Orientador: Siu Mui Tsai / Banca: Marco Aurelio Takita / Banca: Mauricio Bacci Junior / Resumo: Linhagens de Xylella fastidiosa de diferentes hospedeiros, incluindo citros, café, pêssego, videira entre outros, foram utilizadas para construir uma relação filogenética a partir da análise de seqüências completas de nucleotídeos do espaço intergênico 16S-23S rDNA. Dadas as dificuldades encontradas frente ao uso dos primers utilizados para o sequenciamento da região genômica em questão, fez-se necessária a construção de novos primers baseada em dados após alinhamento e comparação com as seqüências disponibilizadas pelo NCBI e com as obtidas neste trabalho. Os "primers" propostos previamente para amplificação da região 16S-23S em Xylella fastidiosa, foram também testados sem muito sucesso uma vez que produzem fragmentos muito extensos e, para a obtenção de seqüências adequadas seria necessário o uso de outras técnicas moleculares mais dispendiosas para obtenção da seqüência completa, o que levaria tempo e custo maiores. Os métodos utilizados tanto para alinhamento de seqüências bem como a construção da árvore filogenética são baseados no princípio cladístico. As seqüências completas do espaço intergênico obtidas, revelaram um nível de variação de bases maior do que a encontrada em seqüências do gene 16S do mesmo organismo (99,0 a 100%), com valores de similaridade que variam em torno de 80 a 100%. A linhagem originada de plantas de pêra, que apresentou uma maior discrepância nos valores, foi tomada como um grupo externo aos dos outros hospedeiros. Baseado no cladograma apresentado, os resultados revelaram que as linhagens de citros e café puderam ser separadas quando se usa o método cladístico de análise, já pela metodologia baseada em princípios fenéticos esta separação não foi possível. Foi possível também agrupar os isolados em três... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: The phylogenetic relationships among Xylella fastidiosa isolates from different hosts were studied, using primers specific for the 16S-23S rDNA intergenic spacer region. Strains isolated from a wide range of host plants were studied - citrus, coffee, grapevine, elm, periwinkle, and others. Current methods for sequencing the 16S-23S spacer regions are laborious because of the large fragment obtained when using the specific primers. Nevertherless, the sequences obtained with this primers did not contribute with significant information, as only partial sequences were obtained. It's necessary other methods to complement in order to obtain a complete sequence of the spacer region. This methods include cloning and the use of internal primers. In order to establish an easier method to sequencing the spacer region, were constructed a new primer pair to facilitated the sequencing and the sequences obtained was complete. The 16S-23S intergenic spacer region analysis showed a higher level of variation than that found in 16S sequences, with similarity values ranging from 80% to 100%. The pear strain, that showed the most variable values, was used as the outgroup. The cladogram constructed by using cladistic methods allowed the grouping of three major clusters: the citrus-coffee-some grapevines- mulberry, the periwinkle-ambrosia, and the others hosts. The citrus and coffee strains could be phylogeneticly separated from this method while by the 16S sequences and the 16S-23S by the phenetic method they couldn't. A phenogram based on similarity data is useful for observing relationships based on share characters. However, its does not necessarily represent the evolutionary histry of the taxa. With the cladistic approach, hypothetical genealogical relationships among Xylella fastidiosa strains... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-07-19Bitstream added on 2014-06-13T18:29:34Z : No. of bitstreams: 1 facincani_ap_me_jabo.pdf: 1373718 bytes, checksum: b53fbfa950bc393c0258f8d1ac8b5755 (MD5) / Muitas das questões relacionadas a como Xylella fastidiosa vive num ambiente cuja concentração de nutrientes é baixa, e como e porquê ela forma agregados nos vasos do xilema, devem estar relacionados com seu metabolismo. O seqüenciamento deste organismo forneceu informações para serem aplicadas em estudos genéticos funcionais, visando à elucidação da funcionalidade de vias metabólicas que possam estar intimamente ligadas à etiologia do amarelinho. O presente estudo foi conduzido com o objetivo de verificar a funcionalidade da via Glicolítica de X. fastidiosa através de estudo das isoenzimas fosfoglicose isomerase, aldolase ou gliceraldeído-3-fosfato liase, gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase e piruvato quinase presentes na via Glicolítica e a glicose 6-fosfato desidrogenase presente na Entner-Doudoroff, bem como a clonagem, expressão e a determinação da atividade da enolase. O gene da enolase é uma das 35 ORFs anotadas no cosmídeo 02F10, denominada XF1291. Estes estudos sugerem que a bactéria X. fastidiosa não utiliza a via Glicolítica no metabolismo de carboidratos, inferindo assim no elevado tempo de duplicação deste fitopatógeno. As atividades enzimáticas da enolase recombinante, da enolase nativa e das isoenzimas aldolase e gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase não foram detectadas, sugerindo que a X. fastidiosa utiliza a via Entner-Doudoroff para a formação de piruvato. São apresentadas evidências de que a regulação gênica e a presença de isoformas, com propriedades regulatórias diferentes, podem dificultar a compreensão do metabolismo de carboidratos em X. fastidiosa. / Many of the questions related to how Xylella fastidiosa lives in an environmental with low concentration of nutrients, and the reason why she forms aggregates in xylem vessels should be related with its metabolism. However, the sequencing this organism provided information to be applied in functional genetic studies. These studies focus on elucidating the functionality of metabolic pathways that might be intimately involved in amarelinho etiology. The objective of this study was to verify the functionality of the Glycolytic pathways by studying the isozymes phosphoglucose isomerase, aldolase or glyceraldehyde-3-phosphato-lyase, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase and pyruvate kinase in the Glycolytic pathway and glucose-6-phosphate dehydrogenase in Entner-Doudoroff pathway, as well as the cloning and expression of enolase and determination of its activity. The enolase gene is one of 35 ORFs annoted in 02F10 cosmid and denominated XF 1291. These studies suggested that X. fastidiosa bacterium does not use the Glycolitic pathway in the metabolism of carbohydrates, which might explain the long time of duplication presented by this phytopathogen. The enzymatic activities of recombinant enolase, native enolase and isozymes aldolase and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase have not been detected, suggesting that X. fastidiosa uses the Entner-Doudoroff pathway to produce pyruvate. Evidences are presented that the regulation of genes and the presence of isoforms with different properties of regulation can make it difficult to understand the metabolism of carbohydrates in X. fastidiosa.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-05-22Bitstream added on 2014-06-13T19:28:40Z : No. of bitstreams: 1 martinati_ja_me_rcla.pdf: 362018 bytes, checksum: 52f2a691f2a1ec67ccf4b3cf6fda2d9e (MD5) / Linhagens de Xylella fastidiosa de diferentes hospedeiros, incluindo citros, café, pêssego, videira entre outros, foram utilizadas para construir uma relação filogenética a partir da análise de seqüências completas de nucleotídeos do espaço intergênico 16S-23S rDNA. Dadas as dificuldades encontradas frente ao uso dos primers utilizados para o sequenciamento da região genômica em questão, fez-se necessária a construção de novos primers baseada em dados após alinhamento e comparação com as seqüências disponibilizadas pelo NCBI e com as obtidas neste trabalho. Os primers propostos previamente para amplificação da região 16S-23S em Xylella fastidiosa, foram também testados sem muito sucesso uma vez que produzem fragmentos muito extensos e, para a obtenção de seqüências adequadas seria necessário o uso de outras técnicas moleculares mais dispendiosas para obtenção da seqüência completa, o que levaria tempo e custo maiores. Os métodos utilizados tanto para alinhamento de seqüências bem como a construção da árvore filogenética são baseados no princípio cladístico. As seqüências completas do espaço intergênico obtidas, revelaram um nível de variação de bases maior do que a encontrada em seqüências do gene 16S do mesmo organismo (99,0 a 100%), com valores de similaridade que variam em torno de 80 a 100%. A linhagem originada de plantas de pêra, que apresentou uma maior discrepância nos valores, foi tomada como um grupo externo aos dos outros hospedeiros. Baseado no cladograma apresentado, os resultados revelaram que as linhagens de citros e café puderam ser separadas quando se usa o método cladístico de análise, já pela metodologia baseada em princípios fenéticos esta separação não foi possível. Foi possível também agrupar os isolados em três... . / The phylogenetic relationships among Xylella fastidiosa isolates from different hosts were studied, using primers specific for the 16S-23S rDNA intergenic spacer region. Strains isolated from a wide range of host plants were studied - citrus, coffee, grapevine, elm, periwinkle, and others. Current methods for sequencing the 16S-23S spacer regions are laborious because of the large fragment obtained when using the specific primers. Nevertherless, the sequences obtained with this primers did not contribute with significant information, as only partial sequences were obtained. It's necessary other methods to complement in order to obtain a complete sequence of the spacer region. This methods include cloning and the use of internal primers. In order to establish an easier method to sequencing the spacer region, were constructed a new primer pair to facilitated the sequencing and the sequences obtained was complete. The 16S-23S intergenic spacer region analysis showed a higher level of variation than that found in 16S sequences, with similarity values ranging from 80% to 100%. The pear strain, that showed the most variable values, was used as the outgroup. The cladogram constructed by using cladistic methods allowed the grouping of three major clusters: the citrus-coffee-some grapevines- mulberry, the periwinkle-ambrosia, and the others hosts. The citrus and coffee strains could be phylogeneticly separated from this method while by the 16S sequences and the 16S-23S by the phenetic method they couldn't. A phenogram based on similarity data is useful for observing relationships based on share characters. However, its does not necessarily represent the evolutionary histry of the taxa. With the cladistic approach, hypothetical genealogical relationships among Xylella fastidiosa strains... (Complete abstract, click electronic address below).

Resumo: Muitas das questões relacionadas a como Xylella fastidiosa vive num ambiente cuja concentração de nutrientes é baixa, e como e porquê ela forma agregados nos vasos do xilema, devem estar relacionados com seu metabolismo. O seqüenciamento deste organismo forneceu informações para serem aplicadas em estudos genéticos funcionais, visando à elucidação da funcionalidade de vias metabólicas que possam estar intimamente ligadas à etiologia do amarelinho. O presente estudo foi conduzido com o objetivo de verificar a funcionalidade da via Glicolítica de X. fastidiosa através de estudo das isoenzimas fosfoglicose isomerase, aldolase ou gliceraldeído-3-fosfato liase, gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase e piruvato quinase presentes na via Glicolítica e a glicose 6-fosfato desidrogenase presente na Entner-Doudoroff, bem como a clonagem, expressão e a determinação da atividade da enolase. O gene da enolase é uma das 35 ORFs anotadas no cosmídeo 02F10, denominada XF1291. Estes estudos sugerem que a bactéria X. fastidiosa não utiliza a via Glicolítica no metabolismo de carboidratos, inferindo assim no elevado tempo de duplicação deste fitopatógeno. As atividades enzimáticas da enolase recombinante, da enolase nativa e das isoenzimas aldolase e gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase não foram detectadas, sugerindo que a X. fastidiosa utiliza a via Entner-Doudoroff para a formação de piruvato. São apresentadas evidências de que a regulação gênica e a presença de isoformas, com propriedades regulatórias diferentes, podem dificultar a compreensão do metabolismo de carboidratos em X. fastidiosa. / Abstract: Many of the questions related to how Xylella fastidiosa lives in an environmental with low concentration of nutrients, and the reason why she forms aggregates in xylem vessels should be related with its metabolism. However, the sequencing this organism provided information to be applied in functional genetic studies. These studies focus on elucidating the functionality of metabolic pathways that might be intimately involved in "amarelinho" etiology. The objective of this study was to verify the functionality of the Glycolytic pathways by studying the isozymes phosphoglucose isomerase, aldolase or glyceraldehyde-3-phosphato-lyase, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase and pyruvate kinase in the Glycolytic pathway and glucose-6-phosphate dehydrogenase in Entner-Doudoroff pathway, as well as the cloning and expression of enolase and determination of its activity. The enolase gene is one of 35 ORFs annoted in 02F10 cosmid and denominated XF 1291. These studies suggested that X. fastidiosa bacterium does not use the Glycolitic pathway in the metabolism of carbohydrates, which might explain the long time of duplication presented by this phytopathogen. The enzymatic activities of recombinant enolase, native enolase and isozymes aldolase and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase have not been detected, suggesting that X. fastidiosa uses the Entner-Doudoroff pathway to produce pyruvate. Evidences are presented that the regulation of genes and the presence of isoforms with different properties of regulation can make it difficult to understand the metabolism of carbohydrates in X. fastidiosa. / Orientadora: Maria Inês Tiraboschi Ferro / Coorientador: João Martins Pizauro Junior / Banca: Julio Cezar Franco de Oliveira / Banca: Luiz Roberto Furlan / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-16Bitstream added on 2014-06-13T20:29:44Z : No. of bitstreams: 1 probst_is_me_botib.pdf: 1176165 bytes, checksum: 785a86c28d825ef0c145ca1427d82c9e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As pesquisas sobre as propriedades medicinais de plantas estão focadas em diversas áreas, tendo a atividade antimicrobiana e o uso potencial contra linhagens multirresistentes recebido atenção especial. O presente trabalho teve como objetivo geral avaliar o potencial antimicrobiano de sete óleos essenciais (OE) isoladamente, e verificar o possível sinergismo de alguns destes OE quando combinados entre si e com antimicrobianos padronizados sobre linhagens bacterianas de importância clínica com perfis de resistência diferenciados, sendo estas de Staphylococcus aureus (linhagens meticilina-resistentes, MRSA, e meticilina-sensível, MSSA), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa (todos isolados clínicos humanos) e Salmonella spp. (isolados clínicos e de alimentos). Os ensaios foram divididos em duas etapas. Inicialmente (Artigo I), foi obtida a Concentração Inibitória Mínima (CIM) para os óleos de assa-peixe (Vernonia polyanthes L.), alecrim (Rosmarinus officinalis L.), alecrim do campo (Baccharis dracunculifolia D.C.), cravo da Índia (Caryophyllus aromaticus L.), canela (Cinnamomum zeyalnicum L.),camomila (Matricaria recutita L.) e pitanga (Eugenia uniflora L.), através da metodologia de diluição em Agar. Os OE foram caracterizados através de cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG-EM), sendo a composição química de cada óleo relacionada com sua atividade sobre os diferentes perfis bacterianos. Na segunda parte do estudo (Artigo II), baseando-se no potencial de ação e rendimento de extração dos óleos, foi avaliado o sinergismo entre os quatro óleos com maiores potenciais, bem como a atividade conjunta destes com tetraciclina e oxacilina frente S. aureus, E. coli e P. aeruginosa. A combinação entre os OE e antibióticos foi testada utilizando a metodologia de difusão em discos. O potencial... / Research about medicinal properties of plants is focused on several areas, and its antimicrobial activities and potential use against multiresistant strains have received special attention. This study aimed to assess the antimicrobial potential of seven essential oils (EO) alone, and the possible synergism of some of these EO when combined with each other and with standard antimicrobials against clinically important bacterial strains with different resistance profiles, among them, Staphylococcus aureus (methicillin-resistant (MRSA) and methicillin-sensitive (MSSA) STRAINS), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa (all human clinical isolates), and Salmonella spp. (clinical and food samples). The tests were divided into two steps. Initially (Article I), we obtained the minimum inhibitory concentration (MIC) for assa peixe (Vernonia polyanthes L.), rosemary (Rosmarinus officinalis L.), alecrim do campo (Baccharis dracunculifolia DC), clove (Caryophyllus aromaticus L.), cinnamon (Cinnamomum zeyalnicum L.), chamomile (Matricaria recutita L.) and Brazilian cherry (Eugenia uniflora L.) oils, by agar dilution method. The OE were characterized by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and the chemical composition of each oil was related to the antimicrobial activity against the different bacterial profiles. In the second part of the study (Article II), based on the action potential and yield of extraction of the oils, we evaluated the synergism between the four oils with higher potential, as well as the synergism with tetracycline and oxacillin against S. aureus, E. coli and P. aeruginosa. The combinations between EO and antibiotics were tested by the disc diffusion method. The synergistic potential of the oils was also evaluated by this method and by the microdilution. The possible interaction between the oils was also verified... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Ary Fernandes Junior / Banca: Maria de Lourdes Ribeiro da Cunha / Banca: Rosemeire Cristina Linhari Pietro / Resumo: As pesquisas sobre as propriedades medicinais de plantas estão focadas em diversas áreas, tendo a atividade antimicrobiana e o uso potencial contra linhagens multirresistentes recebido atenção especial. O presente trabalho teve como objetivo geral avaliar o potencial antimicrobiano de sete óleos essenciais (OE) isoladamente, e verificar o possível sinergismo de alguns destes OE quando combinados entre si e com antimicrobianos padronizados sobre linhagens bacterianas de importância clínica com perfis de resistência diferenciados, sendo estas de Staphylococcus aureus (linhagens meticilina-resistentes, MRSA, e meticilina-sensível, MSSA), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa (todos isolados clínicos humanos) e Salmonella spp. (isolados clínicos e de alimentos). Os ensaios foram divididos em duas etapas. Inicialmente (Artigo I), foi obtida a Concentração Inibitória Mínima (CIM) para os óleos de assa-peixe (Vernonia polyanthes L.), alecrim (Rosmarinus officinalis L.), alecrim do campo (Baccharis dracunculifolia D.C.), cravo da Índia (Caryophyllus aromaticus L.), canela (Cinnamomum zeyalnicum L.),camomila (Matricaria recutita L.) e pitanga (Eugenia uniflora L.), através da metodologia de diluição em Agar. Os OE foram caracterizados através de cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG-EM), sendo a composição química de cada óleo relacionada com sua atividade sobre os diferentes perfis bacterianos. Na segunda parte do estudo (Artigo II), baseando-se no potencial de ação e rendimento de extração dos óleos, foi avaliado o sinergismo entre os quatro óleos com maiores potenciais, bem como a atividade conjunta destes com tetraciclina e oxacilina frente S. aureus, E. coli e P. aeruginosa. A combinação entre os OE e antibióticos foi testada utilizando a metodologia de difusão em discos. O potencial... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Research about medicinal properties of plants is focused on several areas, and its antimicrobial activities and potential use against multiresistant strains have received special attention. This study aimed to assess the antimicrobial potential of seven essential oils (EO) alone, and the possible synergism of some of these EO when combined with each other and with standard antimicrobials against clinically important bacterial strains with different resistance profiles, among them, Staphylococcus aureus (methicillin-resistant (MRSA) and methicillin-sensitive (MSSA) STRAINS), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa (all human clinical isolates), and Salmonella spp. (clinical and food samples). The tests were divided into two steps. Initially (Article I), we obtained the minimum inhibitory concentration (MIC) for assa peixe (Vernonia polyanthes L.), rosemary (Rosmarinus officinalis L.), alecrim do campo (Baccharis dracunculifolia DC), clove (Caryophyllus aromaticus L.), cinnamon (Cinnamomum zeyalnicum L.), chamomile (Matricaria recutita L.) and Brazilian cherry (Eugenia uniflora L.) oils, by agar dilution method. The OE were characterized by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and the chemical composition of each oil was related to the antimicrobial activity against the different bacterial profiles. In the second part of the study (Article II), based on the action potential and yield of extraction of the oils, we evaluated the synergism between the four oils with higher potential, as well as the synergism with tetracycline and oxacillin against S. aureus, E. coli and P. aeruginosa. The combinations between EO and antibiotics were tested by the disc diffusion method. The synergistic potential of the oils was also evaluated by this method and by the microdilution. The possible interaction between the oils was also verified... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Fabiana Pilarski / Banca: Jonas Augusto Rizzato Paschoal / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Resumo: Os surtos de bacterioses na piscicultura são imprevisíveis, por essa razão é necessário dispor de opções terapêuticas eficazes para reduzir a morbidade e mortalidade. Para que a terapia seja eficaz, a escolha do antimicrobiano deve se basear nas informações farmacocinéticas do fármaco no hospedeiro, nas condições de produção e na sensibilidade do patógeno. No Brasil, atualmente só dois antimicrobianos são legalizados para uso na aquicultura, a oxitetraciclina (OTC) e o florfenicol (FFC), os quais muitas vezes são ineficazes. Destes, somente o FFC é autorizado para tratar bacterioses em tilápia-do-Nilo, a espécie mais produzida no país. Este cenário nos levou a investigar a atividade antimicrobiana do tianfenicol (TAF) contra as principais bactérias patogênicas de peixes cultivados no Brasil. Foi determinada a concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM) do TAF para 49 cepas isoladas de surtos de bacteriose ocorridos no período 2011 a 2017 em três estados. Adicionalmente, avaliou-se a atividade antimicrobiana do TAF (G1: 10 mg/kg), do FFC (G2: 10 mg/kg) e da combinação do TAF com o FFC (G3: TAF+FFC: 5 + 2,5 mg/kg e G4: 2,5 + 1,25 mg/kg) no tratamento de aeromonose em tilápia-do-Nilo experimentalmente infectadas com Aeromonas hydrophila. Como resultado do estudo in vitro, mais da metade das cepas testadas foram sensíveis ao TAF, sendo que os gêneros Aeromonas, Lactococcus e Vibrio foram os mais sensíveis. No estudo in vivo, o TAF foi eficaz no ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Outbreaks of bacterial diseases in fish farm are unpredictable; therefore, it is necessary to have effective therapeutic options to reduce the morbidity and mortality. For effective therapy, the anticipated pharmacokinetics and antibacterial activity of the antimicrobial in the target fish species under the given conditions must be considered before decide which antimicrobial to use. In Brazil, only two antimicrobials are approved for use in aquaculture, oxytetracycline (OTC) and florfenicol (FFC), which are often innefective. Moreover, only FFC is approved for use to treat bacterial diseases in Nile tilapia, the main specie in Brazil. This scenario led us to investigate the antibacterial activity o thiamphenicol (TAP) against the main bacteria infecting fishes in Brazil. Minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of TAP were determined for 49 strains isolated from diseases outbreaks registered during 2011 - 2017 in three States. Additionally the antibacterial activity of TAP (10 mg kg-1), FFC (10 mg kg-1) and TAF combined with FFC (G3: TAF+FFC: 5 + 2.5 mg kg-1 e G4: 2.5 + 1.25 mg kg-1) against Aeromonas hydrophila in Nile tilapia aeromoniosi models were evaluated. More than half of the tested strains were in vitro sensitive to TAP, being TAP highly potent against Aeromonas, Lactococcus, and Vibrio. The in vivo therapy with TAP alone and combined with FFC was effective to treat aeromoniosis in Nile tilapia. Groups G1, G2, G3, G4 and co... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Marcos Rogério André / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Paulo Eduardo Neves Ferreira Velho / Resumo: Doenças transmitidas por vetores artrópodes tem se tornado cada vez mais importantes para a saúde humana e animal. Neste sentido, o papel dos animais selvagens como reservatórios na transmissão destas enfermidades vem sendo investigado. A ordem Chiroptera é considerada o segundo maior grupo de mamíferos no mundo, hospedando importantes patógenos zoonóticos, tais como vírus e bactérias. Bartonella spp. e Mycoplasma spp. são bactérias que parasitam eritrócitos de diferentes espécies de mamíferos, incluindo humanos, podendo causar manifestações clínicas diversas. O presente estudo objetivou pesquisar a ocorrência e analisar filogeneticamente Bartonella spp. e Mycoplasma spp. em quirópteros amostrados no Brasil. Para tal, foram colhidas 325 amostras de sangue e/ou tecidos (fígado, coração e baço) de 162 quirópteros pertencentes a 19 espécies distribuídas em quatro famílias distintas de cinco estados: Mato Grosso, Pará, Paraná, São Paulo e Tocantins. Destas, três amostras mostraram-se negativas para o gene endógeno de referência (GAPDH), sendo excluídas das análises. Portanto, do total de 322 amostras, 17 (5,28%) mostraram-se positivas para Bartonella spp. por meio da PCR em tempo real baseada no gene nuoG. A quantificação de um fragmento do gene nuoG de Bartonella spp. por microlitro variou de 4,4 x 10⁰ a 6,95 x10³ cópias/μL nas amostras de sangue e teciduais dos quirópteros. Ainda, 45 amostras (13,97%) mostraram-se positivas para hemoplasmas por meio da PCR convencional baseada ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Vector-borne diseases have become increasingly important to human and animal health. The role of wild animals as reservoirs in the transmission of these diseases has been investigated. The Chiroptera Order is considered the second largest group of mammals in the world, hosting important zoonotic virus and bacteria. Bartonella spp. and Mycoplasma spp. are bacteria that parasites different mammals species' erythrocytes, including humans, causing different clinic manifestations. The present work aimed at investigating the occurrence and assessing the phylogenetic positioning of Bartonella spp. and Mycoplasma spp. in bats sampled in Brazil. A total of 325 blood and/or tissue (liver, spleen and heart) samples were collected from 162 bats belonging to 19 species distributed in four different families from five states: Mato Grosso, Pará, Paraná, São Paulo and Tocantins. Three samples showed negative results in the conventional PCR based on GAPDH gene and excluded from analysis. Seventeen (5,28%) out of 322 bats' samples were positive to qPCR for Bartonella spp. based on nuoG gene. The quantification of a Bartonella spp. nuoG gene fragment per microlitro in bats' blood and tissues ranged from 4,4 x 10⁰ a 6,95 x10³ copies/μL. On the other hand, 45 (13,97%) samples were positive to cPCR assays for hemoplasmas based on 16S rRNA gene. Seven sequences were obtained for Bartonella spp. (nuoG [n=3], gltA [n=2], rpoB [n=1], ftsZ [n=1]), and five 16S rRNA sequences were obtained for Mycoplasm... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-31Bitstream added on 2014-06-13T19:22:44Z : No. of bitstreams: 1 maluta_rp_dr_jabo.pdf: 440520 bytes, checksum: 3c6ccf7fa3a09af508156250e6a377c0 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Canadian Bureau For International Education (Cbie) / Os ruminantes são reservatórios de cepas de Escherichia coli envolvidas na etiologia de doenças graves em humanos. Nesse estudo, a freqüência de E. coli Shigatoxigênica (STEC), E. coli enteropatogênica (EPEC) e E. coli enterotoxigênica (ETEC) foi determinada em fezes e carcaças de ovinos em três fazendas e um matadouro-frigorífico localizados no Estado de São Paulo e as cepas encontradas foram caracterizadas. A freqüência de STEC nas três fazendas foi similar, enquanto a freqüência de EPEC foi variável. Não foram encontradas amostras contendo ETEC. As cepas de STEC stx1- stx2+ revelaram-se geneticamente heterogêneos, possuindo freqüentemente as variantes Stx2a ou Stx2dact, as quais são relacionadas à doenças mais severas em humanos e ademais eles foram freqüentemente originados de amostras colhidas do matadouro-frigorífico. Adicionalmente, algumas cepas desse grupo possuíram novas variantes de Stx2 ou o subtipo Stx2e, que é relacionado à doença do edema em suínos. As cepas de STEC stx1+ stx2+ e stx1+ stx2- mostraram-se geneticamente mais homogêneas, a maioria possuindo os genes lpfAO113, iha e ehxA. As cepas de STEC stx1+ stx2- apresentaram comumente o gene relacionado à ExPEC tsh. As estirpes de EPEC foram heterogêneas, muitas possuíram os genes efa1, ehxA, lpfAO113 ou paa, que são associados à diarréia em humanos. As cepas de STEC e EPEC demonstraram-se geneticamente diversas quando analisadas por PFGE. Esses resultados demonstram que cepas de E. coli potencialmente patogênica para humanos estão presentes na microbiota intestinal de ovinos, com potencial de contaminar carcaças em abatedouro e conseqüentemente serem transmitidas por via alimentar / Ruminants are a reservoir of Escherichia coli which may cause severe disease in humans. Pathotypes related to intestinal disease include Shiga toxin-producing E. coli (STEC), enteropathogenic E. coli (EPEC) and enterotoxigenic E. coli (ETEC). In this study, the prevalence of these pathotypes was examined in sheep feces and carcasses on three farms and at an abattoir. The strains were then characterized. The prevalence of STEC on the three farms was similar, whereas that of EPEC varied between farms. No ETEC were detected. STEC stx1- stx2+ strains were genetically heterogeneous, more frequently possessing Stx2 variant Stx2a or Stx2dact related to more severe disease in humans, and often originated from the abattoir rather than the farms. In addition, some strains of this group possessed new Stx2 variants or Stx2e, the subtype related to porcine edema disease. STEC stx1+ stx2+ and stx1+ stx2- strains were genetically more homogeneous, mostly possessed the genes lpfAO113, iha and ehxA. The STEC strains stx1+ stx2- commonly harbored ExPEC-related gene tsh. The EPEC strains were heterogeneous, several possessing efa1, ehxA, lpfAO113 or paa, genes associated with diarrhea in humans. STEC and EPEC strains were genotypically diverse by PFGE. These results demonstrate that E. coli potentially pathogenic for humans are present in the sheep intestinal microflora, particularly at the abattoir, underlining the potential for foodborne transmission

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2015-03-03T12:06:09Z : No. of bitstreams: 1 000805074_20160227.pdf: 82407 bytes, checksum: 27387f7880642489826cb800af053e88 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-02-29T12:16:27Z: 000805074_20160227.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-29T12:17:26Z : No. of bitstreams: 1 000805074.pdf: 475905 bytes, checksum: 38da9ded440f4702eb18c90ebac18bfd (MD5) / Identificou-se no presente estudo o agente patogênico causador de surtos de estreptococose em cachara e surubins como sendo a Lactococcus garvieae. Considerando que a lactococose é uma doença emergente de importância econômica mundial, que gera surtos de mortalidade em massa em diversas espécies de peixes, avaliamos a possibilidade de prevenção e controle desta patogenia com o uso de vacinas. Após confirmação da patogenicidade da bactéria pelo Postulado de Koch, foram formuladas duas bacterinas inativadas com formalina, uma aquosa e uma oleosa, com emprego de adjuvante. Surubins híbridos foram imunizados via intraperitoneal com ambas bacterinas e com PBS. Para avaliar a eficiência das vacinas foi comparada a potência dos imunobiológicos desenvolvidos na sobrevivência dos animais, na cinética de anticorpos 15, 30 e 60 dias após a vacinação e na modulação da resposta imune após desafio bacteriano. Melhores níveis de proteção foram observados com a imunização com bacterina oleosa, onde foi observado maior nível de anticorpos circulantes e cujo valor de porcentagem relativa de sobrevivência foi de 81,7%. O presente fez o primeiro registro de surto de septicemia hemorrágica causada por Lactococcus garvieae em surubins híbridos e cacharas, e demonstrou que a imunidade dos surubins pode ser estimulada com emprego de vacinas, e que a bacterina oleosa proporciona proteção mais eficaz contra a lactococose / The present study identified the pathogen causing outbreaks of estreptococose in cachara and surubins as being the Lactococcus garvieae. Whereas lactococose as an emerging disease of worldwide economic importance, that generates outbreaks of mass mortality in several species of fish, we evaluated the possibility of prevention and control of this pathogen with the use of vaccines. After confirming the pathogenicity of the bacterium by Koch postulate, two inactivated bacterins with formalin, an aqueous and an oily, with the use of adjuvant, were formulated. Surubins hybrids were immunized intraperitoneally with PBS and both bacterins. To evaluate the efficacy of the vaccines was compared the potency of the biopharmaceuticals developed in survival of the animals, on the kinetic of antibody 15, 30 and 60 days after vaccination and in the modulation of the immune response after bacterial challenge. Best levels of protection were observed with immunization with oily bacterin, where were observed higher level of circulating antibodies and whose value relative survival percentage was 81.7 %. This work made the first recorded outbreak of haemorrhagic septicemia caused by Lactococcus garvieae in hybrid surubins and cacharas, and demonstrated that the immunity of surubins can be stimulated through the use of vaccines, and oily bacterin provides more effective protection against lactococose