CARVALHO, F. C. T. de. Influências exôgenas na qualidade bacteriológica da água, solo e camarão (Litopenaeus vannamei), em quatro fazendas de camarão do Estado do Ceará. 2006. 87 f.: Dissertação (mestrado em Ciências Marinhas Tropicais) - Instituto de Ciências do Mar, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2006. / Submitted by Nadsa Cid (nadsa@ufc.br) on 2015-04-08T18:16:06Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_fctdecarvalho.pdf: 1519340 bytes, checksum: a87e88da8c7a3c5c3ab337f3a4eebbb4 (MD5) / Approved for entry into archive by Nadsa Cid(nadsa@ufc.br) on 2015-04-08T18:16:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_fctdecarvalho.pdf: 1519340 bytes, checksum: a87e88da8c7a3c5c3ab337f3a4eebbb4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T18:16:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_fctdecarvalho.pdf: 1519340 bytes, checksum: a87e88da8c7a3c5c3ab337f3a4eebbb4 (MD5) Previous issue date: 2012 / Bacteria of fecal origin, such as Escherichia coli and Salmonella, are frequently isolated from freshwater or marine waters, originating economic problems to the cultivation of aquatic organisms for human consumption. Another concerning factor is the growing resistance to antibiotics in the aquatic environment, due to its indiscriminate use for both human and animal prophylaxis. This considered, the following research aims at monitoring the presence of enteric bacteria (E. coli and Salmonella spp.) in areas of two freshwater acclimated shrimp (Litopenaeus vannamei) cultivation farms in Jaguaruana-CE, establishing antimicrobials resistance patterns. Sediment and water samples were gathered from ponds and nearby water streams from each farm. The estimated number of E. coli from both the pond and the main river samples were similar in all sources. Two hundred sixty-five (265) strains suspected of E. coli were isolated, 50 (18.87%) of those suspicions were confirmed by biochemical tests. Among the 186 strains suspected of Salmonella, 30 (16.13%) belong to the genus, with five different serovars: S. ser. Saintpaul, S. ser. Infantis, S. ser. Panama, S. ser. Madelia, S. ser. Braenderup, S. enterica subsp. Houtenae and S. enterica subsp. enterica. Physicochemical parameters (temperature, pH and salinity) did not have any influence on the isolation of E. coli or Salmonella strains. There was no relation between the E. coli MPN and Salmonella isolation among the analyzed samples. Resistance to TET, AMP and OTC was observed in 32% of the E. coli strains, where half of this percentage presented a plasmid-related phenotype. Resistance to TET, OTC, AMP and NIT was observed in 16.67% of the Salmonella strains. Only NIT resistance was considered of plasmid origin. Concerning TET and OTC, the E. coli isolates presented a MIC of 32 µg mL-1 and MBC of >128 µg mL-1; whereas the MIC and MBC for TET, OTC and NIT in the Salmonella strains were 64 µg mL-1 and >12,800 µg mL-1, respectively. According to the analysis of the genotypic profiles from the Salmonella isolates, it was not possible to determine the dispersion pattern of its serovars in the environment. The presence of pefA and invA genes was independent from both the serovar and environmental origin of the isolates. / Bactérias de origem fecal como Escherichia coli e Salmonella são frequentemente isoladas de corpos aquáticos dulcícolas e ou marinhos o que acarreta problemas econômicos para cultivos de organismos aquáticos destinados a alimentação humana, pois estão diretamente relacionados à qualidade dos produtos e à saúde dos consumidores. Outra preocupação é com a crescente resistência destas bactérias a antibióticos no ambiente aquático resultante, principalmente, do uso indiscriminado dessas drogas na profilaxia humana e animal. Considerando o exposto, o objetivo da pesquisa foi monitorar a presença de bactérias entéricas (E. coli e Salmonella spp.) em áreas de cultivo de camarão (Litopenaeus vannamei) aclimatado a água doce em duas fazendas situadas em Jaguaruana-CE, analizando os padrões de resistência a antimicrobianos. De cada fazenda foram coletadas amostras de sedimento e água dos viveiros além do afluente próximo. A estimativa do número de E. coli nas amostras de água e sedimentos dos viveiros e do rio abastecedor foram semelhantes para as duas fazendas. Foram isoladas 265 cepas suspeitas de E. coli sendo confirmadas 50 (18,87%) através de testes bioquímicos. Entre 186 cepas suspeitas de Salmonella, 30 (16,13%) foram confirmadas como pertencentes ao gênero, sendo cinco diferentes sorovares: S. sor. Saintpaul, S. sor. Infantis, S. sor. Panama, S. sor. Madelia, S. sor. Braenderup, S. enterica subsp. houtenae e S. enterica subsp. enterica. Os parâmetros físico-químicos (temperatura, pH e salinidade) não influenciaram no isolamento das cepas de E. coli ou Salmonella. Não houve relação entre o NMP de E. coli e o isolamento de Salmonella entre as amostras analisadas. Foi observada resistência à TET, AMP e OTC em 32% das cepas de E. coli com 50% desses apresentando fenótipo relacionado a plasmídeo. Entre as estirpes de Salmonella, 16,67% se mostraram resistentes à TET, OTC, AMP e NIT. Apenas a resistência à NIT foi estabelecida como de origem plasmidial. Para TET e OTC, os isolados de E. coli apresentaram CIM de 32 µg mL-1 e CBM de >128 µg mL-1. Por outro lado, a CIM e CBM para TET, OTC e NIT nas Salmonella foram de 64 µg mL-1 e >12.800 µg mL-1, respectivamente. Através da análise dos perfis genotípicos dos isolados de Salmonella não foi possível estabelecer padrões de dispersão dos sorovares no ambiente. A presença dos genes pefA e invA que codificam fatores de virulência nas culturas de Salmonella foi independente do sorovar e da origem ambiental dos isolados.

Título original: Interação parasita-hospedeiro na fungicultura das formigas atíneas derivadas / Orientador: André Rodrigues / Banca: Silma Leite Rocha / Banca: Cláudio José Von Ruben / Resumo: A fungicultura das formigas atíneas é um modelo atrativo para estudar associações parasita-hospedeiro, pois abriga um amplo número de parasitas e hospedeiros filogeneticamente diversos. As formigas atíneas dependem do cultivo obrigatório de fungos para alimentar suas crias. Nesse mutualismo, fungos do gênero Escovopsis atuam como parasitos especializados do fungo cultivado pelas formigas. Neste trabalho determinamos que a virulência da interação Escovopsis-fungo mutualista é o resultado final da susceptibilidade do hospedeiro e a infectividade do patógeno. Para tanto, foram realizados ensaios de co-cultivo in vitro utilizando fungos mutualistas e isolados de Escovopsis provenientes de colônias de formigas atíneas derivadas. Adicionalmente, foram realizados bioensaios utilizando subcolônias inoculadas com esporos de Escovopsis, para avaliar como a complexidade do jardim de fungo, em conjunto com as formigas, interfere na virulência da interação patógeno-hospedeiro. Os resultados indicaram que o fungo mutualista de Trachymyrmex sp. é mais susceptível a infecção por Escovopsis, quando comparado com Leucoagaricus gongylophorus, o fungo mutualista cultivado por Atta sexdens rubropilosa. Além disso, foi observado que a susceptibilidade do hospedeiro tem uma maior influência do que infectividade do patógeno, no resultado final da interação Escovopsis-fungo mutualista. O fator que determinou a infectividade de Escovopsis foi o padrão de reconhecimento frente ao hospedeiro e não a taxa de crescimento do patógeno. Embora Escovopsis ocasionou a morte do hospedeiro na maioria dos confrontos in vitro, nos experimentos realizados com subcolônias houve a morte de apenas quatro dentre as 90 réplicas tratadas com Escovopsis. Tendo em vista que Escovopsis ocasiona a morte do fungo mutualista apenas in vitro, ou seja, sem a proteção das interações presentes no jardim ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fungus-growing by attine ants is an attractive model system for studying host-parasite associations, because it harbors phylogenetically diverse parasites and hosts. These ants rely on fungal cultivation to feed their brood. In this mutualism, fungi in the genus Escovopsis act as specialized parasites of the ant fungal cultivar. Here, we determined that virulence of the interaction between Escovopsis and the mutualistic fungus is a result of the host susceptibility and the pathogen infectivity. We carried out in vitro dual-culture assays using mutualistic fungi and Escovopsis isolates from different higher-attine ant species. In addition, we performed bioassays using subcolonies inoculated with Escovopsis spores to evaluate how the complexity of the fungus gardens, along with the ants, interfere in the virulence of the host-pathogen interaction. Our results showed that the fungal cultivar of Trachymyrmex sp. is more susceptible to infection by Escovopsis when compared to Leucoagaricus gongylophorus, the mutualistic fungus cultivated by Atta sexdens rubropilosa. In addition, we observed that host susceptibility had a larger impact than the pathogen infectivity in the outcome of the Escovopsis- fungal cultivar interaction. The factor that determined the infectivity of Escovopsis was the patterns of host recognition but not the pathogen's growth rate. Escovopsis caused host death in most in vitro assays. On the other hand, only four out of 90 subcolonies treated with Escovopsis died during the experiments. Considering that Escovopsis caused the death of the mutualistic fungus only in vitro (without the protection of the interactions present in fungus garden), our results suggest that this fungus is an opportunistic pathogen / Mestre

Orientador: Jesus Aparecido Ferro / Banca: Henrique Ferreira / Banca: Rafael Marini Ferreira / Banca: Fabricio José Jaciani / Banca; Helen Alves Penha / Resumo: Diante da importância do cancro cítrico para a citricultura mundial, a bactéria Xanthomonas citri subsp. citri, o agente causal da doença, tem sido amplamente estudada. Pesquisadores brasileiros realizaram o sequenciamento completo do genoma da X. citri subsp. citri isolado 306 (Xac306), com o intuito de elucidar os genes e mecanismos envolvidos na patogenicidade e/ou virulência da bactéria. As ORFs XAC2361 e XAC3898 possuem tamanhos e locais diferentes no genoma da Xac306, mas têm em comum o domínio Peptidase_M23, cujo processo biológico predito é de hidrolase de parede celular, mas a real função destas proteínas em Xac ainda é desconhecida. Este trabalho teve como objetivo avaliar, por meio da mutação sítio-dirigida, se as ORFs XAC2361 e XAC3898 estão relacionadas com a virulência e/ou patogenicidade de X. citri subsp. citri 306 e com o desenvolvimento do cancro cítrico. Para isso, foram realizados testes in vitro e in planta dos mutantes obtidos, visando observar alterações fenotípicas. Devido a presença de peptídeo sinal, a ORF XAC2361 foi fundida à proteína fluorescente mCherry (XAC2361-mCherry) para expressão in vivo e avaliação por microscopia de fluorescência. As análises fenotípicas demonstraram que o mutante ΔXAC2361 não apresentou alterações nos sintomas quando avaliado em limoeiro cravo (Citrus limonia Osbeck), porém apresentou menor capacidade de crescimento in vitro, menor motilidade swimming e swarming e menor capacidade de sobrevivência em SDS. Por outro lado,... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In view of the importance of citrus canker in citrus culture worlwide, the bacterium Xanthomonas citri subsp. citri, the causal agent of this disease, has been extensively studied. Brazilian researchers performed the complete sequencing of the genome of X. citri subsp. citri isolate 306 (Xac306), in order to elucidate the genes and mechanisms involved in the pathogenicity and/or virulence of Xac. The ORFs XAC2361 and XAC3898 have different sizes and location in the genome, but have in common the M23 Peptidase domain, whose biological process is predicted to act as cell wall hydrolase, but the actual function of these proteins in Xac is still unknown. This work aimed to evaluate, through site-directed mutagenesis, whether XAC2361 and XAC3898 ORFs are related to the virulence and / or pathogenicity of Xac306 and the development of citrus canker. In order to observe phenotypic changes, in vitro and in planta tests of the mutants were carried out. Due to the presence of signal peptide, the ORF XAC2361 was fused to the mCherry fluorescent protein (XAC2361-mCherry) for in vivo expression and fluorescence microscopy evaluation. Phenotypic analyzes demonstrated that the ΔXAC2361 mutant showed no change in symptoms when evaluated in Mexican lime (Citrus limonia Osbeck), but presented lower in vitro growth capacity, lower swimming and swarming motility, and lower survival capacity in SDS. On the other hand, the ΔXAC3898 mutant showed a significant reduction in virulence, lower in plant... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador : Ana Marisa Fusco Almeida / Coorientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Eduardo Bagagli / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Márcia Regina von Zeska Kress / Banca: Angela Maria Victoriano de Cmpos Soares / Resumo: Paracoccidioides brasiliensis é o agente causador da paracoccidioidomicose (PCM), micose sistêmica com ampla distribuição na América Latina. A adesão e invasão de células do hospedeiro são eventos cruciais envolvidos na infecção e disseminação do patógeno. Além disso, estes utilizam suas moléculas de superfície para se ligar aos componentes da matriz extracelular para estabelecer a infecção. O sucesso de colonização dos tecidos do hospedeiro pelo fungo é um evento complexo, geralmente envolvendo um ligante codificado pelo patógeno (adesinas) e um receptor da célula (freqüentemente um componente da matriz extracelular). A identificação de mecanismos de adesão, invasão ou evasão imune por Paracoccidioides é extremamente relevante e tem sido alvo de pesquisas recentes desenvolvidas por vários grupos. Neste intuito o estudo dos passos envolvidos desde o contato inicial de P. brasiliensis até os que culminam com a sua entrada na célula através da caracterização funcional de proteínas de membrana de P. brasiliensis, principais alvos de interação com moléculas do hospedeiro, é de grande importância. O Fator de elongação Tu, pertence ao grupo de proteínas denominadas "moonlighting", tais moléculas possuem a capacidade de exercer mais de uma função e, normalmente, localizam-se em diferentes compartimentos da célula. Há relatos que EF-Tu de agentes patogênicos possa atuar como um fator de virulência. Previamente esta proteína foi identificada em P. brasiliensis por análise proteômica, sendo diferencialmente expressa quanto o fungo foi cultivado na presença de sangue de carneiro, porém esta ainda não foi caracterizada sendo interessante então a elucidação do seu papel na interação deste fungo às células epiteliais. O objetivo deste estudo foi produzir a proteína EF-Tu recombinante e seu respectivo anticorpo policlonal, verificar... / Abstract: Paracoccidioides brasiliensis is the causative agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic mycosis with broad distribution in Latin America. The adhesion and host cell invasion are critical events involved in the infection and dissemination of the pathogen. Furthermore, they use their surface molecules to bind to extracellular matrix components to establish infection. The successful colonization of host tissues by the fungus is a complex event, usually involving a linker encoded by the pathogen (adhesins) and a cell receptor (often an extracellular matrix component). The identification of adhesion mechanisms, invasion or immune evasion by P. brasiliensis is extremely important and has been investigated in recent studies developed by several groups. In order to study the steps involved from the initial contact of P.brasiliensis until the culminating in its entry into the host cell through the functional characterization of P. brasiliensis membrane proteins, the main targets of interaction with host molecules, is of great importance. The elongation factor Tu (EF-Tu) belongs to the group of proteins called "moonlighting" such molecules have the ability to perform more than one function, and typically are located in different compartments of the cell. There are reports that EF-Tu of pathogens can act as a virulence factor. This protein has been previously identified in P. brasiliensis by proteomic analysis, but this has not yet been characterized as being interesting then the elucidation of its role in interacting of the fungus with epithelial cells. For this purpose the aim of this study was to produce the recombinant protein and its respective polyclonal antibody, verify your role in the fungus interaction with pneumocytes, extracellular matrix and plasminogen. Also in order to characterize the EF-Tu protein the present study aimed to obtain isolated with low expression of the gene encoding EF-Tu and with this verifies the role of EF-... / Doutor

Orientador: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Antonio Carlos Paes / Banca: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Adolfo Carlos Barreto Santos / Banca: Rogério Giuffrida / Resumo: A linfadenite infecciosa em suínos representa uma das afecções mais preocupantes na criação de suínos em todo mundo, causada por patógenos de origem bacteriana, geralmente diagnosticada na linha de abate. Acarreta prejuízos econômicos com a condenação total ou parcial das carcaças, bem como reflexos em saúde pública, devido ao potencial zoonótico dos agentes causais. O presente estudo investigou a ocorrência e as principais espécies do gênero Mycobacterium, assim como marcadores de virulência plasmidial em linhagens de Rhodococcus equi (R. equi) isoladas de linfonodos e das fezes de suínos de abatedouros do interior do estado de São Paulo, com e sem linfadenite. Foram examinados 150 linfonodos (50 mesentéricos, 50 mediastínicos e 50 submandibulares) com lesões, 150linfonodos (50 mesentéricos, 50 mediastínicos e 50 submandibulares) sem lesões aparentes e 150 fezes de suínos, provenientes de animais destinados ao abate, em dois frigoríficos do interior do estado de São Paulo. As amostras de linfonodos e fezes foram submetidas ao cultivo microbiológico simultaneamente nos meios de ágar acrescido de sangue bovino (5%) desfibrinado, e meios seletivos de CAZ-NB, TCP e TVP para R. equi, e Stonebrink-Lesslie e Lowenstein-Jensen para micobactérias. As colônias sugestivas de R. equi e positivas no teste de CAMP, foram enviadas ao Japão para detecção de linhagens VapA ou VapB, associadas a virulência. As linhagens sugestivas no cultivo microbiano para o gênero Mycobacterium foram submetidas a caracterização de espécies por PCR pela técnica de PRA. Foram identificados nos linfonodos de suínos com lesões 48 (32,0%) linhagens de Mycobacterium spp.e 6 (4,0%) Rhodococcus equi. Nos linfonodos de suínos sem lesões foram identificados 11 (7,3%) isolados de Mycobacterium spp.e nenhuma linhagem de R. equi. Nas fezes foram identificadas 40 (26,6%) linhagens de Rhodococcus equi e ... / Abstract: The infectious lymphadenitis represents one of the most important diseases in pigs worldwide caused by bacterium, usually diagnosed on the slaughterhouses.The disease leads to economic losses due to total or partial condemnation of carcasses, as well as public health concern due to the zoonotic potential of microorganisms. The present study investigated the occurrence and the main species of the genus Mycobacterium as well as virulence markers of plasmid in Rhodococcus equi (R. equi) strains isolated from lymph nodes and feces from pigs of slaughterhouses in the state of São Paulo, with and without lymphadenitis. Were sampled 150 lymph nodes (50 mesenteric, 50 mediastinal and 50 submandibular) with lesions, 150 lymph nodes (50 mesenteric, 50 mediastinal and 50 submandibular) without visible lesions, and 150 feces from pigs of slaughterhouses of state of São Paulo, Brazil. The lymph nodes samples and feces were subjected to microbiological culture simultaneously indefibrinated bovine blood agar (5%), selective media of CAZ-NB, TCP, TVP for R. equi, and Stonebrink-Lesslie, and Lowenstein-Jensen for mycobacteria . The suggestive colonies of R. equi and positive to CAMP test were sent to Japan for evaluation of plasmid profile (VapA or VapB). The suggestive of Mycobacterium sp. were subjected to polymerase chain reaction (PCR) - based species identification using restriction enzyme pattern analysis (PRA). Among lymph nodes of pigs with lesions, 48 (32.0%) Mycobacterium spp. and 6 (4.0%) R. equi strains were identified. In the lymph nodes of pigs without lesions were identified 11 (7.3%) Mycobacterium spp. and none R. equi strain. From the fecal samples, 40 (26.6%) R. equi and 2 (1.3%) Mycobacterium spp. isolates were identified. From 48 Mycobcterium isolates from pigs with lesions, 37 (77.0%) were identified by PRA as M. avium type 1, and 11 (23.0%) M. avium type 2. Among limph nodes with lesions wer ... / Doutor

Orientador: Fernando Carlos Pagnocca / Coorientador: Derlene Attili de Angelis / Banca: Márcia de Souza Carvalho Melhem / Banca: Odair Corrêa Bueno / Resumo: As formigas da tribo Attini são conhecidas como "cultivadoras de fungos" devido à complexa simbiose que mantém com um fungo basidiomiceto, cultivado como alimento. Além do fungo mutualista, cresce continuamente a lista de micro-organismos encontrados nos ninhos e na cutícula desses insetos. Recentemente, leveduras negras, relacionadas ao gênero Phialophora, foram consideradas componentes da simbiose formiga-fungo por comprometerem a habilidade das formigas em lidar com o micoparasita Escovopsis. Os fungos melanizados estão frequentemente relacionados a infecções humanas e, por isso, tem sido questionada a possibilidade desses insetos atuarem como vetores de dispersão de fungos negros patógenos no ambiente urbano. Esta dissertação marca o início de um esforço no qual procuramos investigar a diversidade de fungos negros presentes na cutícula de formigas cortadeiras, bem como verificar o grau de virulência das estirpes obtidas. Este último aspecto, ou seja, a possibilidade das formigas cortadeiras abrigarem e dispersarem micro-organismos patogênicos pode ser o início de um novo ramo de investigação. Analisando fêmeas aladas (içás) de Atta capiguara e A. laevigata, coletadas antes do início do voo nupcial, verificou-se que elas abrigam em suas cutículas uma comunidade diversa de fungos negros, como os gêneros Cladophialophora, Cladosporium, Cochliobolus, Exophiala, Ochroconis, Phaeococcomyces, Phialophora, Penidiella e Pyrenochaeta. Num segundo estudo, os resultados indicaram que leveduras negras do gênero Exophiala, presentes na cutícula de içás e em ambientes contaminados por derivados de petróleo, apresentam características que as tornam potenciais oportunistas humanos, como consistente crescimento a 40°C e produção de lacases. Espera-se que os resultados deste trabalho... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Attini ants are known as basidiomycete fungus cultivated as a food source. Besides the mutualistic fungus, there is a continuous growth in the list of microorganisms found in nests and cuticles of these insects. Phialophora-related black yeasts have recently been considered as components of the antfungus symbiosis by compromising the ability of ants to deal with the mycoparasite Escovopsis. Melanized fungi are frequently related to human infections and, therefore, the ability of these insects act as vectors for dispersal of pathogenic black fungi in the urban environment has been questioned. This dissertation makes a start at assessing the diversity of black fungi derived from the cuticle of leaf-cutting ants, as well as verifying the virulence degree of the strains obtained. The latter, i.e., the possibility of ants sheltering and dispersing pathogenic microorganisms can be the start of a new research field. Our microbial profile of Atta capiguara and A. laevigata winged females, collected prior to the mating flight, revealed that the cuticle of ants can harbor a diverse community of black fungi, such as the melanized genera Cladophialophora, Cladosporium, Cochliobolus, Exophiala, Ochroconis, Phaeococcomyces, Phialophora, Penidiella and Pyrenochaeta. Moreover, we demonstrated that Exophiala species, associated with gynes' cuticle and hydrocarbon-polluted environments, have characteristics that make them potential human opportunists, like consistent growth at 40°C and laccase production. Our results will certainly serve as a basis for more detailed future studies to explore how these fungi reach the interior of the nest, how they survive... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ricardo Antonio Polanczyk / Banca: Celso Omoto / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: Daniel Ricardo Sosa-Gomez / Banca: Guilherme Duarte Rossi / Resumo: Plutella xylostella é uma praga de grande importância para as crucíferas em todo o mundo. Embora seja controlada com inseticidas sintéticos e biológicos, ela pode desenvolver resistência rapidamente a uma variedade de inseticidas. Os biopesticidas mais comuns utilizados para controlar P. xylostella são baseados na bactéria entomopatogênica Bacillus thuringiensis. Embora muitos estudos tenham sido realizados com Bt, o modo de ação ainda não é totalmente compreendido. Uma grande diversidade de genes é diferencialmente expressa no intestino médio de insetos resistentes, o que sugere que vários processos celulares podem estar envolvidos na resistência. Descobertas recentes mostraram que as mutações no gene que codifica o transportador ABCC2 são responsáveis pela resistência às toxinas Bt em diferentes espécies de insetos. O objetivo desta pesquisa foi testar a hipótese de que a susceptibilidade de P. xylostella a Bt se correlaciona com o nível de expressão dos componentes desse regulador de estresse. Os níveis de expressão dos genes ALP, APN, CDKAL 1, MAP4K4 e ABCC2 foi comparado utilizando qPCR, entre populações suscetíveis e resistentes de P. xylostella. A investigação da sequência de DNA do cDNA do ABCC2 foi realizada, por PCR e sequenciamento, para testar a hipótese de que a susceptibilidade de P. xylostella a Bt se correlaciona com mutações no gene ABCC2. Foram realizados retrocruzamentos entre populações suscetíveis e resistentes e cruzamentos de complementação entre popula... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Plutella xylostella is a major insect pest of cruciferous crops worldwide. Although controlled with both synthetic and biological insecticides it can rapidly evolve resistance to a variety of insecticides. The most common biopesticides used to control P. xylostella are based on the entomopathogenic bacterium Bacillus thuringiensis. Although many studies have been performed on Bt, the mode of action is still not fully understood. A wide diversity of genes are differentially expressed in the midgut of resistant insects, this suggests that a variety of cell processes may be involved in the preservation of resistance. Recent discoveries have shown that mutations in the gene encoding an ABCC2 transporter are responsible for resistance to Bt toxins in various different insect species. The aim of this research was to test the hypothesis that the susceptibility of P. xylostella to Bt correlates with the level of expression of components of this putative stress-response regulon. The level of expression of ALP, APN, CDKAL 1, MAP4K4 and ABCC2 genes were compared using qPCR, between susceptible and resistant P. xylostella populations. The investigation of the DNA sequence of ABCC2 cDNA was performed, through PCR and sequencing, to test the hypothesis that the susceptibility of P. xylostella to Bt correlates with mutations on the ABCC2 gene. Backcrosses between susceptible and resistant populations and complementation cross between resistant populations were performed. Our research demons... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Janete Apparecida Desidério / Coorientador: Guilherme Duarte Rossi / Banca: Agda Paula Facincani / Banca: Ana Maria Guidelli Thuler / Resumo: Bacillus thuringiensis é uma bactéria que pode conferir patogenicidade a uma ampla variedade de insetos, e que possui fatores associados à mortalidade de insetos por B. thuringiensis, que foram identificados e são utilizados no controle de insetos-praga como, por exemplo, as toxinas Cry, Vip e Cyt. Novos genes de B. thuringiensis que possam estar envolvidos no processo de patogenicidade a insetos têm sido identificados, entre estes, as quitinases. Enzimas capazes de hidrolisar as ligações glicosídicas entre as unidades de N-acetil-glicosamina da quitina, e aparecem como uma interessante opção por também mostrarem potencial para serem utilizadas no controle de pragas. No presente trabalho, realizou-se o isolamento e a caracterização de um gene de quitinase do isolado de B. thuringiensis I_555 (chi_I555) e a produção e caracterização parcial da quitinase (Chi_I555). A análise de chi_I555 indicou uma fase de leitura aberta de 2025 pares de bases que codificam uma proteína com 674 aminoácidos e peso molecular de 74,24 kDa. Análises bioinformáticas indicaram a presença de um sítio ativo de quitinase, de um domínio de fribronectina e de um domínio ligante de quitina na proteína Chi_I555. A expressão heteróloga de Chi_I555 resultou na produção de uma quitinase ativa sobre o substrato "Chitin Azure" em uma faixa ótima de pH próxima do neutro. A proteína Chi_I555 utilizada neste estudo é altamente promissora para o uso em construções de plantas geneticamente modificadas / Abstract: Bacillus thuringiensis is a bacterium that can confer pathogenicity to a wide variety of insects, and has associated with mortality of insects by B. thuringiensis factors that have been identified and are used to control insect pests such as the Cry toxins, Vip and Cyt. New genes of B. thuringiensis that may be involved in the pathogenic process of insects have been identified among these chitinases. Enzymes capable of hydrolyzing glycosidic linkages between the units of N-acetyl-glucosamine from chitin, and appear as an interesting option to also show potential for use in pest control. In this study, we carried out the isolation and characterization of a chitinase gene from B. thuringiensis isolate I_555 (chi_I555) and the production and partial characterization of a chitinase (Chi_I555). Chi_I555 analysis indicated an open reading frame of 2025 base pairs encoding a protein of 674 amino acids and a molecular weight of 74.24 kDa. Bioinformatics analysis indicated the presence of an active site of chitinase, a fribronectin domain and a chitin binding domain of the protein Chi_I555. Heterologous expression of Chi_I555 resulted in the production of an active chitinase on the substrate "Chitin Azure" in a great range of pH close to neutral. The Chi_I555 protein used in this study is highly promising for use in construction of genetically modified plants / Mestre

Orientador: José Moacir Marin / Banca: Maria Cristina Monteiro de Souza Gugelmin / Banca: Simone Barone Salgado Marques / Banca: Everlon Cid Rigobelo / Banca: Tammy Priscilla Chioda Delfino / Resumo: De 2008 a 2011 foram isoladas 110 cepas de Escherichia coli, sendo 59 a partir de urina de mulheres com ITU bacteriana. Os outros 51 isolados foram coletados por meio de swabs anais dos respectivos animais de estimação. Foram pesquisados por PCR a presença de genes de virulência e os genes mais encontrados foram o hlyF (44,06%), iss (42,37%) e fimH (100%) e hlyF (13,72%), iss (11,76%) e fimH (96,07%) entre as cepas de origem humana e animal, respectivamente. Foi realizada também a técnica de ERIC-PCR, onde pode observar dissimilaridades genéticas entre estes dois grupos bacterianos estudados, dando fortes indícios de que a transmissão no presente trabalho esteve ausente. Foram realizados antibiogramas a partir de cada um dos cinco isolados de cada amostra encontrando maior número de cepas resistentes em mulheres que nos animais em 8 dos 11 antimicrobianos testados, as maiores resistências para as cepas de origem humana foram o ácido nalidíxico e o ciprofloxacino com 97,14% e para as de origem animal a amoxicilina / ácido clavulânico e ampicilina com 74,28% e 68,57% respectivamente. As cepas de origem humana apresentaram também maiores índices de multirresistência que dos animais com 71,42% e 40%, respectivamente. Estas diferenças entre as resistências fortalecem a hipótese de que a origem das bactérias causadoras de ITU em mulheres não é de seus respectivos animais de companhia / Abstract: A hundred-ten Escherichia coli strains was isolated from 2008 to 2011, among them 59 were from women with urinary tract infection (UTI) and 51 were from their pets collected by rectal swab. The virulence genes was search by PCR and the most found genes were fimH (100%), hly (44%) and iss (42.3%) all of then from women. Also was used the ERIC-PCR method to check the similarity among both bacterial groups analyzed. The results showed different patterns for each pair women-animal bacterial isolates. In general the isolates from human showed more resistance to the antimicrobial drugs examined, the highest resistance rate was for nalidixic acid (97.1%) and for streptomicin (96.0%) both from human isolates. The results obtained in this study do not permit to suggest a transmission of bacterial strains involving humans and their companion animals / Doutor

Orientador: José Moacir Marin / Banca: Janete Apparecida Desidério / Banca: Maria de Fátima Martins / Resumo: A piometra canina é uma enfermidade caracterizada pela inflamação do útero com acúmulo de exsudatos, acometendo principalmente fêmeas adultas. Ocorre na fase lútea do ciclo estral em decorrência de alterações hormonais e infecção bacteriana. É reconhecida como uma das principais causas de morte em cadelas e a Escherichia coli é o principal patógeno associado a esta doença. O objetivo deste estudo foi isolar e identificar cepas de E. coli provenientes de conteúdo intra uterino, boca e fezes de cadelas diagnosticadas com piometra, estudar a prevalência de genes codificadores de fatores de virulência uropatogênicos das cepas obtidas testando ainda a semelhança genética entre as cepas isoladas de conteúdo intra uterino e boca e avaliar a susceptibilidade "in vitro" das bactérias isoladas frente a 12 agentes antimicrobianos. Setenta cepas de E. coli, 25 provenientes do conteúdo intra uterino, 26 provenientes da boca e 19 provenientes das fezes, isoladas de 6 cadelas foram examinadas por PCR. Entre as cepas examinadas, 67 (95,7%) foram positivas para o gene fim, 19 (27,1%) foram positivas para iss, 18 (25,7%) foram positivas para hly , 13 (18,5%) foram positivas para iuc e 12 (17,1%) foram positivas para usp. Três animais apresentaram grande similaridade entre as cepas de E. coli isoladas do conteúdo intra uterino e da boca, através da análise da diversidade genética realizada mediante emprego da técnica REP-PCR, ERIC-PCR e BOX-PCR. Resistência antimicrobiana predominante foi detectada para cefalotina (67,1%), ampicilina (65,7%), tetraciclina (61,4%) e nitrofurantoina (58,5%) entre as cepas isoladas. Resistência a múltiplos antimicrobianos foi detectada em 12 (48,0%) dos isolados do conteúdo intra uterino, em 22 (84,6%) dos isolados da boca e em 14 (73,6%) dos isolados das fezes... / Abstract: Canine pyometra is a disease characterized by the inflammation of the uterus with accumulation of purulent discharge, affecting mainly adult animals. Occurs in the luteus phase of the estrus cycle in result of hormone alterations and generally is associated with bacterial infections. It is recognized as one of the main causes of disease and death in the bitch and Escherichia coli is the major pathogen associated with this disease. The aim of this study was to research, isolation and identification of Escherichia coli strains from intrauterine contents, mouth and feces of bitches diagnosed with pyometra, studying the prevalence of uropathogenic virulence factors genes in strains isolated, still testing the genetic similarity among strains isolated from intrauterine contents and mouth and evaluate the susceptibility "in vitro" of the isolated bacteria to 12 antimicrobial drugs. Seventy E. coli strains, 25 from intrauterine contents, 26 from mouth and 19 from feces isolated from six bitches were examined by PCR. Among the strains 67 (95.7%) were positive for fim, 19 (27.1%) were positive for iss, 18 (25.7%) were positive for hly, 13 (18.5%) were positive for iuc and 12 (17.1%) were positive for usp. Multiple antimicrobial resistance was detected for cephalothin (68.0%), nalidixic acid (56.0%) and ampicillin (56.0%) among the pyomera E. coli isolates. Multidrug resistance was found in 12 (48.0%) of the isolates from pyometra, in 22 (84.6%) of the isolates from mouth and in 14 (73.6%) of the isolates from feces... / Mestre