As beta-lactamases de espectro ampliado (ESBL) representam um importante mecanismo de resistência aos beta-lactâmicos. Essas enzimas disseminaram-se entre membros da família Enterobacteriaceae que causam infecções relacionadas à assistência à saúde, especialmente as nosocomiais. Objetivos: (a) Determinar a prevalência de Escherichia coli e Klebsiella spp produtores de ESBL de origem hospitalar e comunitária; (b) Verificar a origem dos isolados (amostra clínica e unidade de internação); (c) Avaliar a acurácia dos testes fenotípicos de detecção de ESBL; (d) Determinar os perfis de sensibilidade aos antimicrobianos; (e) Determinar os genes de beta-lactamase; (f) Avaliar o modo de disseminação e; (g) Realizar experimentos de transferência de resistência. Material e métodos: Foram avaliados 1346 isolados (1162 E. coli, 180 K. pneumoniae e 4 K. oxytoca), de pacientes internados e ambulatoriais, entre abril de 2003 a maio de 2006, em Caxias do Sul. Um isolado/paciente foi incluído e a infecção hospitalar definida pelo CDC (Centers for Diseases Control and Prevention). Pelo método disco-difusão, conforme CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) identificou-se os produtores de ESBL (triagem: aztreonam, cefotaxima, ceftazidima, ceftriaxona e cefpodoxima e confirmatório: cefpodoxima, ceftazidima, cefotaxima, com e sem ác. clavulânico). A cefepima foi incluída nos testes. Os isolados foram submetidos a testes de sensibilidade aos antimicrobianos, por disco-difusão, segundo a CLSI; ao método de PCR para detecção dos genes bla TEM, bla SHV, bla CTX-M e; à tipagem por PGFE. A cepa E. coli αDH, como receptora, foi usada na conjugação e os transconjugantes pesquisados para produção de ESBL e perfil de sensibilidade. Resultados: As prevalências de ESBL em nível hospitalar foram: K. pneumoniae (43,7%) e E. coli (6,7%) e a comunidade, respectivamente, de 2,6% e 0,4%. As vias aéreas (escarro, aspirado traqueal, lavado broncoalveolar) , sangue e urina, e as UTIs e Clínica-Cirúrgicas foram as amostras clínicas e unidades de internação com os maiores percentuais de isolados produtores de ESBL. Independente da bactéria analisada, a ceftazidima foi o substrato com o pior desempenho nos testes. Já a cefpodoxima, a cefotaxima, a ceftriaxona e o aztreonam apresentaram sensibilidade de 100% e especificidade >94,0% para isolados de Klebsiella spp. Para E. coli a cefpodoxima foi o melhor substrato (sensibilidade de 100,0% e especificidade de 75,0%). A cepefima apresentou excelente desempenho. Os isolados de Klebsiella spp produtores de ESBL apresentaram taxas de resistência superiores àqueles apresentados pelos isolados não produtores de ESBL, para vários antimicrobianos beta-lactâmicos e não beta-lactâmicos. Independente da produção de ESBL esses isolados foram sensíveis aos carbapenêmicos e tigeciglina. Foram detectados em E. coli e Klebsiella spp com fenóitpo ESBL os genes de beta-lactamase blaTEM (89,0%), blaCTX-M (75,6%) e blaSHV (35,4%). Foram identificados 22 padrões de PFGE, sendo 11 com mais de um isolado. Esses padrões envolveram 50 isolados de K. pneumoniae produtores de ESBL, com alta disseminação intra-hospitalar entre as unidades de internação do hospital e por período superior a um ano. Os transconjugantes apresentaram fenótipo de ESBL e resistência aos aminoglicosídeos. Conclusões: Nossos resultados mostraram que a produção de ESBL constitui um problema essencialmente nosocomial. Concluímos que a adição da cefepima nos testes de detecção de ESBL leva a um aumento significante na acurácia para E. coli. No entanto, os isolados produtores de ESBL do gênero Klebsiella representam o maior problema no hospital. Esses apresentaram ampla variabilidade genômica, indicando forte pressão seletiva de antimicrobianos, mas também disseminação multiclonal, indicando transmissão cruzada e uma situação de endemia dessas bactérias no hospital. Por fim, nossos resultados indicaram uma fácil disseminação de plasmídeos multirresistentes, o que pode representar um impacto importante nas opções terapêuticas para o tratamento de infecções por bactérias produtoras de ESBL. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-05-23T19:16:15Z No. of bitstreams: 1 Tese Claudia Wollheim.pdf: 783754 bytes, checksum: 3ec34679603cc7ab1e9b4dffac5e5855 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-23T19:16:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Claudia Wollheim.pdf: 783754 bytes, checksum: 3ec34679603cc7ab1e9b4dffac5e5855 (MD5) / The extended-spectrum beta-lactamases (ESBL) represent an important mechanism of resistance to beta-lactam antibiotics. Such enzymes have spread among members of the Enterobacteriaceae family, which are responsible for infections related to health care, particularly nosocomial infections. Objectives: (a) To determine the prevalence of ESBL producing Escherichia coli and Klebsiella spp of hospital and community origin; (b) To verify the origin of the isolates (clinical sample and internment unit); (c) To evaluate the accuracy of the phenotypic tests for ESBL detection; (d) To determine the sensitivity profiles to antimicrobial drugs; (e) To identify the beta-lactamase genes; (f) To evaluate the dissemination way and; (g) To perform experiments of resistance transfer. Materials and Methods: 1,346 isolates were evaluated (1,162 E. coli, 180 K. pneumoniae and 4 K. oxytoca), from inpatient and outpatients, between April 2003 and May 2006, in Caxias do Sul. One isolate/patient was included and the nosocomial infection defined by the CDC (Centers for Diseases Control and Prevention). By means of the disc-diffusion method, according to the CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute), the ESBL producers were identified (screening: aztreonam, cefotaxime, ceftazidime, ceftriaxone, and cefpodoxime and confirmation: cefpodoxime, ceftazidime, cefotaxime, with and without clavulanic acid). Cefepime was included in the tests. The isolates were submitted to sensitivity tests to antimicrobial drugs, using disc-diffusion, defined by CLSI; to PCR for detecting the bla TEM, bla SHV, bla CTX-M genes, and; to PGFE typification. The E. coli a-DH strain was used as the receptor in conjugation experiments and the transconjugants were analyzed with regards to ESBL production and sensitivity profile. Results: The ESBL prevalences at the hospital level were: K. pneumoniae (43.7%) and E. coli (6.7%) and at the community, 2.6% and 0.4%, respectively. The airways (sputum, traqueal aspiration and broncoalveolar lavage), blood, and urine, and the ICUs and surgical units were the clinical samples and the internment units presenting the largest percentages of ESBL producing isolates. Independently of the bacterium, ceftazidime was the substrate which provided the poorest results in the tests. On the other hand, cefpodoxime, cefotaxime, ceftriaxone, and aztreonam showed 100% sensitivity and specificity >94.0% for Klebsiella spp isolates. For E. coli, the best substrate was cefpodoxime (100% sensitivity and 75.0% specificity). Cefepime presented excellent performance. The ESBL producing Klebsiella spp isolates showed higher resistance rates than the ESBL non-producing strain, for several antimicrobial drugs, either beta-lactamic or not. Irrespectively of ESBL production, these isolates showed sensitivity to carbapenems and tigecyiclin. In the E. coli and Klebsiella spp with the ESBL phenotype, the beta-lactamase genes blaTEM (89.0%), blaCTX-M (75.6%) e blaSHV (35.4 %). Were detected. 22 PFGE patterns were identified, 11 with more than one isolate. These clones comprised 50 isolates of ESBL producing K. pneumoniae, with high intra-hospital dissemination among the internment units and for times longer than one year. The transconjugants presented the ESBL phenotype and resistance to aminoglycosides. Conclusions: Our results have shown that ESBL production constitutes an essentially nosocomial problem. We conclude that the addition of cefepime to the ESBL detection tests significantly enhances the accuracy of the test when applied to E. coli. However, the ESBL producing isolates of the genus Klebsiella represent the main problem in the hospital. These isolates presented great genomic variability, indicating strong selective pressure by antimicrobial drugs, but also multiclonal dissemination, which indicates cross-transmission and an endemic situation of these bacteria in the hospital. Finally, our results indicate an easy spreading of multi-resistant plasmids, what can represent an important impact on the therapeutic options for the treatment of ESBL producing bacteria.

Orientador: Antonio Carlos Pizzolitto / Banca: Isabel Yoko Ito / Banca: Sérgio Aparecido Torres / Banca: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza / Banca: Clarice Queico Fujimura Leite / Resumo: Os Staphylococcus coagulase-negativa, particularmente, os Staphylococcus epidermidis são a causa mais freqüente de infecções relacionadas ao cateter por sua habilidade em aderir a uma superfície e entre si (aderência intercelular) formando biofilme em multicamadas sobre superfícies de polímeros. O objetivo do presente estudo foi avaliar cepas hospitalares de Staphylococcus coagulasenegativa isoladas de cateteres intravenosos, quanto à resistência a oxacilina, produção de slime, aderência ao poliestireno, habilidade de formar biofilme sobre superfícies abióticas (cateter esterilizado) e a presença de genes icaAD. Na presente pesquisa, a presença de icaA e icaD foi determinada pelo método PCR, em uma coleção de 27 amostras Staphylococcus coagulase-negativa (10 Staphylococcus epidermidis, 4 S. haemolyticus, 2 S. hominis, 2 S. lugdunensis, 1 S. saprophyticus, 1 S. schleiferi, 2 S. xylosus e 4 S. warneri). Os genes icaAD foram detectados em dez cepas S. epidermidis... (Resumo completo, clicar acesso eletrônmico abaixo) / Abstract: Coagulase-negative Staphylococcus, particularly, Staphylococcus epidermidis are frequent cause of infections associated with catheters and is attributed to the attachment ability on a surface and each other (intercellular adhesion) forming a multilayered biofilm on polymeric surfaces. The objective of the present study was to evaluate coagulase-negative Staphylococcus strains isolated from intravenous catheters by oxacillin resistance, slime production (qualitative method) and spectrophotometric assay (quantitative method), ability to form biofilm on abiotic surfaces (steriled catheter) and the presence of icaAD genes. In the present study icaA and icaD were determined by PCR method, in a collection of 27 coagulasenegative Staphylococcus (10 Staphylococcus epidermidis, 4 S. haemolyticus, 2 S. hominis, 2 S. lugdunensis, 1 S. saprophyticus, 1 S. schleiferi, 2 S. xylosus and 4 S. warneri). The icaA genes were detected in nine S. epidermidis and icaD in ten. The slime-producing ability was determined by culture on Congo red agar plates in which slime-producing strains formed black colonies in 10 S. epidermidis, 4 S.haemolyticus, 4 S. warneri, 2 S. xylosus and 1 S. chromogenes, while nonslimeformingones develop red colonies. The quantitative assay of coagulase-negative Staphylococcus was observed in 19 strains, including: 10 S. epidermidis, 3 S.haemolyticus, 3 S. warneri, 2 S. xylosus, 1 S. chromogenes. The ability of coagulasenegative Staphylococcus to form biofilm embedded in an amorphous substance wasobserved by scanning electronic microscope on abiotic surface in 10 S. epidermidis,3 S. haemolyticus, 2 S. hominis, 2 S. lugdunensis, 1 S. saprophyticus, 1 S. schleiferi,2 S. xylosus and 3 S. warneri. The oxacillin resistance was observed in 9 strains S.epidermidis, 3 S. haemolyticus, 3 S. warneri, 1 S. xylosus and 1 S. chromogenes. All strains of staphylococci were susceptible... (Complete abstract, click eletronic address below) / Doutor

As beta-lactamases de espectro ampliado (ESBL) representam um importante mecanismo de resistência aos beta-lactâmicos. Essas enzimas disseminaram-se entre membros da família Enterobacteriaceae que causam infecções relacionadas à assistência à saúde, especialmente as nosocomiais. Objetivos: (a) Determinar a prevalência de Escherichia coli e Klebsiella spp produtores de ESBL de origem hospitalar e comunitária; (b) Verificar a origem dos isolados (amostra clínica e unidade de internação); (c) Avaliar a acurácia dos testes fenotípicos de detecção de ESBL; (d) Determinar os perfis de sensibilidade aos antimicrobianos; (e) Determinar os genes de beta-lactamase; (f) Avaliar o modo de disseminação e; (g) Realizar experimentos de transferência de resistência. Material e métodos: Foram avaliados 1346 isolados (1162 E. coli, 180 K. pneumoniae e 4 K. oxytoca), de pacientes internados e ambulatoriais, entre abril de 2003 a maio de 2006, em Caxias do Sul. Um isolado/paciente foi incluído e a infecção hospitalar definida pelo CDC (Centers for Diseases Control and Prevention). Pelo método disco-difusão, conforme CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) identificou-se os produtores de ESBL (triagem: aztreonam, cefotaxima, ceftazidima, ceftriaxona e cefpodoxima e confirmatório: cefpodoxima, ceftazidima, cefotaxima, com e sem ác. clavulânico). A cefepima foi incluída nos testes. Os isolados foram submetidos a testes de sensibilidade aos antimicrobianos, por disco-difusão, segundo a CLSI; ao método de PCR para detecção dos genes bla TEM, bla SHV, bla CTX-M e; à tipagem por PGFE. A cepa E. coli αDH, como receptora, foi usada na conjugação e os transconjugantes pesquisados para produção de ESBL e perfil de sensibilidade. Resultados: As prevalências de ESBL em nível hospitalar foram: K. pneumoniae (43,7%) e E. coli (6,7%) e a comunidade, respectivamente, de 2,6% e 0,4%. As vias aéreas (escarro, aspirado traqueal, lavado broncoalveolar) , sangue e urina, e as UTIs e Clínica-Cirúrgicas foram as amostras clínicas e unidades de internação com os maiores percentuais de isolados produtores de ESBL. Independente da bactéria analisada, a ceftazidima foi o substrato com o pior desempenho nos testes. Já a cefpodoxima, a cefotaxima, a ceftriaxona e o aztreonam apresentaram sensibilidade de 100% e especificidade >94,0% para isolados de Klebsiella spp. Para E. coli a cefpodoxima foi o melhor substrato (sensibilidade de 100,0% e especificidade de 75,0%). A cepefima apresentou excelente desempenho. Os isolados de Klebsiella spp produtores de ESBL apresentaram taxas de resistência superiores àqueles apresentados pelos isolados não produtores de ESBL, para vários antimicrobianos beta-lactâmicos e não beta-lactâmicos. Independente da produção de ESBL esses isolados foram sensíveis aos carbapenêmicos e tigeciglina. Foram detectados em E. coli e Klebsiella spp com fenóitpo ESBL os genes de beta-lactamase blaTEM (89,0%), blaCTX-M (75,6%) e blaSHV (35,4%). Foram identificados 22 padrões de PFGE, sendo 11 com mais de um isolado. Esses padrões envolveram 50 isolados de K. pneumoniae produtores de ESBL, com alta disseminação intra-hospitalar entre as unidades de internação do hospital e por período superior a um ano. Os transconjugantes apresentaram fenótipo de ESBL e resistência aos aminoglicosídeos. Conclusões: Nossos resultados mostraram que a produção de ESBL constitui um problema essencialmente nosocomial. Concluímos que a adição da cefepima nos testes de detecção de ESBL leva a um aumento significante na acurácia para E. coli. No entanto, os isolados produtores de ESBL do gênero Klebsiella representam o maior problema no hospital. Esses apresentaram ampla variabilidade genômica, indicando forte pressão seletiva de antimicrobianos, mas também disseminação multiclonal, indicando transmissão cruzada e uma situação de endemia dessas bactérias no hospital. Por fim, nossos resultados indicaram uma fácil disseminação de plasmídeos multirresistentes, o que pode representar um impacto importante nas opções terapêuticas para o tratamento de infecções por bactérias produtoras de ESBL. / The extended-spectrum beta-lactamases (ESBL) represent an important mechanism of resistance to beta-lactam antibiotics. Such enzymes have spread among members of the Enterobacteriaceae family, which are responsible for infections related to health care, particularly nosocomial infections. Objectives: (a) To determine the prevalence of ESBL producing Escherichia coli and Klebsiella spp of hospital and community origin; (b) To verify the origin of the isolates (clinical sample and internment unit); (c) To evaluate the accuracy of the phenotypic tests for ESBL detection; (d) To determine the sensitivity profiles to antimicrobial drugs; (e) To identify the beta-lactamase genes; (f) To evaluate the dissemination way and; (g) To perform experiments of resistance transfer. Materials and Methods: 1,346 isolates were evaluated (1,162 E. coli, 180 K. pneumoniae and 4 K. oxytoca), from inpatient and outpatients, between April 2003 and May 2006, in Caxias do Sul. One isolate/patient was included and the nosocomial infection defined by the CDC (Centers for Diseases Control and Prevention). By means of the disc-diffusion method, according to the CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute), the ESBL producers were identified (screening: aztreonam, cefotaxime, ceftazidime, ceftriaxone, and cefpodoxime and confirmation: cefpodoxime, ceftazidime, cefotaxime, with and without clavulanic acid). Cefepime was included in the tests. The isolates were submitted to sensitivity tests to antimicrobial drugs, using disc-diffusion, defined by CLSI; to PCR for detecting the bla TEM, bla SHV, bla CTX-M genes, and; to PGFE typification. The E. coli a-DH strain was used as the receptor in conjugation experiments and the transconjugants were analyzed with regards to ESBL production and sensitivity profile. Results: The ESBL prevalences at the hospital level were: K. pneumoniae (43.7%) and E. coli (6.7%) and at the community, 2.6% and 0.4%, respectively. The airways (sputum, traqueal aspiration and broncoalveolar lavage), blood, and urine, and the ICUs and surgical units were the clinical samples and the internment units presenting the largest percentages of ESBL producing isolates. Independently of the bacterium, ceftazidime was the substrate which provided the poorest results in the tests. On the other hand, cefpodoxime, cefotaxime, ceftriaxone, and aztreonam showed 100% sensitivity and specificity >94.0% for Klebsiella spp isolates. For E. coli, the best substrate was cefpodoxime (100% sensitivity and 75.0% specificity). Cefepime presented excellent performance. The ESBL producing Klebsiella spp isolates showed higher resistance rates than the ESBL non-producing strain, for several antimicrobial drugs, either beta-lactamic or not. Irrespectively of ESBL production, these isolates showed sensitivity to carbapenems and tigecyiclin. In the E. coli and Klebsiella spp with the ESBL phenotype, the beta-lactamase genes blaTEM (89.0%), blaCTX-M (75.6%) e blaSHV (35.4 %). Were detected. 22 PFGE patterns were identified, 11 with more than one isolate. These clones comprised 50 isolates of ESBL producing K. pneumoniae, with high intra-hospital dissemination among the internment units and for times longer than one year. The transconjugants presented the ESBL phenotype and resistance to aminoglycosides. Conclusions: Our results have shown that ESBL production constitutes an essentially nosocomial problem. We conclude that the addition of cefepime to the ESBL detection tests significantly enhances the accuracy of the test when applied to E. coli. However, the ESBL producing isolates of the genus Klebsiella represent the main problem in the hospital. These isolates presented great genomic variability, indicating strong selective pressure by antimicrobial drugs, but also multiclonal dissemination, which indicates cross-transmission and an endemic situation of these bacteria in the hospital. Finally, our results indicate an easy spreading of multi-resistant plasmids, what can represent an important impact on the therapeutic options for the treatment of ESBL producing bacteria.

Orientador: Pedro Bertolini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-16T20:23:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sugizaki_MariaFatima_M.pdf: 2623810 bytes, checksum: 731401dad432440f82c91b75281af3d1 (MD5) Previous issue date: 1986 / Resumo: Não informado / Abstract: Paracoccidioidomycosis, an infectious disease induced by the pathogenic fungus Paracoccidioides brasiliensis has drawn a great deal of attention in Brazil, specially in the State of são Paulo, where the infection is endemic. The major difficulty in studying this disease , by the mycological view point, is related to theethiological agent isolation usually provided from clinical samples, which are always contamineted other kinds of microorganisms, whose accelerated growth impedes recuperation from P. brasiliensis ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Biologia e Patologia Buco-Dental

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2016. / Submitted by Nayara Silva (nayarasilva@bce.unb.br) on 2016-06-27T14:00:04Z No. of bitstreams: 1 2016_ElisangelaAlinePereira.pdf: 802072 bytes, checksum: 516a1149a3b2b4b2103a8fb940e6b57b (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-06-27T18:52:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_ElisangelaAlinePereira.pdf: 802072 bytes, checksum: 516a1149a3b2b4b2103a8fb940e6b57b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-27T18:52:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_ElisangelaAlinePereira.pdf: 802072 bytes, checksum: 516a1149a3b2b4b2103a8fb940e6b57b (MD5) / Staphylococcus aureus é o microrganismo mais isolado nos casos de mastites bovina e destaca-se por possuir resistência aos tratamentos com antimicrobianos convencionais e devido ao seu potencial em produzir toxinas causadoras de doenças. O objetivo desse trabalho foi detectar a presença dos genes de enterotoxinas e da toxina da Síndrome do Choque Tóxico dos Staphylococcus aureus isolados do leite de animais em mastite clínica. Foram analisadas 75 amostras de S. aureus do banco de germoplasma do Laboratório de Microbiologia Médica Veterinário da Universidade de Brasília. As amplificações obtidas apresentaram valores maiores que o esperado para os genes de enterotoxinas. Foram identificados entre os isolados de S. aureus um percentual de 10,68% de amplificações com utilização de primers isoladamente (uniplex) e não houve amplificações em combinação com diferentes primers (multiplex). Analisando a PCR-uniplex, houve maior número de amplificações da enterotoxina SEA, presente em 8% dos isolados. Os genes SEB e SEC, foram detectados em 1,34% das amostras e os genes SED e TSST-1 não apresentaram nenhuma amplificação nesse estudo. O tamanho do fragmento para SEA foi de 1.200 pb em 4 amostras amplificadas, 1 amostra com 800 pb e outra com 620 pb. Em relação a SEB e a SEC, houve apenas amplificação de uma de suas amostras, com tamanho da banda de 1.200 pb e 1100 pb respectivamente. O conhecimento do perfil molecular dos S. aureus auxilia em estudos epidemiológicos de infecções intramamárias de rebanhos leiteiros e conhecendo o potencial toxigênico das estirpes de S. aureus, corrobora para prevenir e controlar as infecções nos rebanhos para melhorar a qualidade dos produtos oferecidos à população. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Staphylococcus aureus is the most frequently isolated organism in cases of bovine mastitis and stands by having resistance to conventional antibiotic treatments and due to its potential to produce toxins that cause diseases. The aim of this study was to detect the presence of enterotoxin genes and the Toxic Shock Syndrome toxin gene of Staphylococcus aureus isolated from the milk of animals with clinical mastitis. Seventy-five samples of S. aureus, from the gene bank of the Medical Veterinary Microbiology Laboratory of the University of Brasilia, were analysed. The obtained amplifications showed higher values than expected for the enterotoxin genes. We identified 10.68% amplifications when using singly primers (uniplex), but there were no amplification when combining different primers (multiplex). Analyzing the uniplex PCR, there were more amplifications of the SEA enterotoxin gene (8% of the isolates). The SEB and SEC genes were detected in 1.34% of the samples and the SED and the TSST-1 genes showed no amplification in this study. The size of the SEA fragment was 1.200 pb in 4 amplified samples, 800 pb in 1 sample and 620 pb in another one. Regarding the SEB and the SEC genes, there was the amplification of only one of the samples, that had a band size of 1.200 pb and 1100 bp, respectively. Knowledge about the molecular profile of S. aureus assists in epidemiological studies about mammary infections of dairy herds. Moreover, knowledge about the toxigenic potential of S. aureus strains helps to prevent and control infections in herds in order to improve the quality of the products offered to the population.

Orientador: Mara Correa Lelles Nogueira / Banca: Ana Lúcia da Costa Darini / Banca: Fernando Gongora Rubio / Resumo: A produção de beta-lactamases de espectro estendido (ESBL) por bactérias gram-negativas causadoras de infecções hospitalares é a maior causa de falha terapêutica com cefalosporinas. Klebsiella pneumoniae, um importante causador de infecções hospitalares em todo o mundo apresenta a maior diversidade de fenótipos de resistência associados à produção de ESBL, e são os organismos onde estas enzimas são mais comumente encontradas. As ESBL dos tipos TEM, SHV e CTX-M são as mais prevalentes em K. pneumoniae, e nos últimos anos, CTX-M emergiu como o principal mecanismo de resistência a cefalosporinas de amplo espectro. Surtos de infecção hospitalar causados por esta bactéria estão associados à disseminação de clones resistentes, e a disseminação de genes de resistência entre cepas ecologicamente relacionadas é comum. O Brasil apresenta uma das mais altas frequências de K. pneumoniae produtoras de ESBL do mundo, mas estudos para a caracterização genética das ESBL no país são raros. Este estudo teve como objetivos detectar e identificar os principais genes responsáveis pela produção de ESBL por cepas de K. pneumoniae isoladas de pacientes internados no Hospital de Base de São José do Rio Preto (HB), no período entre dezembro de 2005 e outubro de 2007, e realizar a tipagem molecular destes isolados buscando identificar seu perfil de ocorrência e disseminação dentro do HB. Noventa e quatro isolados clínicos de K. pneumoniae foram estudados. A detecção e identificação de blaCTX-M, blaSHV e blaTEM foi realizada por PCR e sequenciamento. A tipagem molecular dos isolados foi realizada por PFGE e ERIC-PCR. Os genes responsáveis pela produção de ESBL encontrados foram blaSHV-2, blaSHV-2a, blaSHV-5, blaSHV-12, blaSHV-31 blaCTX-M-2, blaCTX-M-59 e blaCTX-M-15. Além destes, foram identificados blaSHV-1, blaSHV-11, blaSHV-38, blaSHV-62, blaSHV-25,... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Antibiotic resistance due to the production of extended-spectrum beta-lactamases (ESBL) is a worldwide increasing problem, leading to therapeutic failure with third-generation cephalosporins. K. pneumoniae, an important nosocomial pathogen, presents the higher diversity of ESBL and resistance phenotypes, and is the organism where ESBL are most frequently identified. The TEM, SHV and CTX-M ESBL types are the most prevalent in K. pneumoniae, and in recent years, CTX-M has emerged as the main mechanism of resistance to third generation cephalosporins. Hospital infections caused by K. pneumoniae are associated to the dissemination of resistant clones, and also to dissemination of resistance genes among ecologically related strains. In Brazil, ESBL producing K. pneumoniae are detected with the highest frequencies of the world, but studies for the genetic characterization of this resistance mechanism in our country are rare. This study aimed to detect and identify the main ESBL genes harbored by K. pneumoniae isolated from patients admitted to the Hospital de Base de São José do Rio Preto (HB), within the period of December/2005 and October/2007. The pattern of dissemination of the ESBL producing isolates inside the institution was also investigated. Ninety four clinical isolates of K. pneumoniae were studied. The detection and identification of blaCTX-M, blaSHV and blaTEM was performed by PCR and sequencing. The molecular typing was performed by PFGE and ERIC-PCR. The ESBL genes detected were blaSHV-2, blaSHV-2a, blaSHV-5, blaSHV-12, blaSHV-31 blaCTX-M-2, blaCTX-M-59 and blaCTX-M-15. Also, other beta-lactamase genes as blaSHV-1, blaSHV-11, blaSHV-38, blaSHV-62, blaSHV-25, blaSHV-108 and blaTEM-1 were identified. The presence of blaCTX-M in 58, 5% of the studied isolates indicate that this is probably the main genetic mechanism of ESBL production... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-05Bitstream added on 2014-06-13T19:14:42Z : No. of bitstreams: 1 shinya_ty_me_sjrp.pdf: 938343 bytes, checksum: c5a013f3a467162e18061087abbec274 (MD5) / Devido à necessidade de obtenção de novas moléculas com ação antimicrobiana, o presente trabalho visou investigar a capacidade antagônica do extrato produzido pelo fungo Trichosporon asahii. O extrato foi obtido pela fermentação do fungo em fermentador de bancada 7L, a 28°C por 72 horas. O caldo fermentado foi centrifugado a 2500 rpm por 20 minutos, sendo o sobrenadante a fração denominada extrato bruto, que foi seco em estufa (37°C) e ressuspendido em água destilada, para testes de ação antimicrobiana contra os micro-organismos Candida albicans, Malassezia pachydermatis, Trichophyton mentagrophytes, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 e ATCC 27853, Xanthomonas campestris pv campestris. O teste de sensibilidade foi o de Concentração Bactericida e Fungicida Mínima (CBM e CFM), através da macrodiluição em tubos e plaqueamento. Numa segunda etapa, o extrato bruto foi submetido a uma separação líquido-líquido utilizando os solventes hexano e diclorometano, obtendo-se frações aquosa e orgânica. Numa última etapa de purificação, o extrato diclorometânico passou por uma cromatografia de troca-iônica, cromatografia em sílica gel e precipitação com sulfato de amônio. Foram calculados alguns parâmetros de fermentação do T. asahii, através dos métodos de quantificação de açúcares redutores, pH, viabilidade e brotamento das leveduras e quantidade total de células. O teste de sensibilidade do extrato bruto demonstrou apenas atividade antibacteriana (30000 µg/mL sobre P. aeruginosa ATCC 9027, 33000 µg/mL sobre P. aeruginosa ATCC 27853 e 75000 µg/mL sobre X. campestris). Observou-se uma diminuição da CBM para a fração diclorometânica (17500 µg/mL sobre P. aeruginosa ATCC 9027, 20000 µg/mL sobre P. aeruginosa ATCC 27853 e 60000 µg/mL sobre X. campestris). Na pré-purificação, o método que demonstrou maior eficácia para o propósito... / Nowadays there is a demand for new natural molecules that may contribute to the control of pathogenic microorganisms. In this study it was aimed to investigate the antimicrobial ability of the broth produced by the culture of the fungus Trichosporon asahii. The extract was obtained by fermentation of T. asahii bench 7 L fermenter at 28° C for 72 hours. The fermented broth was centrifuged at 2500 rpm for 20 minutes, and the supernatant fraction termed crude extract, which was dried in oven (37° C) and resuspended in distilled water for testing antimicrobial activity against the microorganisms Candida albicans, Malassezia pachydermatis, Trichophyton mentagrophytes, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 and ATCC 27853 and Xanthomonas campestris pv campestris. The method used for quantification of antibiotic was the Minimum Bactericidal and Fungicidal Concentration (MBC and MFC) by macrodilution tubes and plating. In a second stage, the crude extract was subjected to liquid-liquid separation using dichloromethane and hexane solvents to yield aqueous and organic fractions. A new purification step from the dichloromethanic fraction passed through an ion exchange chromatography, silica gel chromatography and by precipitation with ammonium sulfate. It was also calculated some fermentation parameters of T. asahii by analytical methods for quantifying reducing sugars, pH, cell viability, budding yeasts and total cells. The MBC test showed only antibacterial activity (33,000 µg/mL for P. aeruginosa ATCC 27853, 30,000 µg/mL for P. aeruginosa ATCC 9027 and 75,000 µg/mL for X. campestris). There was a decrease in the MBC for the dichloromethanic fraction (20,000 µg/mL for P. aeruginosa ATCC 27853, 17,500 µg/mL for P. aeruginosa ATCC 9027 and 60,000 µg/mL for X. campestris). In the pre-purification step, the ion exchange chromatography was the more effective method... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-16Bitstream added on 2014-06-13T20:29:44Z : No. of bitstreams: 1 probst_is_me_botib.pdf: 1176165 bytes, checksum: 785a86c28d825ef0c145ca1427d82c9e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As pesquisas sobre as propriedades medicinais de plantas estão focadas em diversas áreas, tendo a atividade antimicrobiana e o uso potencial contra linhagens multirresistentes recebido atenção especial. O presente trabalho teve como objetivo geral avaliar o potencial antimicrobiano de sete óleos essenciais (OE) isoladamente, e verificar o possível sinergismo de alguns destes OE quando combinados entre si e com antimicrobianos padronizados sobre linhagens bacterianas de importância clínica com perfis de resistência diferenciados, sendo estas de Staphylococcus aureus (linhagens meticilina-resistentes, MRSA, e meticilina-sensível, MSSA), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa (todos isolados clínicos humanos) e Salmonella spp. (isolados clínicos e de alimentos). Os ensaios foram divididos em duas etapas. Inicialmente (Artigo I), foi obtida a Concentração Inibitória Mínima (CIM) para os óleos de assa-peixe (Vernonia polyanthes L.), alecrim (Rosmarinus officinalis L.), alecrim do campo (Baccharis dracunculifolia D.C.), cravo da Índia (Caryophyllus aromaticus L.), canela (Cinnamomum zeyalnicum L.),camomila (Matricaria recutita L.) e pitanga (Eugenia uniflora L.), através da metodologia de diluição em Agar. Os OE foram caracterizados através de cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG-EM), sendo a composição química de cada óleo relacionada com sua atividade sobre os diferentes perfis bacterianos. Na segunda parte do estudo (Artigo II), baseando-se no potencial de ação e rendimento de extração dos óleos, foi avaliado o sinergismo entre os quatro óleos com maiores potenciais, bem como a atividade conjunta destes com tetraciclina e oxacilina frente S. aureus, E. coli e P. aeruginosa. A combinação entre os OE e antibióticos foi testada utilizando a metodologia de difusão em discos. O potencial... / Research about medicinal properties of plants is focused on several areas, and its antimicrobial activities and potential use against multiresistant strains have received special attention. This study aimed to assess the antimicrobial potential of seven essential oils (EO) alone, and the possible synergism of some of these EO when combined with each other and with standard antimicrobials against clinically important bacterial strains with different resistance profiles, among them, Staphylococcus aureus (methicillin-resistant (MRSA) and methicillin-sensitive (MSSA) STRAINS), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa (all human clinical isolates), and Salmonella spp. (clinical and food samples). The tests were divided into two steps. Initially (Article I), we obtained the minimum inhibitory concentration (MIC) for assa peixe (Vernonia polyanthes L.), rosemary (Rosmarinus officinalis L.), alecrim do campo (Baccharis dracunculifolia DC), clove (Caryophyllus aromaticus L.), cinnamon (Cinnamomum zeyalnicum L.), chamomile (Matricaria recutita L.) and Brazilian cherry (Eugenia uniflora L.) oils, by agar dilution method. The OE were characterized by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and the chemical composition of each oil was related to the antimicrobial activity against the different bacterial profiles. In the second part of the study (Article II), based on the action potential and yield of extraction of the oils, we evaluated the synergism between the four oils with higher potential, as well as the synergism with tetracycline and oxacillin against S. aureus, E. coli and P. aeruginosa. The combinations between EO and antibiotics were tested by the disc diffusion method. The synergistic potential of the oils was also evaluated by this method and by the microdilution. The possible interaction between the oils was also verified... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Pedro de Oliva Neto / Banca: Ary Fernandes Júnior / Banca: Valéria Marta Gomes Lima / Resumo: Devido à necessidade de obtenção de novas moléculas com ação antimicrobiana, o presente trabalho visou investigar a capacidade antagônica do extrato produzido pelo fungo Trichosporon asahii. O extrato foi obtido pela fermentação do fungo em fermentador de bancada 7L, a 28°C por 72 horas. O caldo fermentado foi centrifugado a 2500 rpm por 20 minutos, sendo o sobrenadante a fração denominada extrato bruto, que foi seco em estufa (37°C) e ressuspendido em água destilada, para testes de ação antimicrobiana contra os micro-organismos Candida albicans, Malassezia pachydermatis, Trichophyton mentagrophytes, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 e ATCC 27853, Xanthomonas campestris pv campestris. O teste de sensibilidade foi o de Concentração Bactericida e Fungicida Mínima (CBM e CFM), através da macrodiluição em tubos e plaqueamento. Numa segunda etapa, o extrato bruto foi submetido a uma separação líquido-líquido utilizando os solventes hexano e diclorometano, obtendo-se frações aquosa e orgânica. Numa última etapa de purificação, o extrato diclorometânico passou por uma cromatografia de troca-iônica, cromatografia em sílica gel e precipitação com sulfato de amônio. Foram calculados alguns parâmetros de fermentação do T. asahii, através dos métodos de quantificação de açúcares redutores, pH, viabilidade e brotamento das leveduras e quantidade total de células. O teste de sensibilidade do extrato bruto demonstrou apenas atividade antibacteriana (30000 µg/mL sobre P. aeruginosa ATCC 9027, 33000 µg/mL sobre P. aeruginosa ATCC 27853 e 75000 µg/mL sobre X. campestris). Observou-se uma diminuição da CBM para a fração diclorometânica (17500 µg/mL sobre P. aeruginosa ATCC 9027, 20000 µg/mL sobre P. aeruginosa ATCC 27853 e 60000 µg/mL sobre X. campestris). Na pré-purificação, o método que demonstrou maior eficácia para o propósito... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Nowadays there is a demand for new natural molecules that may contribute to the control of pathogenic microorganisms. In this study it was aimed to investigate the antimicrobial ability of the broth produced by the culture of the fungus Trichosporon asahii. The extract was obtained by fermentation of T. asahii bench 7 L fermenter at 28° C for 72 hours. The fermented broth was centrifuged at 2500 rpm for 20 minutes, and the supernatant fraction termed crude extract, which was dried in oven (37° C) and resuspended in distilled water for testing antimicrobial activity against the microorganisms Candida albicans, Malassezia pachydermatis, Trichophyton mentagrophytes, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 and ATCC 27853 and Xanthomonas campestris pv campestris. The method used for quantification of antibiotic was the Minimum Bactericidal and Fungicidal Concentration (MBC and MFC) by macrodilution tubes and plating. In a second stage, the crude extract was subjected to liquid-liquid separation using dichloromethane and hexane solvents to yield aqueous and organic fractions. A new purification step from the dichloromethanic fraction passed through an ion exchange chromatography, silica gel chromatography and by precipitation with ammonium sulfate. It was also calculated some fermentation parameters of T. asahii by analytical methods for quantifying reducing sugars, pH, cell viability, budding yeasts and total cells. The MBC test showed only antibacterial activity (33,000 µg/mL for P. aeruginosa ATCC 27853, 30,000 µg/mL for P. aeruginosa ATCC 9027 and 75,000 µg/mL for X. campestris). There was a decrease in the MBC for the dichloromethanic fraction (20,000 µg/mL for P. aeruginosa ATCC 27853, 17,500 µg/mL for P. aeruginosa ATCC 9027 and 60,000 µg/mL for X. campestris). In the pre-purification step, the ion exchange chromatography was the more effective method... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ary Fernandes Junior / Banca: Maria de Lourdes Ribeiro da Cunha / Banca: Rosemeire Cristina Linhari Pietro / Resumo: As pesquisas sobre as propriedades medicinais de plantas estão focadas em diversas áreas, tendo a atividade antimicrobiana e o uso potencial contra linhagens multirresistentes recebido atenção especial. O presente trabalho teve como objetivo geral avaliar o potencial antimicrobiano de sete óleos essenciais (OE) isoladamente, e verificar o possível sinergismo de alguns destes OE quando combinados entre si e com antimicrobianos padronizados sobre linhagens bacterianas de importância clínica com perfis de resistência diferenciados, sendo estas de Staphylococcus aureus (linhagens meticilina-resistentes, MRSA, e meticilina-sensível, MSSA), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa (todos isolados clínicos humanos) e Salmonella spp. (isolados clínicos e de alimentos). Os ensaios foram divididos em duas etapas. Inicialmente (Artigo I), foi obtida a Concentração Inibitória Mínima (CIM) para os óleos de assa-peixe (Vernonia polyanthes L.), alecrim (Rosmarinus officinalis L.), alecrim do campo (Baccharis dracunculifolia D.C.), cravo da Índia (Caryophyllus aromaticus L.), canela (Cinnamomum zeyalnicum L.),camomila (Matricaria recutita L.) e pitanga (Eugenia uniflora L.), através da metodologia de diluição em Agar. Os OE foram caracterizados através de cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG-EM), sendo a composição química de cada óleo relacionada com sua atividade sobre os diferentes perfis bacterianos. Na segunda parte do estudo (Artigo II), baseando-se no potencial de ação e rendimento de extração dos óleos, foi avaliado o sinergismo entre os quatro óleos com maiores potenciais, bem como a atividade conjunta destes com tetraciclina e oxacilina frente S. aureus, E. coli e P. aeruginosa. A combinação entre os OE e antibióticos foi testada utilizando a metodologia de difusão em discos. O potencial... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Research about medicinal properties of plants is focused on several areas, and its antimicrobial activities and potential use against multiresistant strains have received special attention. This study aimed to assess the antimicrobial potential of seven essential oils (EO) alone, and the possible synergism of some of these EO when combined with each other and with standard antimicrobials against clinically important bacterial strains with different resistance profiles, among them, Staphylococcus aureus (methicillin-resistant (MRSA) and methicillin-sensitive (MSSA) STRAINS), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa (all human clinical isolates), and Salmonella spp. (clinical and food samples). The tests were divided into two steps. Initially (Article I), we obtained the minimum inhibitory concentration (MIC) for assa peixe (Vernonia polyanthes L.), rosemary (Rosmarinus officinalis L.), alecrim do campo (Baccharis dracunculifolia DC), clove (Caryophyllus aromaticus L.), cinnamon (Cinnamomum zeyalnicum L.), chamomile (Matricaria recutita L.) and Brazilian cherry (Eugenia uniflora L.) oils, by agar dilution method. The OE were characterized by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and the chemical composition of each oil was related to the antimicrobial activity against the different bacterial profiles. In the second part of the study (Article II), based on the action potential and yield of extraction of the oils, we evaluated the synergism between the four oils with higher potential, as well as the synergism with tetracycline and oxacillin against S. aureus, E. coli and P. aeruginosa. The combinations between EO and antibiotics were tested by the disc diffusion method. The synergistic potential of the oils was also evaluated by this method and by the microdilution. The possible interaction between the oils was also verified... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre