, 30°C e 37°C), fonte (origem bovina e origem humana), tipo (amostras tratadas e não tratadas termicamente), para as amostras de leite as interações temperatura x tempo; fonte x tempo e tipo x tempo foram significativas. Nas amostras de presunto houve significância nas interações temperatura x tempo e tipo x tempo e para as amostras de creme as interações fonte x tempo e tipo x tempo foram significativas (p< 0,05). Da dez linhagens teste inoculadas, apenas S. wameri (01) e S.chromogenes (01), ambas de origem bovina, mostraram-se aptas a produzir enterotoxinas nos alimentos experimentalmente inoculados. Este trabalho pode contribuir como subsídio para uma possível reavaliação dos procedimentos microbiológicos normativos da legislação sobre alimentos, que até o momento, correlacionam a produção da enzima coagulase com a capacidade de produção de enterotoxinas por estafilococos / Abstract: Due to the constantly increasing numbers of food poisoning outbreaks resulting from the contamination of food by different microorganisms or their metabolites, this research was realized with the objective of verifying the behavior and production of enterotoxins in food by coagulase negative strains of Staphylococcus. For some time it was thought that only Saureus was able to produce enterotoxins in food, but recent research has demonstrated the enterotoxigenic of coagulase negative staphylococcal strains in culture medium, leading to the need to check for such enterotoxigenic capacity in food. Five coagulase negative bovine staphylococcal strains and five human ones were used for this study. These strains were chosen due to their prover ability to produce enterotoxins in culture medium. The test staphylococcal strains were identified as S.wameri (2), Shyicus (1), Schromogenes (1), Sepidermidis (3), Sxylosus (2) and S.hominis (1). The foods chosen for the experiment were non-fat dried milk, cream pies and cooked ham. Sterilized and non sterilized food samples were used in order to check for possible interference by pre-existent microorganism.in the food. The research was conducted under different temperature/time incubation conditions of 25°C, 30°C and 37°C for 12, 24, 48 and 72 hours. The development of the ten test strains was observed in all food samples, that of bovine S. chromogenes, being especially apparent. A statistical analysis showed that 37°C was the optimum temperature for growth and 12 - 24 hours the best incubation period, the microbial population tending to stabilize or even decrease after this period. In the cooked ham samples, better staphylococcal growth was shown in the heat treated samples. The statistical analysis of the data for growth showed that incubation time was significant for all foods. A second analysis of variance at each incubation time, where the variables were incubation time (25°C, 30°C and 37°C), source (bovine and human) and type (heat treated and non-heat treated), showed that for the milk samples, the interactions temperature x time, source x time and type x time were all significant. For the ham samples the interactions temperature x time and type x time were significant and for the cream pies the interactions source x time and type x time (all at p<0.05). Of the ten strains tested, only bovine S. wameri and S. chromogenes strains were capable of producing enterotoxins in the foods analyzed. The results of this study indicate that research emphasising the importance of coagulase negative staphylococci in food poisoning outbreaks is important, leading to a possible reavaluation of the legislation regarding microbiological procedures which previously correlated the production of the enzyme coagulase with the production of enterotoxins. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador : Antonio Fernando Pestana de Castro, Antonio Carlos Corsini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T06:24:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zucato_MariaRitaLabegalini_M.pdf: 4344631 bytes, checksum: cf50522a3d1f368ca56a220601efd40b (MD5) Previous issue date: 1985 / Resumo: A enterotoxina termoestável (STa) de Escherichia colí, extraída de uma amostra de origem humana (sorogrupo 0128), semipurificada de acordo com Ricci et al (1982), foi estudada quanto a sua capacidade de interferir na Resposta Imune Humoral (RIH), Resposta Imune Mediada por Células (RIC) e na capacidade fagocitária dos macrófagos, de camundongos (CBA x 'C IND. 57'B1/ 10)'F IND. 1'. Para análise de nossos resultados nos baseamos nos seguintes resultados e hipóteses : 1 - A enterotoxina STa ativa a guanil-ciclase levando a um aumento no nível de GMP-c nos linfócitos B (Field et al, 1978; Hugles et al, 1978; Guerrant et al, 1980). Quando o estimulo fosse suficiente para causar apenas um ligeiro aumento de GMP-c, ocorreria uma supressão na RIH, ao passo que, quando o estímulo resultasse em altos níveis de GMP-c levaria a uma ativação na RIH, de acordo com a teoria Yin-Yang (Goldberg et al, 1973) e baseado no trabalho de Chisari et al (1974). 2 - A enterotoxina STa agiria sobre os macrófagos do sistema imune dos animais imunizados, Os macrófagos em tal estado de ativação produzem 'H IND. 2''O IND. ' (Finazzi-Agro et al, 1980), que em baixa concentração aumentam o GMP-c dos linfócitos B (Mittal et al, 1977; White et al, 1976), levando a um estÍmulo na RIH, ao passo que o 'H IND. 2''O IND. 2' em concentrações muito maiores tem um efeito inibitório sobre a mesma (Mittal et al, 1977). 3 - Os macrófagos ativados pela enterotoxina STa poderiam ter ainda um efeito sobre a RIH, devido a liberação de prostaglandina por estas células, que ocasionaria um aumento de AMP-c nos linfócitos B (Godwin, 1978) levando a uma supressão da RIH. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador : Sonia Presa Caggiani de Salzberg / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-15T12:59:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ueno_Mariko_M.pdf: 40336742 bytes, checksum: cf07c0e0941be2d7d54bd24cf2f08fe1 (MD5) Previous issue date: 1987 / Resumo: O principal objetivo deste trabalho foi a produção, purificação e obtenção de anti-soro da enterotoxina estafilocócica tipo B (EEB). Com os reagentes obtidos (antígeno e anticorpo) procedeu-se ao levantamento de S. aureus produtores de enterotoxina B em portadores assintomáticos. A enterotoxina foi produzida pela linhagem S. aureus S-6, conhecida como altamente produtora de EEB. O método de purificação foi o de SCHANTZ e colaboradores, e para a produção de anti-soro, utilizou-se o esquema de imunização de coelhos, otimizado pelo Food Research Institute (FRI), Wisconsin, USA. O processo de purificação foi avaliado pela difusão dupla em gel "Optimal Sensitivity Plate", OSP (Ouchterlony modificado) para a identificação da toxina, o método de difusão simples em gel de "Oudin" para a dosagem da toxina, e a dosagem de proteína total foi realizada pelo método de Lowry. Na produção de toxina foi utilizado como meio de cultura o hidrolisado de caseína N-Z-Amine NAK suplementado com tiamina (0,00005%) e niacina (0,001%). A quantidade de toxina produzida neste meio foi de 0,33mg/mL. Na primeira cromatografia em Amberlite CG-50 obteve-se um rendimento de 79,9% em relação à quantidade total adsorvida, na segunda cromatografia em Amberlite CG-50 obteve-se um rendimento de 73,3% em relação à primeira cromatografia e na terceira cromatografia em carboximetil celulose o rendimento foi de 80% era relação à segunda cromatografia. O rendimento através de todo o processo de purificação, ou seja toxina total produzida no meio de cultura e toxina total após a terceira cromatografia foi de 44,2%. A toxina purificada apresentou um alto grau de pureza já que houve formação de apenas uma linha de precipitação quando ensaiada contra anti-soro polivalente. Para a produção de anti-soro utilizou-se um lote de cinco coelhos, sendo um inoculado com toxina bruta, sem purificar e quatro com toxina purificada. Para a inoculação seguiu-se o esquema de imunização utilizado no FRI, que abrange um período de 70 dias e doses compreendidas entre 1 e 300 µg administradas em oito seções. O soro foi retirado entre uma e oito semanas após a última injeção através de punção cardíaca. O soro do animal imunizado com preparação bruta de enterotoxina apresentou, através do método de ÜSP, maior variedade de anticorpos, evidenciados através das linhas de precipitação formadas, que os soros dos animais inoculados com enterotoxina purificada. Estes últimos apresentaram ainda alguns interferentes, porém as linhas de precipitação correspondentes foram tênues em relação à linha principal de enterotoxina B. O número de portadores humanos assintomáticos de S. aureus 53% está dentro dos valores apresentados na literatura, 18 a 82%. O valor encontrado para as linhagens produtoras de enterotoxina B, 70,8%, foi ligeiramente superior aos valores apresentados na literatura norte americana / Abstract: The principal goal of this work was the production, purification and antiserum production of Staphylococcal enterotoxin B (SEB). With these reagents, antigen and antiserum, a survey of enterotoxin B producing S. aureus strains in assintomatic carriers was conducted. The enterotoxin was produced by the S-6 strain of S. aureus, a well-known enterotoxin B producer. The purification procedure was that of SCHANTZ and co-workers and for the antiserum production, the Food Research Institute (FRI), Wisconsin, USA immunization schedule was followed. The purification procedure was monitored through the Lowry method for total protein, double diffusion in gel Optimal Sensitivity Plate, OSP (a double diffusion Ouchterlony modification) for toxin identification and single gel diffusion of Oudin for toxin quantification. The casein hydrolysate N-Z-Amine NAK supplemented with thiamine (0,00005%) and niacin (0,001%) was used for toxin production. The enterotoxin concentration in the supernatant was 0,33mg/mL. The toxin yield in the first chromatography using the resin Amberlite CG-50 was 79,9% of the total adsorbed in the resin. In the second chromatography, using the same resin, the yield was 73,3% with respect to the first chromatography and in the third chromatography, using Carboximethyl Celulose; the yield was 80% with respect to the second chromatography. The yield for the entire purification procedure, total toxin after the third chromatography and and total toxin in the broth culture, was 44,2%. The purified enterotoxin showed high purity since only one precipitin line was formed against polivalent antiserum. Five animals were used for the antiserum production, one inoculated with the crude toxin and four with the purified toxin. For inoculation, the FRI recommended schedule was used, with doses ranging between 1 and 300 µg given in eight different sections during a 70 day period. The animals were bled through cardiac puncture after one to eight weeks following the last injection. The antisera obtained from the crude extract immunized animals showed higher number of antibodies, by the OSP method as displayed through precipitin lines, than the antisera from rabbits inoculated with the purified toxin, the latter showed a few very weak secondary lines related to the main line due to enterotoxin B. The number of S. aureus assyntomatic carriers 53% was within the range of values found in the literature, between 18 to 82%. Among them, the number of enterotoxin B producers 70,8% was slightly higher than the 68% reported by North American literature / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos