Orientador : Lucila Costallat Ricci / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T21:12:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_YliriaFerreirada_M.pdf: 8250034 bytes, checksum: 4153a375169220d327ec671517b9ecc7 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Cepas de Escherichia coZi podem apresentar mecanismos e fatores de virulência diversos podendo causar no homem, principalmente, infecções intestinais. Desta forma, tendo-se como base os dados clínicos, expressão de mecanismos e de fatores de virulência, dados epidemiológicos, sorotipagem e análises moleculares, dentre outros, as cepas de E. coZi diarreiogênicas humanas podem ser classificadas em pelo menos sete grupos de enteropatogenicidade. Com relação ao grupo diarreiogênico representado pela E. coZi enterotoxigênica (ETEC), a identificação destes patógenos incluem a pesquisa das enterotoxinas STa e/ou LT e a expressão de fatores de colonização (FC). Estes últimos, também denominados de adesinas, permitem a colonização da bactéria à mucosa do intestino delgado, podendo variar morfológica e antigenicamente. Vários FC já foram identificados e caracterizados em cepas ETEC isoladas de diferentes regiões geográficas. Em trabalhos anteriores, a runbria PCF02 foi identificada, caracterizada e purificada a partir de 2 cepas ETEC LT+ pertencentes ao sorogrupo 02, isoladas no nosso meio. Na seqüência dos trabalhos, a partir da fimbria purificada, 9 hibridomas secretores de anticorpos monoclonais reativos com PCF02 foram obtidos, seus isotipos determinados e soluções ascíticas dos mesmos preparadas e tituladas em provas de Western blotting e ELISA. Após a padronização da prova de Inibição do ELISA, desenvolvida com MAbs dos isotipos IgA (4) e IgG2b (5) e pools dos mesmos, mais 5 amostras diarreiogênicas de E. coZi foram identificadas como sendo PCFO2+. Possível homologia (analogia) de epítopos com CFAIII foi verificada com estes MAbs, através de observações em imunomicroscopia. Neste trabalho, dando continuidade aos estudos relacionados ao PCFO2, procurou-se inicialmente reavaliar-se a metodologia de purificação e comprovar-se a Prova de Inibição do ELISA padronizada para a identificação desta fimbria, além de verificar-se possíveis homologias de epítopos entre PCF02 e outros FC, descritos como os mais freqüentemente identificados em cepas ETEC isoladas de fezes humanas. Com base nos resultados obtidos, comprovou-se que MAbs do isotipo IgA reconhecem epítopos distintos dos MAbs IgG2b, uma vez que estes últimos são capazes de reagirem com uma segunda subunidade de 15 kDa de PCF02, em provas de Westem blotting. Esta nova subunidade desta fímbria talvez deva corresponder ao "tip" da mesma. Pelos experimentos desenvolvidos verificou-se que apenas as amostras 312-2 e 312-3, dentre as cinco cepas identificadas inicialmente como PCF02+, expressavam realmente esta fímbria apresentando, também, a fração de 15kDa. Quanto às amostras D242 e D243, estas demonstraram pertencer ao complexo CF AIIV expressando CS5 e CS6 sendo que esta última subunidade apresenta epítopos idênticos aos expressos em PCF02. Quanto às amostras pertencentes ao sorogrupo 02, nenhuma reação inespecífica foi verificada. Portanto, a Prova de Inibição do ELISA desenvolvida com MAbs do isotipo IgG2b demonstrou ser adequada não só para a identificação das duas subunidades de PCF02 expressas em cepas ETEC, como também de amostras ETEC do complexo CF AIIV, que sempre expressam a subunidade CS6 / Abstract: Some strains of Escherichia coZi may expresses differents mechanisms and virulences factors representing one of several highly adapted clones wich together have evolved the ability to cause a broad spectrum of human and animal diseases. With respect to enteric diarrheal diseases caused by E. coZi strains, seven categories of diarrheagenic E. coZi isolated from human stool cultures have been classified, based on clinical observations, mechanisms, virulence factors, epidemiologic studies, serotypes and molecular analysis. The group represented by enterotoxigenic E. coZi (ETEC) is identified by ST and or L T enterotoxins production and expression of colonization factors (CF). These adhesins allow bacteria colonization on the surface of the small bowel mucosa. Detection of CF in alI ETEC strains identified in the differents geographic regions of the world is impractical because of their great number and heterogeneity. Previous studies, a new putative colonization factor (PCF) was characterized in isolates of ETEC from human diarrheical stools at Ouro Preto (MG) Brazil, expressing just L T and belonging to sorogroup 02. This fimbriae was named PCF02, and with this purified antigen nine hybridomas secreting MAbs (monoclonal antibodies) against PCF02 were produced. For standardization of Inhibition ELISA Test to identify PCF02 in enterotoxigenics strains pools of these MAbs, belonging to isotypes 19A (4) and IgG2b (5), were tested using this immune reaction. After testes new five ETEC strains presented positive results to PCF02, alI belonging to serogroup 02. The aim of this study included improvement of the purification methods of this fimbriae and evidences confirming sensibility and specificity of Inhibition ELISA Test in PCF02 identification. The objectives propossed also included study of possible epitopes similarity between this fimbriae and the most frequently CF reported in epidemiological studies. Ours results confumed that Mabs belonging to 19A and IgG2b isotypes reacted with differents epitopes of PCFO2. With respect to IgG2b a new subunit or adhesin presenting about 15 kDa was identified in Westem blotting reactions in semi-purified proteic extraction of PCFO2 strain. Regarding to Inhibition ELISA Test developed with MAbs belonging to both isotypes datas confirmed expression of PCFO2 just by 312-2 and 312-3 isolates. Antigenic similarities was demonstrated between CS6 belonging to CF AIIV complex and PCFO2. Results demonstrated that D242 and D243 expresse CS5 and CS6. We conclude that the Inhibition ELISA Test developed with MAbs of isotype IgG2b were able to identify not just ETEC strains expressing PCFO2 but also expressing CS6, representing an important tool for the identification of these adhesins / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-10-19Bitstream added on 2014-06-13T19:40:41Z : No. of bitstreams: 1 scorzoni_l_dr_arafcf.pdf: 3179979 bytes, checksum: 1e778fd453c60b43b64a943d7b3e82a0 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A incidência de infecções fúngicas oportunistas tem aumentado nas últimas décadas devido à crescente proporção de pacientes imunocomprometidos em nossa sociedade. Candida krusei é descrita como um dos agentes de infecções fúngicas em pacientes susceptíveis. Embora sua prevalência seja baixa entre as infecções fúngicas (2-7%), a resistência intrínseca ao fluconazol torna esta levedura importante no contexto relacionado à epidemiologia e na procura de novas alternativas terapêuticas. Modelos de organismos não mamíferos são alternativas viáveis para estudar a virulência de fungos e eficácia de drogas. Neste trabalho utilizou-se Galleria mellonella e Caenorhabditis elegans como modelos para estudar a virulência e avaliar a eficácia antifúngica de anfotericina B e fluconazol durante a infecção por C. krusei, bem como cultura de macrófagos e testes de agrotransformação. No modelo de G. mellonella foi realizada a caracterização completa da interação de C. krusei por meio da determinação do índice de fagocitose, quantificação da densidade hemocitária, melanização, estudos de filamentação, carga fúngica e histopatologia. Além disso, foi realizado estudo de eficácia antifúngica entre G. mellonella e C. elegans mostrando resultados compatíveis entre os dois modelos. Além disso, utilizou-se cultura de macrófagos RAW 267.7 para verificar o efeito das duas drogas sobre a fagocitose e produção de citocinas quando as células foram infectadas com C. krusei. Não houve alterações quanto à fagocitose nesse modelo, entretanto a produção de TNF-α mostrou-se excessivamente aumentada com o tratamento com anfotericina sugerindo que além do efeito direto da droga existem também mecanismos de imunomodulação envolvidos nessa... / The incidence of opportunistic fungal infections has increased in the last decades due to the increasing proportion of immunocompromised patients. Candida krusei is described as one of the agents of fungal infections in susceptible patients. Although its prevalence is low among fungal infections (2-7%), the intrinsic resistance to fluconazole makes this yeast important in this context related to epidemiology and new therapies. Models of non-mammalian are viable alternatives to study virulence of fungi and drug efficacy. In this work we used Galleria mellonella and Caenorhabditis elegans as models for studying virulence and evaluate the efficacy of antifungal agent’s amphotericin B, fluconazole and caspofungin during infection by C. krusei, and C. albicans, as well as, macrophages and agrotransformation studies. The model of G. mellonella was done full characterization of the interaction with C. krusei by determining the phagocytosis index, measuring the density haemocytic, melanization, filamentation studies, fungal burden and histopathology. In addition, we conducted a study of antifungal efficacy between G. mellonella and C. elegans showing compatible results between the two models. Furthermore, we used macrophage culture RAW 267.7 to determine the effect of drugs amphotericin B and fluconazole on phagocytosis and production of cytokines when the cells were infected with C. krusei and C. albicans. There was no change on the phagocytosis in this model, however, the production of TNF-α was shown to be excessively increased with treatment with amphotericin suggesting that in addition to the direct effect of the drug, immunomodulation mechanisms are also involved in this response. The construction of transformants... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-01Bitstream added on 2014-08-13T18:00:44Z : No. of bitstreams: 1 000754734_20150701.pdf: 231621 bytes, checksum: 4c2f97d9c6c55f4efc6859a27924d8f8 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-07-01T11:47:20Z: 000754734_20150701.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-01T11:48:06Z : No. of bitstreams: 1 000754734.pdf: 1149581 bytes, checksum: 00a6992568f37a07b9de0817318cc468 (MD5) / A diarreia é um grave problema em potros até seis meses de vida, acarretando em prejuízos na equideocultura. Sendo assim os objetivos desta pesquisa foram realizar o estudo clínico e a identificação dos principais enteropatógenos e fatores de virulência, responsáveis pela diarreia em potros. Foram avaliados 56 potros com diarreia (GD) e 60 sem diarreia (GC) até 90 dias de vida. Foram realizados hemogasometria e hemograma dos animais do GD. Amostras fecais dos potros do GD e GC foram utilizadas para a identificação dos enteropatógenos. As principais alterações clínicas nos animais GD foram aumento da peristalse e da frequência de defecação (100,0%) e desidratação (67,8%). A hiperfibrinogenemia (26,8%), leucocitose (12,5%), linfocitose (37,5%) e neutrofilia (17,8), acidose metabólica (16%) e diminuição de bicarbonato (16%) foram os principais achados hematológicos. Ao menos um dos enteropatógenos pesquisados foi detectado no GD (50/56) e GC (48/60). Em 32% (16/50) das amostras positivas foi identificado um único enteropatógeno, enquanto que dois ou mais enteropatógenos foram detectados em 68% (34/50) das amostras. E. coli apresentou a maior frequência nos isolamentos dos potros com diarreia (62,5%), seguida da Salmonella spp. (25%); Strongyloides (25%); estrongilídeos (10,7%); Clostridium perfringens (10,7%); Rhodococcus equi (7,1%); Cryptosporidium spp. (5,4%); Clostridium difficile (1,8%); coronavírus (1,8%); Giardia sp. (1,8%). Conclui-se que a identificação dos animais desidratados e com graves alterações hidroeletrolíticas, bem como a necessidade de se detectar os agentes etiológicos e seus fatores de virulência, são importantes para direcionar o médico veterinário a definir medidas de controle e terapêutica adequados / Diarrhea is a serious problem in foals up to six months old, resulting in losses in equine business. The aims of this research were to perform the clinical study and the identification of main pathogens and virulence factors responsible for diarrhea in foals. A total of 56 foals with diarrhea (DG) and and 60 without diarrhea (CG) up to 90 days old were evaluated. Fecal samples of a (DG) and 60 without diarrhea (GC) up to 90 days old were evaluated. Hemogram and hemogasometry were performed in the animals of DG. Fecal samples of DG and GC were used to identify the enteropathogens. The main clinical findings in animals of GD were increased peristalsis and defecation frequency (100,%) and dehydration (67.8%). Hyperfibrinogenemia (26.8%), leukocytosis (12.5%), lymphocytosis (37.5%) and neutrophilia (17.8%), metabolic acidosis (16%) and decreased bicarbonate (16%) were the main hematologic findings. At least one of the enteropathogens studied was detected in DG (50/56) and in CG (48/60). In 32% (16/50) of positive samples was identified a single enteropathogen, while two or more enteropathogens were detected in 68% (34/50) of samples. E. coli showed the highest frequency in the isolations of foals with diarrhea (62.5%), followed by Salmonella spp. (25%); Strongyloides (25%); Strongyles (10.7%); C. perfringens (10.7%), Rhodococcus equi (7.1%); Cryptosporidium spp. (5.4%); C. difficile (1.8%), coronavirus (1.8), Giardia sp. (1.8%). In conclusion the identification of dehydrated animals and animals with severe electrolyte alterations as well as the need to detect the etiologic agents and their virulence factors are important to conduct the veterinarian to define control measures and appropriate therapy

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-11-30Bitstream added on 2014-06-13T20:44:12Z : No. of bitstreams: 1 santo_e_dr_jabo.pdf: 2769623 bytes, checksum: 67ca8d21675f50ba7c4d00ceff7f7038 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Esta pesquisa foi realizada em 23 açougues da cidade de T aquaritinga, estado de São Paulo, durante um período de 10 meses. Foram isoladas duzentas e oitenta e sete cepas de Escheríchía calí de carne moída, moedor de carne e mãos de manipuladores de carne. Cinco destas cepas foram caracterizadas como E.coli patogênica extra-intestinal (ExPEC). Investigou-se a presença de fímbrias, produção de hemolisina, aerobactina e colicina. Também foi analisada a presença dos genes (pap, afa, sfa) relacionados com a expressão de fímbrias, através da reação em cadeia da polimerase (PCR). Das amostras analisadas 100% apresentavam aerobactina e fímbria do tipo 1, 80% produziam hemolisina, e 60% expressaram colicina e fímbria P. Também foi verificado que 60% das cepas de ExPEC apresentavam o genótipo pap e 40% o genótipo pap-sfa concomitantemente. Quanto ao nível de resistência aos 12 antimicrobianos testados, observou-se que 80% das cepas eram resistentes a múltiplos antimicrobianos (3). Os antimicrobianos mais eficientes foram: ceftriaxona e amoxicilina-ácido clavulânico (0%) de resistência, seguidos de amicacina, amoxicilina, ciprofloxacina e gentamicina com resultado, considerado satisfatório, de 20% de resistência. Em contraste, houve elevada resistência (80%) para tetraciclina e estreptomicina . Conclui-se que retalhos de carne podem ser um importante veículo para disseminação na comunidade de cepas ExPEC. Este trabalho chama a atenção para os retalhos de carne como fonte potencial de cepas de ExPEC, que não são reconhecidas como patógeno de origem alimentar, o que pode representar um motivo de preocupação para as autoridades da vigilância epidemiológica. / For ten months, at Taquaritinga city, São Paulo State, we have conducted an malysis over meat conditions, at 23 butcheries. In this survey we collected. two hundred eighty seven generic Escherichia coli from ground beef, mincers and of the hands of neat manipulators. Five of these isolates were recognized as Extraintestinal Pathogenic :.coli (ExPEC) strains. The presence of fimbriae, hemolysin production, aerobactin and colicin. were lVestigated, as well the existence of genes (pap, ata, sfa) related to fimbriae !xpression, using a Polimerase Chain Reaction (PCR). In this ExPEC strains, we have verified the presence of aerobactin and fimbriae Ipe 1 (100%), hemolysin (80%) and related results for colicin and P fimbriae (60%). We Iso confirmed that 60% of ExPEC strains exhibited pap, and 40% were simultaneously, ap-sfa.. From twelve antimicrobial agents tested, we found a resistance levei (80%) to lultiple antimicrobial agents (~3). The most efficient antimicrobial agents were: 3ftriaxone and amoxacilin-clavulanic acid (0%) resistance, followed by a satisfactory resistance for amicacin, amoxacilin, ciprofloxacin and gentamicin (20%). In contrast, we lund a high levei of resistance (80%) for tetracycline and streptomycin. From this study, we have toncluded that meat can be a very important vehicle for community dissemination of ExPEC, which may represent a reason of concern.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:44Z : No. of bitstreams: 1 000851519.pdf: 1178190 bytes, checksum: 6da71571493874117e3f938393027381 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Escherichia coli diarreiogênica (ECD) representa uma das principais causas da diarreia infantil. Com base em seus mecanismos de virulência, podemos classificá-la em seis patotipos distintos: E. coli enteropatogênica (EPEC), E. coli enterotoxigênica (ETEC), E. coli enteroinvasora (EIEC), E. coli produtora da toxina Shiga (STEC), E. coli enteroagregativa (EAEC) e E. coli que adere difusamente (DAEC). O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência de ECD, entre crianças diarreicas (Pacientes) e crianças saudáveis (Controles), menores de cinco anos de idade, na cidade de Botucatu/SP. Foram analisadas amostras de fezes de 200 crianças com diarreia, atendidas no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, entre os meses de Março de 2013 a Setembro de 2014, e 200 crianças saudáveis. Isolados de E. coli foram classificados nos distintos patotipos de ECD pela pesquisa de marcadores de virulência específicos através de PCR e, posteriormente, foram caracterizados quanto ao padrão de aderência em células HeLa e resistência à drogas antimicrobianas. Os isolados portadores do locus of enterocyte effacement (eae+) foram submetidos ao teste de FAS (Fluorescence Actin Staining), para avaliar a capacidade desses isolados em induzir a lesão attaching and effacing (AE). Ademais, os isolados de EPEC e STEC tiveram seu antígeno somático (O), e flagelar (H) determinados. ECD foi isolada de 18,0% das crianças diarreicas, e em 19,0% das crianças saudáveis, sendo que nenhum patotipo de ECD pode ser individualmente associado com a doença diarreica (P0,05). O patotipo EAEC foi o mais frequente, tendo sido detectado em igual proporção entre crianças diarreicas e saudáveis (10,0%). Dentre os isolados de EPEC, 16 provenientes das fezes de crianças com diarreia e 18 provenientes de crianças saudáveis, somente um foi capaz de aderir às células HeLa no padrão localizado (AL), sendo esse o único isolado classificado... / Diarrheagenic Escherichia coli (DEC) comprises a major cause of child hood diarrhea. Based on their virulence mechanisms, DEC can be classified into six distinct pathotypes: enteropathogenic E. coli (EPEC), enterotoxigenic E. coli (ETEC), enteroinvasive E. coli (EIEC), enteroaggregative E. coli (EAEC), enterohemorrhagic E. coli (EHEC) and diffusely adherent E. coli (DAEC). This study aims to investigate the prevalence of DEC among diarrheal children (patients) and healthy children (controls), up to five years of age in Botucatu/SP. We analyzed stool samples from 200 children with diarrhea attended at Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, between March/2013 and September/2014, and 200 healthy children. E. coli isolates were classified in different pathotypes by detection of virulence markers (by PCR) and then, characterized regarding its adherence pattern to HeLa cells and antimicrobial resistance drugs. Isolates carrying the locus of enterocyte effacement (eae+) were submitted to FAS test (Fluorescence Actin Staining), to evaluate the ability of these isolates to induce attaching and effacing lesion (AE). In addition, EPEC and STEC isolates, had their somatic (O) and flagellar (H) antigens determined. DEC was isolated from 18.0% of diarrheal children, and 19.0% of healthy children, and none of the DEC pathotypes could be individually associated with the diarrheal disease (P>0.05). EAEC was the most frequent DEC pathotype, being detected in equal proportion between patients and controls (10.0%). Among the EPEC isolates, 16 from patients and 18 from controls, only one was able to produce the localized adherence (LA) pattern to HeLa cells, being this isolate the only typical EPEC (tEPEC) identified in this study. The remains EPEC isolates were classified as aEPEC (atypical EPEC), and detected in 8.0 and 8.5% of the patients and controls, respectively. STEC and ETEC were detected in only one child from each studied ... / FAPESP: 2013/05170-1

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:24:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-28. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:30:40Z : No. of bitstreams: 1 000851921.pdf: 11886045 bytes, checksum: 1cf15c01de888d44bc38aeeab19c7d88 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O aumento de micoses invasivas e o desenvolvimento de mecanismos de resistência de algumas espécies de fungos, frente aos fármacos utilizados na terapia, têm sido preocupante. O tratamento antifúngico, geralmente é agressivo e o surgimento da resistência antifúngica acrescenta dificuldades adicionais no tratamento dessas infecções. Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii são os principais agentes etiológicos da criptococose, e afetam principalmente pacientes imunodeprimidos. Nesse trabalho foi realizada a caracterização morfológica e da virulência de três isolados clínicos de C. neoformans e dois isolados ambientais de C. gattii em Galleria mellonella, além da análise do nível de expressão dos genes MDR1 e AFR1 envolvidos no funcionamento de bomba de efluxo, através da quantificação relativa por PCR (polimerase chain reaction) em tempo real. Uma vez esses genes quantificados, esses isolados foram usados na prospecção de moléculas sintéticas para verificação da atividade inibitória dos genes selecionados, após o contato com as mesmas. Os isolados foram classificados como sensível (26S), sensibilidade intermediária (27I) e resistente (30R) da espécie neoformans e da espécie C. gattii, um foi resistente (118R) e outro sensível (CL), in vitro, a fluconazol. As moléculas selecionadas para os testes foram o ácido gálico e seus derivados sintéticos, e os melhores resultados observados foram obtidos a partir dos galatos de alquila G11, G12, G14, G15, G16 e G17, apresentando ótima atividade antifúngica contra os isolados testados, em especial os galatos G14, G16 e G17, obtendo ótima atividade antifúngica. O galato de n-dodecila (G16), foi selecionado para os demais testes apresentando atividade aditiva no teste de sinergismo, quando utilizado em associação com fluconazol, reduzindo os valores de CIM para o mesmo, o que mostra a possível... / The increase of invasive mycoses and the development of antifungal resistance by some fungi species have been worrying. The antifungal treatment is usually aggressive and inefficient, and the emergence of antifungal resistance increases the difficulties in treating these fungi infections.Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii are the main etiologic agents of cryptococcosis andespecially affect immunocompromised patients. In this work the Galleria mellonella, was used to perform the morphologic characterization as well as determine the virulence of three sequential clinical isolates of C. neoformansand twoisolates environmental of C. gattii. In addition, was held the analysis of genes expressions (MDR1, ERG11 and AFR1), that are involved in efflux pumps and ergosterol synthesis, by real time PCR (polimerase chain reaction) assay. After these characterizations the isolates were used in the prospecting of synthetic molecules to verify the inhibitory activity of selected genes. After incubation in vitro with fluconazole the C.neoformans isolates were classified as sensitive (26S), intermediate sensitivity (27I) and resistant (30R), and the C. gattiiisolates were resistant (118R) and the other sensitive (LC). The galic acid molecules and their synthetic derivatives were tests against C.neoformans and C. gattii isolates.The best results were obtained from alkyl gallates G11, G12, G14, G15, G16 and G17 which shows a great antifungal activity, especially G14, G16 e G17. The gallate n-dodecyl (G16), was select to others tests once presented additive activity in synergism test with fluconazole, decreasing the MIC values. The gene expression assay shows that both isolates expressed MDR1 and AFR1 (encoding efflux pumps), and the G16 was capable to inhibit these genes which makes this molecule promising for inhibiting efflux. With virulence assays using the G. mellonella was possible ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-27Bitstream added on 2014-06-13T18:26:13Z : No. of bitstreams: 1 alencar_jrcc_me_jabo.pdf: 452079 bytes, checksum: 64ef6d14a56bc4bdcb0ceb200761c268 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O isolamento geográfico de populações de uma mesma espécie de inseto pode resultar em alterações fisiológicas, originando populações com suscetibilidade diferente às diversas táticas de controle. Plutella xylostella, a traça-das-crucíferas é uma praga cosmopolita específica das Brassicaceaes, apresentando problemas de resistência à inseticidas químicos e biológicos. O objetivo deste trabalho foi determinar a influência da variabilidade populacional da traça-das-crucíferas na eficiência das táticas de controle com micro-organismos entomopatogênicos. Foram utilizados os métodos de sequenciamento do gene COI e ISSR-PCR para aferir a variabilidade populacional entre quatro populações da praga, e estudou-se a suscetibilidade delas às táticas de controle com o fungo entomopatogênico Beauveria bassiana (20 isolados), nematoides entomopatogênicos (quatro espécies) e bactérias simbiontes de nematoides entomopatogênicos (dez isolados), avaliando-se o consumo foliar, a multiplicação do entomopatógeno no hospedeiro e estudando os aspectos biológicos em busca de efeitos subletais. . Foram selecionados seis isolados de B. bassiana e as quatro espécies de nematoides, pois foram as mais virulentas à praga. As populações são distintas devido sua variabilidade e isso resulta em diferenças no desenvolvimento de insetos que sobrevivem a aplicação dos entomopatógenos, inclusive na virulência de Steinernema brazilense sobre a população de Jaboticabal. Foi constatada também a redução de consumo foliar nos tratamentos com os entomopatógenos / The geographical isolation of same species populations can result in physiological changes, resulting in populations with different susceptibility to various control tactics. Plutella xylostella, is a specific pest of Brassicaceaes widely spread around the globe, presenting problems with chemical and biological insecticides resistance. The aim of this study was to determine the influence of Diamondback moth populational variability in the efficiency of control tactics with entomopathogenic microorganisms. The methods used were sequencing of the COI gene and ISSR-PCR to measure the population variability among four populations of the pest, and the study of their susceptibility to tactics control with the entomopathogenic fungus B. bassiana (twenty strains), entomopathogenic nematodes (four species) and symbiotic bacteria of entomopathogenic nematodes (ten strains), evaluating leaf consumption, the multiplication of the pathogen in the host and studying the biological aspects in search of sub lethal effects. Six isolates of B. bassiana and four species of nematodes were selected, as were the more virulent to the pest. The populations are distinct because due the genetic, variability and and that results in differences in the development of insects that survive the entomopathogens application, including the virulence of Steinernema brazilense on the population of Jaboticabal. It was also found to reduce leaf consumption in the emtomopathogens treatments

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-19Bitstream added on 2014-06-13T19:43:15Z : No. of bitstreams: 1 tansini_a_dr_arafcf.pdf: 666076 bytes, checksum: 4a336ba4a2f0d99a602646cc539929be (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A infecção por Y. pseudotuberculosis é uma causa de doenças intestinais e extraintestinais. A resolução da infecção está relacionada à ativação de células Th1, entretanto, pouco se conhece sobre a influência de outras subpopulações de linfócitos T, como Th17 e Treg, na regulação dessa infecção. Células dendríticas são capazes de orientar a resposta imune adaptativa através da produção de citocinas e apresentação de antígenos às células T, tornando essas células essenciais na ativação e diferenciação de linfócitos T. Desse modo, o presente trabalho avaliou o papel de distintas subpopulações de linfócitos T e a influência de células dendríticas no desenvolvimento da resposta imune contra a infecção por Y. pseudotuberculosis. Para tanto, foram avaliadas as subpopulações de linfócitos T CD4+, CD8+ e Foxp3+, presentes durante a infecção por Y. pseudotuberculosis e amostras bacterianas mutantes para fatores de virulência Yops, bem como a expressão de citocinas intracelulares (IL-2, IL-4, IL-10, IL-17, IFN-γ, TNF-α e TGF-β) por estas células. O papel de linfócitos Treg e Th17 no controle da bactéria foi analisado por meio de ensaio de depleção de células CD25+ e neutralização de IL-17. Além disso, a influência de células dendríticas na modulação da resposta imune contra Y. pseudotuberculosis foi estudada através da determinação da produção de citocinas (IL-6, IL-12, IL-10, IL-23, TNF-α e TGF-β) e co-cultivo com linfócitos T obtidos de animais imunizados com antígenos de Y. pseudotuberculosis. Os resultados mostraram redução na produção de citocinas pró-inflamatórias por células dendríticas infectadas com a amostra bacteriana portadora do plasmídeo de virulência, em ambas as linhagens de camundongos estudadas... / Y. pseudotuberculosis infection is a cause of intestinal and extraintestinal diseases. Infection resolution is related to the activation of Th1 cells, however, little is known about the influence of other T cells subsets, like Th17 and Treg, in the control of this infection. Dendritic cells are capable of directing the adaptive immune response by producing cytokines and presenting antigens to T cells, making them essential to T lymphocytes activation and differentiation. Thus, this study evaluated the role of different T lymphocytes subsets and the influence of dendritic cells on the development of the immune response against Y. pseudotuberculosis infection. Here, we evaluated the T cells subsets CD4+, CD8+ and Foxp3+, present during Y. pseudotuberculosis infection and mutant samples bacterial virulence factors, and also the intracellular expression of cytokines (IL-2, IL-4, IL-10, IL-17, IFN-γ, TNF-α and TGF-β) by these cells. The role of Th17 and Treg cells in controlling the bacteria was analyzed by tests of depleted CD25+ cells and IL-17 neutralization. Furthermore, the influence of dendritic cells in modulating the immune response against Y. pseudotuberculosis was studied by determining the cytokine production (IL-6, IL-12, IL-10, IL-23, TNF-α and TGF-β) and co-culture with lymphocytes from animals immunized with Y. pseudotuberculosis antigens. The results showed a reduction in proinflammatory cytokines production by dendritic cells infected with bacteria carrying the bacterial virulence plasmid, in both mice strains studied... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-26Bitstream added on 2015-04-09T12:47:49Z : No. of bitstreams: 1 000817299.pdf: 639613 bytes, checksum: 3a27811ced1e1d8bc5861bd392515794 (MD5) / Embora Escherichia coli não seja um microrganismo natural do trato intestinal de peixes, sabe-se que a microbiota desses animais está diretamente relacionada à qualidade microbiológica da água em que vivem. Para avaliar a frequência de Escherichia coli shigatoxigênica (STEC) e enteropatogênica (EPEC), foram coletadas um total de 472 amostras de fezes e musculatura de peixes da espécie Oreochromis niloticus (tilápia), bem como da água em que viviam. Nos animais provenientes de pisciculturas, somente uma estirpe STEC (0,2%) foi isolada, e esta apresentou resistência a diversos antimicrobianos das classes das quinolonas, tetraciclinas, aminoglicosídeos e anfenicóis, enquanto em peixes de vida livre, seis estirpes (6%) foram isoladas, sendo cinco STEC e uma EPECa. Todas as STEC foram classificadas como patogênicas pelo grupamento filogenético e a EPECa, comensal. Além disso, foram detectados os genes de virulência astA, ehxA, saa, efa1, paa e lpfAO113 e os sorogrupos O55, O39, O116, H14, H18 e H36. Em relação às variantes da toxina Stx2, foi observada a rara combinação dos subtipos stx2a, stx2c e stx2d em um mesmo isolado. De acordo com a análise de similaridade genética, os isolados são bastante heterogêneos e apresentaram origem clonal diversificada. Os resultados desse estudo evidenciaram que os peixes têm o potencial de transmissão de E. coli diarreiogênicas para o ser humano, e também o possível uso indiscriminado de antimicrobianos na criação intensiva desses animais / Although Escherichia coli is not an organism typically found in the fish gut, the microbiota of these animals is directly related to the quality of water in which they live. To evaluate the frequency of shigatoxigenic (STEC) and enteropathogenic (EPEC) Escherichia coli, a total of 472 fish fecal and muscle samples were collected (Oreochromis niloticus, called tilapia), as well as the water in which the fish lived. In animals from fish farms, only one STEC strain (0.2%) was isolated, and showed resistant to several antimicrobial of the quinolone, tetracycline, aminoglycoside and amphenicol classes. In wild fish, six isolates (6%) were obtained, five STEC and one aEPEC. All STEC were classified as pathogenic by phylogenetic grouping, and aEPEC was commensal. In addition, astA, ehxA, saa, efa1, paa, lpfAO113 virulence genes, and O55, O39, O116, H14, H18 and H36 serogroups were detected. Regarding Stx2 toxin variants, an unusual combination of stx2a, stx2c and stx2d subtypes was observed. According to the analysis of genetic similarity, the isolates are heterogeneous and showed a diversified clonal origin. The results of this study demonstrated that fish have the potential to transmit diarrheagenic E. coli to humans, as well as the possible indiscriminate use of antimicrobials in the intensive farming of these animals

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-01-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:48:18Z : No. of bitstreams: 1 000831958_20160129.pdf: 141405 bytes, checksum: a56af035cf777e68b39f9624adee2a7e (MD5) Bitstreams deleted on 2016-01-29T12:35:59Z: 000831958_20160129.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-29T12:36:36Z : No. of bitstreams: 1 000831958.pdf: 462812 bytes, checksum: 2070c5ce1422e2b78e58a79e3c1e4034 (MD5) / Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) é uma categoria de E. coli de interesse em saúde pública, pois é responsável por causar diarréia, principalmente em crianças de países em desenvolvimento. Um total de 68 estirpes EPEC isoladas de humanos e animais (búfalos, ovinos e suínos) foram analisadas para marcadores de virulência e submetidos à sorotipagem, subtipagem do gene eae e similaridade clonal por eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). Os resultados da PCR demonstraram que seis isolados de humanos possuíam o gene bfp (EPEC típica), enquanto que 62 estirpes possuíam apenas o gene eae (EPEC atípica). Essas estirpes de EPEC pertenciam a 39 sorotipos (O: H) incluindo sorotipos clássicos de EPEC que estão relacionados a doenças em humanos, como O26:H11, O128:H2 e outros sorotipos relacionados a pessoas com diarreia, como O8:H16 e O76:H7. Seis tipos de intimina foram detectados entre as 68 estirpes de EPEC. São elas a 1, 2, 1, , e . A análise do PFGE, após a digestão Xbal, foi realizada nas 68 estirpes de EPEC. Os isolados se mostraram heterogêneos no PFGE e apresentaram 55 perfis diferentes. Quanto a filogenia, a maioria das estirpes de EPEC foram classificadas dentro do grupo B1. Além disso, algumas estirpes foram classificadas no grupo D, que são constituídos por estirpes de E. coli que podem causar infecções extra-intestinais. A presença de tipos de EPEC potencialmente patogênicas para humanos e EPEC isoladas de animais com características genéticas e fenotípicas em comum indica que a transmissão de agentes zoonoticos pode ocorrer. Portanto, o papel destes animais como reservatórios de EPEC deve ser considerado nas investigações de surtos de diarreia / Escherichia coli (EPEC) is a category of E. coli in interest in public health, as it is responsible for causing diarrhea, especially in children in developing countries. A total of 68 strains of EPEC isolated from humans and animals (buffalo, sheep and pigs) were analyzed for virulence markers, serotyping, subtyping of the eae gene and similarity clonal by electrophoresis in pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). The PCR results showed that six human isolates had the bfp gene (typical EPEC), and 62 strains only had the eae gene (atypical EPEC). These strains belonged to 39 EPEC O: H serotypes including classical EPEC that are related to diseases in humans, such as O26: H11, O128: H2 and other serotypes that were related to people with diarrhea, as O8: H16 and O76:H7. Six types of intimin were detected among the 68 strains of EPEC, and 1, 2, 1, , and . The PFGE analysis, after XbaI digestion was performed on 68 strains of EPEC. The isolates were shown in heterogeneous PFGE and had 55 different profiles. Regarding the Phylogeny most strains of EPEC were classified into the group B1. Furthermore, some strains have been classified in group D, which consist of the E. coli strains that cause extra-intestinal infections. The presence of potentially pathogenic for humans types of EPEC and EPEC strains isolated from animals that may indicate disease transmission between animals and humans can occur and have an impact on public health. Furthermore, the role of these animals as EPEC carriers should be considered in outbreak investigations diarrhea. Keywords: EPEC, virulence genes, PFGE, zoonosis