Resumo: A identificação de exames laboratoriais adequados para a confirmação da hipótese clínica é importante em serviços de rotina para pacientes com paracoccidioidomicose (PCM) e foi o objetivo deste estudo. Realizou-se estudo retrospectivo de 401 pacientes com PCM atendidos de 1974 a 2008, na Área de Doenças Tropicais do Hospital das Clínicas - Faculdade de Medicina de Botucatu / UNESP. Foram analisadas, antes do tratamento, quatro técnicas diagnósticas - exame micológico direto (MD), citopatológico (CP), histopatológico (HP) e reação de imunodifusão dupla em gel de ágar (ID) para avaliação dos níveis de anticorpos séricos específicos. A comparação de duas proporções entre populações dependentes ou independentes foi feita pelo teste de Mc Nemar ou binomial.O grau de concordância entre dois testes foi avaliado através do Coeficiente Kappa. Para comparação de mais de duas populações dependentes foi utilizado o teste de Cochran. A comparação de múltiplas proporções para amostras seriadas foi feita pelo teste de Tukey e a comparação de duas proporções foi feita pelo teste Z. Para estudo da associação entre variáveis qualitativas foi utilizado o teste do qui-quadrado. Para as variáveis quantitativas, cujo objetivo era comparar grupos, foi utilizado o teste não paramétrico de Kruskal-Wallis. A rejeição da hipótese de nulidade foi vinculada a um erro tipo I ( ) igual ou menor que 0,05. Para a realização dos testes foi utilizado o programa computacional SAS-The Statistical Analysis System, versão 6.12. Homens (88,0%) e forma crônica (76,8%) predominaram. A distribuição de pacientes de acordo com o primeiro atendimento não apresentou diferença. Identificação da fase leveduriforme típica de P. brasiliensis foi possível em 86% dos pacientes enquanto 14% deles apresentaram apenas a sorologia positiva. O exame micológico direto foi realizado... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Identification of appropriate laboratory measurements to confirm a clinical hypothesis is important in a routine service for paracoccidioidomycosis patients and constituted the objective of this study. Clinical records and laboratory cards of 401 paracoccidioidomycosis patients seen at the Tropical Diseases Area - Botucatu Medical School (São Paulo, Brazil) from 1974 to 2008 were reviewed. Direct mycological examination (DM), cell block preparation (CB), histopathological examination (HP), and specific antibodies serum levels evaluated through double agar gel immunodiffusion test (ID) were evaluated before treatment. Statistical analysis: the comparison between proportions for dependent or independent populations was made by the McNemar test or Binomial. The agreement between methods was evaluated using the Kappa Coefficient. The comparison of more than two dependent populations was made by the Cochran Test. The comparison of multiple proportions was done by Tukey test and for two proportions by Z test. In order to study the association between qualitative variables the chi-square test was used. For quantitative variables, whose objective was to compare groups, the nonparametric Kruskal-Wallis test was used. The software SAS - The Statistical Analysis System, version 6.12, was used. The significance was set up at p<0.05. Males (88.0%) and chronic form (76.8%) predominated. Patients distribution according to period of assistance presented no differences. Typical P. brasiliensis yeast forms were identified in clinical specimens in 86% of the patients while 14% of them showed only a positive serological test. Direct mycological examination carried out in 51 different tissue specimens showed 74.5% of sensitivity. The sensitivity was 62.5% in 112 sputum samples. Cell block preparation carried out in 483 sputum samples showed 55.3% of sensitivity. Histopathological examination carried out... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Rinaldo Poncio Mendes / Coorientador: Adriana Pardini Vicentini Moreira / Banca: Mário León Silva-Vergara / Banca: Valmir Laurentino Silva / Mestre

Orientador: Luciano Tavares Angelo Cintra / Banca: Gustavo Sivieri de Araújo / Banca: Eloi Dezan Junior / Banca: Renata Oliveira Samuel / Banca: Rinaldo Poncio Mendes / Resumo: Introdução: a paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica endêmica cuja incidência vem aumentando de forma significativa na região norte do Brasil. Duas espécies, Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides lutzii podem causar a doença. A última aparenta ter maior importância em Rondônia, estado com as maiores taxas de incidência e mortalidade por PCM do Brasil. Objetivo: descrever as características clínicas, epidemiológicas e laboratoriais de pacientes portadores de PCM e estabelecer correlação com lesões orais. Material e Métodos: estudo retrospectivo de pacientes atendidos no Centro de Referência em Medicina Tropical de Rondônia durante o período de janeiro de 2013 a dezembro de 2016. Resultados: foram diagnosticados 107 pacientes com média de idade de 53,8 anos, sendo 100 homens e 07 mulheres. Observou-se que 77% mantinham contato ou relataram experiência anterior com lavoura. A maioria (98,1%) apresentou a forma crônica da doença. O diagnóstico foi confirmado em 74,7%, e baseado em achados clínicos e/ou epidemiológicos no restante. O diagnóstico sorológico não esteve disponível no período. O tempo médio entre o início dos sintomas e a realização do diagnóstico foi de 7,3 meses. Os principais locais acometidos foram os pulmões (95,3%), seguidos da cavidade oral (55,1%) e dos gânglios (28%). Na cavidade oral, a faringe/laringe predominou (33%), seguida da mucosa jugal (17,8%) e palato mole (13,1%). Houve 58,3% de associação com tabagismo. O medicamento mais ut... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Background: Paracoccidioidomycosis (PCM) is an endemic systemic mycosis whose incidence has been increasing significantly in the northern region of Brazil. Two species, Paracoccidioides brasiliensis and Paracoccidioides lutzii can cause the disease. The latter appears to be more important in Rondônia, the state with the highest incidence and mortality rates by PCM in Brazil. O bjective : T o describe the clinical, epidemiological and laboratory characteristics of PCM patients and to establish correlation with oral lesions . Material and Methods: a retrospective study of patients attended at the Reference Center in Tropical Medicine of Rondônia during the period from January 2013 to December 2016. Results: A total of 107 patients were diagnosed, with mean age of 53.8 years, 100 men and 7 women. It was observed that 77% maintained contact or reported previous experience with rural areas . The majority (98.1%) presented the chronic form of the disease. The diagnosis was confirmed by the finding of the fungus in clinical specimen s in 74.7%, and based on clinical and/or epidemiological findings in the rest. The serological diagnosis was not available in the period. The mean time between onset of symptoms and the diagnosis was 7.3 months. The main sites were the lungs (95.3%), follo wed by the oral cavity (55.1%) and the ganglia (28%). In the oral cavity, the pharynx/larynx predominated (33%), followed by jugal mucosa (17.8%) and soft palate (13.1%). There was an 58,3 % association with smoking . The most commonly used drug was Itr acona zole in 93.5% of patients. Conclu sion: There was no difference between groups with or without oral cavity involvement. The presence of oral lesions in more than half of the cases, with a more accessible diagnosis, suggests that the time between onset of sy mptoms and the beginning... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-26Bitstream added on 2014-06-13T19:51:40Z : No. of bitstreams: 1 moreto_tc_me_botfm.pdf: 849370 bytes, checksum: d071bdf82901d445a21a6ee49c43f0c3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A identificação de exames laboratoriais adequados para a confirmação da hipótese clínica é importante em serviços de rotina para pacientes com paracoccidioidomicose (PCM) e foi o objetivo deste estudo. Realizou-se estudo retrospectivo de 401 pacientes com PCM atendidos de 1974 a 2008, na Área de Doenças Tropicais do Hospital das Clínicas – Faculdade de Medicina de Botucatu / UNESP. Foram analisadas, antes do tratamento, quatro técnicas diagnósticas - exame micológico direto (MD), citopatológico (CP), histopatológico (HP) e reação de imunodifusão dupla em gel de ágar (ID) para avaliação dos níveis de anticorpos séricos específicos. A comparação de duas proporções entre populações dependentes ou independentes foi feita pelo teste de Mc Nemar ou binomial.O grau de concordância entre dois testes foi avaliado através do Coeficiente Kappa. Para comparação de mais de duas populações dependentes foi utilizado o teste de Cochran. A comparação de múltiplas proporções para amostras seriadas foi feita pelo teste de Tukey e a comparação de duas proporções foi feita pelo teste Z. Para estudo da associação entre variáveis qualitativas foi utilizado o teste do qui-quadrado. Para as variáveis quantitativas, cujo objetivo era comparar grupos, foi utilizado o teste não paramétrico de Kruskal-Wallis. A rejeição da hipótese de nulidade foi vinculada a um erro tipo I ( ) igual ou menor que 0,05. Para a realização dos testes foi utilizado o programa computacional SAS-The Statistical Analysis System, versão 6.12. Homens (88,0%) e forma crônica (76,8%) predominaram. A distribuição de pacientes de acordo com o primeiro atendimento não apresentou diferença. Identificação da fase leveduriforme típica de P. brasiliensis foi possível em 86% dos pacientes enquanto 14% deles apresentaram apenas a sorologia positiva. O exame micológico direto foi realizado... / Identification of appropriate laboratory measurements to confirm a clinical hypothesis is important in a routine service for paracoccidioidomycosis patients and constituted the objective of this study. Clinical records and laboratory cards of 401 paracoccidioidomycosis patients seen at the Tropical Diseases Area – Botucatu Medical School (São Paulo, Brazil) from 1974 to 2008 were reviewed. Direct mycological examination (DM), cell block preparation (CB), histopathological examination (HP), and specific antibodies serum levels evaluated through double agar gel immunodiffusion test (ID) were evaluated before treatment. Statistical analysis: the comparison between proportions for dependent or independent populations was made by the McNemar test or Binomial. The agreement between methods was evaluated using the Kappa Coefficient. The comparison of more than two dependent populations was made by the Cochran Test. The comparison of multiple proportions was done by Tukey test and for two proportions by Z test. In order to study the association between qualitative variables the chi-square test was used. For quantitative variables, whose objective was to compare groups, the nonparametric Kruskal-Wallis test was used. The software SAS – The Statistical Analysis System, version 6.12, was used. The significance was set up at p<0.05. Males (88.0%) and chronic form (76.8%) predominated. Patients distribution according to period of assistance presented no differences. Typical P. brasiliensis yeast forms were identified in clinical specimens in 86% of the patients while 14% of them showed only a positive serological test. Direct mycological examination carried out in 51 different tissue specimens showed 74.5% of sensitivity. The sensitivity was 62.5% in 112 sputum samples. Cell block preparation carried out in 483 sputum samples showed 55.3% of sensitivity. Histopathological examination carried out... (Complete abstract click electronic access below)

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, endêmica na América Latina, com alta prevalência no Brasil. O agente etiológico da doença são fungos do gênero Paracoccidioides. A gp43 é o antígeno principal do Pb e tem sido demonstrado que camundongos imunizados com anticorpos monoclonais anti-gp43 (MAbs) (Ab1) induzem a cascata idiotípica, produzindo anticorpos anti-Id (Ab2) e anti-anti-Id (Ab3). Observou-se que todos os Mabs Ab2 inibiram (>90%) a ligação da gp43 ao Mab 17c (Ab1) sugerindo que estes Mabs anti-Id ligam-se ao parátopo do Mab Ab1, comprovando assim que os Mabs anti-Id obtidos possuem a imagem interna da gp43. Então, nosso grupo de pesquisa construiu uma nova molécula de anticorpo à partir do Mab anti-idiotípico Ab2-&#946;, que mimetiza o antígeno gp43 de P.brasiliensis, denominada de fragmento variável de cadeia única (scFv), e a transfecção dessa molécula em células dendríticas (DCs) mostrou ser promissora na PCM experimental. Visto que a molécula de DC-pMAC/PS-scFv, que possui a região de reconhecimento e ativação de linfócitos T, mostrou eficiência em modelo murino de terapia na PCM experimental, este trabalho teve como objetivo investigar os efeitos da terapia com o scFv em associação às nanocápsulas. Para isso, utilizando a levedura Pichia pastoris, obtivemos a expressão da molécula de scFv recombinante que foi posteriormente encapsulada em um composto a base de PLGA, na proporção 50:50 de PLA e PGA, e testada em modelo murino. Nosso modelo de terapia com scFv encapsulado mostrou-se eficiente, uma vez que observamos diminuição do CFU, maior recrutamento de células dendríticas e macrófagos nos pulmões dos animais, bem como aumento da produção de citocinas como IFN- &#947; e IL-12, diminuição de IL-10 para os animais tratados com o scFv encapsulado. Para as citocinas IL-4 e IL-17, não obtivemos níveis diferentes entre os grupos de tratamento. Ainda, não observamos diferença na produção de imunoglobulina IgG1. Sendo assim, nossos resultados sugerem a modulação de resposta imune para o tipo Th1, importante na proteção da PCM e diminuição da carga fúngica pulmonar. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic Mycosis, endemic in Latin America, with high prevalence in Brazil. The Etiologic Agent of disease are fungus of the genus Paracoccidioides. The main Antigen is gp43 Pb and it has been shown that mice immunized with monoclonal anti-gp43 antibodies (MAbs) (Ab1) induce the all idiotypic, producing antibodies anti-Id (Ab2) and anti-anti-Id (Ab3). It was observed that all the Mabs Ab2 inhibited (90%) the > gp43 by Mab 17 c (Ab1) suggesting that these anti-Id Mabs bind to the Mab paratopo Ab1, proving how the anti-Id Mabs obtained possess the internal image of gp43 (GESZTESI et al., 1996). So, our research group has built a new antibody molecule from Mab anti-idiotypic Ab2-b, which mimics the gp43 Antigen of p. brasiliensis, called single-chain variable fragment (scFv), and transfection of this molecule on dendritic cells (DCs) proved to be promising in the PCM. Since the molecule of DC-pMAC/PS-scFv, that has the recognition and activation of T lymphocytes, showed efficiency in murine model of therapy in experimental PCM, this study aimed to investigate the effects of therapy with the scFv in association to standard techniques. To do this, using the yeast Pichia pastoris, we obtained the expression of scFv recombinant molecule that was later encapsulated in the base compound of PLGA, 50:50 ratio of PLA and PGA, and tested in murine model. Our model of encapsulated scFv therapy proved to be efficient, since we observe reduction of CFU, greater recruitment of dendritic cells and macrophages in the lungs of animals, as well as increased production of cytokines such as IFN-&#947; and IL-12, IL-10 reduction for animals treated with encapsulated scFv. For the cytokines IL-4 and IL-17, we didn\'t get different levels between treatment groups. Still, it was not observed decrease of IgG1 immunoglobulin. So, our results suggest the modulation of immune response to Th1 type, important in the protection of the PCM.

Orientadores: Ronei Luciano Mamoni, Maria Heloisa Souza Lima Blotta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T10:37:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Longhi_LarissaNaraAlegrini_M.pdf: 6631958 bytes, checksum: 45b4fc2e64262b037302e0269ebd8f71 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Tradicionalmente o papel das células NK na resposta imunológica tem sido associado com a resistência à infecção viral e tumores, porém estudos recentes apontam para a participação destas células na resposta imunológica contra outras doenças infecciosas. O objetivo deste estudo foi avaliar a possível participação de células NK (CD56+CD3-) na resposta imunológica ao fungo Paracoccidioides brasiliensis. Foram utilizadas células CD56+ isoladas por meio imunomagnético provenientes de pacientes com paracoccidioidomicose e de indivíduos controle. As células CD56+ foram avaliadas quanto à capacidade citotóxica direta contra leveduras de P. brasiliensis (cepa virulenta - Pb18 e avirulenta - Pb265) e contra células-alvo (monócitos) infectadas com leveduras de ambas as cepas. Também foi avaliada a expressão dos constituintes dos grânulos citotóxicos (granzima A, B, perforina e granulisina), receptores de ativação (NKG2D) e de inibição (KIR2DL2/L3/S2 e KIR3DL1), marcadores de ativação (CD69 e CD25), assim como a produção de citocinas (IFN-g e TNF-a) por meio de PCR em tempo real e por citometria de fluxo. A participação da IL-15 na ativação das células NK foi avaliada pela adição da citocina recombinante em alguns experimentos. Para avaliar a participação dos grânulos na atividade citotóxica direta e contra células-alvo em alguns experimentos as células foram tratadas com inibidores específicos (SrCl, concanamicina A ou EGTA). Os resultados demonstraram que células de pacientes apresentam resposta citotóxica (direta e contra células-alvo) inferior àquela observada nos indivíduos controle. A citotoxicidade direta foi dependente de grânulos, mas independente de perforina, enquanto que a citotoxicidade contra células-alvo foi dependente de perforina. A expressão de granulisina (RNAm e proteína) foi maior nas células de indivíduos controle. Além disso, observamos que células CD56+ apresentam a capacidade de secretar essa proteína após o estímulo com leveduras de P. brasiliensis. Também observamos que as células CD56+ de doadores normais são ativadas (aumentam a expressão de CD69 e CD25) quando estimuladas com o fungo, enquanto as células NK de pacientes não mostraram esse aumento, a não ser quando estimuladas com IL-15. Estes resultados demonstraram que as células CD56+ podem participar ativamente da resposta imunológica contra o P. brasiliensis, podendo contribuir tanto para a morte direta do fungo como de células infectadas, e que a granulisina pode desempenhar um papel preponderante no controle da infecção pelo P. brasiliensis. Outro fato importante observado foi que as células CD56+ quando estimuladas por células leveduriformes de P. brasiliensis produzem e secretam IFN-g, uma citocina com atuação importante na ativação de outras células do sistema imunológico como macrófagos e linfócitos, e dessa forma pode contribuir para o desenvolvimento da resposta imunológica adquirida subseqüente à infecção. / Abstract: Besides their role in viral infection and tumor resistance, recent studies have showed that NK cells also participate in the immune response against other infectious diseases. The aim of this study was to evaluate the possible role for NK cells (CD56+) in the immune response against the fungi Paracoccidioides brasiliensis. CD56+ cells from patients with paracoccidioidomycosis and healthy individuals were isolated by immmunomagnetic columms and antibodies. We evaluated the capacity of the direct killing of P. brasiliensis yeast cells (Pb18 virulent strain and Pb285 avirulent strain), as well as, the ability to kill infected target cells (monocytes infected with either virulent or avirulent strains). The CD56+ cells also were assessed in order to evaluate the expression of citotoxic granules (granzyme A, B, perforin and granulysin) and the expression of the activation receptor NKG2D, the inhibition receptors KIR2DL2/L3/S2 and KIR3DL1 and the activation molecules CD69 and CD25. We also determine the capability of production and release of cytokines (IFN-g and TNF-a) using Real Time PCR, flow cytometry and ELISA. The role of IL-15 was analyzed by the addition of recombinant cytokine in some experiments. To determine if the cytotoxic activity was dependent of granules, cell cultures were supplemented with specific inhibitors which prevent granule release. The results showed that cells from patients present a lower citotoxic response when compared to healthy individuals. The direct citotoxicity seems to be granule-dependent but independent on perforin, whereas the citotoxicity against target cells showed to be perforin dependent. It was observed an augmented expression of granulysin (mRNA and protein) in cells from controls, and that CD56+ cells are able to produce and release granulysin after stimulation with P. brasiliensis yeast cells. Furthermore, the analyses of CD56+ cells from controls showed elevated expression of CD25 and CD69 after the stimulus with yeast cells, while cells from patients are only activated in the presence of IL-15. These results demonstrated that CD56+ cells can participate actively of the immune response against the P. brasiliensis infection either by destroying directly yeast cells or by the recognition and killing of infected cells. Granulysin is the possible mediator of the cytotoxic effect observed in this study, once this protein is produced and released by CD56+ cells. Another important data is the finding that CD56+ cells are able to produce IFN-g after the stimulus, which could influence the subsequent acquired immunological response by stimulating others cells as macrophages and lymphocytes. / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, endêmica na América Latina, com alta prevalência no Brasil. O agente etiológico da doença são fungos do gênero Paracoccidioides. A gp43 é o antígeno principal do Pb e tem sido demonstrado que camundongos imunizados com anticorpos monoclonais anti-gp43 (MAbs) (Ab1) induzem a cascata idiotípica, produzindo anticorpos anti-Id (Ab2) e anti-anti-Id (Ab3). Observou-se que todos os Mabs Ab2 inibiram (>90%) a ligação da gp43 ao Mab 17c (Ab1) sugerindo que estes Mabs anti-Id ligam-se ao parátopo do Mab Ab1, comprovando assim que os Mabs anti-Id obtidos possuem a imagem interna da gp43. Então, nosso grupo de pesquisa construiu uma nova molécula de anticorpo à partir do Mab anti-idiotípico Ab2-&#946;, que mimetiza o antígeno gp43 de P.brasiliensis, denominada de fragmento variável de cadeia única (scFv), e a transfecção dessa molécula em células dendríticas (DCs) mostrou ser promissora na PCM experimental. Visto que a molécula de DC-pMAC/PS-scFv, que possui a região de reconhecimento e ativação de linfócitos T, mostrou eficiência em modelo murino de terapia na PCM experimental, este trabalho teve como objetivo investigar os efeitos da terapia com o scFv em associação às nanocápsulas. Para isso, utilizando a levedura Pichia pastoris, obtivemos a expressão da molécula de scFv recombinante que foi posteriormente encapsulada em um composto a base de PLGA, na proporção 50:50 de PLA e PGA, e testada em modelo murino. Nosso modelo de terapia com scFv encapsulado mostrou-se eficiente, uma vez que observamos diminuição do CFU, maior recrutamento de células dendríticas e macrófagos nos pulmões dos animais, bem como aumento da produção de citocinas como IFN- &#947; e IL-12, diminuição de IL-10 para os animais tratados com o scFv encapsulado. Para as citocinas IL-4 e IL-17, não obtivemos níveis diferentes entre os grupos de tratamento. Ainda, não observamos diferença na produção de imunoglobulina IgG1. Sendo assim, nossos resultados sugerem a modulação de resposta imune para o tipo Th1, importante na proteção da PCM e diminuição da carga fúngica pulmonar. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic Mycosis, endemic in Latin America, with high prevalence in Brazil. The Etiologic Agent of disease are fungus of the genus Paracoccidioides. The main Antigen is gp43 Pb and it has been shown that mice immunized with monoclonal anti-gp43 antibodies (MAbs) (Ab1) induce the all idiotypic, producing antibodies anti-Id (Ab2) and anti-anti-Id (Ab3). It was observed that all the Mabs Ab2 inhibited (90%) the > gp43 by Mab 17 c (Ab1) suggesting that these anti-Id Mabs bind to the Mab paratopo Ab1, proving how the anti-Id Mabs obtained possess the internal image of gp43 (GESZTESI et al., 1996). So, our research group has built a new antibody molecule from Mab anti-idiotypic Ab2-b, which mimics the gp43 Antigen of p. brasiliensis, called single-chain variable fragment (scFv), and transfection of this molecule on dendritic cells (DCs) proved to be promising in the PCM. Since the molecule of DC-pMAC/PS-scFv, that has the recognition and activation of T lymphocytes, showed efficiency in murine model of therapy in experimental PCM, this study aimed to investigate the effects of therapy with the scFv in association to standard techniques. To do this, using the yeast Pichia pastoris, we obtained the expression of scFv recombinant molecule that was later encapsulated in the base compound of PLGA, 50:50 ratio of PLA and PGA, and tested in murine model. Our model of encapsulated scFv therapy proved to be efficient, since we observe reduction of CFU, greater recruitment of dendritic cells and macrophages in the lungs of animals, as well as increased production of cytokines such as IFN-&#947; and IL-12, IL-10 reduction for animals treated with encapsulated scFv. For the cytokines IL-4 and IL-17, we didn\'t get different levels between treatment groups. Still, it was not observed decrease of IgG1 immunoglobulin. So, our results suggest the modulation of immune response to Th1 type, important in the protection of the PCM.

Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada por Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis), que acomete preferencialmente o pulmão, sendo este um dos poucos órgãos que está em continua e intensa interação com o meio ambiente e o sistema imune. O grande desafio para o sistema imune pulmonar é discriminar o que é nocivo e reagir de acordo. As células dendríticas (DCs) são apresentadoras de antígenos \"profissionais\" capazes de fazer o processamento do antígeno e a apresentação de peptídeos a linfócitos T e são ideais para manter este equilíbrio delicado entre a tolerância e uma resposta imune efetora. Sabendo da importância dessas células no sistema imune e que a infecção por P. brasiliensis ataca preferencialmente o pulmão, células de lavado broncoalveolar (BAL), após infecção experimental com leveduras de P. Brasiliensis, foram analisadas. Nós observamos um significante aumento de DCs no BAL após 24hrs da infecção intratraqueal com 104 leveduras de P. brasiliensis. A caracterização das DCs mostraram que essas células expressaram CD11c, MHC-II e DEC205. A fim de verificar a capacidade de migração das DCs, as mesmas foram diferenciadas a partir de células de medula óssea e pulsadas com leveduras de P. brasiliensis, marcadas com CFSE e injetadas intratraquealmente em camundongos. Como controle negativo, utilizamos PBS e DCs não pulsadas com o fungo. Os resultados mostraram, que após 12 horas de infecção, as DCs (CFSE+CD11c+), migraram para os linfonodos torácicos. No entanto, a quantidade destas células diminui discretamente após 24 horas de infecção. Além disso, não observamos DCs nos linfonodos regionais, quando analisamos os grupos controle. Dessa forma, as células pulmonares também foram marcadas in vivo injetando-se intratraquealmente o corante CFSE juntamente com leveduras de P. brasiliensis. Verificamos que após 12 horas, as DCs pulmonares, dos animais infectados com o fungo, migraram para os linfonodos regionais. Esses resultados comprovam que o fungo P. brasiliensis foi capaz de ativar as DCs, induzindo sua migração para linfonodos regionais, e induziu nesse órgão uma resposta por células T evidenciada pela produção preferencial de IL-10. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis), which mainly affects the lungs. They are one of the few organs that are in constant and intense interaction with the environment and the immune system. The great challenge for the pulmonary immune system is to discriminate what is harmful and react accordingly. Dendritic cells (DCs) are \"professionals\" antigen-presenting cells and they can do the antigen processing. They can also do the presentation of peptides to T lymphocytes and are ideal for maintaining this delicate balance between tolerance and an effector immune response. Knowing the importance of these cells in the immune system and that the infection by P. brasiliensis preferentially attacks the lungs, cells from bronchoalveolar lavage (BAL), after experimental infection with yeasts of P. Brasiliensis, were analyzed. We observed a significant increase of DCs in BAL after 24 hours of intratracheal infection with 104 of yeast cells of P. brasiliensis. The characterization of these cells showed that DCs expressed CD11c, MHC-II and DEC205. In order to verify the ability of migration of DCs, they were differentiated from bone marrow cells and pulsed with yeasts of P. brasiliensis, they were also labeled with CFSE and injected intratracheally into mice. As a negative control, we used PBS and DCs that were not pulsed with the fungus. The results showed that after 12 hours of infection, the DCs (CFSE + CD11c +), migrated to the thoracic lymph nodes. However, the quantity of these cells decreases slightly after 24 hours of infection. Furthermore, we observed no DCs in regional lymph nodes when we analyzed the control groups. Thus, the lung cells were also labeled in vivo by injecting the CFSE dye intratracheally with yeasts of P. brasiliensis. We found that after 12 hours, pulmonary DCs of the animals infected with the fungus migrated to regional lymph nodes. These results indicate that the fungus P. brasiliensis was able to activate DCs, inducing their migration to regional lymph nodes, and inducing a response in that organ by T cells as evidenced by preferential production of IL-10.

A paracoccidioidomicose (PCM) é um a micose profunda de natureza granulomatosa, causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis) e que compromete preferencialmente o tecido pulmonar. O P. brasiliensis sintetiza várias substâncias, dentre estas, destaca-se a glicoproteína de 43 kDa (gp43), a qual é considerada o principal componente antigênico do fungo. Dada a importância da gp43, anticorpos monoclonais (Mabs) contra esta glicoproteína foram obtidos e posteriormente caracterizados. Baseado na hipótese da rede idiotípica, Jerne (1974) propôs que cada anticorpo, quando produzido em resposta a um antígeno, induz a formação de outros anticorpos dirigidos contra sua região variável, na qual é única. Anticorpos anti-idiotípicos, que reconhecem o paratopo, contendo a imagem interna do antígeno, são denominados de Ab2-&#946; e seu potencial terapêutico tem sido explorado em diferentes sistemas. Apesar da molécula de anticorpo ser complexa estruturalmente, sabemos que a região Fab, é a responsável pelo mimetismo do antígeno. Então, nosso grupo de pesquisa construiu uma nova molécula de anticorpo à partir do Mab anti-idiotípico Ab2-&#946;, que mimetiza o antígeno gp43 de P. brasiliensis, denominada de fragmento variável de cadeia única (scFv). A transfecção dessa molécula em células dendríticas (DCs) mostrou ser promissora na PCM experimental, visto que estes transfectomas foram eficientes em apresentar a proteína scFv às células dos linfonodos, induzindo linfoproliferação, além de diminuírem a carga fúngica pulmonar. Visto que a molécula de scFv que possui a região de reconhecimento e ativação de linfócitos T mostrou eficiência no modelo de terapia na PCM experimental, o principal objetivo deste trabalho foi analisar os mecanismos pelos quais os transfectomas de DCs ativam a resposta imune em camundongos infectados com o fungo, para que possamos entender melhor a capacidade destas células em modular a resposta imune na PCM experimental. Dessa maneira, avaliamos a capacidade das DCs trasfectadas com pMAC/PS-scFv em migrar para os linfonodos regionais e induzirem uma resposta protetora com produção de IgG, bem como, analisamos o fenótipo destas células e produção de citocinas. Nosso modelo de terapia com pMAC/PS-scFv mostrou-se eficiente, uma vez que observamos diminuição de células T regulatórias nos linfonodos regionais, bem como aumento da produção de citocinas como IFN-&#947; e IL-12. Ainda, observamos aumento do isotipo IgG2b, sugerindo a modulação de resposta imune para o tipo Th1, importante na proteção da PCM. / The paracoccidioidomycosis (PCM) is the nature of granulomatous mycosis caused by Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis) and preferentially compromises lung tissue. The P. brasiliensis synthesizes various substances, among these, there is a 43 kDa glycoprotein (gp43), which is considered a major antigenic component of the fungus. Given the importance of gp43 monoclonal antibodies (Mabs) against this glycoprotein were obtained and further characterized. Based on the idiotypic network hypothesis, Jerne (1974) proposed that each antibody, when produced in response to an antigen, induces the several of other antibodies production against its variable region, which is unique. Anti-idiotypic antibodies that recognize the paratope containing the internal image of the antigen are called Ab2 &#946; and their therapeutic potential has been explored in different systems. Although the antibody molecule is structurally complex, we know that the Fab region, is responsible for antigen mimicking. Therefore, our research group has engineered a new molecule from the antibody Mab-anti-idiotypic Ab2 &#946; that mimics the antigen gp43 of P. brasiliensis, known as single chain variable fragment (scFv). Transfection of this molecule on dendritic cells (DCs) has shown promise in experimental PCM, since these transfection were effective scFv protein present in the cells of the lymph nodes, inducing lymphoproliferation, in addition to reducing fungal burden in the lung. Since the scFv molecule that has the region recognition and activation of T lymphocytes showed efficiency in therapy model in experimental PCM, the main objective of this study was to analyze the mechanisms by which transfected DCs activate the immune response in infected mice with the fungus, so that we can better understand the ability of these cells to modulate the immune response in experimental PCM. Thus, the capacity of transfected DCs with pMAC / PS-scFv to migrate to regional lymph nodes and induce a protective response with IgG production, as well as analyze the phenotype of these cells and cytokine production. Our therapy model with pMAC / PS-scFv was efficient, since we observed decrease of regulatory T cells in regional lymph nodes, as well as increased production of cytokines such as IFN-&#947; and IL-12. Furthermore, we observed increased IgG2b isotype, suggesting modulation of the immune response to a Th1 response, the protect model of experimental PCM.

Às condições crônicas podem causar alterações físicas, psíquicas e sociais progressivas requerendo em alguns casos mudanças permanentes no estilo de vida dos indivíduos. A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica, que exige tratamento prolongado, cuja maior prevalência encontra-se na América Latina com diversas áreas endêmicas no Brasil. Este estudo teve como objetivo caracterizar os clientes portadores de paracoccidioidomicose cutânea mucosa e identificar os motivos da não adesão ao seguimento clínico terapêutico. Foram consultados 74 prontuários de clientes adultos com diagnóstico de paracoccidioidomicose cutâneo mucosa atendidos e ou internados em um hospital escola terciário do interior paulista, no período de janeiro de 2000 a junho de 2006. O projeto foi encaminhado ao Comitê de Ética em Pesquisa do referido hospital. A maioria dos sujeitos é do sexo masculino (86,5%), com idade médica de 44,5 anos, 67,6% dos casos foram internados de uma a oito vezes, em 50,0% dos casos a internação se deu em decorrência de recidivas e 74,3% fizeram uso irregular das medicações e houve o abandono do tratamento por 54% dos clientes. O enfermeiro enquanto elemento essencial nos serviços de saúde pode propor estratégias individuais e coletivas para a assistência, visando estimular o cliente a lidar com as mudanças e consquentemente melhorar os níveis de adesão ao seguimento. / The chronical conditions can cause physical, emotional and social progressive alterations, requiring in some situations permanent changes in people life style. Paracoccidioidomycosis is a systemic mycosis, that requires a long-term treatment and its higher prevalence is in Latin America with different endemic areas in Brazil. This study aimed to characterize the clients carrie cuataneous mucosal paracoccidioidomycosis and to identify the reasons of non adhesion to clinical therapeutical follow-up. A total of 74 patient file were consulted of adults clients cared and/or interned is a teaching hospital of the interior of São Paulo State, in the period January 2000 through June 2006. The project was approved by the Ethical and Research Commitment of the hospital. Most of the participants was male (86,5%), with average age of 44,5 years old, 67,6% of the cases were interned from one to eight times and in 50,0% of the cases the hospitalization occurred due to recidives and 74,3% took the medicine in a irregular way, there was also the abandonment of the treatment in 54,0%. The nurse as the essencial member of health services can propose individual and collective strategies to the caring, in order to incentivate the client to deal with the changes and in consequence to improve the levels of adhesion to the follow-up.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica de natureza profunda e granulomatosa, que afeta preferencialmente o tecido pulmonar causada pelo Paracoccidioides brasiliensis, um fungo que exibe dimorfismo térmico. O P. brasiliensis interage com células apresentadoras de antígenos (APCs), alterando suas principais funções biológicas. Entre as APCs, os macrófagos são células que desempenham um papel importante na indução e regulação da resposta imune e/ou inflamatória. São células do sistema fagocítico mononuclear que podem discriminar entre o que é próprio do organismo e os patógenos, através da expressão de receptores de reconhecimento padrão (PRR) que reconhecem padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs), sendo células importantes no processo de fagocitose controlando o crescimento destes patógenos. Recentemente tem sido demonstrada a importância dos receptores Notch na regulação da atividade de macrófagos e do sistema imune. Os ligantes de Notch estão envolvidos nas locais inflamatórios de infecção devido ao aumento da expressão dos mesmos na superfície de células envolvidas neste processo. Considerando que a sinalização Notch pode estar envolvida na modulação da função de macrófagos, nós avaliamos se P. brasiliensis tem a capacidade de modular a ativação desta via e interferir na produção de citocinas pró-inflamatórias. Para isso, macrófagos J774, pré-estimulados com LPS ou não, foram interagidos com leveduras do fungo, seguido por análise de PCR em tempo real e citometria de fluxo, dosagem de citocinas e índice de fagocitose. Nossos dados revelaram que na presença do fungo existe aumento dos níveis de transcrição do receptor Notch 1 e diminuição da transcrição do ligante Delta 4 em macrófagos pré-estimulados com LPS. Entretanto, verificamos que o fungo sozinho não é capaz de induzir a transcrição de NF-&#954;B, nem na presença do LPS, mas quando os macrófagos são estimulados com LPS e sofrem inibição da via de Notch existe aumento dos níveis de transcritos após interação com o fungo, sugerindo que esse fator é ativado na ausência de Notch. Nesse contexto de inibição de Notch, evidenciamos que a fagocitose de leveduras do fungo por macrófagos tornou-se mais eficiente, visto que houve aumento do índice de fagocitose na ausência de Notch. Foi possível verificar que o fungo tem a capacidade de promover a produção de IL-6 via TLR-Notch, fazendo-nos supor que essa citocina seja importante para o estabelecimento da doença ao ser benéfica para o fungo e prejudicar o hospedeiro. E concomitantemente ao aumento de IL-6 existe diminuição da produção de TNF-&#945;. Com base nesses resultados, podemos sugerir que o P. brasiliensis utiliza a via de sinalização Notch como um mecanismo de escape. A interação entre as leveduras do fungo e os macrófagos promove a ativação dessa via, através do receptor Notch 1, induzindo maior produção de IL-6, citocina importante para o crescimento do fungo no hospedeiro, conjuntamente com a diminuição de TNF-&#945; prejudicando a atividade fungicida dos macrófagos. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis and deep granulomatous in nature, which affects mainly the lung tissue caused by Paracoccidioides brasiliensis, a fungus that exhibits thermal dimorphism. The P. brasiliensis interacts with antigen presenting cells (APCs), changing its main biological functions. Among the APCs, macrophages are cells that play an important role in the induction and regulation of the immune response and/or inflammatory response. They are cells of the mononuclear phagocytic system that can discriminate between what is characteristic of the organisms and pathogens, by expression of pattern recognition receptors (PRR) that recognizes the pathogen-associated molecular pattern (PAMPs), and are considered cells important in phagocytosis for controlling the growth of these pathogens. It has been recently demonstrated the importance of the Notch receptor in regulating the activity of macrophages and of the immune system. The ligands of Notch are involved in inflammatory sites of infection because there are increased expression of these ligands on cell surface involved in this process. Whereas the Notch signaling may be involved in modulating macrophage function, we evaluated whether P. brasiliensis has the ability to modulate the activation of this pathway and interfere with the production of pro-inflammatory cytokines. For this, J774 macrophages, pre-stimulated with LPS or not, are interacted with yeast fungus, followed by Real Time PCR analysis and flow cytometry, cytokine and phagocytosis index. Our data showed that the presence of the fungus exists increased levels of transcription of the Notch 1 receptor, and a decrease in ligand Delta 4 transcription on macrophages pre-stimulated with LPS. However, we found that the fungus itself is not able to induce transcription NF-&#954;B, even in the presence of LPS, but when macrophages are stimulated with LPS and suffer inhibition of the Notch signaling, exists increased levels of transcripts after interaction with the fungus, suggesting that this factor is activated in the absence of Notch. Within the context of inhibition of Notch, we found that phagocytosis of yeasts by macrophages become more efficient, since the increased rate of phagocytosis in the absence of Notch. It was verified that the fungus has the ability to promote the production of IL-6 via TLR-Notch, making us suppose that this cytokine is important for the establishment of the disease to be beneficial for the fungus and damage the host. And concurrently with increased IL-6 there is decreased production of TNF-&#945;. Based on these results, we suggest that P. brasiliensis uses the Notch signaling pathway as an escape mechanism. The interaction between the yeasts with macrophages promotes the activation of this pathway, by means of a Notch 1 receptor, inducing increased production of IL-6 cytokine important for the growth of fungus on host, together with a reduction of TNF-&#945;, contributing with a damaging fungicidal activity of macrophages.