Orientador: Pasqual Barretti / Banca: Regina El Dib / Banca: Oswaldo Merege / Resumo: A escolha do regime antimicrobiano para o tratamento das peritonites em Diálise Peritoneal (DP) é fundamental para uma evolução clinica favorável. Não há consenso sobre a melhor terapia; poucos estudos prospectivos controlados foram publicados e a única revisão sistemática com meta-análise disponível não mostrou superioridade de alguma classe ou associação antimicrobiana. O objetivo desta revisão foi analisar os resultados do tratamento das peritonites em adultos em DP empregando duas metodologias, revisão sistemática com meta-análise de estudos clínicos randomizados (ECR) e a meta-análise proporcional de série de casos, uma nova estratégia que tem sido utilizada em outras condições clinicas. Método: Foi realizada uma revisão de literatura, sem restrição de idioma. Os estudos foram obtidos das bases CENTRAL, MEDLINE, EMBASE e LILACS. Os critérios de inclusão foram: (1) ECR e série de casos com número de pacientes em cada estudo maior que cinco (2) uso de algum antibiótico, ou esquema antibiótico para tratamento inicial de peritonite em DP (ex: cefazolina/gentamicina, vancomicina/gentamicina); para germes gram-positivos (ex:vancomicina/cefalosporina da primeira geração) e para gram-negativos (ex: gentamicina, ceftazidima e fluoquinonolonas) (3) estudos relatando a taxa de resolução. Para os ECR foram considerados os desfechos cura, resposta primária, remoção de cateter e recidiva epara metanálise proporcional de serie de casos foi considerado apenas o desfecho percentagem de cura. Resultados:Um total de 65 estudos (22 ECR e 43 série de casos) preencheram os critérios de inclusão. Nos RCT não foi observada superioridade de nenhuma classe ou associação antimicrobianautilizada para tratamento empírico ou para episódios causados por germes gram-positivos ou negativos. Entre as serie de casos, a associação ceftazidina/glicopeptídeo (proporção total= 87% [IC 95% = 0,83-0,91] ) apresentou... / Abstract: The choice of antimicrobials for treatment of peritoneal dialysis (PD)-related peritonitis is crucial for a favorable outcome. There is no consensus about the best therapy; few prospective controlled studies have been published, and the only published systematic reviews did not report superiority of any class of antimicrobials. The objective of this review was to analyze the results of PD peritonitis treatment in adult patients by employing two methodologies, the systematic review with meta-analysis of randomized clinical trials (RCT) and the proportional meta-analysis of cases series, a new strategy that has been used in other clinical settings. Methods: A review of the literature was conducted. There was no language restriction. Studies were obtained from MEDLINE, EMBASE, and LILACS. The inclusion criteria were: (1) case series and RCTs with the number of reported patients in each study greater than five, (2) use of any antibiotic therapy for initial treatment of PD-related peritonitis (e.g., cefazolin plus gentamicin, vancomycin plus gentamicin), for gram-positive (e.g., vancomycin, first generation cephalosporin), or for gram-negative rods (e.g., gentamicin, ceftazidime, fluoroquinolone), and (3) studies specifying the rates of resolution. For RCT analyses the outcomes resolution, primary response, catheter removal, and relapse were considered, whilefor proportional meta-analysis only the outcome resolution rate was taken using a random-effects model, and the pooled resolution rates were calculated. Results: 64 studies (21 RCT and 43 case series) met all inclusion criteria. There were 21 comparisons between the antibiotics using in RCT. No superior antimicrobial class or associations were identified, when used for empirical treatment or for gram-positive or gram-negative episodes. Among the case series the pooled resolution rate of ceftazidime plus glycopeptide as initial treatment (pooled propor = ... / Mestre

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-26. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:28:27Z : No. of bitstreams: 1 000849323.pdf: 2210676 bytes, checksum: 9a2b0916dc4afbd9f41047f5af8cb332 (MD5) / A escolha do regime antimicrobiano para o tratamento das peritonites em Diálise Peritoneal (DP) é fundamental para uma evolução clinica favorável. Não há consenso sobre a melhor terapia; poucos estudos prospectivos controlados foram publicados e a única revisão sistemática com meta-análise disponível não mostrou superioridade de alguma classe ou associação antimicrobiana. O objetivo desta revisão foi analisar os resultados do tratamento das peritonites em adultos em DP empregando duas metodologias, revisão sistemática com meta-análise de estudos clínicos randomizados (ECR) e a meta-análise proporcional de série de casos, uma nova estratégia que tem sido utilizada em outras condições clinicas. Método: Foi realizada uma revisão de literatura, sem restrição de idioma. Os estudos foram obtidos das bases CENTRAL, MEDLINE, EMBASE e LILACS. Os critérios de inclusão foram: (1) ECR e série de casos com número de pacientes em cada estudo maior que cinco (2) uso de algum antibiótico, ou esquema antibiótico para tratamento inicial de peritonite em DP (ex: cefazolina/gentamicina, vancomicina/gentamicina); para germes gram-positivos (ex:vancomicina/cefalosporina da primeira geração) e para gram-negativos (ex: gentamicina, ceftazidima e fluoquinonolonas) (3) estudos relatando a taxa de resolução. Para os ECR foram considerados os desfechos cura, resposta primária, remoção de cateter e recidiva epara metanálise proporcional de serie de casos foi considerado apenas o desfecho percentagem de cura. Resultados:Um total de 65 estudos (22 ECR e 43 série de casos) preencheram os critérios de inclusão. Nos RCT não foi observada superioridade de nenhuma classe ou associação antimicrobianautilizada para tratamento empírico ou para episódios causados por germes gram-positivos ou negativos. Entre as serie de casos, a associação ceftazidina/glicopeptídeo (proporção total= 87% [IC 95% = 0,83-0,91] ) apresentou... / The choice of antimicrobials for treatment of peritoneal dialysis (PD)-related peritonitis is crucial for a favorable outcome. There is no consensus about the best therapy; few prospective controlled studies have been published, and the only published systematic reviews did not report superiority of any class of antimicrobials. The objective of this review was to analyze the results of PD peritonitis treatment in adult patients by employing two methodologies, the systematic review with meta-analysis of randomized clinical trials (RCT) and the proportional meta-analysis of cases series, a new strategy that has been used in other clinical settings. Methods: A review of the literature was conducted. There was no language restriction. Studies were obtained from MEDLINE, EMBASE, and LILACS. The inclusion criteria were: (1) case series and RCTs with the number of reported patients in each study greater than five, (2) use of any antibiotic therapy for initial treatment of PD-related peritonitis (e.g., cefazolin plus gentamicin, vancomycin plus gentamicin), for gram-positive (e.g., vancomycin, first generation cephalosporin), or for gram-negative rods (e.g., gentamicin, ceftazidime, fluoroquinolone), and (3) studies specifying the rates of resolution. For RCT analyses the outcomes resolution, primary response, catheter removal, and relapse were considered, whilefor proportional meta-analysis only the outcome resolution rate was taken using a random-effects model, and the pooled resolution rates were calculated. Results: 64 studies (21 RCT and 43 case series) met all inclusion criteria. There were 21 comparisons between the antibiotics using in RCT. No superior antimicrobial class or associations were identified, when used for empirical treatment or for gram-positive or gram-negative episodes. Among the case series the pooled resolution rate of ceftazidime plus glycopeptide as initial treatment (pooled propor = ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-13Bitstream added on 2014-06-13T20:56:18Z : No. of bitstreams: 1 tolentino_fm_me_sjrp.pdf: 712675 bytes, checksum: a173e0a0b0b13ecd5a1bb07001fdec0b (MD5) / A produção de beta-lactamases de espectro estendido (ESBL) por bactérias gram-negativas causadoras de infecções hospitalares é a maior causa de falha terapêutica com cefalosporinas. Klebsiella pneumoniae, um importante causador de infecções hospitalares em todo o mundo apresenta a maior diversidade de fenótipos de resistência associados à produção de ESBL, e são os organismos onde estas enzimas são mais comumente encontradas. As ESBL dos tipos TEM, SHV e CTX-M são as mais prevalentes em K. pneumoniae, e nos últimos anos, CTX-M emergiu como o principal mecanismo de resistência a cefalosporinas de amplo espectro. Surtos de infecção hospitalar causados por esta bactéria estão associados à disseminação de clones resistentes, e a disseminação de genes de resistência entre cepas ecologicamente relacionadas é comum. O Brasil apresenta uma das mais altas frequências de K. pneumoniae produtoras de ESBL do mundo, mas estudos para a caracterização genética das ESBL no país são raros. Este estudo teve como objetivos detectar e identificar os principais genes responsáveis pela produção de ESBL por cepas de K. pneumoniae isoladas de pacientes internados no Hospital de Base de São José do Rio Preto (HB), no período entre dezembro de 2005 e outubro de 2007, e realizar a tipagem molecular destes isolados buscando identificar seu perfil de ocorrência e disseminação dentro do HB. Noventa e quatro isolados clínicos de K. pneumoniae foram estudados. A detecção e identificação de blaCTX-M, blaSHV e blaTEM foi realizada por PCR e sequenciamento. A tipagem molecular dos isolados foi realizada por PFGE e ERIC-PCR. Os genes responsáveis pela produção de ESBL encontrados foram blaSHV-2, blaSHV-2a, blaSHV-5, blaSHV-12, blaSHV-31 blaCTX-M-2, blaCTX-M-59 e blaCTX-M-15. Além destes, foram identificados blaSHV-1, blaSHV-11, blaSHV-38, blaSHV-62, blaSHV-25,... / Antibiotic resistance due to the production of extended-spectrum beta-lactamases (ESBL) is a worldwide increasing problem, leading to therapeutic failure with third-generation cephalosporins. K. pneumoniae, an important nosocomial pathogen, presents the higher diversity of ESBL and resistance phenotypes, and is the organism where ESBL are most frequently identified. The TEM, SHV and CTX-M ESBL types are the most prevalent in K. pneumoniae, and in recent years, CTX-M has emerged as the main mechanism of resistance to third generation cephalosporins. Hospital infections caused by K. pneumoniae are associated to the dissemination of resistant clones, and also to dissemination of resistance genes among ecologically related strains. In Brazil, ESBL producing K. pneumoniae are detected with the highest frequencies of the world, but studies for the genetic characterization of this resistance mechanism in our country are rare. This study aimed to detect and identify the main ESBL genes harbored by K. pneumoniae isolated from patients admitted to the Hospital de Base de São José do Rio Preto (HB), within the period of December/2005 and October/2007. The pattern of dissemination of the ESBL producing isolates inside the institution was also investigated. Ninety four clinical isolates of K. pneumoniae were studied. The detection and identification of blaCTX-M, blaSHV and blaTEM was performed by PCR and sequencing. The molecular typing was performed by PFGE and ERIC-PCR. The ESBL genes detected were blaSHV-2, blaSHV-2a, blaSHV-5, blaSHV-12, blaSHV-31 blaCTX-M-2, blaCTX-M-59 and blaCTX-M-15. Also, other beta-lactamase genes as blaSHV-1, blaSHV-11, blaSHV-38, blaSHV-62, blaSHV-25, blaSHV-108 and blaTEM-1 were identified. The presence of blaCTX-M in 58, 5% of the studied isolates indicate that this is probably the main genetic mechanism of ESBL production... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-11-30T14:53:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 109331_Monique.pdf: 821126 bytes, checksum: 211cd45acfda901f7808b74a824a0d73 (MD5) license.txt: 214 bytes, checksum: a5b8d016460874115603ed481bad9c47 (MD5) Previous issue date: 2014 / A sepse e síndrome de disfunção orgânica múltipla representam um problema clínico de alta relevância, principalmente devido a sua grande incidência em pacientes críticos e aos seus altos índices de mortalidade. Apesar de medidas terapêuticas terem sido capazes de diminuir a mortalidade, sabe-se que muitos sobreviventes de sepse não são capazes de retomar suas atividades usuais. A encefalopatia associada à sepse (EAS) é muitas vezes a primeira disfunção orgânica a se manifestar. A presença da EAS está associada a maior mortalidade e pior prognóstico e muitos pacientes apresentam dano cognitivo a médio e longo prazo que pode ser irreversível. Os mecanismos associados estao em torno do aumento de citocinas pró-inflamatórias, alterações na permeabilidade da barreira hematoencefálica (BHE), ativação microglial com a potencializacao da liberação de citocinas e o estresse oxidativo resultando no dano neuronal. Por conseguinte, tais eventos podem ser potencializados através da participação de moléculas que, quando ativadas perpetuam a resposta inflamatória e a quebra da BHE. Sendo assim é possível postular que a molécula CD40 possa estar envolvida nesse processo inflamatório. O objetivo deste estudo foi investigar a interação entre as moléculas CD40-CD40L sob parâmetros neuroinflamatórios e comportamentais em ratos submetidos a modelo de sepse. Ratos Wistar machos foram submetidos à ligação e perfuração cecal (CLP) para indução de sepse. Os animais foram divididos em sham, CLP, CLP + 1ug/kg, 10ug/kg e 100ug/kg de anticorpo antiCD40 administrado por via intracerebroventricular. Foram acompanhados por 10 dias para curva de sobrevivência e testes comportamentais. Em outro experimento, animais foram mortos em 12, 24 e 48 horas após CLP para avaliar expressão de CD40 e CD40L por Western Blotting e 24 horas após para avaliação de dano oxidativo em lipídios (TBARS), dano às proteínas por carbonilação protéica, concentração de nitrito/nitrato (ON), mieloperoxidase (MPO), quebra da barreira hematoencefálica (BHE) e níveis de citocinas. Dados foram avaliados por teste t e análise de variância de uma via e teste post hoc Tukey. Teste de Kaplan-Meier e log-rank foram utilizados para sobrevivência e teste de Man Whitney para análise comportamental todos com significância p<0,05. Os resultados mostram que o tratamento com anti-CD40 não é capaz de interferir na sobrevivência de animais submetidos a sepse, por outro lado, apresentam melhoras na memória e aprendizado. Os resultados também apresentam aumento nos níveis de CD40 e CD40L em hipocampo, mostram que a dose de 100 ug/kg foi mais efetiva na redução da permeabilidade da BHE, níveis de citocinas e MPO. A dose de 10 e 100 ug/kg foram efetivas na diminuição de TBARS e doses de 1 e 10 e 100 ug/kg foram efetivas apenas na redução de ON. Carbonil não mostrou resultado significativo em nenhuma dose. Conclui-se que o tratamento com anti-CD40 é eficaz na redução de dano cognitivo e parâmetros inflamatórios em sobreviventes de sepse. / Sepsis and multiple organ dysfunction syndrome represent a clinical problem of high relevance, mainly due to its high incidence in critically ill patients and their high mortality rates. Although therapeutic measures have been able to reduce the mortality, it is known that many survivors of sepsis are not able to resume their usual activities. Encephalopathy associated with sepsis (EAS) is often the first organ dysfunction to manifest. The presence of the EAS is associated with higher mortality and worse prognosis, many patients have cognitive impairment in the medium and long term that may be irreversible. Associated mechanisms station around the increase of proinflammatory cytokines, changes in the permeability of the blood brain barrier (BBB), microglial activation with potentiation of the release of cytokines and oxidative stress resulting in neuronal damage. Therefore, such events can be leveraged through the participation of molecules that when activated perpetuate the inflammatory response and breakdown of the BBB. Thus it is possible to postulate that the CD40 molecule may be involved in the inflammatory process. The aim of this study was to investigate the interaction between the CD40 - CD40L molecules in neuroinflammatory and behavioral parameters in rats submitted to sepsis model. Male Wistar rats were subjected to cecal ligation and puncture (CLP) to induce sepsis. The animals were divided into sham, CLP, CLP + 1ug/kg, 10ug/kg and 100ug/kg antibody anti-CD40 administered by intracerebroventricular route. Were followed for 10 days for survival curve and behavioral testing. In another experiment, the animals were killed at 12, 24 and 48 hours after CLP to evaluate expression of CD40 and CD40L by Western blotting, 24 hours for assessment of oxidative damage to lipids (TBARS), damage to proteins by protein carbonylation, concentration of nitrite/nitrate (NO), myeloperoxidase (MPO), breakdown of the blood brain barrier (BBB) and cytokine levels. Data were analyzed by t test and analysis of variance and Tukey post hoc test. Kaplan-Meier and log-rank test were used for survival and Man Whitney test for behavioral analysis with all significant at p< 0.05. The results show that treatment with anti-CD40 antibody is not able to affect the survival of animals with sepsis, on the other hand, show improvements in learning and memory. The results also showed increased levels of CD40 and CD40L in the hippocampus, show that dose of 100 ug/kg was more effective in reducing the permeability of the BBB, levels of cytokines and myeloperoxidase. The dose of 10 and 100 ug/kg were effective in lowering TBARS and doses of 1 and 10 and 100 ug/kg were effective only in the reduction of NO. Carbonyl not showed significant result in any dose. Thus concluding that treatment with anti-CD40 antibody is effective in reducing cognitive impairment and inflammatory parameters in survivors of sepsis.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós–Graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-03-11T15:16:39Z No. of bitstreams: 1 2012_DacienedeArrudaGrossklaus.pdf: 2226412 bytes, checksum: a2beca3dd626165f4620dcfff4567b83 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-03-18T13:36:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_DacienedeArrudaGrossklaus.pdf: 2226412 bytes, checksum: a2beca3dd626165f4620dcfff4567b83 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-18T13:36:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_DacienedeArrudaGrossklaus.pdf: 2226412 bytes, checksum: a2beca3dd626165f4620dcfff4567b83 (MD5) / O fungo dimórfico Paracoccidioides é o agente etiológico da paracoccidioidomicose, uma doença adquirida pela inalação de conídios ou fragmentos de micélio que transitam para a fase patogênica, leveduriforme, nos pulmões do hospedeiro. Após a infecção, a sobrevivência do fungo depende da evasão do sistema imune e adaptação ao ambiente hostil do hospedeiro. Macrófagos alveolares são a primeira linha de defesa contra Paracoccidioides e para conter a infecção essas células produzem várias substâncias nocivas como o peróxido de hidrogênio (H2O2) que desencadeia o estresse oxidativo. Para investigar os efeitos que H2O2 causa no proteoma de Paracoccidiodes, foi utilizada a técnica de eletroforese em gel bidimensional (2-DE) para analisar as proteínas diferencialmente expressas durante a resposta inicial (2 h) e tardia (6 h) ao H2O2. A análise 2-DE revelou um total de 179 proteínas/spots diferencialmente expressos (116 spots com expressão aumentada e 63 com expressão diminuída). As proteínas/spots diferencialmente expressas foram submetidas à identificação por meio da espectrometria de massas e submissão da massa monoisotópica dos peptídeos ao banco de dados do NCBI. Todos os spots/proteínas foram identificados com sucesso e agrupados de acordo com a categoria funcional - FunCat2. Resgate, defesa e virulência celular, metabolismo e energia foram as categorias com as maiores freqüências de proteínas/isoformas. Várias enzimas antioxidantes, como catalase, superóxido dismutase, peroxidases e tioredoxinas foram identificadas, bem como outras oxidoredutases que estão provavelmente envolvidas na resposta contra o estresse oxidativo. O perfil metabólico foi caracterizado, verificando-se ativação da via das pentoses fosfato, uma importante fonte geradora de NADPH celular. No intuito de confirmar os dados proteômicos, ensaios confirmatórios de atividade enzimática, citometria de fluxo e análises dos níveis transcricionais e de NADPH foram realizados e se mostraram concordantes com os dados obtidos na análise proteômica. Os resultados sugerem que Paracoccidioides possui um amplo repertório antioxidante, composto por diferentes proteínas que atuam de maneira complementar, que foram capazes de detoxificar as EROs e de minimizar os efeitos causados pelo estresse oxidativo. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The dimorphic fungus Paracoccidioides is the etiologic agent of paracoccidioidomycosis, a disease acquired by inhalation of infective airborne conidia or mycelia fragments that transit to the pathogenic yeast phase in the host lungs. Upon infection, fungal survival depends on evasion from the immune system and adaptation to the host environment. Alveolar macrophages are the first defense cells line against Paracoccidioides and aiming to restrict the fungal infection, macrophages produce several harmful substances, such as hydrogen peroxide (H2O2) that triggers oxidative stress. To investigate the effect of H2O2 on the proteome of Paracoccidiodes, we used a large scale 2-DE protein gel electrophoresis approach to analyze differentially expressed proteins that were detected in early (2 h) and in late (6 h) H2O2-treatments. The 2-DE analysis revealed a total 179 spots differentially expressed (116 proteins spots with increased expression and 63 with decreased expression). Differentially expressed proteins were subjected to identification by mass spectrometry and by submi tting the monoisotopic mass of the peptides to the NCBI non reduntand database. All spots were successfully identified and they were grouped according the functional category - FunCat2. Cell rescue, defense and virulence, metabolism and energy were the categories that showed the most number of occurrences of the proteins/isoforms. Several antioxidant enzymes, such as catalase, superoxide dismutase, peroxidases and thioredoxins were identified, as well as others oxidoreductases putatively involved with defense against oxidative stress. A view of the metabolic cell profile depicted an activation of the pentose phosphate pathway, a great source of cellular reducing power in the form of NADPH. Confirmatory assays of enzymatic activity, flow cytometry, transcript levels and NADPH measurements, produced data in agreement with proteomic analysis. The results indicated that Paracoccidioides has several antioxidant systems, including various proteins that complementarlly were able to detoxified ROS and minimized the damage triggered by oxidative stress.

Orientador: Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-22T03:06:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rochelle_SergioLuizdeAlmeida_M.pdf: 5683901 bytes, checksum: e776173a95294205ccb61491d864fd3c (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Os fungos, especialmente as leveduras do Gênero Candida, são agentes potencialmente patogênicos, capazes de provocar inúmeras doenças nos seres vivos, em especial quando se aproveitam da queda da resistência orgânica, sendo considerados oportunistas. Com o surgimento da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida, parece oportuno, a crescente ampliação de pesquisas com esses microorganismos, os quais têm sido estudados do ponto de vista fisiológico, bioquímico, soro lógico, genético, etc. Na cavidade oral, são responsáveis por doenças que afetam as diversas estruturas bucais, justificando o crescente aumento de casos clínicos e de investigações nessa área. Dentre as técnicas que têm sido empregadas com o objetivo de identificar e caracterizar melhor esses organismos, as de Biologia Molecular desempenham, um poderoso papel investigativo. A PAGE-SDS, tem se mostrado uma técnica importante nos estudos de identificação e caracterização desses microorganismos...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Fungi, especially the genus Candida yeasts, are potentially patogenic agents, able to cause numberless iIInesses in being, particularly when take advantage in the fali of the organic resistance, being considered opportunists. The arise of the Acquired Immune Deficiency Syndrome, seems suitable, that the increasing amplification of researches with these microorganisms, which has been studied in physiological, biochemical, serological, genetical, etc., point of view. In the oral cavity, are responsible for illnesses that affect variol.js orais structures, justifying the increase of clinical cases and the investigations in this area. Among the techniques that have been used with the objective to identify and characterize these organisms from the Molecular Biology attends, a powerful investigator role. The SDS-PAGE, has been shown a technique of complementary value and important studies of identification and characterization of these microorganisms...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Mestre em Ciências

Introdução: Atualmente o uso de fluoroquinolonas na prática clínica tem sido associado a um aumento da incidência da infecção com bactérias resistentes as quinolonas, especialmente Escherichia coli. O Brasil tem uma das mais altas taxas de resistência as quinolonas entre os países da America Latina. Diferentes mecanismos de resistência estão envolvidos no desenvolvimento de resistência as quinolonas. Os principais mecanismos dividem se em três categorias: i) alteração na DNA girase e topoisomerase IV; ii) diminuição do acúmulo de antibióticos no interior da bactéria e iii) produção de proteínas protetoras da DNA girase e topoisomerase IV. No ano de 2010 foram observadas elevadas taxas de resistência às fluorquinolonas em Escherichia coli isoladas de hemoculturas de pacientes atendidos em hospitais privados da cidade de São Paulo, pelo Fleury Medicina e Saúde. As taxas de resistência à ciprofloxacina variaram de 26,1% a 43,9% em três hospitais diferentes. Considerando que há determinantes cromossômicos não transferíveis e determinantes plasmidiais transferíveis da resistência às fluorquinolonas, a avaliação da clonalidade dos isolados e dos determinantes genéticos da resistência às fluorquinolonas poderá contribuir para o entendimento de alguns dos fatores que possam contribuir para essa progressiva elevação nas taxas de resistência a essa classe de antimicrobianos. Objetivo: Avaliar o fenótipo, a diversidade genética, determinantes cromossômicos e plasmidiais da resistência a fluorquinolonas em Escherichia coli isoladas de corrente sanguínea. Materiais e métodos: Foram estudados 47 E. coli resistentes a ciprofloxacino isoladas de hemoculturas de pacientes atendidos em cinco centros hospitalares da cidade de São Paulo. A caracterização fenotípica foi realizada por determinação da concentração mínima inibitória para fluoroquinolonas. A confirmação genotípica da resistência foi confirmada por PCR para os genes qnrA, qnrB, qnrS. As regiões determinantes da resistência a fluorquinolonas dos genes gyrA, parC foram sequenciadas. A tipagem molecular foi realizada pela técnica de ERIC-PCR. Resultados e conclusões: Os genes qnrA e qnrS não foram detectados nos isolados avaliados neste estudo. Os genes qnrB foram detectados em 42,5% dos isolados. Em todos os isolados, exceto o F4991, foram detectadas as substituições S83L e D87N na GyrA Em todos os isolados, exceto o F4991, foram detectadas as substituições S80I em ParC. Foi detectada a substituição E84V em ParC 23,4% dos isolados. Foi observada a disseminação dos grupos clonais ERIC1 e ERIC2 entre hospitais e disseminação intrahospitalar dos grupos clonais ERICS, ERIC6 e ERIC7. / Introduction: The use of fluoroquinolones in clinicai practice has been associated with an increased incidence of infection with bacteria resistant to quinolones, especially Escherichia coli. Brazil has one of the highest rates of resistance to quinolones among the countries in Latin America. Different resistance mechanisms are involved in the development of resistance to quinolone. The main mechanisms fall into three categories: i) alteration in DNA gyrase and topoisomerase IV, ii) reduction in the accumulation of antibiotics within the bacterium and iii) production of proteins that protect DNA gyrase and topoisomerase IV. In the year of 2010 high rates of resistance to fluoroquinolones in E. coli were observed blood cultures isolates from of patients from private hospitais in São Paulo. Ciprofloxacin resistance rates ranged from 26.1 to 43% 9% at three different hospitais. There are chromosomal and transferable plasmid-determined resistance to fluoroquinolones. The evaluation of the clonality of the isolates and the genetic determinants of resistance to fluoroquinolones may contribute to the understanding of some of the factors that may contribute to the progressive increase in resistance rates to this class of antimicrobials. Objective: To evaluate the phenotype, genetic diversity, chromosomal and plasmid determinants of resistance to fluoroquinolones in E. coli isolated from bloodstream. Materiais and methods: We studied 47 ciprofloxacin resistant E. coli isolated from blood cultures of patients treated at five hospitais in the city of Sao Paulo. Phenotypic characterization was performed by determining the minimum inhibitory concentration for fluoroquinolones. Genotypic resistance was confirmed by PCR to genes qnrA, qnrB and qnrS. The quinolone resistance determining regions of genes gyrA and parC were sequenced. Molecular typing was performed using ERIC-PCR. Results and conclusions: The qnrA and qnrS genes were not detected in the isolates evaluated in this study. The qnrB genes were detected in 42.5% of isolates. In all isolates, except for F4991, substitutions were detected in gyrA S83L and D87N. In all isolates, except for F4991, substitution S80I were detected in ParC. E84V substitution in ParC was detecxted in 23.4% of isolates. We observed the spread of clonal groups ERIC1 and ERIC2 and between hospitais and alsdo intra-hospital spread of clonal groups ERIC5, and ERIC6 ERIC7.

Não consta resumo na publicação. / Abstract not available.

O Staphylococcus aureus é um patógeno extremamente versátil tanto em termos de resistência a antimicrobianos quanto em virulência. O S. aureus resistente a oxacilina (ORSA) adquire a resistência a toda a classe de beta-Iactâmicos através de um cassete cromossômico (SCCmec) que carrega o gene mecA, mas pode carregar outros genes de resistência. A soma desses genes de resistência e de virulência torna o S. aureus um grave problema para hospitais do mundo inteiro, que nos últimos vem se estendendo também à comunidade. Foram estudados 50 isolados de ORSA, dentre os quais 15 pertencentes ao clone endêmico brasileiro (CEB) e 3 cepas SCCmec tipo IV isoladas entre 1995 e 1999. Adicionalmente, 32 amostras ORSA SCCmec tipo IV isoladas no Hospital de Clínicas de São Paulo. As amostras foram analisadas quanto ao perfil de sensibilidade a antimicrobianos, classificação do tipo de SCCmec, perfil de virulência quanto a toxinas e adesinas, classificação do grupo agr (locus regulatório dos genes de virulência) e sua funcionalidade, avaliação da expressão dos genes de toxinas e genotipagens por PFGE e MLST. Observou-se que as cepas CEB são multiresistentes. Já as cepas SCCmec IV apresentam um perfil de sensibilidade maior, uma vez que possuem um tipo de SCCmec que não carrega outros genes de resistência além do gene mecA. As amostras CEB SCCmec IV não apresentaram grandes diferenças no conteúdo de toxinas e adesinas. Apenas as cepas SCCmec IV isoladas entre 1995 e 1999 apresentaram um maior conteúdo de genes de virulência que as isoladas no HC. As cepas SCCmec IV isoladas no Brasil não são altamente virulentas como descrito em outros países. Não possuem fatores de virulência como a Leucocidina Panton-Valentine, toxinas exfoliativas e enterotoxinas. Por outro lado, possuem a alfa-hemolisina e a leucocidina LukD-LukE, toxina ainda pouco estudada, que vem sendo apresentada em pesquisas como causa de lesões oculares graves e diarréias pós-antibioticoterapia. Não foi possível estabelecer uma relação entre o tipo de agr e o perfil de virulência das cepas, uma vez que os perfis foram muito semelhantes mesmo entre cepas de grupos agr diferentes. / Staphylococcus aureus is an extremely successful pathogen for it is both highly resistant to antibiotics in addition to being virulent. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) acquires resistance to the beta-Iactam antibiotics through the acquisition of a chromosomal cassette (SCCmec) which carries the mecA gene, and can carry other resistance genes. The presence of these genes in S. aureus makes it a serious problem in hospitaIs worldwide. In spite of usually being restricted to the nosocomial environment, over the last few years MRSA has been spreading throughout the community. Fifty nosocomial MRSA strains were studied, including 15 belonging to the Brazilian endemic clone (BEC), 3 type IV SCCmec strains isolated between 1995-1999, and 32 type N SCCmec isolates from the \"Hospital de Clínicas (HC) de São Paulo\". The isolates were analyzed as to their susceptibility profile, SCCmec type, virulence and expression profile (toxins and adhesins), agr group classification and functionality, PFGE and MLST profiles. BEC isolates proved to be multiresistant to antibiotics. Type IV SCCmec strains presented a susceptibility profile to a number of drugs of different antimicrobial classes. BEC and type N SCCmec strains did not present significant differences in their virulence profiles. Only the type IV SCCmec strains isolated in 1995-1999 presented a greater virulence profile than those isolated in the HC. Type IV SCCmec strains isolated in Brazil were not highly virulent as described in other countries. Brazilian isolates usually do not possess virulence factors such as the Panton-Valentine leukocidin, exfoliative toxins and enterotoxins. On the other hand, they usually possess alpha-hemolysin and the LukED leukocidin, which is still very poorly studied that have been presented in papers like cause of serious ocular lesions and post-antimicrobial therapy diarrhea. A relation between the agr type and the virulence profile was not established, for virulence profiles were very similar even between isolates belonging to different agr groups.

S. aureus é um patógeno que sempre surpreende equipes médicas quanto à sua capacidade de resistir em curto espaço de tempo às mais novas drogas lançadas no mercado. Algumas alterações genéticas que poderiam causar a emergência de VISA foram previamente identificadas, dentre elas uma mutação no sistema de dois componentes GraRS. As proteínas GraR e GraR*, esta última com a mutação que levaria ao fenótipo de VISA, foram estudadas com o intuito de resolver a estrutura tridimensional de ambas e determinar seu papel no processo de resistência à vancomicina. Ensaios de clonagem, expressão, purificação das proteínas e dicroísmo circular foram realizados, porém não houve sucesso na cristalização. No estudo epidemiológico, PFGE dividiu os 36 isolados de MRSA (25 de infecção e 11 de colonização) de um hospital mineiro em 8 pulsotipos. Análise do MLST e SCCmec do pulsotipo A (58,3% das amostras) mostrou que os isolados pertenciam ao CC5 (ST5 e ST105) e continham SCCmecII. Todos os 3 isolados ST239 continham SCCmecIII, sendo relacionados ao BEC. A maioria dos isolados ST5 continha SCCmecII como o Clone NY/J. Observou-se 24% de resistência à tigeciclina nos isolados de sítios de infecção. Dois isolados foram sensíveis à daptomicina depois de 24 horas de incubação mas resistentes após 48 horas. Os resistentes à tigeciclina eram todos ST105-SCCmecII, e de 5 pacientes diferentes. Os resistentes à daptomicina eram ST5-SCCmecII, de pacientes diferentes, e apresentaram algumas mutações no gene rpoB. Uma mudança na linhagem prevalente nos hospitais brasileiros tem sido reportada e, de fato, BEC não era prevalente neste hospital em 2009. ST5-SCCmecII e ST105-SCCmecII foram prevalentes, e ainda o último apresenta o agravante da resistência à tigeciclina quando esta droga ainda não era utilizada no hospital. Não houve disseminação de apenas um pulsotipo, sugerindo que essas linhagens sejam endêmicas ao hospital. O conhecimento do perfil das linhagens locais auxilia na adequação do tratamento empírico dado aos pacientes, além de demonstrar que é preciso ter cuidado ao se administrar novas drogas indiscriminadamente para evitar seleção de clones mais resistentes. / S. aureus is a pathogen that always surprises the medical staff regarding its capability to resist to the newest drugs marketed, in a short period of time. Some genetic changes which might cause the emergence of VISA were previously identified, among them a mutation on the twocomponent system GraRS. The proteins GraR and GraR*, the last one with the mutation that would lead to the VISA phenotype, were studied aiming to solve the tridimensional structure of both and determine their role on the process of vancomycin resistance. Cloning, expression, protein purification and circular dichroism experiments were performed, however, the crystallization was not successful. In the epidemiological study PFGE distributed the 36 isolates (25 from infection sites and 11 from colonization) from a hospital in Minas Gerais in 8 pulsotypes. Analysis of MLST and SCCmec of pulsotype A (58.3% of all samples) showed that the isolates belonged to CC5 (ST5 and ST105) and harbored SCCmecII. All three ST239 harbored SCCmecIII, being related to Brazilian Endemic Clone (BEC). Most ST5 isolates harbored SCCmecII as the NY/J clone. It was observed 24% of resistance to tigecycline on the infection sites isolates. On microdilution, 2 isolates were susceptible to daptomycin after 24 hours of incubation, but resistant after 48 hours. Tigecycline-resistants were all ST105-SCCmecII and were isolated from 5 different patients. Daptomycin-resistants were ST5-SCCmecII, from different patients, and they presented some mutations on the gene rpoB. A change in the prevalent lineage of the Brazilian hospitals has been reported and, in fact, the clone BEC was not prevalent in this hospital in 2009. ST5-SCCmecII and ST105-SCCmecII were prevalent, and also, the last one presents the aggravating factor of tigecycline resistance when this drug was not used in the hospital. However, there was no dissemination of only one pulsotype, suggesting these lineages to be endemic to the hospital. Knowledge of the profile of the local lineages helps on the adequation of empiric treatment given to the patients, besides demonstrating that care is needed on administering new drugs indiscriminately to avoid selection of the more resistant clones.