Orientador: Roberto Carvalheiro / Coorientador: Lucia Galvão de Albuquerque / Banca: Carlos Antonio Lopes de Oliveira / Banca: Humberto Tonhati / Resumo: Os programas de melhoramento em espécies aquícolas apresentam, no geral, um número restrito de famílias e um pequeno tamanho efetivo populacional, levando ao acasalamento de animais aparentados e, consequentemente, ao aumento da endogamia. Por sua vez, maiores níveis de endogamia tendem a ocasionar queda no desempenho dos animais causada pela depressão endogâmica. O objetivo deste estudo foi estimar os níveis de endogamia e depressão endogâmica sobre as características de peso à despesca, comprimento à despesca e resistência a Piscirickettsia salmonis em uma população de salmão coho. A resistência a Piscirickettsia salmonis foi definida como o dia da morte de cada peixe após desafio conduzido em dois anos, com média de 42 dias em 2012 e 14 dias no ano de 2014. Foi utilizado um banco de dados composto por 53.504 observações, provenientes de nove gerações e 930 famílias. A estimação dos componentes de variância e endogamia foram obtidas utilizando o programa computacional AIREMLF90 e os valores de depressão endogâmica foram estimados a partir de um modelo animal. Os valores observados para o coeficiente de endogamia foram crescentes ao longo das gerações, com uma taxa média máxima de 8,75% no ano de 2014. A depressão endogâmica afetou em maior nível as características de peso à despesca e dia de morte, com redução de 6,4 e 9,2% no desempenho dos animais, respectivamente, para o nível máximo de endogamia observado (30%). Os resultados indicam a necessidade de uso de estratégias ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Aquaculture breeding programs present, in general, low number of families and reduced effective population size, resulting in mating of related animals and, consequently, increased level of inbreeding. High inbreeding coefficient may negatively impact the animals' performance due to inbreeding depression. The objective of this study was to estimate inbreeding coefficient and inbreeding depression on growth traits and resistance against Piscirickettsia salmonis in a coho salmon population. Resistance against P. salmonis was defined as days to death of each fish after being challenged in two different years, with an average of 42 days in 2012 and 14 days in 2014. Data of 53,504 animals from 930 families was analyzed. Variance components were estimated using the software AIREMLF90, and inbreeding depression was estimated under an animal model. An increasing rate of inbreeding was observed, attaining an average of 8.75% in 2014. Inbreeding depression was more pronounced for harvest weight (PD) and days to death (DM), in comparison with harvest length. At the highest observed inbreeding level (30%), the estimated reduction caused by inbreeding depression was equal to 6,4% for PD and 9,2% for DM. The results indicate the necessity to control inbreeding more effectively for the studied coho salmon population, to guarantee genetic progress in the long term. / Mestre

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:24:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-08. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:31:01Z : No. of bitstreams: 1 000855108.pdf: 5251596 bytes, checksum: d3674a86d5c8919bdac9bb7f5be66b36 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O cobia (Rachycentron canadum) é forte candidato para piscicultura marinha no Brasil. Como em qualquer atividade de produção, a intensificação submete os peixes a elevada densidade de estocagem e alteração do hábito natural da espécie. Estes fatores acarretam estresse, reduz a eficiência do sistema imune e predispõe os peixes às doenças. O presente estudo teve como objetivo estabelecer o diagnóstico da elevada mortalidade em juvenis de cobias criados em tanques-rede no litoral norte do Estado de São Paulo. A maricultura iniciou em novembro de 2010, o primeiro ciclo de engorda de cobias com 24.000 alevinos e em setembro de 2011 restavam cerca de 500. O plano diagnóstico iniciou em março de 2011, com necropsia e coleta de tegumento, brânquias, coração, fígado, baço, rim e cecos pilóricos para análise histopatológica (n=8). Pela análise suspeitou-se tratar de pasteurelose, doença bacteriana septicêmica causada pela Photobacterium damselae subsp piscicida. Em maio, julho e setembro, foram coletadas fígado, baço, coração e rim para exame bacteriológico (n=15) e histologico (n=38). As bactérias isoladas foram submetidas a análise molecular confirmando a doença. Não houve isolamento de Mycobacterium sp. Na macroscopia, nódulos esbranquiçados com cerca de 0,5 milímetro foram observados no fígado e rim. Parasitas identificadas como Neobenedenia melleni e Tuxophorus caligodes estavam presentes principalmente, na cabeça. Na microscopia, 94% apresentavam granulomas no fígado contendo centro necrótico e aglomeração de bactérias delimitadas por células epitelióides e extensa fibroplasia. A coloração de Ziehl Neelsen foi negativa para bactérias álcool ácido resistente. O fígado de 92% dos peixes apresentava extensa e severa vacuolização no citoplasma dos hepatócitos. A coloração de Sudan Black identificou presença de lipídios confirmando o quadro de esteatose. A regressão da esteatose foi... / The cobia (Rachycentron canadum) shows great potential for marine fish farming in Brazil. As in any production activity, the intensification submit the fish to the high stocking density and alteration of the natural habit of the species. These factors cause stress, reduce the efficiency of the immune system and predispose fish to diseases. This study aimed to establish the diagnosis of high mortality in juvenile cobias raised in cages on the northern coast of São Paulo. The mariculture began in November 2010, the first cycle of fattening cobias with 24,000 fingerlings and in September 2011 remained about 500. The diagnostic plan began in March 2011, with necropsy and collection integument, gills, heart, liver, spleen, kidney and pyloric caeca for histopathological analysis (n = 8). After analysis, the fish mortality was related to pasteurellosis, a septicemic bacterial disease caused by Photobacterium damselae subsp piscicida. In May, July and September were collected liver, spleen, heart and kidney for bacteriological examination (n = 15) as well as same samples collected in March to histopathology (n = 38). Bacterial isolates were subjected to molecular analysis to confirm disease. No Mycobacterium sp. In macroscopic, whitish nodules with about 0.5 mm were observed in the liver and kidney. Neobenedenia melleni and Tuxophorus caligodes were the parasites identified mainly present in the head. In microscopy, we evaluated 46 fish of which 94% had liver granulomas containing necrotic center and agglomeration of bacteria delimited by epithelioid cells and extensive fibroplasia. The Ziehl Neelsen was negative for alcohol acid resistant bacteria. The liver of 92% of fish had severe and extensive vacuolization in the cytoplasm of hepatocytes. The Sudan Black stain identified the presence of lipids confirming steatosis. The regression of steatosis was noted from July, when the trash fish was included in the diet. The diagnosis of high ... / CAPES: 23038.05168/2009-69

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-03Bitstream added on 2014-08-13T18:00:25Z : No. of bitstreams: 1 000759978.pdf: 3044978 bytes, checksum: 9f473a1b86cb80664b6c1dbec2f5f431 (MD5) / O tifo aviário é uma doença sistêmica provocada por Salmonella enterica subsp. enterica sorovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG), bactéria que não possui flagelos. Acredita-se que por não produzir flagelos, SG seria pouco reconhecido pelo sistema imune. Deste modo provocaria inflamação de menor intensidade na mucosa, atravessando as barreiras intestinais com mais facilidade e assim desencadeando enfermidade sistêmica severa. Com intuito de investigar essa hipótese, em estudo prévio, construiu-se um mutante de SG capaz de produzir flagelos (SG Fla+) o qual desencadeou resposta imune pro-inflamatória em células de cultivo, além de ter sido menos patogênico para as aves que a estirpe selvagem de SG. No entanto, notou-se que SG Fla+ tende a interromper a produção de flagelos após dois ou mais cultivos consecutivos em meio sólido, tornando-se fenotipicamente aflagelado (SG Fla-). O presente estudo teve por objetivo comparar a patogenicidade de SG Fla+, SG Fla- e SG para aves susceptíveis ao tifo aviário. No primeiro experimento, as taxas de mortalidade provocadas pelas estirpes e excreção fecal das mesmas foram avaliadas. Enquanto que no segundo ensaio, avaliou-se a capacidade de colonização cecal, invasão das estirpes em fígado e baço e ainda a presença e intensidade de lesões macro e microscópicas em órgãos. SG Fla+ provocou mortalidade inferior às estirpes aflageladas, quando utilizou-se o inóculo diluído (106 UFC). Os resultados da excreção fecal demonstram que SG Fla+ foi a estirpe mais excretada. Pôde-se observar que SG e SG Fla- foram recuperadas do conteúdo cecal em quantidades mais elevadas que SG Fla+. SG e SG Fla- foram isoladas mais cedo e em maiores quantidades que SG Fla+ em fígado e baço. No fígado verificou-se hepatomegalia, degeneração, congestão, alterações na coloração (amarelo-esverdeado a esverdeado), reatividade linfoide ... / The fowl typhoid is a systemic disease of chickens caused by Salmonella enterica subsp. enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG), a microorganism that does not produce flagella. It is suggested that due to the absence of flagella SG is poorly recognized by the bird immune system. As a result, just a mild inflammation is induced in the gut mucosa, favoring the development of a severe systemic infection. In order to investigate this hypothesis, in a previous study, a mutant of SG capable of producing flagella (SG Fla+) was constructed. This mutant was able to trigger mRNA pro-inflammatory cytokines e chemokines in cultured cells and was less pathogenic to birds than the wild type strain. However, it was noticed that SG Fla+ trends to stop flagella production after culturing two or more times on solid medium, becoming non-flagelated (SG Fla-). The present study aimed at comparing the pathogenicity of SG Fla+, SG Fla- and SG to birds. In the first experiment, mortality rates caused by strains and fecal excretion were evaluated. In the second assay, the ability of strains in colonizing the ceca and invading liver and spleen were compared. In addition to this, the presence and intensity of macroscopic and microscopic lesions in organs were evaluated. When inoculated in the lower amount (106 CFU) SG Fla+ provoked less mortality than the non-flagellate strains. The results of fecal excretion indicate that SG Fla+ was more excreted than the other strains. It was observed that SG and SG Fla- were recovered from cecal contents in higher amounts than SG Fla+. SG Fla- and SG were isolated earlier and in higher amounts from liver and spleen. In the liver degeneration, congestion, changes in color (greenish-yellow to greenish), lymphoid reactivity and multifocal areas of necrosis were noticed. Spleen was enlarged and congested; foci of necrosis in the white pulp and lymphoid depletion were also ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-03Bitstream added on 2014-06-13T18:31:13Z : No. of bitstreams: 1 nespolo_nm_me_jabo.pdf: 317079 bytes, checksum: b5a59555adeaded005ddc00b0895ba68 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Tem sido evidente o aumento no consumo de pescado, especialmente do salmão (Salmo salar) sob a forma “in natura”, em pratos da cozinha oriental. Como conseqüência, tem havido maior preocupação quanto às suas características higiênico-sanitárias, tendo em vista a facilidade que microrganismos encontram para se desenvolverem em sua carne, o que pode expor os consumidores a agentes que causam desde uma simples gastrenterite até o óbito. Diante desta preocupação, desenvolveu-se este estudo com objetivos de avaliar características microbiológicas do salmão por meio da quantificação de microrganismos heterotróficos mesófilos, coliformes totais e termotolerantes, o perigo de veiculação de Vibrio parahaemolyticus, Staphylococcus aureus, Salmonella sp., Escherichia coli e Aeromonas sp. através da carne e contribuir com subsídios técnicos para criar uma legislação brasileira com padrões microbiológicos específicos para o pescado consumido cru. Foram colhidas 31 amostras de salmão, 16 refrigeradas e 15 congeladas, no comércio varejista de cidades da região nordeste do estado de São Paulo. Os resultados obtidos mostram populações de microrganismos heterotróficos mesófilos variando entre 1,0 x 10 e 3,9 x 106 UFC/g, coliformes totais e termotolerantes em, respectivamente, 32,24% e 19,33% das amostras e Aeromonas sp. em 35,48% das amostras com variação populacional de 2,0 x 102 a 8,0 x 103 UFC/g. Ainda houve a presença de Staphylococcus aureus em uma amostra e ausência de Vibrio parahaemolyticus, Salmonella sp. e Escherichia coli. Os resultados obtidos podem servir de parâmetro para a criação de um padrão microbiológico específico para o pescado consumido cru e servem também de alerta para os consumidores do produto tendo em vista a veiculação de microrganismos potencialmente patogênicos. / The increasing of seafood consumption has become evident especially in the use of salmon (Salmo salar) consumed raw in oriental dishes. Consequently, it has risen up the concern related to their hygienic-sanitary characteristics due to the facility that microorganisms multiply in the meat which can expose consumers to the causative agents of a mild gastroenteritis until the death. Regarding such informations, this study was aimed to evaluate microbiological characteristics of salmon by quantifying microrganisms heterotrophic mesophiles, total coliforms and thermotolerant. It was also evaluated the danger of transmission of Vibrio parahaemolyticus, Staphylococcus aureus, Salmonella sp., Escherichia coli and Aeromonas sp. on the fish muscle and contributed to technical informations to create a Brazilian regulations about specific microbiological standards for consumption of raw seafood. Thirty-one samples of salmon were collected, 16 chilled and 15 frozen, from the retail market in cities of the northeast region of São Paulo State. The results show populations of mesophilic heterotrophic microorganisms ranging from 1.0 x 10 and 3.9 x 106 CFU/g, in total and fecal coliforms, respectively, 32.24% and 19.33% of samples and Aeromonas sp. in 35.48% of samples ranging population of 2.0 x 102 to 8.0 x 103 CFU/g. Staphylococcus aureus was present in one sample and were not found Vibrio parahaemolyticus, Salmonella sp. and Escherichia coli. The results may serve as a parameter for the establishment of a microbiological standard for the consumption of raw seafood and also as a warning to consumers of the product for the presence of potentially pathogenic microorganisms.

Orientador: Maria José Tavares Ranzani de Paiva / Banca: Eduardo Makoto Onaka / Banca: Antenor Aguiar Santos / Banca: Paulo Teixeira Lacava / Banca: Ricardo Carneiro Borra / Resumo: Identificou-se no presente estudo o agente patogênico causador de surtos de estreptococose em cachara e surubins como sendo a Lactococcus garvieae. Considerando que a lactococose é uma doença emergente de importância econômica mundial, que gera surtos de mortalidade em massa em diversas espécies de peixes, avaliamos a possibilidade de prevenção e controle desta patogenia com o uso de vacinas. Após confirmação da patogenicidade da bactéria pelo Postulado de Koch, foram formuladas duas bacterinas inativadas com formalina, uma aquosa e uma oleosa, com emprego de adjuvante. Surubins híbridos foram imunizados via intraperitoneal com ambas bacterinas e com PBS. Para avaliar a eficiência das vacinas foi comparada a potência dos imunobiológicos desenvolvidos na sobrevivência dos animais, na cinética de anticorpos 15, 30 e 60 dias após a vacinação e na modulação da resposta imune após desafio bacteriano. Melhores níveis de proteção foram observados com a imunização com bacterina oleosa, onde foi observado maior nível de anticorpos circulantes e cujo valor de porcentagem relativa de sobrevivência foi de 81,7%. O presente fez o primeiro registro de surto de septicemia hemorrágica causada por Lactococcus garvieae em surubins híbridos e cacharas, e demonstrou que a imunidade dos surubins pode ser estimulada com emprego de vacinas, e que a bacterina oleosa proporciona proteção mais eficaz contra a lactococose / Abstract: The present study identified the pathogen causing outbreaks of estreptococose in cachara and surubins as being the Lactococcus garvieae. Whereas lactococose as an emerging disease of worldwide economic importance, that generates outbreaks of mass mortality in several species of fish, we evaluated the possibility of prevention and control of this pathogen with the use of vaccines. After confirming the pathogenicity of the bacterium by Koch postulate, two inactivated bacterins with formalin, an aqueous and an oily, with the use of adjuvant, were formulated. Surubins hybrids were immunized intraperitoneally with PBS and both bacterins. To evaluate the efficacy of the vaccines was compared the potency of the biopharmaceuticals developed in survival of the animals, on the kinetic of antibody 15, 30 and 60 days after vaccination and in the modulation of the immune response after bacterial challenge. Best levels of protection were observed with immunization with oily bacterin, where were observed higher level of circulating antibodies and whose value relative survival percentage was 81.7 %. This work made the first recorded outbreak of haemorrhagic septicemia caused by Lactococcus garvieae in hybrid surubins and cacharas, and demonstrated that the immunity of surubins can be stimulated through the use of vaccines, and oily bacterin provides more effective protection against lactococose / Doutor

Orientador: Julieta Rodini Engrácia de Moraes / Banca: Fabiana Garcia Scaloppi / Banca: Sérgio Henrique Canello Schalch / Banca: Laura Satiko Okada Nakaghi / Banca: Rogério Salvador / Resumo: O cobia (Rachycentron canadum) é forte candidato para piscicultura marinha no Brasil. Como em qualquer atividade de produção, a intensificação submete os peixes a elevada densidade de estocagem e alteração do hábito natural da espécie. Estes fatores acarretam estresse, reduz a eficiência do sistema imune e predispõe os peixes às doenças. O presente estudo teve como objetivo estabelecer o diagnóstico da elevada mortalidade em juvenis de cobias criados em tanques-rede no litoral norte do Estado de São Paulo. A maricultura iniciou em novembro de 2010, o primeiro ciclo de engorda de cobias com 24.000 alevinos e em setembro de 2011 restavam cerca de 500. O plano diagnóstico iniciou em março de 2011, com necropsia e coleta de tegumento, brânquias, coração, fígado, baço, rim e cecos pilóricos para análise histopatológica (n=8). Pela análise suspeitou-se tratar de pasteurelose, doença bacteriana septicêmica causada pela Photobacterium damselae subsp piscicida. Em maio, julho e setembro, foram coletadas fígado, baço, coração e rim para exame bacteriológico (n=15) e histologico (n=38). As bactérias isoladas foram submetidas a análise molecular confirmando a doença. Não houve isolamento de Mycobacterium sp. Na macroscopia, nódulos esbranquiçados com cerca de 0,5 milímetro foram observados no fígado e rim. Parasitas identificadas como Neobenedenia melleni e Tuxophorus caligodes estavam presentes principalmente, na cabeça. Na microscopia, 94% apresentavam granulomas no fígado contendo centro necrótico e aglomeração de bactérias delimitadas por células epitelióides e extensa fibroplasia. A coloração de Ziehl Neelsen foi negativa para bactérias álcool ácido resistente. O fígado de 92% dos peixes apresentava extensa e severa vacuolização no citoplasma dos hepatócitos. A coloração de Sudan Black identificou presença de lipídios confirmando o quadro de esteatose. A regressão da esteatose foi... / Abstract: The cobia (Rachycentron canadum) shows great potential for marine fish farming in Brazil. As in any production activity, the intensification submit the fish to the high stocking density and alteration of the natural habit of the species. These factors cause stress, reduce the efficiency of the immune system and predispose fish to diseases. This study aimed to establish the diagnosis of high mortality in juvenile cobias raised in cages on the northern coast of São Paulo. The mariculture began in November 2010, the first cycle of fattening cobias with 24,000 fingerlings and in September 2011 remained about 500. The diagnostic plan began in March 2011, with necropsy and collection integument, gills, heart, liver, spleen, kidney and pyloric caeca for histopathological analysis (n = 8). After analysis, the fish mortality was related to pasteurellosis, a septicemic bacterial disease caused by Photobacterium damselae subsp piscicida. In May, July and September were collected liver, spleen, heart and kidney for bacteriological examination (n = 15) as well as same samples collected in March to histopathology (n = 38). Bacterial isolates were subjected to molecular analysis to confirm disease. No Mycobacterium sp. In macroscopic, whitish nodules with about 0.5 mm were observed in the liver and kidney. Neobenedenia melleni and Tuxophorus caligodes were the parasites identified mainly present in the head. In microscopy, we evaluated 46 fish of which 94% had liver granulomas containing necrotic center and agglomeration of bacteria delimited by epithelioid cells and extensive fibroplasia. The Ziehl Neelsen was negative for alcohol acid resistant bacteria. The liver of 92% of fish had severe and extensive vacuolization in the cytoplasm of hepatocytes. The Sudan Black stain identified the presence of lipids confirming steatosis. The regression of steatosis was noted from July, when the trash fish was included in the diet. The diagnosis of high ... / Doutor

Orientador: Angelo Berchieri Junior / Coorientador: Oliveiro Caetano de Freitas Neto / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Antonio José Piantino Ferreira / Resumo: O tifo aviário é uma doença sistêmica provocada por Salmonella enterica subsp. enterica sorovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG), bactéria que não possui flagelos. Acredita-se que por não produzir flagelos, SG seria pouco reconhecido pelo sistema imune. Deste modo provocaria inflamação de menor intensidade na mucosa, atravessando as barreiras intestinais com mais facilidade e assim desencadeando enfermidade sistêmica severa. Com intuito de investigar essa hipótese, em estudo prévio, construiu-se um mutante de SG capaz de produzir flagelos (SG Fla+) o qual desencadeou resposta imune pro-inflamatória em células de cultivo, além de ter sido menos patogênico para as aves que a estirpe selvagem de SG. No entanto, notou-se que SG Fla+ tende a interromper a produção de flagelos após dois ou mais cultivos consecutivos em meio sólido, tornando-se fenotipicamente aflagelado (SG Fla-). O presente estudo teve por objetivo comparar a patogenicidade de SG Fla+, SG Fla- e SG para aves susceptíveis ao tifo aviário. No primeiro experimento, as taxas de mortalidade provocadas pelas estirpes e excreção fecal das mesmas foram avaliadas. Enquanto que no segundo ensaio, avaliou-se a capacidade de colonização cecal, invasão das estirpes em fígado e baço e ainda a presença e intensidade de lesões macro e microscópicas em órgãos. SG Fla+ provocou mortalidade inferior às estirpes aflageladas, quando utilizou-se o inóculo diluído (106 UFC). Os resultados da excreção fecal demonstram que SG Fla+ foi a estirpe mais excretada. Pôde-se observar que SG e SG Fla- foram recuperadas do conteúdo cecal em quantidades mais elevadas que SG Fla+. SG e SG Fla- foram isoladas mais cedo e em maiores quantidades que SG Fla+ em fígado e baço. No fígado verificou-se hepatomegalia, degeneração, congestão, alterações na coloração (amarelo-esverdeado a esverdeado), reatividade linfoide ... / Abstract: The fowl typhoid is a systemic disease of chickens caused by Salmonella enterica subsp. enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG), a microorganism that does not produce flagella. It is suggested that due to the absence of flagella SG is poorly recognized by the bird immune system. As a result, just a mild inflammation is induced in the gut mucosa, favoring the development of a severe systemic infection. In order to investigate this hypothesis, in a previous study, a mutant of SG capable of producing flagella (SG Fla+) was constructed. This mutant was able to trigger mRNA pro-inflammatory cytokines e chemokines in cultured cells and was less pathogenic to birds than the wild type strain. However, it was noticed that SG Fla+ trends to stop flagella production after culturing two or more times on solid medium, becoming non-flagelated (SG Fla-). The present study aimed at comparing the pathogenicity of SG Fla+, SG Fla- and SG to birds. In the first experiment, mortality rates caused by strains and fecal excretion were evaluated. In the second assay, the ability of strains in colonizing the ceca and invading liver and spleen were compared. In addition to this, the presence and intensity of macroscopic and microscopic lesions in organs were evaluated. When inoculated in the lower amount (106 CFU) SG Fla+ provoked less mortality than the non-flagellate strains. The results of fecal excretion indicate that SG Fla+ was more excreted than the other strains. It was observed that SG and SG Fla- were recovered from cecal contents in higher amounts than SG Fla+. SG Fla- and SG were isolated earlier and in higher amounts from liver and spleen. In the liver degeneration, congestion, changes in color (greenish-yellow to greenish), lymphoid reactivity and multifocal areas of necrosis were noticed. Spleen was enlarged and congested; foci of necrosis in the white pulp and lymphoid depletion were also ... / Mestre

Orientador: Fernando Antônio de Ávila / Banca: Beatriz Ernestina Cabilio Guth / Banca: Ariel Eurides Stella / Banca: Hélio José Montassier / Banca: José Moacir Marin / Resumo: Os ruminantes são reservatórios de cepas de Escherichia coli envolvidas na etiologia de doenças graves em humanos. Nesse estudo, a freqüência de E. coli Shigatoxigênica (STEC), E. coli enteropatogênica (EPEC) e E. coli enterotoxigênica (ETEC) foi determinada em fezes e carcaças de ovinos em três fazendas e um matadouro-frigorífico localizados no Estado de São Paulo e as cepas encontradas foram caracterizadas. A freqüência de STEC nas três fazendas foi similar, enquanto a freqüência de EPEC foi variável. Não foram encontradas amostras contendo ETEC. As cepas de STEC stx1- stx2+ revelaram-se geneticamente heterogêneos, possuindo freqüentemente as variantes Stx2a ou Stx2dact, as quais são relacionadas à doenças mais severas em humanos e ademais eles foram freqüentemente originados de amostras colhidas do matadouro-frigorífico. Adicionalmente, algumas cepas desse grupo possuíram novas variantes de Stx2 ou o subtipo Stx2e, que é relacionado à doença do edema em suínos. As cepas de STEC stx1+ stx2+ e stx1+ stx2- mostraram-se geneticamente mais homogêneas, a maioria possuindo os genes lpfAO113, iha e ehxA. As cepas de STEC stx1+ stx2- apresentaram comumente o gene relacionado à ExPEC tsh. As estirpes de EPEC foram heterogêneas, muitas possuíram os genes efa1, ehxA, lpfAO113 ou paa, que são associados à diarréia em humanos. As cepas de STEC e EPEC demonstraram-se geneticamente diversas quando analisadas por PFGE. Esses resultados demonstram que cepas de E. coli potencialmente patogênica para humanos estão presentes na microbiota intestinal de ovinos, com potencial de contaminar carcaças em abatedouro e conseqüentemente serem transmitidas por via alimentar / Abstract: Ruminants are a reservoir of Escherichia coli which may cause severe disease in humans. Pathotypes related to intestinal disease include Shiga toxin-producing E. coli (STEC), enteropathogenic E. coli (EPEC) and enterotoxigenic E. coli (ETEC). In this study, the prevalence of these pathotypes was examined in sheep feces and carcasses on three farms and at an abattoir. The strains were then characterized. The prevalence of STEC on the three farms was similar, whereas that of EPEC varied between farms. No ETEC were detected. STEC stx1- stx2+ strains were genetically heterogeneous, more frequently possessing Stx2 variant Stx2a or Stx2dact related to more severe disease in humans, and often originated from the abattoir rather than the farms. In addition, some strains of this group possessed new Stx2 variants or Stx2e, the subtype related to porcine edema disease. STEC stx1+ stx2+ and stx1+ stx2- strains were genetically more homogeneous, mostly possessed the genes lpfAO113, iha and ehxA. The STEC strains stx1+ stx2- commonly harbored ExPEC-related gene tsh. The EPEC strains were heterogeneous, several possessing efa1, ehxA, lpfAO113 or paa, genes associated with diarrhea in humans. STEC and EPEC strains were genotypically diverse by PFGE. These results demonstrate that E. coli potentially pathogenic for humans are present in the sheep intestinal microflora, particularly at the abattoir, underlining the potential for foodborne transmission / Doutor

Orientador: Rubén Pablo Schocken Iturrino / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Banca: Janete Apparecida Desidério / Banca: Caroline Peters Pigatto de Nardi / Banca: Alessandra Aparecida Medeiros / Resumo: A produção de aves no Brasil tem aumentado consideravelmente, impulsionada principalmente pelo consumo da carne de frango, o que gera uma preocupação com a transmissão de patógenos ao ser humano. Porém, a higienização e cuidados adequados durante toda cadeia produtiva pode-se evitar contaminações dos alimentos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a presença de bactérias patogênicas em granjas, esteiras condutoras de cortes de frango em frigoríficos antes e após a higiene pré-operacional e operacional, e em cortes de frangos congelados adquiridos em supermercados, além de comparar geneticamente os isolados obtidos nos diferentes pontos da cadeia produtiva por sequências repetitivas utilizando a técnica Rep-PCR. Os mesmos isolados também foram submetidos ao teste de sensibilidade a antimicrobianos. Para tanto, foram realizadas contagem de Enterobactérias e de Clostridium spp., identificação por PCR de Salmonella spp., Clostridium perfringens e Escherichia coli diarreiogênicas (E. coli enteropatogênica - EPEC, E. coli shigatoxigênica - STEC, E. coli enteroagregativa - EAEC, E. coli enterotoxigênica - ETEC), e isolamento bacteriano. Para quantificação de Enterobactérias e de Clostridium spp., foram colhidos 311 suabes de esteiras de frigoríficos, dos quais procedeu-se, também, o cultivo bacteriano para posterior identificação das amostras por PCR espécie-específico. Em granjas comerciais, foram colhidas 164 amostras de suabes com conteúdo cloacal de frangos saudáveis e 20 amostras de cortes de frangos congelados em supermercados. Nas granjas, foram identificadas 107 amostras contendo EPEC, já nas esteiras condutoras de cortes nos frigoríficos, foram verificadas 23 amostras positivas para E. coli EPEC e uma para C. perfringens. Em cortes de frangos congelados de supermercados, foram encontradas quatro amostras contendo EPEC, duas contendo STEC e quatro... / Abstract: Brazilian poultry production has been increasing significantly, mainly by the consumption of chicken meat, which leads to concern about the transmission of pathogens to human. However, proper hygiene and management in the production chain of poultry meat may avoid food bacteria contamination. Thus, this study aimed to evaluate the presence of pathogenic bacteria in poultry farms, sanitary conveyors of Brazilian slaughterhouses, before and after the pre-operational and operational hygiene, and in frozen cuts of chicken commercialized in supermarkets, beyond of comparing isolates obtained in different points of the production chain by repetitive sequences using Rep-PCR. The same isolates were also submitted to antimicrobial sensitivity test. For this, it was performed Enterobacteriaceae and Clostridium spp. counts, identification of Salmonella spp., Clostridium perfringens and diarrheagenic Escherichia coli (Enteropathogenic E. coli - EPEC, Shigatoxigenic E. coli - STEC, Enteroaggregative E. coli - EAEC, Enterotoxigenic E. coli - ETEC) through PCR and bacterial isolation. For quantification of Enterobacteriaceae and Clostridium spp. and PCR identification of pathogens, 311 samples were collected from sanitary conveyors using sterile swabs. From poultry farms, 164 samples of cloacal content swabs were collected from healthy chickens, and 20 samples of frozen chicken cuts were taken from supermarkets. In commercial poultry farms, 107 positives samples for EPEC were identified. Similarly, it was found 23 positive samples for EPEC and one for C. perfringens in sanitary conveyor at chicken slaughterhouses. In cuts of chicken from supermarkets, it was found four positive samples for EPEC, two for STEC and four for C. perfringens. No samples were diagnosed with the presence of Salmonella spp.. The genetic profile analysis of 27 EPEC strains showed that there was a genetic relationship among ... / Doutor

Orientador: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Marcos Rogério André / Banca: Alessandro de Mello Varani / Banca: Itabajara da Silva Vaz Junior / Banca: Mucio Flavio Barbosa Ribeiro / Resumo: Anaplasma marginale é o mais prevalente patógeno transmitido por carrapatos em bovinos nas regiões tropicais e subtropicais do mundo. A Proteína Principal de Superfície 1 alpha (MSP1a) do A. marginale contém um número variável de sequências repetidas na região animo-terminal e tem sido utilizada para a caracterização da diversidade genética desse patógeno. Nós realizamos um estudo longitudinal para averiguar a diversidade genética do A. marginale em um rebanho bovino leiteiro de Seropédica no estado do Rio de Janeiro e Taiaçu no estado de São Paulo, Brasil. Vinte bezerras foram avaliadas a cada três meses durante o primeiro ano de vida por esfregaço sanguíneo, Ensaio de Imunoadsorção Enzimático Indireto (ELISA), Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e Reação em Cadeia da Polimerase (nPCR/qPCR). Adicionalmente, as amostras positivas para o gene msp1a usando nPCR foram sequenciadas. A frequência do A. marginale variou de 10 - 90% no esfregaço sanguíneo, 20 - 80% no ELISA/RIFI e 15 - 100% na qPCR. O número de copias da msp1a por mL de sangue variou de 1,04 x 101 a 6.76 x 1012 (Seropédica RJ) e 1.20 x 101 a 5.17 x 106 (Taiaçu SP). Os resultados mostraram que a diversidade genética do A. marginale, em um grupo de bezerras até 1 ano de idade em Taiaçu (SP) foi baixa, com apenas três diferentes estirpes identificadas, mostrando o genótipo E. No entanto, os resultados mostraram que o diversidade genética do A. marginale, em um grupo de bezerras até 1 ano de idade em Seropédica (RJ) foi elevada, com dezenove diferentes estirpes identificadas, mostrando o genótipo E e G. As estirpes 4-63-27 (27.4%) e α-β3-Γ (77.8%) foram as mais comumente observadas em bezerras do estado do Rio de Janeiro e São Paulo, respectivamente. O novo conjunto de repetição da MSP1a 190 foi descrito em bezerras de Taiaçu e vinte e uma repetições em tandem da MSP1a resultou em novas sequências com alterações de... / Abstract: Anaplasma marginale is the most prevalent tick-borne pathogen in cattle in tropical and subtropical regions of the world. The A. marginale major surface protein 1 alpha (MSP1a) contains a variable number of tandem repeats in the amino terminal region and has been used for the characterization of pathogen genetic diversity. We conducted a longitudinal study to ascertain the genetic diversity of A. marginale in in a dairy cattle herd in Seropédica state of Rio de Janeiro and Taiaçu state of São Paulo, Brazil. Twenty calves were evaluated every three months during the first year of life by blood smear, Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA), Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) and Polymerase Chain Reaction (nPCR/qPCR). Additionally, samples positive for the msp1a gene using nPCR were sequenced. The prevalence of A. marginale ranged from 10 to 90% according to blood smears, 20-80% using ELISA/IFAT and 15-100% using qPCR. The number of msp1a copies per mL of blood ranged from 1,04x101 to 6.76x1012 (Seropédica RJ) and 1.20 x 101 to 5.17 x 106 (Taiaçu SP). The results showed that the genetic diversity of A. marginale in a group of calves up to 1 year of age from Taiaçu (SP) was low, with only three different strains identified, showing the microsatellite genotype E. However, the results showed that the genetic diversity of A. marginale in a group of calves up to 1 year of age from Seropédica (RJ) was high, with nineteen different strains identified, showing the microsatellite genotype E and G. The strains 4-63-27 (27.4%) and α-β3-Γ (77.8%) were the most commonly observed in calves of Seropédica RJ and Taiaçu SP, respectively. The new MSP1a tandem repeat 190 was described in calves from Taiaçu and twenty-two MSP1a tandem repeats resulted in new sequences with amino acid changes, which were labeled as 165-186 in calves from Seropédica. In Seropedica, three animals were born infected, with strains 4-63-27, 78-242-25-31 and ... / Doutor