Orientador : Sonia Presa Caggiani de Salzberg / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-16T16:24:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hirooka_ElisaYoko_D.pdf: 4696505 bytes, checksum: 1200698a43df3235d6efdac9fd96b67b (MD5) Previous issue date: 1984 / Resumo: O presente trabalho foi desenvolvido com a finalidade de estudar o efeito da concentração dos íons magnésio e ferro, assim como da proteína conalbumina no desenvolvimento da linhagem Staphylococus aureus S-6 . As outras propriedades estudadas foram a produção do proteínas extracelulares congulase, nuclease e as enterotoxinas A ( EEA ) o B ( EEB ) e a estrutura de parede celular. A remoção de íons do hidrolisado de caseína, meio NAK ( 2,5 µg/mL de íons ferro e magnésio ) com alumina deu origem ao meio denominado NAKSA ( 0,4 ug/mL de forro 0,1 ug/ml de magnésio) . Este tratamento afetou o desenvolvimento de S.aureus S-6 , obtendo-se células com morfologia alterada, diminuição do peso seco e modificações na produção das proteínas extracelularas DNAse, coagulase e as enterotoxinas A e B, assim como a enzima intracelular desidrogenase lática. A adição de 1,11 µg/mL de Mg2+ ao meio NAKSA levou a recuperação do peso seco, porém não houve restabelecimento total da morfologia celular. Para este valor de magnésio, o nível de DNAse aumentou 3,5 vezes em relação ao meio NAK, enquanto que a concentração das proteínas extracelulares restantes, assim como intracelulares analisadas, não atingiu os valores obtidos no meio NAK. Foi constatado que este aumento da atividade nucleásica não se deve a um dano da célula ao nível de membrana, nem ao efeito do íon magnésio ou de componentes da parede celular na atividade enzimática, mas devido a uma maior produção e liberação da enzima pelo microrganismo. A quantidade de enterotoxina B produzida foi afetada por variações na concentração de magnésio, enquanto que a de enterotoxina A permaneceu constante. A adição de ferro em concentrações superiores a 1,19 ug/mL, ao meio NAKSA mais 1,11 µg/mL do Mg2+ teve como consequência efeitos adversos , tanto para o desenvolvimento do microrganismo, quanto sobre a liberação de DNAse e EEB, indicando que o equilíbrio iônico desempenha um papel importante no desenvolvimento normal das células. A adição de conalbumina ao meio NAKSA mais 1,11 µg/mL de Mg2+ não apresentou efeitos inibitórios nas propriedades estudadas, ocorrendo inclusive um ligeiro estímulo na produção das proteínas extracelulares no meio NAKSA. Em relação à fração das enzimas extracelulares associadas à célula, verificou-se que a DKAse superficial liberada pela ação da lisostafina foi aproximadamente 200 vezes inferior a concentração da mesma enzima presente no sobrenadante da cultura. A quantidade de DNAse presente na parede celular foi aproximadamente igual aquela presente nos protoplastos. A linhagem S. aureus S-6 apresentou variações durante o armazenamento e transferências sucessivas, tais como aumento ou diminuição na produção das proteínas extracelulares em estudo. A analise por difração de raios X mostrou que as paredes celulares do microrganismo desenvolvido nos meios NAK e NAKSA , não apresentam diferenças ao nível da estrutura tridimensional, embora tenham sido observadas alterações morfológicas marcantes, através de microscopia ótica / Abstract: This research was developed to study the effect of the ions magnesium and iron and the protein conalbumin in the development of the strain Staphylococus aureus S-6. Other properties studied were the production of extracellular proteins coagulase, nuclease and entorotoxins A (SEA) and B (SEB) and cell wall structure. The ion remotion from the ca-sein hidrolysate (NAK medium) containing iron and magnesium at the concentration of 2.5 pg/mL each, originated the NAKSA medium containing 0.4 µg/mL of iron and 0.1 ug/mL of magnesium, This treatment affected the development of S. aureus S-6 when compared to the one obtained using the NAK medium. The cells showed altered morphology, dry weight decrease and modification of the extracellular proteins production DNAse, coagulase and the enterotoxins A-and B, as well as the intracellular enzyme lactic de hydrogenase. The addition of 1.11 µg/mL of Mg2+ to the NAKSA medium produced complete recovery of the cell dry weight, but only partial recovery of the ceil morphology. At this magnesium level the DNAse concentration increased 3.5 times as related to the concentration in the. NAK medium. On the other hand the remainder of the exoproteins under study did not achieve the values obtained in the NAK medium. It was verified that the increase in nuclease activity was not due to cell injury at the membrane level, either to the effect of the magnesium ion or the cell wall components on the enzyme activity, but to a higher production and releasing of the enzyme by the microorganism. The production of enterotoxin B was affected by differences in the magnesium concentration, although enterotoxin A remained constant. The addition of iron at. concentration 1.19 µg/ml. to the NAKSA medium plus 1.11 µg/mL of Mg2+ had a negative effect on the growth of the microorganism, as well as the releasing of DNAse and SEB, indicating that the ionic equilibrium is important for the adequate cell development.The addition of conaibumin to the NAKSA plus 1.11 ug/mL of Kg^+ medium did not show inhibitory effects on the properties under study. On the other hand, the addition of this protein to the NAKSA medium promoted the production of the extracellular proteins. With respect to the cell associated extracellular enzymes fraction, it was verified that the surface DNAse re leased by lysGS taphin act ion was about 200 times lower than the fraction of the same enzyme present in the culture supernatant. The DNAse present at the cell wall was approximately the 'same present in the cell protoplasts. The strain S. aureus S-6 showed variations during the storage and transference period such as increase or decrease in the production of the extracellular proteins under study. The X-ray diffraction analysis indicated that the cell wall of the microorganism growing in the NAK and NAKSA medium have no differences at the structural level, even though strong morphological differences v/ere observed by optical microscopy / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador : Sonia Presa Caggiani de Salzberg / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-15T12:59:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ueno_Mariko_M.pdf: 40336742 bytes, checksum: cf07c0e0941be2d7d54bd24cf2f08fe1 (MD5) Previous issue date: 1987 / Resumo: O principal objetivo deste trabalho foi a produção, purificação e obtenção de anti-soro da enterotoxina estafilocócica tipo B (EEB). Com os reagentes obtidos (antígeno e anticorpo) procedeu-se ao levantamento de S. aureus produtores de enterotoxina B em portadores assintomáticos. A enterotoxina foi produzida pela linhagem S. aureus S-6, conhecida como altamente produtora de EEB. O método de purificação foi o de SCHANTZ e colaboradores, e para a produção de anti-soro, utilizou-se o esquema de imunização de coelhos, otimizado pelo Food Research Institute (FRI), Wisconsin, USA. O processo de purificação foi avaliado pela difusão dupla em gel "Optimal Sensitivity Plate", OSP (Ouchterlony modificado) para a identificação da toxina, o método de difusão simples em gel de "Oudin" para a dosagem da toxina, e a dosagem de proteína total foi realizada pelo método de Lowry. Na produção de toxina foi utilizado como meio de cultura o hidrolisado de caseína N-Z-Amine NAK suplementado com tiamina (0,00005%) e niacina (0,001%). A quantidade de toxina produzida neste meio foi de 0,33mg/mL. Na primeira cromatografia em Amberlite CG-50 obteve-se um rendimento de 79,9% em relação à quantidade total adsorvida, na segunda cromatografia em Amberlite CG-50 obteve-se um rendimento de 73,3% em relação à primeira cromatografia e na terceira cromatografia em carboximetil celulose o rendimento foi de 80% era relação à segunda cromatografia. O rendimento através de todo o processo de purificação, ou seja toxina total produzida no meio de cultura e toxina total após a terceira cromatografia foi de 44,2%. A toxina purificada apresentou um alto grau de pureza já que houve formação de apenas uma linha de precipitação quando ensaiada contra anti-soro polivalente. Para a produção de anti-soro utilizou-se um lote de cinco coelhos, sendo um inoculado com toxina bruta, sem purificar e quatro com toxina purificada. Para a inoculação seguiu-se o esquema de imunização utilizado no FRI, que abrange um período de 70 dias e doses compreendidas entre 1 e 300 µg administradas em oito seções. O soro foi retirado entre uma e oito semanas após a última injeção através de punção cardíaca. O soro do animal imunizado com preparação bruta de enterotoxina apresentou, através do método de ÜSP, maior variedade de anticorpos, evidenciados através das linhas de precipitação formadas, que os soros dos animais inoculados com enterotoxina purificada. Estes últimos apresentaram ainda alguns interferentes, porém as linhas de precipitação correspondentes foram tênues em relação à linha principal de enterotoxina B. O número de portadores humanos assintomáticos de S. aureus 53% está dentro dos valores apresentados na literatura, 18 a 82%. O valor encontrado para as linhagens produtoras de enterotoxina B, 70,8%, foi ligeiramente superior aos valores apresentados na literatura norte americana / Abstract: The principal goal of this work was the production, purification and antiserum production of Staphylococcal enterotoxin B (SEB). With these reagents, antigen and antiserum, a survey of enterotoxin B producing S. aureus strains in assintomatic carriers was conducted. The enterotoxin was produced by the S-6 strain of S. aureus, a well-known enterotoxin B producer. The purification procedure was that of SCHANTZ and co-workers and for the antiserum production, the Food Research Institute (FRI), Wisconsin, USA immunization schedule was followed. The purification procedure was monitored through the Lowry method for total protein, double diffusion in gel Optimal Sensitivity Plate, OSP (a double diffusion Ouchterlony modification) for toxin identification and single gel diffusion of Oudin for toxin quantification. The casein hydrolysate N-Z-Amine NAK supplemented with thiamine (0,00005%) and niacin (0,001%) was used for toxin production. The enterotoxin concentration in the supernatant was 0,33mg/mL. The toxin yield in the first chromatography using the resin Amberlite CG-50 was 79,9% of the total adsorbed in the resin. In the second chromatography, using the same resin, the yield was 73,3% with respect to the first chromatography and in the third chromatography, using Carboximethyl Celulose; the yield was 80% with respect to the second chromatography. The yield for the entire purification procedure, total toxin after the third chromatography and and total toxin in the broth culture, was 44,2%. The purified enterotoxin showed high purity since only one precipitin line was formed against polivalent antiserum. Five animals were used for the antiserum production, one inoculated with the crude toxin and four with the purified toxin. For inoculation, the FRI recommended schedule was used, with doses ranging between 1 and 300 µg given in eight different sections during a 70 day period. The animals were bled through cardiac puncture after one to eight weeks following the last injection. The antisera obtained from the crude extract immunized animals showed higher number of antibodies, by the OSP method as displayed through precipitin lines, than the antisera from rabbits inoculated with the purified toxin, the latter showed a few very weak secondary lines related to the main line due to enterotoxin B. The number of S. aureus assyntomatic carriers 53% was within the range of values found in the literature, between 18 to 82%. Among them, the number of enterotoxin B producers 70,8% was slightly higher than the 68% reported by North American literature / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Jose Luiz Pereira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-25T03:10:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mollo_VeraMariadeHollanda_M.pdf: 2189708 bytes, checksum: cd5a44e5b3fc31fbc6f925bc2ee28906 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Métodos de detecção de enterotoxinas estafilocócicas, sensíveis, rápidos e específicos obtidos diretamente de extrato de alimentos são importantes para a diminuição no tempo de diagnostico de intoxicações alimentares e no controle sanitário de alimentos. O trabalho visou 'a produção, purificação de enterotoxina estafilocócica do tipo B (EEB) para obtenção de respectiva anti imunoglobulina (lgG anti-EEB) e padronização da metodologia ELlSA "Duplo Sanduíche" para detecção de enterotoxina B em alimentos.A enterotoxina B foi purificada através de três etapas utilizando-se resina de troca iônica AMBERLlTE CG-50 e CM-Sepharose e coluna de exclusão molecular Sephadex G-75. A purificação de enterotoxina foi determinada através de eletroforese SDS - PAGE. A enterotoxina estafilocócica do tipo B purificada foi utiliza~a para imunização de coelhos e cobaias. Os anti-soros policlonais antitoxina B foram utilizados para padronização de método imunoenzimático (EIE) duplo sanduíche visando a detecção de enterotoxina estafilocócica do tipo B em alimentos. A fração IgG foi purificada por fraCionamento com sulfato de amônia e posteriormente foi feita a cromatografia em coluna de exclusão molecular Sephacryl S-200. No método imunoenzimático duplo sanduíche utilizou-se como anticorpo de captura a imunoglobulina de coelho imunizado anti-enterotoxina 8 e como anticorpo detetor o anti-soro obtido de cobaia imunizada. o ensaio imunoenzimático foi padronizado utilizando-se como antígeno a enterotoxina 8 purificada. A técnica do ELlSA mostrou-se bastante sensível sendo detectado 1 ng/ml de enterotoxina estafilocócica B. / Abstract: Methods of detection of staphylococci enterotoxin, which are sensitive, fast and specifc when obtained directly from the extract of food are important for the decrease in time of diagnose of foodborne intoxications and in the sanitary control of foods. This work intended to produce and purificate staphylococci type B (EEB) for obtaining the respective anti imunoglobulina (lgG anti-EEB) and standardization of the ELlSA "Double Sandwich" methodology for detection of enterotoxin B from food. The enterotoxin-B was purified through three stages. For this purpose, ionic change AMBERLlTE CG - 50 resin, CM-Sepharose and molecular exclusion Sephadex G -75 column more used. The enterotoxin purification was determined through eletroforese SDS - PAGE. The stafilococci purified enterotoxin type B was used for immuniz~tion of rabbits and guinea-pig. The policlonals antiserums antitoxin B was used for standarlization of double sandwich imunoenzimatic (EIE) seeking the detection of stafilococci enterotoxin type B in food. The fraction IgG was purified by precipitation with ammonia sulfate followed by molecularexclusion Sephacryl S-200 collumn chromatography. The imunoglobulin antienterotoxin B of immunized rabbit was used as capture antibody and the antiserums of immunized guinea-pig was used as detector antibody in the double sandwich ELlSA. The ELlSA standardized by using the purified enterotoxin B as antigen ELlSA technique, revealed to be sensitive, being able to detect 1 ng/ml of staphylococci B enterotoxin. / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Agrarias / Made available in DSpace on 2012-10-16T05:26:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Foi avaliado o perfil de seletividade e adequacidade do meio "caldo infusão cérebro e coração sal vermelho neutro" (BHISNR), proposto por Machado (1979) para isolamento de Staphylococcus aureus. Trezentas culturas do microrganismo, isoladas de queijo colonial, foram estudadas comparativamente aos meios tradicionais de Baird-Parker (BP) e Triptic Soy Broth (TSB) adicionado 10% de NaCl. Os resultados obtidos demonstraram que o meio proposto é tão eficiente quanto os demais para o isolamento deste microrganismo, porém mais sensível na recuperação de baixas populações bacterianas. Enquanto os meios BP + 10% NaCl e TSB apresentaram contagens mínimas em torno de 3,9 LOG ufc/g e 3,8 LOG NMP/g respectivamente, o meio BHISNR apresentou resultado mínimo em torno de 4,96 LOG NPM/g. Os valores máximos foram similares, porém o meio BHISNR obteve menor desvio padrão relativo e absoluto em relação aos demais meios. O meio proposto demonstrou ainda, ser mais rápido na obtenção dos resultados finais, além de utilizar técnica mais simples e menos onerosa do que os métodos oficiais atualmente recomendados.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciencias Agrarias / Made available in DSpace on 2016-01-08T16:35:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 1990 / Um total de 175 amostras de pescado e produtos do mar foram analisados quanto à presença de Escherichia coli e Staphylococcus aureus. As metodologias recomendadas oela apha e speck para o isolamento de E. coli foram comparadas e 317 cepas desta espécie testadas quanto a capacidade de produção de toxina ST e LT. Apenas uma cepa (0,32%) apresentou resultado positivo para a toxina ST. Foi verificado também a capacidade de produção de toxina em 109 cepas de S. aureus isoladas a partir das amostras, sendo uma amostra produtora de toxina D, quatro de toxina A e quatro de toxina AB.

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Orientador: Arnaldo Yoshiteru Kuaye / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-26T16:49:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nicolau_EdmarSoares_D.pdf: 41325678 bytes, checksum: e2610ca5a48ee0c7c0265f9dc3ed0ab0 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Foram analisadas 218 amostras colhidas durante o processamento de queijo tipo mussarela, em três indústrias de laticínios instaladas na Região de Goiânia-GO. Os estabelecimentos foram classificados em função da categoria da indústria, ou seja, em função da atuação do Serviço de Inspeção: inspeção permanente (categoria A), inspeção periódicas (categoria B) e ausência de inspeção (categoria C). Foram realizadas a contagem de Staphy/ococcus aureus, contagem de bolores e leveduras e determinação do Número Mais Provável (NMP) de coliformes fecais. ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: In this project, 218 samples of mozzarella cheese were collected from three dairy processors located around Goiânia-Brazil. The dairy industries were chosen according to the Inspection Service system, such as permanent inspection (A), half-time inspection (B) and non-inspected (C). The samples were submitted to microbiological counts of Staphy/ococcus aureus, molds and yeast and fecal coliforms. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Pedro Eduardo de Felicio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-01T09:05:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Saiki_MargaretYuriko_M.pdf: 14197745 bytes, checksum: bdec19916d272db95beac0a2c6aa3cbc (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Produtos cárneos com baixo teor de sal e alta atividade de água têm vida de prateleira reduzida à temperatura ambiente. A carne de sol, um produto tipicamente brasileiro, é elaborada de forma artesanal e tem uma duração média de três a cinco dias. Os princípios de boas práticas de fabricação, associados ao armazenamento refrigerado adequado e à embalagem a vácuo, permitem a conservação de produtos cárneos tradicionais de baixo teor de sal, por um tempo maior, para a comercialização a longas distâncias. O presente trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar a segurança microbiológica de uma carne bovina salgada e levemente dessecada, com características físico-químicas similares à carne-de-sol, com teor de sal compatível ao paladar humano, sem necessidade de dessalga e acondicionada em dois tipos de embalagem a vácuo, de acordo com suas permeabilidades ao oxigênio (9,6cc02/m2/dia vs 40,Occ02/m2/dia). No processamento utilizou-se o coxão-mole bovino, cortado em fatias de 5,Ocm de espessura, salgadas com 4% de sal e mantidas a 0°C por quatro horas. Ems eguida, foi realizada a secagem em câmara climatizada durante quatro horas a uma temperatura média de 24,5°e e umidade relativa do ar de 52,3% ...Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: Meat products with low salt content and high water activity have a short shelf-life at ambient temperature. A typical Brazilian beef product, "carne-de-sol", is traditionally made in small quantities at local markets and has an average time for consumption of three to five days. Principies of good manufacturing practices associated with proper cold storage and vacuum packaging could allow the preservation of low salt traditional meat products for longer time to make possible their marketing to distant areas. However, it is important to take into account the potential hazard of toxin formation in these products at abusive temperatures. This research work was carried out to evaluate the microbiological safety of a beef product with physico-chemical characteristics similar to "carne-de-sol", having salt levei compatible to consumers acceptance without desalting, vacuum packaged in two types of packaging films according to their oxygen barrier (9.6ccO2/m2/diavs. 40.0ccO2/m2/dia).Boxed beef top round wholesale cuts were sliced in 5 cm thick steaks, added of 4% salt and kept in the cooler (O°C ] for four hours ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Fumio Yokoya / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Tecnologia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-16T16:49:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 IbarraLeon_JosedeJesus_M.pdf: 1036886 bytes, checksum: ccb44897207267061a616b2114ef07fe (MD5) Previous issue date: 1974 / Resumo: O método de temperatura programada para avaliar a resistência de fatores termicamente vulneráveis, desenvolvido por Hayakawa et al. (1969), foi testado para verificar a possibilidade do seu uso na medição da resistência ao calor das células de Staphylococcus aureus. Os resultados indicam que o método é aplicável para a determinação da resistência de células microbianas ao calor, com a vantagem de se necessitar menos equipamento e ser mais rápido que qualquer dos métodos descritos anteriormente / Abstract: The method of programmed heating to evaluate the resistance of thermally vulnerable factors, developed by Hayakawa et al. (1969), was tested to verify the possibility of its use in the measurement of the resistance to heat of cells of Staphylococcus aureus. The results indicate that the method is applicable to the determination of the resistance of microbial cells to heat, with the advantage that it requires less equipment and is quicker than any of the methods described previously / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Agrarias / Made available in DSpace on 2012-10-16T06:46:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Foi observado o comportamento de cepas de Staphylococcus aureus enterotoxigênico, em frango, sob condições de congelamento doméstico (-20 3 oC). Dezoito frangos resfriados foram adquiridos de uma indústria de produtos avícolas do Estado de Santa Catarina - Brasil - e analisados em grupos de três, utilizando-se quatro meios de isolamento e identificação de S. Aureus. O tradicional Baird-Parker (BP), o Baird-Parker suplementado (BP-S), o caldo infusão de cérebro e coração-sal-vermelho neutro (BHISNR) e o caldo de infusão de cérebro e coração-sal-vermelho neutro modificado (BHISVN-M), foram comparados quanto a eficiência na recuperação e contagem de S. Aureus, durante 35 dias de armazenamento a 20 3 oC, em congelador doméstico, observando-se um intervalo de 7 dias entre as análises e considerando-se a primeira delas como dia zero. O método de cultura em saco de celofane foi usado para a produção e o de placa de ótima sensibilidade (OSP) para detecção e identificação da enterotoxinas (A,B,C e D) de todas as linhagens recuperadas desde o dia 0 até o dia 35. Baseados em nossos resultados, pudemos concluir que os meios líquidos (BHISNR e BHISNR-M) foram mais eficientes na recuperação de células injuriadas de S. Aureus e o meio BP-S o melhor quanto a recuperação de cepas toxigênicas injuriadas, quando comparado aos demais meios de cultura testados. As cepas produtoras de enterotoxinas C foram as que apresentaram maior freqüência de isolamento em todos os meios testados.