Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-27Bitstream added on 2014-06-13T18:29:22Z : No. of bitstreams: 1 rodrigues_cm_me_botib.pdf: 878460 bytes, checksum: 50adcf0ae69bed0497b25ed84bbbb9d4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Baseado nas informações geradas após o seqüenciamento do genoma, foi desenvolvido uma série de meios de cultura de composição definida (XDM1, XDM2, XDM3, XDM4 e XDM5). Portanto, um dos objetivos do presente trabalho foi estabelecer a curva de crescimento da X. fastidiosa no meio definido XDM2. Foi utilizada a estirpe 9a5c de X. fastidiosa mantida nesse mesmo meio de cultura. A medida da taxa de crescimento bacteriano foi realizada através de leituras de densidade óptica durante dezesseis dias com intervalos de 48 horas. A avaliação da viabilidade celular foi realizada através da contagem de unidade formadora de colônia (UFC) por diluição seriada. As duas avaliações apresentaram uma alta correlação (R2= 0,91) verificada através de regressão exponencial. O início da fase estacionária foi obtido após 10 dias de crescimento. De posse dos dados de UFC, foi possível calcular o tempo de geração da X. fastidiosa no meio XDM2, de aproximadamente 21 horas. Comparando o tempo de geração obtido na curva de crescimento em meio PW (11,37h), foi comprovado que a bactéria apresenta um crescimento mais rápido em meio PW do que no meio definido XDM2. Outro aspecto interessante revelado no estudo do genoma funcional da X. fastidiosa está relacionado à expressão de genes associados à patogenicidade. O principal mecanismo de patogenicidade é a formação de biofilme no xilema da planta hospedeira conduzindo ao bloqueio dos vasos do xilema. Análise da expressão diferencial de genes desse fitopatógeno em condição de virulência e durante a formação do biofilme revela padrões de genes associados à adaptação e competitividade no ambiente do hospedeiro. Esses genes possivelmente são ativados no biofilme maduro e são essenciais para sua manutenção na planta. Além disso, sabe-se que bactérias que formam biofilme apresentam resistência crescente a compostos... / Based on informations generated after the genome sequencing, a series of culture media of defined composition were developed (XDM1, XDM2, XDM3, XDM4 e XDM5). Therefore, one of the objectives of the present work was to establish the growth curve of X. fastidiosa in the defined medium XDM2. For this, we utilized the 9a5c strain of X. fastidiosa maintained in this medium. The measurement of the bacterial growth rate was done by optical density analysis during sixteen days with intervals of 48 hours. The evaluation of cellular viability was carried out counting the colony units forming (CFU) by serial dilution. Both evaluations presented a high correlation (R2 = 0,91) verified by exponential regression. The beginning of the stationary phase was observed after ten days of growth. With the data of CFU, it was possible to calculate the generation time of X. fastidiosa in XDM2 medium, estimated to be of approximated 21 hours. Comparing the generation time obtained for the growth curve in PW medium (11,37 hours), we proved that the bacteria grow faster in PW compared with the defined medium XDM2. Another interesting aspect reveled by the study of functional genome of X. fastidiosa is related to the expression of genes associated with pathogenicity. The main mechanism of its pathogenicity is the formation of a biofilm in the xylem of the host plant, causing the blockage of the xylem vessels. Analysis of the differential expression of genes of this phytophatogen in condition of virulence and during the biofilm formation reveals standards associated to adaptation and competition in the host environment. These genes are possibly activated in the mature biofilm and are essential for its maintenance in the plant. Besides, it is known that bacteria that form biofilm present elevated resistance to antimicrobial compounds while biofilm is structured, like antibiotics, heavy metals... (Complete abstract click electronic access below)

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Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-09-09Bitstream added on 2014-08-13T18:01:37Z : No. of bitstreams: 1 000741182_20140930.pdf: 395072 bytes, checksum: 127ce5ee4bdf12a8f76953cc23531f21 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:24:44Z: 000741182_20140930.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:27:41Z : No. of bitstreams: 2 000741182_20140930.pdf.txt: 31713 bytes, checksum: a6a381f0975530bddc3e0a62f9b75201 (MD5) 000741182.pdf: 2756696 bytes, checksum: cd9eae9b4fd91fd67273e14a72e3bad3 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:33:18Z: 000741182.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:43:32Z : No. of bitstreams: 2 000741182_20140930.pdf.txt: 31713 bytes, checksum: a6a381f0975530bddc3e0a62f9b75201 (MD5) 000741182.pdf: 2756696 bytes, checksum: cd9eae9b4fd91fd67273e14a72e3bad3 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:48:58Z: 000741182.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:49:49Z : No. of bitstreams: 1 000741182.pdf: 2756696 bytes, checksum: cd9eae9b4fd91fd67273e14a72e3bad3 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-27T11:47:13Z: 000741182.pdf,Bitstream added on 2014-10-27T11:48:06Z : No. of bitstreams: 1 000741182.pdf: 2756696 bytes, checksum: cd9eae9b4fd91fd67273e14a72e3bad3 (MD5) / Os Enterococcus spp habitam normalmente o trato gastrointestinal de seres humanos e de animais. Desde 1980, foram identificados como importantes agente de infecções hospitalares. As espécies E. faecalis e E. faecium são agentes de diversas infecções, como bacteriemia, sepse, endocardite, infecção do trato urinário, infecções de feridas e meningite. A resistência adquirida, mais predominantemente a penicilina/ampicilina, aminoglicosídeos (alto nível de resistência) e glicopeptídeos são relatados em um número crescente de isolados e o espectro terapêutico nestes casos é limitado. A principal preocupação é que os genes que codificam a resistência para todos esses antibióticos poderiam ser transferidos para outros enterococos ou mesmo para muitos outros patógenos virulentos. A resistência adquirida aos glicopeptídeos é mediada por vários mecanismos (tipos VanA/B/D/E/G/L), sendo que os genótipos VanA e VanB são transferíveis. Fatores relacionados com o hospedeiro, com o hospital, procedimentos invasivos, meio ambiente, e o uso de antibióticos podem aumentar o risco de colonização ou infecção com VRE. Este estudo visa investigar a ocorrência destes microrganismos, em pacientes de hospitais de Manaus - Amazonas, identificando a distribuição das espécies e o perfil de resistência aos antimicrobianos e dos genes de resistência a vancomicina envolvidos. Foram analisados 38 isolados de Enterococcus spp. provenientes de pacientes internados ou de atendimento ambulatorial no período de outubro de 2011 a setembro de 2012. Foram confirmados 29 isolados de E. faecalis e 8 de E. faecium por testes bioquímicos convencionais, pela metodologia automatizada e por Reação da Polimerase em Cadeia (PCR). Um isolado de Enterococcus spp. foi identificado pelo equipamento automatizado como E. casseliflavus, identificação não confirmada pela PCR. A avaliação dos perfis de suscetibilidade aos ... / The Enterococcus spp. normally inhabit the gastrointestinal tract of humans and animals. Since 1980, have been identified as a major cause of nosocomial infections. The species E. faecalis and E. faecium are agents of various infections, such as bacteremia, sepsis, endocarditis, urinary tract infections, wound infections and meningitis. Acquired resistance, most predominantly penicillin / ampicillin, aminoglycosides (high-level resistance) and glycopeptides are reported in an increasing number of isolates and therapeutic spectrum in these cases is limited. The main concern is that the genes which encode resistance to these antibiotics could all be transferred to other Enterococci or for many other virulent pathogens. Acquired resistance to glycopeptides is mediated by several mechanisms (types VanA/B/D/E/G/L), with VanA and VanB genotypes are transferable. Factors related to the host, with the hospital, invasive procedures, environment, and the use of antibiotics may increase the risk of colonization or infection with VRE. This study aims to investigate the occurrence of these microorganisms in hospital patients of Manaus - Amazonas, identifying species distribution and antimicrobial resistance profile and vancomycin resistance genes involved. We analyzed 38 Enterococcus spp. from inpatient or outpatient care from October 2011 to September 2012. 29 isolates E. faecalis and 8 E. faecium were confirmed by conventional biochemical tests, the automated methodology and Polymerase Chain Reaction (PCR). An isolate of Enterococcus spp. was identified by automated equipment as E. casseliflavus, identification was not confirmed by PCR. The evaluation of the antimicrobial susceptibility profiles commonly used in clinical practice were performed by disk diffusion methods and automated. There were differences in the results of sensitivity to penicillin and ampicillin between the two methods. There were no isolated ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-01Bitstream added on 2014-06-13T21:03:39Z : No. of bitstreams: 1 000742593.pdf: 859815 bytes, checksum: 5425a81ef339c86fb09a4e61bcbfe71f (MD5) / Peritonites e infecções do orifício de saída do cateter de diálise representam as principais complicações infecciosas relacionadas à diálise peritoneal, frequentemente respondem pela falência deste método dialítico, portanto com importante impacto na morbidade e mortalidade dos pacientes. Existem associações entre o portador de S. aureus e aumento no risco de infecções nos pacientes tratados por diálise peritoneal. Entretanto, desconhecemos estudos que avaliaram a virulência de Staphylococcus spp. carreados. Fatores de virulência são descritos como responsáveis pelos sintomas e gravidade de diversas infecções causadas por S. aureus. Esses fatores incluem as hemolisinas α, β, γ e δ, lipases, lecitinases, proteases, toxina 1 da Síndrome do Choque tóxico (TSST-1) e as enterotoxinas estafilocócicas (EEs), desoxirribonuclease (DNAse) e de desoxirribonuclease termoestável (TNAse). Este estudo teve como objetivo avaliar se fatores de virulência produzidos por Staphylococcus spp. e as características clinicas e epidemiológicas dos pacientes podem influenciar na ocorrência de infecções relacionadas ao tratamento. Para tal, foram incluídos 32 pacientes tratados por diálise peritoneal na Unidade de Diálise do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu- UNESP, avaliados primariamente quanto à colonização (culturas de coletas nasais e pele pericateter, em três momentos distintos no período de 12 meses) e subsequentemente foram observados quanto ao risco para a ocorrência de infecções, acompanhados por até 36 meses confirmados com culturas do efluente peritoneal na ocorrência de peritonites e secreção da pele pericateter na vigência de infecção de orifício de saída do cateter. As amostras de Staphylococcus spp. carreadas depois de devidamente identificadas, foram reavaliadas usando como critério de similaridade o método de susceptibilidade com... / Peritonitis and infections in the exit orifice of the dialysis catheter represent the main infectious complications related to peritoneal dialysis, and are often responsible for the failure in this dialysis method, therefore with a significant impact on morbidity and mortality of patients. There are associations between the carrier of S. aureus and increased risk of infection in peritoneal dialysis patients. However, studies that evaluated the virulence of Staphylococcus spp. carried are not aware. Virulence factors are described as responsible for the symptoms and severity of different infections caused by S. aureus. These factors include hemolysins α, β, and δ, lipases lecithinases, proteases, toxin 1 in Toxic Shock Syndrome (TSST-1) and staphylococcal enterotoxins (SEs), deoxyribonuclease (DNase) and thermostable deoxyribonuclease (TNAse). This study aimed to evaluate whether virulence factors produced by Staphylococcus spp. and the clinical and epidemiological characteristics of patients may influence the occurrence of infections related to the treatment. In order to do this, 32 patients treated by peritoneal dialysis at the Dialysis Unit of the University Hospital, Botucatu School of Medicine, UNESP, Brazil were included, evaluated primarily by the colonization (cultures collected from the nose and pericatheter skin, at three different times during 12 months) and subsequently were observed regarding the risk for the occurrence of infections, followed by at least 36 months confirmed with cultures from peritoneal effluent in the occurrence of peritonitis and secretion of the pericatheter skin in the occurrence of infection in the outlet orifice of the catheter. Samples of Staphylococcus spp. carriers after being properly identified, were reevaluated using similarity criteria from the method of susceptibility agar drug diffusion technique (Kirby-Bauer method), thus allowing strains selection of ...

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-19Bitstream added on 2014-08-13T17:59:55Z : No. of bitstreams: 1 000768735.pdf: 1378869 bytes, checksum: 208d6f9ea0a8b866c4aaf52ade9bcdc9 (MD5) / Staphylococcus aureus se destaca por sua patogenicidade e alta frequência, permitindo que este agente seja capaz de produzir doenças tanto em indivíduos sadios quanto em imunocomprometidos por sua fácil disseminação. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a distribuição de clones de S. aureus sensíveis e resistentes à meticilina (MSSA/MRSA) em 50 isolados provenientes de pacientes com infecções de pele da Seção de Dermatologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina (FMB) de Botucatu, 50 isolados de idosos de Instituições de Longa Permanência (ILP) de Bauru e 50 isolados provenientes de detentos do Centro de Ressocialização (CR) de Avaré. Os isolados de S. aureus foram submetidos à técnica de E-test para determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM). Para determinação do perfil de virulência e resistência à oxacilina nos 150 isolados de S. aureus foram realizadas reações em cadeia da polimerase (PCR) para a detecção dos genes mecA, cassete cromossômico estafilocócio mec (SCCmec), genes codificadores das enterotoxinas (sea, seb e sec-1), toxinas esfoliativas A e B (eta e etb), toxina 1 da síndrome do choque tóxico (tst), leucocidina de Panton-Valentine (lukS-PV e lukF-PV), hemolisinas alfa e delta (hla e hld) e biofilme (icaA e icaD). O perfil clonal dos isolados MSSA e MRSA foi caracterizado por Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE), e os clones de MRSA foram submetidos a tipagem molecular por Multilocus Sequence Typing (MLST) e spa typing. Os resultados revelaram maior prevalência de MRSA nas instituições de longa permanência, além de apresentarem CIM90 64μg/mL para oxacilina e CIM90 > 256 μg/mL para clindamicina. Das 150 amostras de S.aureus ... / Staphylococcus aureus is distinguished by its high pathogenicity and frequency, allowing that this agent is capable of producing diseases in both healthy individuals and immunocompromised due to its easy dissemination. The aim of this work was to characterize the distribution of clones of S. aureus sensitive and resistant (MSSA/MRSA) in 50 isolates from patients with skin infections of Section of Dermatology of the University Hospital of the Botucatu Medical School Hospital of the (FMB), 50 isolates of elderly residents of nursing homes of Bauru and 50 isolates from inmates of Detention Center of Avare. The isolates of S. aureus were subjected to the technique of E-test for determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). To determine the virulence profile and oxacillin resistance in 150 isolates of S. aureus was used Polymerase Chain Reaction (PCR) for the detection of mecA gene, staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec), genes encoding enterotoxins (sea, seb and sec-1), exfoliative toxins A and B (eta e etb), toxic shock syndrome toxin 1 (tst), Panton-Valentine leukocidin (lukS-PV and lukF-PV), alpha and delta hemolysin (hla and hld) and biofilm (icaA and icaD). The clonal profile of MRSA and MSSA isolates were characterized by Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE), and MRSA clones were subjected to molecular typing Multilocus Sequence Typing (MLST) and spa typing. The results revealed a higher prevalence of MRSA in institutional settings, besides having MIC90 64μg/mL for oxacillin and MIC90 > 256 mg/mL for clindamycin. Of the 150 samples of S. aureus studied, 20 (13.3%) were mecA carriers, being detected seven isolates harboring SCCmec type IV nine carrying the SCCmec type II, only one isolate carrying the SCCmec type I and 3 isolates were not typed by the protocol used. Among the virulence factors, enterotoxin A was the most prevalent in all sources. Is important to note, 10% of isolates from Center Resocialization ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-25Bitstream added on 2014-06-13T18:55:47Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_lf_me_jabo.pdf: 1207984 bytes, checksum: 5a5e1f9c2d00ce2012cc5d6ff3d5b0e6 (MD5) / Os queijos elaborados a partir de leite cru são muito consumidos no Brasil. No entanto, sua elaboração realizada por pessoas não capacitadas pode resultar em sua contaminação por vários micro-organismos, incluindo Escherichia coli, afetando a qualidade microbiológica do queijo e representando risco potencial para a saúde dos consumidores. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar as características fenotípicas e genotípicas de estirpes de Escherichia coli isoladas em amostras de queijos elaborados a partir de leite não pasteurizado em três cidades, para avaliar o possível risco potencial deste tipo de queijo para a população humana. Para tanto, 83 queijos foram coletados em cada um dos três diferentes municípios, Uberaba / Minas Gerais (30), Ribeirão Preto / São Paulo (22) e Aracajú / Sergipe (31) no ano de 2010. Os isolados foram cultivados em ágar EMB e, no ano de 2012, analisados o grupo filogenético por PCR, o sorogrupo O por aglutinação, a resistência antimicrobiana por difusão em disco, a presença de genes de resistência antimicrobiana por PCR, e campo pulsado por eletroforese em gel. O número de amostras positivas para E. coli foi maior na cidade de Aracaju (90,32%) e os isolados de E. coli da cidade de Uberaba demonstraram alta resistência antimicrobiana (92,30%). A maior parte dos isolados pertencia ao grupo filogenético A (54,4%) e B1 (44,3%). A resistência aos antimicrobianos foi moderada, sendo que a maior prevalência foi do município de Uberaba (56,7%). Houve isolados com genes de resistência a antimicrobianos, sendo que o gene tetB foi o gene mais comumente encontrado. Os sorotipos mais observados foram O4, O18 e O23, importantes como causadores de doenças extra intestinais, como meningite e infecção do trato urinário. Clones de E. coli foram encontrados em amostras de queijos na... / The cheeses made from raw milk is widely consumed in Brazil. However, preparation is performed by people not trained and can result in contamination by various micro-organisms, including Escherichia coli, affecting the microbiological quality of cheese and representing potential risk to consumer health. The objective of this study was to assess the phenotypic and genotypic characteristics of Escherichia coli strains isolated in samples of cheeses made from unpasteurized milk in three cities, to assess the possible risk potential of this type of cheese for the human population. For this, 83 cheeses were collected in each of three different municipalities, Uberaba / Minas Gerais (30), Ribeirão Preto / São Paulo (22) and Aracaju / Sergipe (31) in 2010. The isolates were cultured on agar and EMB, and in 2012, analyzed the phylogenetic group by PCR, serogroup by agglutination, antimicrobial resistance by disk diffusion, the presence of antimicrobial resistance genes by PCR and pulsed field by gel electrophoresis. The number of samples positive for E. coli was higher in the city of Aracaju (90.32%) and E. coli isolated from Uberaba demonstrated high antimicrobial resistance (92.30%). Most isolates belonging to the phylogenetic group A (54.4%) and B1 (44.3%). Antimicrobial resistance was moderate, and the highest prevalence was at Uberaba (56.7%). There were isolates with antimicrobial resistance genes, and the gene tetB was the gene most commonly found. The serotypes most frequently observed were O4, O18 and O23, important as disease causing extra bowel, such as meningitis and urinary tract infection. E. coli clones were found in samples of cheeses in the same city and in different cities and there was also a high genetic variability, indicating that this type of food can be contaminated at different points during the... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-14Bitstream added on 2014-06-13T19:36:22Z : No. of bitstreams: 1 felippelli_g_me_jabo.pdf: 1436569 bytes, checksum: 00f0274450e4cffec2477f87c66b1216 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os objetivos específicos do presente trabalho foram diagnosticar espécies de nematódeos resistentes à ivermectina de alta concentração (3,15% e 3,5%) por meio de necropsias parasitológicas realizadas em bovinos procedentes de oitos municípios dos estados de Minas Gerais, São Paulo e Rio Grande do Sul; avaliar comparativamente as eficácias terapêuticas de duas formulações contendo altas concentrações de ivermectina 3,15% (630 mcg/Kg) e 3,5% (700 mcg/Kg), contra nematódeos parasitos de bovinos naturalmente infectados; fornecer subsídios para um melhor conhecimento sobre a distribuição da resistência de nematódeos à ivermectina, em diferentes regiões do Brasil. Para isto foram utilizados 108 animais, naturalmente infectados, os quais foram selecionados pelas médias de três pré-contagens (-3,-2 e -1) de ovos por grama de fezes (OPG), divididos em grupos experimentais, constituídos por seis repetições. Quatorze dias pós-tratamento (DPT), os animais foram eutanasiados e necropsiados. Resistência à ivermectina 3,15% (630 mcg/Kg) e 3,5% (700 mcg/Kg) foi diagnosticada obtendo eficácia terapêutica insuficientemente efetiva (<90%) pelas médias aritméticas ou 1000 espécimes sobreviveram nos grupos tratados, dentre as quais: Haemonchus placei (0,0-89,27%), Cooperia punctata (0,0-26,46%), Cooperia pectinata (0,0-90,16%), Cooperia spatulata (21,82-71,50%), Trichostrongylus axei (82,23%), Oesophagostomum radiatum (54,93-83,33%) e Trichuris discolor (64,71-82,58%); Considerando apenas os resultados analisados estatisticamente referentes aos oito experimentos realizados (116 necropsias) pode-se inferir que a resistência à ivermectina, em altas concentrações (630 e 700 μg/Kg) está amplamente disseminada, sobretudo nas espécies Haemonchus placei, Cooperia punctat... / The specific objectives of the present study were to diagnose high concentration ivermectin (3,15% and 3,5%) resistance in nematodes through parasitological necropsies conducted in bovines originating from eight cities from the states of Minas Gerais, São Paulo and Rio Grande do Sul; evaluate, by comparison, the therapeutic efficacies of two formulations containing high concentrations of ivermectin, respectively 3,15% (630 mcg/Kg) and 3,5% (700 mcg/Kg), against nematodes parasitizing naturally infected bovines; provide aid for a better knowledge about the distribution of ivermectin resistance in nematodes throughout different regions of Brazil. To achieve these goals 108 naturally infected animals were used, all selected using the average of three EPG counts (-3, -2 and -1), divided in experimental groups consisting of six repetitions. Fourteen days after treatment all animals were euthanized and necropsied. Resistance to 3,15% ivermectin (630 mcg/Kg) and 3,5% ivermectin (700 mcg/Kg) was diagnosed by obtaining insufficient therapeutical efficacy (< 90%) when analyzing arithmetic means or by finding at least 1000 specimens that survived in the treated groups, amongst which, Haemonchus placei (0,0-89,27%), Cooperia punctata (0,0-26,46%), Cooperia pectinata (0,0-90,16%), Cooperia spatulata (21,82-71,50%), Trichostrongylus axei (82,23%), Oesophagostomum radiatum (54,93-83,33%) e Trichuris discolor (64,71-82,58%). Considering only the statistically analyzed results related to the eight experiments conducted (116 necropsies) it can be inferred that resistance to high concentration ivermectin (630 and 700 μg/Kg) is highly disseminated, specially in Haemonchus placei, Cooperia punctata, Cooperia pectinata, Cooperia spatulata, Trichostrongylus axei, Oesophagostomum radiatum and... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-28Bitstream added on 2014-06-13T20:10:25Z : No. of bitstreams: 1 000747565.pdf: 762896 bytes, checksum: 9cce482492cfda2fb9dc6de8b7ae0113 (MD5) / A mastite é uma enfermidade que causa inflamação na glândula mamária e geralmente tem origem infecciosa. É uma das principais doenças que acomete os rebanhos de ovinos causando prejuízos econômicos aos produtores. Na mastite infecciosa, as bactérias do gênero Staphylococcus são os principais causadores de mastite em rebanhos de ovinos. Esses micro-organismos se caracterizam pela capacidade de produzir uma ampla variedade de toxinas extracelulares e outros fatores de virulência como a formação de biofilme, além de apresentarem resistência aos agentes antimicrobianos empregados no tratamento dos animais. Esse estudo teve como objetivos caracterizar o perfil clonal e os fatores de virulência e de resistência aos antimicrobianos em Staphylococcus spp. isolados do leite de ovinos de três rebanhos. Após a realização do California Mastitis Test (CMT) as amostras de leite foram colhidas para contagem de Células Somáticas (CCS) e identificação das espécies de estafilococos isoladas, detecção de genes codificadores de enterotoxinas (sea, seb, sec e sed), da toxina TSST-1, da leucocidina PVL e de biofilme (icaA, icaC, icaD, bap, aap e bhp), além da determinação da resistência a oxacilina pela pesquisa do gene mecA e perfil de sensibilidade a doze antimicrobianos. Os isolados com a presença de genes para toxinas e biofilme foram testados para detecção do RNA mensageiro para avaliação da capacidade de expressão dos fatores de virulência. Foram coletadas 473 amostras de leite de 242 animais, sendo encontrados micro-organismos em 169 (35,7%) amostras. Das 169 amostras em que foram isolados micro-organismos, 132 (78,1%) foram identificados como pertencendo ao gênero Staphylococcus, sendo 20 (15,1%) amostras identificadas como Staphylococcus aureus e as demais 112 (84,9%) como estafilococos coagulase-negativa (ECN). Das 20 amostras de S. aureus isoladas, nenhuma apresentou o gene... / Mastitis is a disease that causes inflammation in the mammary gland and is usually infectious. It is a major disease that affects sheep herds causing economic losses for producers. In infectious mastitis, Staphylococcus bacteria are the major cause of mastitis in sheep flocks. These micro-organisms are characterized by the ability to produce a wide variety of extracellular toxins and other virulence factors such as biofilm formation, besides presenting resistance to antimicrobial agents used in the treatment of animals. This study aimed to characterize the profile and clonal virulence factors and antimicrobial resistance in Staphylococcus spp. isolated from milk of sheep from three flocks. After the completion of the California Mastitis Test (CMT) milk samples were collected for Somatic Cell Count (SCC) and species identification of staphylococci isolated detection of genes encoding enterotoxins (sea, seb, sec and sed), the toxin TSST-1, PVL and Leucocidin of biofilm (icaA, icaC, icaD, bap, aap and bhp), besides the determination of resistance to oxacillin by research mecA and sensitivity profile to twelve antimicrobials. Isolates with the presence of toxin genes and biofilm were tested for the detection of messenger RNA for assessing the ability of expression of virulence factors. We collected 473 milk samples from 242 animals, micro-organisms found in 169 (35.7%) samples. Of the 169 samples that were isolated micro-organisms, 132 (78.1%) were identified as belonging to the genus Staphylococcus, 20 (15.1%) samples identified as Staphylococcus aureus and the remaining 112 (84.9%) as coagulase-negative staphylococci (CNS). Of the 20 samples of S. aureus isolates, none had the mecA and most were sensitive to all drugs tested except one sample that was resistant to tetracycline. Seven samples showed a toxin gene, the gene being the most seb found, present in five samples, followed by sea on three, two ...

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2015-05-14T16:59:10Z : No. of bitstreams: 1 000822140.pdf: 1942626 bytes, checksum: f2001c67bc6e7163aba1a6ffbdbcc496 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Staphylococcus aureus juntamente com outras espécies de estafilococos coagulase-negativa são importantes patógenos responsáveis por infecções nosocomiais associadas ao uso de dispositivos implantáveis. O fator mais importante na patogênese de infecções estafilocócicas associadas a estes dispositivos é a habilidade do patógeno de formar biofilme, que confere proteção contra o sistema imunológico do hospedeiro e da ação de antimicrobianos, sendo o Polissacarídeo de Adesão Intercelular (PIA) codificado pelo operon icaADBC o principal componente do biofilme estafilocócico. Esse estudo objetivou estudar a estrutura do biofilme de diferentes espécies de Staphylococcus, avaliar a antibioticoterapia utilizada para tratamento dessas infecções em células livres e em biofilme e alternativas para prevenção da formação de biofilme. Foram estudadas 200 amostras de Staphylococcus spp. sendo 50 da espécie S. aureus e 150 do grupo dos estafilococos coagulase-negativa (ECN), incluindo 50 amostras de S. epidermidis, 20 S. haemolyticus, 20 S. warneri, 20 S. hominis, 20 S. lugdunensis e 20 amostras de S. saprophyticus isoladas de pacientes do Hospital das Clínicas (HC) da Faculdade de Medicina de Botucatu (FMB). As amostras foram submetidas à pesquisa dos genes icaADBC pela reação em cadeia da polimerase (PCR) e à expressão pela técnica de Transcriptase Reversa-PCR (RT-PCR). A produção de biofilme foi verificada através dos métodos fenotípicos de aderência ao tubo de borossilicato e na placa de poliestireno. A determinação da concentração inibitória mínima em células planctônicas e em biofilme foi testada para as drogas oxacilina, vancomicina, eritromicina, gentamicina, linezolida e sulfametoxazol-trimetropim pelo método de microdiluição em caldo. O teste do peptídeo (RIP) na prevenção da formação de biofilme foi realizado com cultura de bactérias em TSB glicose 2% com pontas de cateteres e ... / Staphylococcus aureus, together with other coagulase-negative staphylococci (CoNS), is an important pathogen that causes nosocomial infections associated with the use of implantable devices. The most important factor in the pathogenesis of staphylococcal infections associated with these devices is the ability of the pathogen to form a biofilm, which protects bacteria against the host immune system and against the action of antimicrobial drugs. The main component of staphylococcal biofilms is polysaccharide intercellular adhesin (PIA), which is encoded by the icaADBC operon. The objectives of this study were to investigate the structure of biofilms of different Staphylococcus species, to evaluate the effect of antibiotics used to treat these infections on planktonic and biofilm cels, and to identify alternatives for the prevention of biofilm formation. A total of 200 Staphylococcus spp., including 50 S. aureus and 150 CoNS strains (50 S. epidermidis, 20 S. haemolyticus, 20 S. warneri, 20 S. hominis, 20 S. lugdunensis and 20 S. saprophyticus), isolated from patients seen at the University Hospital of the Botucatu School of Medicine (HC-FMB), were studied. The presence of the icaADBC genes was investigated by the polymerase chain reaction (PCR) and their expression was determined by reverse transcriptase-PCR (RT-PCR). Biofilm formation was evaluated using the phenotypic method of adherence to borosilicate tubes and polystyrene plates. The minimum inhibitory concentration (MIC) of oxacillin, vancomycin, erythromycin, gentamicin, linezolid and sulfamethoxazole-trimethoprim for planktonic and biofilm cells was determined by the broth microdilution method. The effect of RNA-inhibiting peptide (RIP) on the prevention of biofilm formation was tested using bacterial cultures grown in TSB-2% glucose containing catheter tips and visualization by scanning electron microscopy and on polystyrene plates. The icaA gene was detected by PCR in 97 (48.5%) ... / FAPESP: 11/07285-5

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-29Bitstream added on 2014-06-13T18:56:53Z : No. of bitstreams: 1 000749087.pdf: 1190514 bytes, checksum: 2f296befce1a51e83e431b9d970625ef (MD5) / Ao longo das últimas décadas o controle de Rhipicephalus (Boophilus) microplus tem sido dificultado pelo desenvolvimento da resistência à maioria dos grupos químicos utilizados. Algumas moléculas tem se apresentado como alternativas promissoras, mas mesmo assim, apresentam redução de eficácia com o passar do tempo. As lactonas macrocíclicas, moléculas com atividade endectocida, surgiram como uma dessas opções, mas relatos sobre a resistência, especialmente à ivermectina, se tornam cada vez mais frequentes. O presente estudo objetivou determinar a redução de eficácia da ivermectina contra o R. (B.) microplus, e o consequente surgimento da resistência à esse princípio ativo, por meio de resultados encontrados em várias propriedades rurais, frente às diferentes cepas presentes. Foram realizados testes com bovinos naturalmente infestados da região Sudeste do Brasil, utilizando diferentes concentrações de ivermectina (200 μg/kg, 500 μg/kg e 630 μg/kg). Estes experimentos basearam-se na contagem de partenóginas, entre 4,5 e 8 mm de diâmetro, presentes no lado esquerdo dos bovinos. Das doze propriedades avaliadas, três com a utilização de ivermectina 500 μg/kg (0,5% pour-on), três onde foi testada a ivermectina 200 μg/kg (1% injetável) e seis onde avaliou-se a ivermectina 630 μg/kg (3,15% injetável), apenas uma apresentou valores de eficácia média, entre os dias 7 e 14 pós-tratamento, superior à 90%, sendo classificada como sensível. Nenhum dos demais experimentos atingiu este valor, permitindo a classificação de onze dentre as doze cepas (91,67%) avaliadas, como resistentes. Além disso, o presente estudo confirma a eficiência da avaliação in vivo para o diagnóstico da resistência, assim como reforça a necessidade de maior atenção a esse fenòmeno, amplamente disseminado nessa região do Brasil / Throughout the last decades, the control of Rhipicephalus (Boophilus) microplus has become more difficult due to the development of resistance to most of the products used for its control. Some molecules have been presented as promising alternatives, but nonetheless, their efficacy has shown reduction as time passes. The macrocyclic lactones, molecules with endectocidal activity, appeared as one of these options, but resistance to them, especially to ivermectin, are commonly reported in literature. The present study aimed to determine the decrease in acaricidal efficacy of ivermectin against Rhipicephalus (Boophilus) microplus, and the consequent development of resistance to this active component, by means of several results found in several rural properties, with different tick strains present. Tests were conducted in naturally infested animals originated from farms on the Southeast region of Brazil, using different concentrations of ivermectin (200 μg/kg, 500 μg/kg and 630 μg/kg) applied in different administration methods (pour on and injectable). From all twelve properties evaluated, being three with the administration of 500 μg/kg ivermectin (0.5% pouron), three were 200 μg/kg ivermectin (1% injectable) was tested and six were 630 μg/kg ivermectin (3.15% injectable) was evaluated, only one presented mean efficacy values, between days 7 and 14 post-treatment, superior to 90%, being classified as sensible. None of the other experiments reached or surpassed this index, allowing the classification of eleven amongst twelve (91.67%) evaluated R. (B.) microplus strains, as resistant. Besides, the present study confirms the efficiency of in vivo evaluation for the diagnosis of resistance, as well as reinforces the need for a greater attention to this problem, widely spread in this region of Brazil