Orientador: Antonio Carlos Pizzolitto / Banca: Isabel Yoko Ito / Banca: Sérgio Aparecido Torres / Banca: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza / Banca: Clarice Queico Fujimura Leite / Resumo: Os Staphylococcus coagulase-negativa, particularmente, os Staphylococcus epidermidis são a causa mais freqüente de infecções relacionadas ao cateter por sua habilidade em aderir a uma superfície e entre si (aderência intercelular) formando biofilme em multicamadas sobre superfícies de polímeros. O objetivo do presente estudo foi avaliar cepas hospitalares de Staphylococcus coagulasenegativa isoladas de cateteres intravenosos, quanto à resistência a oxacilina, produção de slime, aderência ao poliestireno, habilidade de formar biofilme sobre superfícies abióticas (cateter esterilizado) e a presença de genes icaAD. Na presente pesquisa, a presença de icaA e icaD foi determinada pelo método PCR, em uma coleção de 27 amostras Staphylococcus coagulase-negativa (10 Staphylococcus epidermidis, 4 S. haemolyticus, 2 S. hominis, 2 S. lugdunensis, 1 S. saprophyticus, 1 S. schleiferi, 2 S. xylosus e 4 S. warneri). Os genes icaAD foram detectados em dez cepas S. epidermidis... (Resumo completo, clicar acesso eletrônmico abaixo) / Abstract: Coagulase-negative Staphylococcus, particularly, Staphylococcus epidermidis are frequent cause of infections associated with catheters and is attributed to the attachment ability on a surface and each other (intercellular adhesion) forming a multilayered biofilm on polymeric surfaces. The objective of the present study was to evaluate coagulase-negative Staphylococcus strains isolated from intravenous catheters by oxacillin resistance, slime production (qualitative method) and spectrophotometric assay (quantitative method), ability to form biofilm on abiotic surfaces (steriled catheter) and the presence of icaAD genes. In the present study icaA and icaD were determined by PCR method, in a collection of 27 coagulasenegative Staphylococcus (10 Staphylococcus epidermidis, 4 S. haemolyticus, 2 S. hominis, 2 S. lugdunensis, 1 S. saprophyticus, 1 S. schleiferi, 2 S. xylosus and 4 S. warneri). The icaA genes were detected in nine S. epidermidis and icaD in ten. The slime-producing ability was determined by culture on Congo red agar plates in which slime-producing strains formed black colonies in 10 S. epidermidis, 4 S.haemolyticus, 4 S. warneri, 2 S. xylosus and 1 S. chromogenes, while nonslimeformingones develop red colonies. The quantitative assay of coagulase-negative Staphylococcus was observed in 19 strains, including: 10 S. epidermidis, 3 S.haemolyticus, 3 S. warneri, 2 S. xylosus, 1 S. chromogenes. The ability of coagulasenegative Staphylococcus to form biofilm embedded in an amorphous substance wasobserved by scanning electronic microscope on abiotic surface in 10 S. epidermidis,3 S. haemolyticus, 2 S. hominis, 2 S. lugdunensis, 1 S. saprophyticus, 1 S. schleiferi,2 S. xylosus and 3 S. warneri. The oxacillin resistance was observed in 9 strains S.epidermidis, 3 S. haemolyticus, 3 S. warneri, 1 S. xylosus and 1 S. chromogenes. All strains of staphylococci were susceptible... (Complete abstract, click eletronic address below) / Doutor

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Martha Simões Ribeiro / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da terapia fotodinâmica sobre a patogenicidade de C. albicans e C. dubliniensis na candidose bucal em ratos. Foram utilizados 96 ratos (Rattus norvegicus, Albinus, Wistar), sendo que 80 animais foram submetidos à indução de candidose experimental no dorso da língua por C. albicans ou C. dubliniensis e 16 ratos não foram infectados por Candida. Após 5 dias da indução da candidose, foram realizados diferentes tratamentos: laser e azul de metileno como fotossensibilizador (Grupo L+F+), apenas laser (Grupo L+F-), apenas fotossensibilizador (Grupo L-F+) e grupo sem laser e fotossensibilizador (Grupo L-F-). Após 1 dia, amostras do dorso da língua foram coletadas e semeadas em ágar Sabouraud para contagem de UFC/mL recuperadas da cavidade bucal. Os animais foram submetidos à eutanásia para análise microscópica do dorso da língua. Foi avaliada também a capacidade de produção de fosfolipase e proteinase por C. albicans e C. dubliniensis. Os resultados demonstraram que a quantidade de C. albicans recuperadas da cavidade bucal dos ratos foram semelhantes entre os quatro grupos estudados. C. dubliniensis não foi recuperarada da cavidade bucal dos ratos estudados. Na análise microscópica do dorso da língua, observou-se a presença de várias lesões teciduais induzidas por C. albicans, sendo que no grupo L+F+ essas lesões foram menores em relação aos demais grupos estudados. C. dubliniensis exibiu lesões teciduais discretas sem diferença estatística entre os grupos. Em relação aos fatores de patogenicidade de C. albicans, o grupo L+F+ produziu menor quantidade de fosfolipase e proteinase em relação aos demais grupos. C. dubliniensis produziu menor quantidade de fosfolipase em relação à C. albicans, sem diferença entre os 4 grupos estudados. Entretanto, C. dubliniensis não foi capaz de produzir proteinase... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective was to evaluate the effects of photodynamic therapy on the pathogenicity of C. albicans and C. dubliniensis in oral rats candidosis. Were evaluated 96 rats, while 80 were subjected to candidosis experimental induction on the tongue dorsum by C. albicans or C. dubliniensis and 16 rats were not infected. After 5 days of induction candidosis, different treatments were performed: laser and methylene blue as photosensitizers (Group L+F+), laser only (Group L+F-), only photosensitizers (Group L-F+) and without laser neither photosensitizers group (Group L-F). After 1 day, samples of the tongue dorsum were collected and sown on Sabouraud agar for counts of UFC/mL recovered from the oral cavity. The animals were submitted to euthanasia for microscopic analysis. It also evaluated the production capacity of a proteinase and phospholipase C. albicans and C. dubliniensis. The results showed that the amount of C. albicans recovered from rats oral cavity were similar among the four groups. To recover C. dubliniensis of the oral cavity from studied rats was not possible. In microscopic examination of tongue dorsum, was seen the presence of multiple tissue lesions induced by C. albicans, whereas in group L+ F+ these lesions were smaller than in other groups. C. dubliniensis showed slight tissue lesions with no statistic difference between groups. Regarding the factors of pathogenicity of C. albicans, the group L+F+ produced smaller amounts of phospholipase and proteinase compared to other groups. C. dubliniensis produced fewer quantitiy of phospholipase related to C. albicans, without difference between the 4 (four) groups studied. However, C. dubliniensis was not able to produce proteinase. It was concluded that the development of experimental candidosis by C. dubliniensis was less than that induced by C. albicans. Photodynamic therapy was effective on treatment... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Marcio Garcia Ribeiro / Banca: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Rogerio Giuffrida / Resumo: A rodococose suína compreende doença infecciosa caracterizada por linfadenites piogranulomatosas. Diferentes fatores de virulência são reconhecidos na patogenicidade de Rhodococcus equi. A estrutura da parede celular bacteriana, a viabilidade no interior de fagócitos e na ausência de ferro, a produção de citotoxinas, a resistência aos antimicrobianos convencionais e, recentemente, a presença de proteínas associadas à virulência (Vap) reguladas por plasmídios, são considerados os principais mecanismos de virulência do microrganismo. Diferentes fatores de virulência foram avaliados em 23 (6,1%) linhagens de R. equi isoladas de 378 linfonodos submandibulares e mesentéricos de suínos e javalis (Sus scrofa). Foram realizados exames microbiológicos em 129 linfonodos apresentando lesões (linfadenite) e 129 sem lesões (controle) de suínos, e 60 linfonodos com lesões e 60 sem lesões de javalis. Dentre as 23 linhagens de R. equi, 19 (7,4%) foram isoladas de suínos, das quais 17 obtidas de linfonodos com lesões e duas sem lesões. Das 19 linhagens de suínos, 18 (94,7%) foram obtidos de linfonodos submandibulares e um (5,3%) de mesentérico. As quatro (3.3%) linhagens de R. equi isoladas de javalis foram obtidas exclusivamente de linfonodos com lesões. Destes, três foram obtidos de linfonodos submandibulares e um de mesentérico. Dentre nove antimicrobianos testados, azitromicina (100,0%), gentamicina (100,0%), levofloxacina (100,0%), vancomicina (100,0%), amoxicillina/ácido clavulânico (94,7%), eritromicina (94,7%) e rifampicina (94,7%) foram os fármacos mais efetivos. Baixa ocorrência de resistência aos antimicrobianos nos isolados de suínos foi observada contra os fármacos testados. A concentração inibitória mínima (MIC90) da azitromicina, eritromicina e rifampicina foi observada, respectivamente, em ≤2 µg/mL, ≤0,5 µg/mL and ≤1 µg/mL... (resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The rhodococcosis in swine comprise an infectious disease characterized by pyogranulomatous lymphadenitis. Different virulence factors are recognized in pathogenicity of the Rhodococcus equi. The structure of bacterial cell wall, the viability inside of phagocytes and in absence of iron, the production of cytotoxins, the resistance to conventional antimicrobials and recently, the presence of proteins associated to virulence (Vap) regulated by plasmids, are considered the most important virulence mechanisms of microorganism. Different virulence factors were evaluated in 23 (6.1%) R. equi strains isolated from 378 submandibular and mesenteric lymph nodes of swine and wild boars (Sus scrofa). Microbiological exams were performed in 129 lymph nodes presenting lesions (lymphadenitis) and 129 without lesions (controls) from swine, and 60 lymph nodes with lesions and 60 without lesions from wild boars. Among 23 R. equi strains, 19 (7.4%) were isolated from swine and, from these, 17 were obtained from lymph nodes with lesions and two without lesions. From 19 strains isolated from swine, 18 (94.7%) were obtained of submandibular lymph nodes and one (5.3%) from mesenteric. The four (3.3%) R. equi strains isolated from wild boars were obtained exclusively of lymph nodes presenting lesions. From these, three were obtained from submandibular lymph nodes and one of mesenteric. Among nine antimicrobials tested, azithromycin (100.0%), gentamicin (100.0%), levofloxacin (100.0%), vancomycin (100.0%), amoxicillin/clavulanic acid (94.7%), erythromycin (94.7%) and rifampin (94.7%) were the most-effective drugs. Low rates of resistance to antimicrobials in swine isolates were observed against drugs tested. The inhibitory minimal concentration of 90% of isolates (MIC90) with use of azithromycin, erythromycin and rifampin were observed respectively in 2 μg/mL, 0.5 μg/mL and 1 μg /mL... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: José Moacir Marin / Banca: Maria Cristina Monteiro de Souza-Gugelmin / Banca: Luiz Florencio Franco Margatho / Banca: Clóvis Maurílio de Souza / Banca: Roberto Alves de Oliveira / Resumo: Esta pesquisa foi realizada em 23 açougues da cidade de T aquaritinga, estado de São Paulo, durante um período de 10 meses. Foram isoladas duzentas e oitenta e sete cepas de Escheríchía calí de carne moída, moedor de carne e mãos de manipuladores de carne. Cinco destas cepas foram caracterizadas como E.coli patogênica extra-intestinal (ExPEC). Investigou-se a presença de fímbrias, produção de hemolisina, aerobactina e colicina. Também foi analisada a presença dos genes (pap, afa, sfa) relacionados com a expressão de fímbrias, através da reação em cadeia da polimerase (PCR). Das amostras analisadas 100% apresentavam aerobactina e fímbria do tipo 1, 80% produziam hemolisina, e 60% expressaram colicina e fímbria P. Também foi verificado que 60% das cepas de ExPEC apresentavam o genótipo pap e 40% o genótipo pap-sfa concomitantemente. Quanto ao nível de resistência aos 12 antimicrobianos testados, observou-se que 80% das cepas eram resistentes a múltiplos antimicrobianos (3). Os antimicrobianos mais eficientes foram: ceftriaxona e amoxicilina-ácido clavulânico (0%) de resistência, seguidos de amicacina, amoxicilina, ciprofloxacina e gentamicina com resultado, considerado satisfatório, de 20% de resistência. Em contraste, houve elevada resistência (80%) para tetraciclina e estreptomicina . Conclui-se que retalhos de carne podem ser um importante veículo para disseminação na comunidade de cepas ExPEC. Este trabalho chama a atenção para os retalhos de carne como fonte potencial de cepas de ExPEC, que não são reconhecidas como patógeno de origem alimentar, o que pode representar um motivo de preocupação para as autoridades da vigilância epidemiológica. / Abstract: For ten months, at Taquaritinga city, São Paulo State, we have conducted an malysis over meat conditions, at 23 butcheries. In this survey we collected. two hundred eighty seven generic Escherichia coli from ground beef, mincers and of the hands of neat manipulators. Five of these isolates were recognized as Extraintestinal Pathogenic :.coli (ExPEC) strains. The presence of fimbriae, hemolysin production, aerobactin and colicin. were lVestigated, as well the existence of genes (pap, ata, sfa) related to fimbriae !xpression, using a Polimerase Chain Reaction (PCR). In this ExPEC strains, we have verified the presence of aerobactin and fimbriae Ipe 1 (100%), hemolysin (80%) and related results for colicin and P fimbriae (60%). We Iso confirmed that 60% of ExPEC strains exhibited pap, and 40% were simultaneously, ap-sfa.. From twelve antimicrobial agents tested, we found a resistance levei (80%) to lultiple antimicrobial agents (~3). The most efficient antimicrobial agents were: 3ftriaxone and amoxacilin-clavulanic acid (0%) resistance, followed by a satisfactory resistance for amicacin, amoxacilin, ciprofloxacin and gentamicin (20%). In contrast, we lund a high levei of resistance (80%) for tetracycline and streptomycin. From this study, we have toncluded that meat can be a very important vehicle for community dissemination of ExPEC, which may represent a reason of concern. / Doutor

Orientador: Maria Stella Gonçalves Raddi / Banca: Lourdes Botelho Garcia / Banca: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: Fernando de Sá Del Fiol / Banca: Luiz Marcos da Fonseca / Resumo: O efeito de amoxicilina e ciprofloxacino, agentes antimicrobianos com diferentes mecanismos de ação, sobre alguns fatores relacionados à sua virulência em Staphylococcus aureus ATCC 25923 foi comparado. Efeito pós-antimicrobiano, atividade hemolítica para hemácias de carneiro, atividade de citolisinas extracelulares para células McCoy, susceptibilidade à fagocitose dependente e não dependente de opsonização, por neutrófilos de Rattus albinus norvegicus, foram avaliados em bactérias crescidas na presença de concentração subinibitória (½ CIM) do antimicrobiano e a capacidade de induzir estresse oxidativo foi determinada diretamente sobre as células bacterianas através da detecção da produção de ânion superóxido. Amoxicilina e ciprofloxacino demonstraram efeito sobre o crescimento de S. aureus estatisticamente significativo em relação ao controle, sendo maior para amoxicilina. A atividade hemolítica foi diminuída na presença de amoxicilina e ambos antimicrobianos induziram aumento na atividade de citolisinas extracelulares. A técnica de quimiluminescência dependente de luminol, utilizada para avaliar susceptibilidade à fagocitose através do burst oxidativo de polimorfonucleares neutrófilos, demonstrou que amoxicilina influenciou positivamente a fagocitose dependente de opsoninas e ciprofloxacino estimulou a fagocitose não opsonizada. Visto o burst oxidativo ser um método indireto para a demonstração de fagocitose, a confirmação de células bacterianas fagocitadas/aderidas foi realizada através da observação de esfregaços corados em microscopia ótica comum (1000 x). Apesar de ambos antimicrobianos induzirem aumento de ânion superóxido intracelular, detectado em ensaios de redução de nitroblue tetrazolium (NBT), o ciprofloxacino induziu maior quantidade que a amoxicilina. A demonstração de que diferentes antimicrobianos possam atuar sobre...( Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Amoxycillin and ciprofloxacin are antimicrobials with dissimilar mechanisms of action against bacteria. This is a comparative study of how each of these agents affects some of the factors related to the virulence of the pathogenic strain of Staphylococcus aureus ATCC 25923. The post-antibiotic effect, hemolytic activity against sheep erythrocytes, cytolysin activity against McCoy cells and susceptibility to opsonin-dependent and independent phagocytosis by neutrophils from Rattus albinus norvegicus were assessed in bacteria grown in a subinhibitory concentration (½ MIC) of each agent. Induction of oxidative stress was observed directly by detecting superoxide production in response to the bacteria. Both the antimicrobials exerted effect on the growth of S. aureus, which was significantly different from the growth of controls, though amoxycillin had the stronger effect. Hemolytic activity was diminished in the presence of amoxycillin, but both agents induced an increase in the activity of secreted cytolysins. By employing luminol-dependent chemiluminescence to assess the susceptibility of the bacteria to phagocytosis by detecting the respiratory burst in polymorphonuclear neutrophils, it was shown that amoxycillin had a positive effect on opsonin-dependent phagocytosis, while ciprofloxacin stimulated non-opsonized phagocytosis. Since detection of the respiratory burst is an indirect demonstration of phagocytosis, direct observation of stained slides under the light microscope at 1000 × magnification was used to confirm the presence of bacteria ingested by and adhering to neutrophils. While both agents induced a rise in the intracellular level of superoxide, assayed by nitroblue tetrazolium reduction, ciprofloxacin produced the stronger response. The demonstration that distinct antimicrobials... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Antonio Carlos Paes / Banca: Domingos da Silva Leite / Resumo: Escherichia coli e considerado o principal agente causal de infeccao de trato urinario (ITU) e piometra em caes. A patogenicidade das linhagens esta relacionada a presenca de adesinas e diferentes fatores de virulencia. Foram avaliadas alteracoes hematologicas e diferentes fatores de virulencia em 51 linhagens de E. coli isoladas de ITU, 52 de piometra e 55 de fezes de caes sem sinais entericos. A producao de ƒ¿-hemolisina foi verificada em 26 (51,0%) das estirpes de ITU e em 20 (38,5%) de piometra. Exames hematologicos revelaram principalmente anemia, trombocitopenia e leucocitose por neutrofilia e monocitose nos caes com ITU e piometra. Os maiores indices de sensibilidade nas 158 estirpes foram observados para norfloxacina, ciprofloxacina e enrofloxacina em mais de 60% dos isolados. Os maiores indices de resistencia foram encontrados em 60% ou mais das estirpes com o uso de sulfametoxazole/trimetoprim. Linhagens resistentes a tres ou mais antimicrobianos foram constatadas em 24 (47,1%) de ITU, 7 (13,5%) de piometra e 4 (7,3%) das fezes, das quais respectivamente, 17 (33,3%), 1 (1,9%) e 3 (5,5%), com resistencia multipla a cinco ou mais drogas. fimH foi observado em mais de 90% dos isolados. papC foi detectado em 12 (23,5%) linhagens de ITU, 19 (36,5%) de piometra e 10 (18,2%) das fezes. papGI nao foi detectado, enquanto papGII foi observado em 3 (5,8%) isolados de piometra. papGIII foi expressado em 10 (19,6%) linhagens de ITU, 15 (28,8%) de piometra e 9 (16,4%) das fezes. sfaS foi encontrado em 22 (43,1%) de ITU, 24 (46,1%) de piometra e 19 (34,5%) das fezes. afa foi detectado em 1 (1,9%) linhagem de ITU e de piometra...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Escherichia coli is considered the more important microrganism in urinary tract infection (UTI) and pyometra in dogs. The pathogenicity of strains is associated with different adhesins and virulence factors. Haematological exams and different virulence factors was evaluated in 51 E. coli strains isolated from UTI, 52 from pyometra and 55 from feces of dogs without enteric signs. Alpha-haemolysin was verified in 26 (51.0%) strains from UTI and 20 (38.5%) from pyometra. Haematological exams revealed mainly anaemia, thrombocytopenia and leucocytosis by neutrophilia and monocitosis in dogs with UTI and pyometra. Norfloxacin, ciprofloxacin and enrofloxacin were the most-effective drugs (>60%) for 158 E. coli strains. High rates of E. coli resistance to antimicrobials were observed in 60% or more of strains using sulfametoxazole/trimetoprim. Multiple drug resistance for three or more antimicrobials was observed in 2 (47.1%) strains isolated from UTI, 7 (13.5%) from pyometra and 4 (7.3%) from feces. From these, 17 (33.3%), 1 (1.9%) and 3 (5.5%), respectively, showed multiple resistance to five or more drugs. fimH was observed in 90% or more of 158 isolates. papC was detected in 12 (23.5%) strains isolated from UTI, 19 (36.5%) from pyometra and 10 (18.2%) from feces. None strain expressed papGI, while papGII was observed in 3 (5.8%) strains of pyometra. papGIII was detected in 10(19.6%) strains of UTI, 15 (28.8%) from pyometra and 9 (16.4%) from feces. sfaS was observed in 22 (43.1%) strains of UTI, 24 (46.1%) of pyometra and 19 (34.5%) of feces. afa was identified in 1 (1.9%) strains isolated from UTI and pyometra...(Complete abstract, click electronic address below) / Mestre