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Orientadores: Lucila Costallart Ricci, Marlene Braide Serafim / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T19:39:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Piton_MariaAmeliadeJesus_M.pdf: 13153764 bytes, checksum: 6ed463b9ceca25bff6a2da9c5dba060a (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Neste trabalho, foram estudadas 111 amostras de Escherichia coli isoladas de 60 fezes diarréicas de adultos e crianças encaminhados ao Hospital das Clínicas da UNICAMP, no período de Janeiro de 1992 a Março de 1994. Paralelamente, 27 cepas de E. coli isoladas de 19 amostras de fezes normais, também foram pesquisadas como grupo controle. Os 138 isolados de E. coli eram procedentes de coproculturas negativas para os enteropatógenos pertencentes aos gêneros Shigella, Salmonella e Yersinia, além dos sorogrupos mais associados aos virotipos EIEC, EPEC e EHEC. Na pesquisa da produção das enterotoxinas STa e L T-I do grupo ETEC, apenas a enterotoxina termo-Iábil foi identificada, inicialmente pela técnica sorológica da Imuno Hemólise Radial (SRIH). Porém, pela alta frequência de resultados positivos observada, esta técnica foi avaliada quanto a possíveis reações falso-positivas, a outros métodos sorológicos, métodos biológicos e a métodos moleculares normalmente também utilizados na identificação da L T -I. Dentre estas técnicas, o teste biológico utilizando-se culturas de células Vero e o GM1-ELlSA, foram os mais sensíveis na detecção da L T-I, identificando apenas 5 amostras produtoras desta enterotoxina, dentre as 111 isoladas de fezes diarréicas (3,6% ETEC L T-I). Demonstraram, desta forma, serem os mais adequados na identificação da enterotoxina L T -I em cepas isoladas de levantamentos epidemiológicos. Com relação aos testes sorológicos que utilizam hemácias de carneiro como suporte da reação hemolítica, tais como SRIH e micro-PIH (97,8% de concordância), estes podem ser utilizados como técnicas de triagem na pesquisa de L T -I. Porém, estas técnicas devem ser re padronizadas sempre que houver mudança da procedência dos eritrócitos, verificando-se a adequação da diluição do soro anti-toxina utilizado em reações sorológicas desenvolvidas com sobrenadantes de cultura de menos 10 amostras de E. coli positivas para esta enterotoxina e 10 cepas negativas. Quanto às provas de hibridização, 4 amostras hibridizaram com a sonda para L T-I, apresentando esta técnica 99,2% de concordância com a técnica de cultura celular e GM1-ELlSA. Com relação a determinação dos sorogrupos, dentre as cepas isoladas de fezes diarréicas, verificou-se maior freqüência de O11, O60 e O90, enquanto que nos isolados de fezes normais os sorogrupos mais freqüentes foram O6, O8 O14 e O87. Dentre as amostras isoladas de fezes diarréicas, dois sorogrupos descritos em EIEC (O171 e O29), além de um sorogrupo descrito para EPEC (O119) foram identificados. Maior número de produção de colicinas e maior variabilidade das mesmas foi verificado nos isolados de fezes normais (44.5% de cepas produtoras). Por outro lado, dentre as 111 amostras procedentes de fezes diarréicas, apenas 15 amostras (13,5%) produziram colicinas , dentre estas uma amostra produtora do Col V. Quanto à resistência aos antimicrobianos, as amostras isoladas de fezes diarréicas apresentaram resistência frente aos 6 antimicrobianos avaliados, superiores aos verificados junto ao grupo controle. No que diz respeito à produção de outras toxinas, uma amostra isolada de fezes diarréicas foi identificada como produtora de CNF1. Porém, produção de L T -li, VT e de CLDT não foi identificada. Por outro lado, testes em alça ligada de coelho demonstraram atividade enterotóxica em sobrenadantes de cultura de cepas não produtoras das demais toxinas. Padrões variados de hemaglutinação D-manose resistente (MRMH) foi observado, sendo que 74% dos isolados de fezes normais hemaglutinaram hemácias de galinha. Nenhum padrão MRMH foi condizente aos descritos para os diferentes Fatores de Colonização de ETEC. A estes somam-se resultados negativos frente aos soros a-CFA/I, a-CFA/II (CS2, CS3), a-CFAIV (CS4, CS5) e a-PCFO2. Com relação ao padrão de aderência às células HEp-2, em período de infecção de 3 horas e de crescimento de mais 3 horas, verificou-se 23 amostras apresentando padrão enteroagregativo, sendo 19 isoladas de fezes diarréicas e 4 de fezes normais foram estudados. Estes dados correspondem a 16.6% de amostras apresentando características do virotipo EaggEC. Dentre as cepas com este padrão, estas correspondem a 14 amostras de fezes, 13 destas de crianças abaixo de 8 anos. No grupo controle, as cepas correspondem a 4 amostras de fezes normais de adultos. Dentre as amostras com fenótipo de aderência em HEp-2, destacamos uma cepa com padrão LA/DA e uma ETEC L T-I com aderência difusa a 37°C, mas não a 16°C. Através da caracterização fenotípica das amostras em estudo, desenvolvida neste trabalho, uma triagem de cepas de interesse no estudo da enteropatogenicidade da E. coli pode ser realizada, o que certamente servirá de suporte para relevantes trabalhos posteriores / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-09-11. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:15Z : No. of bitstreams: 1 000868600.pdf: 2036190 bytes, checksum: 3872e6084fbe526a55b084da83826c3a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Doença de Crohn (DC) é uma variante das doenças inflamatórias intestinais que não tem uma causa definida, porém há o envolvimento de fatores ambientais e genéticos, entre eles a microbiota. Portadores da DC apresentam desequilíbrio na composição de espécies da microbiota intestinal, incluindo o aumento da Escherichia coli. A E. coli é uma bactéria versátil em sua relação com o hospedeiro, isto é, inclui cepas comensais e várias categorias patogênicas. Estas compreendem dois grupos: linhagens causadoras de infecções intestinais e linhagens causadoras de infecção extraintestinais. As E. coli isoladas de portadores da DC em geral pertencem ao segundo grupo, e uma das principais características apresentadas por estas bactérias é a interação com células epiteliais (aderência e invasão). Estudos feitos na década de 90 levaram a identificação de um novo patótipo de E. coli, capaz de aderir e invadir células epiteliais e ainda invadir e se replicar dentro de macrófagos, produzindo granulomas, característica histopatológica da DC. Este novo patótipo, chamado de Adherent and Invasive E. coli (AIEC), têm sido usada como referência na caracterização de E. coli isoladas a partir de portadores da DC. Neste trabalho, foi feito o estudo de caracterização fenotípica e genética de E. coli isoladas a partir de 9 portadores da DC e 5 pacientes controles, as quais foram submetidas a testes de adesão e invasão celular em células epiteliais, teste de formação de biofilme e identificação de filogrupos da coleção de referência de E. coli (EcoR). Dentre o conjunto de amostras bacterianas estudado, foi encontrada uma amostra isolada de uma paciente com DC que apresentou invasibilidade superior às demais, e foi intensivamente estudada, tendo-se verificado que ela apresenta um perfil de virulência distinto de AIEC. O genoma da amostra em questão foi sequenciado e anotado. Os resultados da caracterização... / FAPESP: 13/04475-3

Orientador: Antonio Fernando Pestana de Castro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T02:41:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nakazato_Gerson_M.pdf: 5854580 bytes, checksum: 31a33b6b3de0d29ee4c95df2ccfa7bb5 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Amostras de Escherichia coZi enteropatogênicas (EPEC) são uma das causas importantes de diarréia aguda em cães,. principalmente nos neonatos. Neste trabalho foram. Estudadas amostras fecais de 137 cães com diarréia e 34 cães normais, de várias faixa etárias e diferentes localidades do Estado de São Paulo. Através da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), o gene eae foi encontrado em amostras de E. co/i isoladas de 22 cães, sendo 19 de cães com diarréia e 3 normais. Também através do teste de PCR, amostras de E. colí de 2 cães (com diarréia) apresentaram o gene bfpA. Nenhuma destas 22 amostras fecais, apresentou o plasmídio EAF, e genes que codificam enterotoxinas (ST e LT) ou citotoxinas (Stx e CNF). Utilizando iniciadores específicos, entre as 22 amostras fecais eae positivas, 7 amplificaram com iniciadores para intimina ß, 5para y, 1 para a, 1 para 8 e uma amostra para 13 e .., (colônias diferentes). Sete amostras não reagiram com nenhum destes iniciadores (não-tipáveis).Em relação a inserção de LEE ("Locus of Enterocyte Effacemenf') , através de PCR, algumas amostras apresentaram ÚlSerção de LEE em selC (amplificação da junção direita e esquerda do LEE com selC). Em outras LEEpode estar inserido em pheU (pheU inteITompido). E também, foi observado que E. coZi de 7 amostras fecais LEE estaria inserido em uma outra região do cromossomo ainda desconhecida (selC e pheU intacto). Utilizando cultura de células, foi verificado que a maioria das amostras aderiu em células HEp-2 (14 amostras) e HeLa (12 amostras), sendo que a adesão mais predominante foi do tipo localizada..like (LAL) (8 amostras em HEp.2 e 7 em HeLa). Para o teste de "Fluorescence Actin Staining" (F AS), 10 amostras eae positivas (que apresentaram adesão positiva em HEp-2) foram testadas. Em todas as amostras examinadas foram observados acÚIDulo de actina nos pontos de adesão da bactéria às células, portanto sendo consideradas como positivas no teste de FAS. As amos1ras eae positivas apresentaram uma grande variabilidade em relação a sorotipagem. Os soro grupos encontrados foram: 04, 011, 015, 025, 055,088,098,0111,0119,0125,0142,0156,0157,0167,0174 e ONT. Os sorotipos 01l1:H25, 0119:H2, 055:H7 e O142:H6, isolados neste trabalho, também são encontrados em amostras de EPEC de origem humana. Analisando estes dados foi constatada a presença de amostras EPEC em cães com diarréia e normais (conhecidas como "Dog" EPEC - DEPEC). Levando-se em conta que os fatores de virulência encontrados nestas amos1ras são muito semelhante as das EPEC humanas, e verificando-se a sorotipagem de algumas amostras, estes cães poderiam servir como possível fonte de infecção para o homem e vice-versa. A presente pesquisa é original e inédita nas Américas com exceção do Canadá constituindo-se em todos os seus aspectos a primeira constatação no Brasil da ocorrência de amostras DEPEC e suas respectivas características, incluindo a pesquisa dos genes eae, bfpA, plasmídio EAF, sub-tipos de intiminas, inserção do LEE e genes que codificam a pordução de enterotoxinas (8Ta, 8Th, LT-I e LT-II) ou citotoxinas (Stx, CNF) / Abstract: Strains of Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) are an important cause of acute diarrhea in dogs, mainly in puppies.10 this report 137 feces samples from dogs with diarrhea and.34 normal ones from different ages and regions of the State of São Paulo, were examined By Polymerase Chain Reaction (PCR), the eae gene was found in strains of E. coli from 22 dogs. Nineteen were from dogs with diarrhea and 3 from normal animals. As detected by PCR, strains of E. coli from 2 dogs (with diarrhea) harbored the bfpA gene, and none presented the EAF plasmid. Genes that encode for enterotoxins (S1 and L T) or cytotoxins (Stx and CNF) were not found in any strains, as detected by PCR. Using specific, among 22 eoe positive strains of stools, 7 were also positive for ß intimin, 5 for y, 1 for a?, 1 for a, 1 for ß and y (different colonies) types. Seven of the stra.ins showed no amplified fragments with any of the specific primers for the studied sub-types of intimin. With regard to the sites of insertion of the LEE (Locus of Enterocyte Effacement), as studied by PCR, some strains had the LEE inserted in selC (amplification of right and left junction of LEE with selC). Others strains may have the LEE inserted in pheU (pheU interrupted) and ao equal number of strains had the LEE inserted in a other sire yet unknown (intact selC and pheU). Using cells cultures, it was verified that most strains adhered to HEp-2 cells (14 strains) and to HeLa (12 strains). The most predominant adherence pattern was the localized-like (LAL) (8 strains for HEp-2 and 7 strains for HeLa). In the Fluorescence Actin Staining (F AS) test, 10 eae positive strains and positive for the adherence to HEp-2 were tested. All strains showed accumulation. of actin under the site of adherence of the bacteria to the HEp-2 ce1ls. Thus these strains were considered F AS positive. Positives eae strains showed a wide diversity oí serotypes. Serogroups were found: 04, 011, O15,025, 055, 088_ 098,. 0111, 0119, 0125, 0142, 0156, 0157, 0167, 0174 e ONT. The 0111:H25, 0119:H2, 055:H7 and 0142:H6 serotypes, isolated in this research, are also found among strains of EPEC from humans. These results confirmed the presence of EPEC in dogs with diarrhea and normal dogs (Dog EPEC - DEPEC). As to the virulence factors found in these strains, they were very similar to human EPEC, and an account of these serotypes it is suggested that dogs may play a possible role on the transmission of EPEC infection to humans and vice-versa. These data are original and have not been published yet in North and South America with the exception of Canada. The report of DEPEC strains and their respective characteristics , including search of the eae gene, bfpA, EAF plasmid, intimins sub-types, as well as the insertion of the LEE and the genes that encode for the production of enterotoxins (STa, STb_ LT-I and LT-lI) or cytotoxins (Stx and CNF) are in our opinion the most outstanding ones / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Domingos da Silva Leite / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T14:01:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Duarte_Arlete_M.pdf: 3000936 bytes, checksum: c7eaab16a96a70b56f591557220c9a53 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Não informado / Abstract: Not informed. / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientadores : Domingos da Silva Leite, Wanderley Dias da Silveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T21:11:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hollanda_LucianaMariade_M.pdf: 6442851 bytes, checksum: 7f384f41f8462cf129d4c025d990fe59 (MD5) Previous issue date: 2001 / Mestrado

Orientador: Aparecida Machado de Moraes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T14:55:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Velho_PauloEduardoNevesFerreira_D.pdf: 2446406 bytes, checksum: e4ccb38baf8e0f3a32785ac7193d12f9 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: As bartoneloses humanas são um grupo de doenças cuja patogênese é pouco conhecida. A Bartonella henselae é uma das mais estudadas bactérias deste gênero. Ainda assim, pouco se sabe sobre sua virulência e sua relação com o hospedeiro. O objetivo deste estudo foi observar se passagens desses microorganismos in vivo determinariam alterações ultra-estruturais nas mesmas. Para isso foram selecionados camundongos isogênicos fêmeas, de 4 a 7 semanas de vida, que foram inoculados com cepa padrão de B. henselae (I). Estas foram recuperadas inicialmente de animais geneticamente imunodeficientes (II) e então inoculadas em imunocompetentes. Colônias de bactérias obtidas desta última passagem (III) foram comparadas com colônias I e II à microscopia eletrônica de transmissão. Perda de fímbrias e abundante formação de blebs foram as alterações morfológicas mais encontradas nas colônias III. Também, no sexto dia após as inoculações, os animais foram sacrificados e as principais alterações histológicas encontradas foram proliferação endotelial, observada nos animais imunodeficientes, e reação granulomatosa incipiente, observada em um dos camundongos imunocompetentes inoculados. Estes achados são concordantes com aqueles observados clínica e histologicamente nas doenças humanas causadas por bactérias deste gênero. São discutidos, também, outros achados ultra-estruturais e da microscopia de luz do fígado e do baço dos camundongos, além das observações bacteriológicas e do exame direto do sangue dos camundongos. Este estudo demonstrou que passagens in vivo da B. henselae induziram-na a alterações morfológicas. Estas alterações poderiam explicar a maior virulência das bactérias das colônias III, sugerida pelos resultados encontrados. A maioria destes achados não foi previamente descrita, assim, novos estudos sobre a patogênese da infecção pelas bartonelas deverão considerar as informações ora apresentadas / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Domigos da Silva Leite / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T21:44:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Valadares_GeorgioFreesz_M.pdf: 6286632 bytes, checksum: 750787e549d06747aefb2b4788eebbfc (MD5) Previous issue date: 2000 / Mestrado

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-26Bitstream added on 2014-08-13T18:01:12Z : No. of bitstreams: 1 000735330_20140826.pdf: 26004 bytes, checksum: 80491d16dd561bc066d6dacbdc900451 (MD5) / A piometra canina é uma enfermidade caracterizada pela inflamação do útero com acúmulo de exsudatos, acometendo principalmente fêmeas adultas. Ocorre na fase lútea do ciclo estral em decorrência de alterações hormonais e infecção bacteriana. É reconhecida como uma das principais causas de morte em cadelas e a Escherichia coli é o principal patógeno associado a esta doença. O objetivo deste estudo foi isolar e identificar cepas de E. coli provenientes de conteúdo intra uterino, boca e fezes de cadelas diagnosticadas com piometra, estudar a prevalência de genes codificadores de fatores de virulência uropatogênicos das cepas obtidas testando ainda a semelhança genética entre as cepas isoladas de conteúdo intra uterino e boca e avaliar a susceptibilidade “in vitro” das bactérias isoladas frente a 12 agentes antimicrobianos. Setenta cepas de E. coli, 25 provenientes do conteúdo intra uterino, 26 provenientes da boca e 19 provenientes das fezes, isoladas de 6 cadelas foram examinadas por PCR. Entre as cepas examinadas, 67 (95,7%) foram positivas para o gene fim, 19 (27,1%) foram positivas para iss, 18 (25,7%) foram positivas para hly , 13 (18,5%) foram positivas para iuc e 12 (17,1%) foram positivas para usp. Três animais apresentaram grande similaridade entre as cepas de E. coli isoladas do conteúdo intra uterino e da boca, através da análise da diversidade genética realizada mediante emprego da técnica REP-PCR, ERIC-PCR e BOX-PCR. Resistência antimicrobiana predominante foi detectada para cefalotina (67,1%), ampicilina (65,7%), tetraciclina (61,4%) e nitrofurantoina (58,5%) entre as cepas isoladas. Resistência a múltiplos antimicrobianos foi detectada em 12 (48,0%) dos isolados do conteúdo intra uterino, em 22 (84,6%) dos isolados da boca e em 14 (73,6%) dos isolados das fezes... / Canine pyometra is a disease characterized by the inflammation of the uterus with accumulation of purulent discharge, affecting mainly adult animals. Occurs in the luteus phase of the estrus cycle in result of hormone alterations and generally is associated with bacterial infections. It is recognized as one of the main causes of disease and death in the bitch and Escherichia coli is the major pathogen associated with this disease. The aim of this study was to research, isolation and identification of Escherichia coli strains from intrauterine contents, mouth and feces of bitches diagnosed with pyometra, studying the prevalence of uropathogenic virulence factors genes in strains isolated, still testing the genetic similarity among strains isolated from intrauterine contents and mouth and evaluate the susceptibility in vitro of the isolated bacteria to 12 antimicrobial drugs. Seventy E. coli strains, 25 from intrauterine contents, 26 from mouth and 19 from feces isolated from six bitches were examined by PCR. Among the strains 67 (95.7%) were positive for fim, 19 (27.1%) were positive for iss, 18 (25.7%) were positive for hly, 13 (18.5%) were positive for iuc and 12 (17.1%) were positive for usp. Multiple antimicrobial resistance was detected for cephalothin (68.0%), nalidixic acid (56.0%) and ampicillin (56.0%) among the pyomera E. coli isolates. Multidrug resistance was found in 12 (48.0%) of the isolates from pyometra, in 22 (84.6%) of the isolates from mouth and in 14 (73.6%) of the isolates from feces...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-05-10Bitstream added on 2014-06-13T21:05:09Z : No. of bitstreams: 1 paula_cjs_dr_jabo.pdf: 584953 bytes, checksum: ec9392065fb3f24ecd68608f81b4c9f5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / De 2008 a 2011 foram isoladas 110 cepas de Escherichia coli, sendo 59 a partir de urina de mulheres com ITU bacteriana. Os outros 51 isolados foram coletados por meio de swabs anais dos respectivos animais de estimação. Foram pesquisados por PCR a presença de genes de virulência e os genes mais encontrados foram o hlyF (44,06%), iss (42,37%) e fimH (100%) e hlyF (13,72%), iss (11,76%) e fimH (96,07%) entre as cepas de origem humana e animal, respectivamente. Foi realizada também a técnica de ERIC-PCR, onde pode observar dissimilaridades genéticas entre estes dois grupos bacterianos estudados, dando fortes indícios de que a transmissão no presente trabalho esteve ausente. Foram realizados antibiogramas a partir de cada um dos cinco isolados de cada amostra encontrando maior número de cepas resistentes em mulheres que nos animais em 8 dos 11 antimicrobianos testados, as maiores resistências para as cepas de origem humana foram o ácido nalidíxico e o ciprofloxacino com 97,14% e para as de origem animal a amoxicilina / ácido clavulânico e ampicilina com 74,28% e 68,57% respectivamente. As cepas de origem humana apresentaram também maiores índices de multirresistência que dos animais com 71,42% e 40%, respectivamente. Estas diferenças entre as resistências fortalecem a hipótese de que a origem das bactérias causadoras de ITU em mulheres não é de seus respectivos animais de companhia / A hundred-ten Escherichia coli strains was isolated from 2008 to 2011, among them 59 were from women with urinary tract infection (UTI) and 51 were from their pets collected by rectal swab. The virulence genes was search by PCR and the most found genes were fimH (100%), hly (44%) and iss (42.3%) all of then from women. Also was used the ERIC-PCR method to check the similarity among both bacterial groups analyzed. The results showed different patterns for each pair women-animal bacterial isolates. In general the isolates from human showed more resistance to the antimicrobial drugs examined, the highest resistance rate was for nalidixic acid (97.1%) and for streptomicin (96.0%) both from human isolates. The results obtained in this study do not permit to suggest a transmission of bacterial strains involving humans and their companion animals