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Efeito da laserterapia na viabilidade de macrófagos e sua produção de óxido nítrico frente a cimentos endodônticos /

Rabello, Ariele Patricia. January 2012 (has links)
Orientador: Fábio Luiz Camargo Villela Berbert / Banca: Flaviana Bombarda de Andrade / Banca: Juliane Maria Guerreiro Tanomaru / Resumo: O presente estudo avaliou o efeito da fototerapia com o laser de baixa intensidade (LBI) infra-vermelho próximo (InGaAsP: LASERTable; λ780 ± 3 ɳm, 25 mW) em linhagem celular de macrófagos de camundongos (RAW 264.7) expostos à diferentes cimentos endodônticos. Os grupos foram divididos de acordo com o material obturador e a presença ou não de irradiação, além dos grupos controle, sendo: G1: controle negativo - somente células, G2: células + laser, G3: controle positivo - LPS, G4: LPS + laser, G5: Endofill, G6: Endofill + laser, G7: AH Plus, G8: AH Plus + laser, G9: Sealapex e G10: Sealapex + laser. A viabilidade celular foi determinada por meio do teste de MTT e a produção de óxido nítrico (NO) pelo método de Griess. A irradiação com LBI influenciou significativamente a viabilidade de macrófagos expostos aos três materiais obturadores (p<0,001), sendo que o G8 foi o que resultou em maior número de células viáveis (p<0,001). Não houve interferência do LBI sobre a produção de óxido nítrico em nenhum dos grupos estudados. Concluiu-se que todos os cimentos endodônticos permitiram índices significativamente maiores de viabilidade celular quando da aplicação do LBI; o cimento AH Plus apresentou aumento significativamente maior de viabilidade dos macrófagos em relação aos demais cimentos quando da aplicação 18 do LBI , seguido do Sealapex e Endofill; o LBI não interferiu de forma significativa na produção de NO por parte dos macrófagos expostos a nenhum dos cimentos endodônticos estudados / Abstract: The present study evaluated the effect of phototherapy with low intensity laser (LLLT) near infrared (InGaAsP: LASERTable; λ780 ± 3 ɳm, 25 mW) in cell line mouse macrophages (RAW 264.7) exposed to different sealers. All the groups were divided according to the filling material with presence or absence of irradiation: G1: negative control - only cells, G2: laser + cells, G3: positive control - LPS, G4: LPS + laser , G5: Endofill, G6: Endofill + laser, G7: AH Plus, G8: AH Plus + laser, G9, G10 and Sealapex: Sealapex + laser. Cell viability was determined using the MTT assay and production of nitric oxide (NO) by the Griess method. The irradiation with LLLT significantly affect the viability of macrophages exposed to three filling materials (p <0.001), and the G8 was resulted in a greater number of viable cells (p <0.001). There was no interference from the LBI on nitric oxide production in any groups. It was concluded that all the sealers was significantly higher levels of cell viability when applying the LBI, and the AH Plus showed significantly greater viability of the macrophages relative to the other cements when applying the LBI, and followed by Sealapex Endofill; the LBI didn't interfere significantly in the production of NO by macrophages exposed to any sealers studied / Mestre
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Investigação das propriedades citotóxicas e imunológicas de complexos de paládio(II) in vitro utilizando o modelo experimental de Ehrlich /

Rocha, Michelle Corrêa da. January 2007 (has links)
Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Denise Fecchio / Banca: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Resumo: O câncer destaca-se pela alta incidência e mortalidade. O tratamento do câncer compreende cada vez mais a quimioterapia combinada, ou seja, substâncias antitumorais agindo conjuntamente com as células do sistema imune, potencializando-as ou apenas mantendo-as viáveis para exercerem sua função. Dentre os tipos celulares que constituem o sistema imunológico, os macrófagos são apontados como os principais elementos do organismo de combate aos tumores. Os macrófagos ativados agem liberando produtos tais como radicais de oxigênio (H2O2) e nitrogênio (NO), interleucina-1ß (IL-1ß) e fator de necrose tumoral (TNF-a), que são prejudiciais às células tumorais dependendo da concentração, além de sua ação indireta através da secreção de interferon-gama (IFN-.). Complexos de paládio(II) são investigados há décadas, destacando-se por sua potencialidade como agente antitumoral. Neste trabalho avaliou-se a ação dos compostos [Pd(dmba)(X)(dppp)] (X= SCN, NCO, N3 ou Cl) sobre as células tumorais de Ehrlich e macrófagos in vitro, utilizando como padrão a cis-platina (cis-Pt). Para tanto, foram realizados ensaios para determinação do índice de citotoxicidade mediano, o IC50, para cada composto pelos períodos de 24 e 48h e com base em tais concentrações investigadas para os macrófagos verificou-se a produção e/ou inibição de NO e H2O2, além das citocinas TNF-a, IFN-. e IL-1 bem como a atividade citotóxica/citolítica. Os compostos demonstraram ser agentes promissores por seus efeitos sobre as células tumorais e imunes, muitas vezes de forma igual ou superior à cis-Pt, droga de uso corrente na quimioterapia do câncer. / Abstract: The cancer is a disease with high incidence and mortality. The cancer treatment involves the combinated chemotherapy wich one involves antitumour substances acting along with the immune cells, stimulating or only keeping them able to act in the immune response. Between the cell types that belong to the immunological system, the macrophages are considered the main elements of the body that can act against tumours. The activated macrophages act releasing substances like oxygen (H2O2) and nitrogen (NO) radicals, interleukin-1 (IL-1) and tumour necrosis factor alpha (TNF-á), wich are not beneficial to the tumour cells in some concentrations, besides its indirect action towards interferon-gama (IFN-ã) release. Palladium(II) complexes are employed in many studies to verify its antitumour properties. For example we can describe the four following compounds: [Pd(dmba)(X)(dppp)], X= SCN, NCO, N3 or Cl. This work had as goal the evaluation of the action of such compounds towards Ehrlich tumour cells, macrophages and lymphocytes in vitro, employing cis-platin (cis-Pt) as standard. The following parameters were evaluated: the cytotoxic index (IC50) of each compound after 24 and 48h incubation for Ehrlich tumour cells, macrophages and lymphocytes; the immunological behaviour of the compounds in the concentrations previously determined such as NO and H2O2 production or inhibition, besides the cytokines TNF-á, IFN-ã and IL-1 as well as the cytotoxic/cytolitic activity. The compounds presented a good behaviour, based on their efects towads tumour and immune cells, many times like or even better than cis-Pt, standard drug in cancer chemotherapy. / Mestre
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Atividade imunomoduladora de Lactobacillus rhamnosus em macrófagos de camundongos estimulados com Lipopolisacarídeo, Ácido Lipoteicóico e manana /

Oliveira, Felipe Eduardo de. January 2013 (has links)
Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Co-orientador: Mariella Vieira Pereira Leão / Banca: Antônio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Célia Regina Gonçalves e Silva / Resumo: Os probióticos são capazes de equilibrar a microbiota residente e modular a resposta imune aos diferentes estímulos microbianos, entretanto, seus efeitos imunomoduladores ainda não estão claramente elucidados. O presente estudo avaliou o efeito imunomodulador de Lactobacillus rhamnosus ou seus produtos sobre macrófagos (RAW 264.7) ativados por lipopolissacarídeo (LPS), ácido lipoteicóico (LTA) ou manana, pela análise da produção de citocinas pró e anti-inflamatórias (TNF-α, IL-1 β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12). Foi utilizada a cepa padrão de L. rhamnosus ATCC 7469, semeada em Ágar Man-Rogosa-Shape (MRS) e cultivada a 37ºC/5% CO2 por 24 h. Foram empregadas três diferentes preparações de probióticos: 1) L. rhamnosus vivo (LV) na concentração de 2,5 x 107 células/mL; 2) L. rhamnosus morto (LM) obtido por autoclavagem da preparação anterior a 121°C/15 min; 3) Sobrenadante da suspensão de L. rhamnosus (SL), resultante da centrifugação da suspensão LM a 8300 xg/10min. Foram utilizados macrófagos de camundongos (RAW 264.7), cultivados em meio DMEM completo (suplementado com 10% de soro fetal bovino) foram distribuídos em microplacas de poliestireno na concentração de 5 x 105 células viáveis/poço/mL de meio DMEM completo. Após 24 h de incubação (37°C/5% CO2) para adesão celular, as placas foram lavadas com PBS estéril e apirogênico e as células foram estimuladas com LPS de Escherichia coli, LTA de Streptococcus faecalis ou manana de Saccharomyces cerevisiae na concentração de 1 μg/mL, na presença ou ausência das diferentes preparações dos probióticos por 2,5h. Em seguida as placas foram lavadas com PBS, tiveram seu meio trocado e foram incubadas por 16h (37°C/5% CO2). Os sobrenadantes das culturas foram coletados para a detecção e quantificação das citocinas (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10 e IL-12) pelo método imunoenzimático ELISA. Os .... / Abstract: Probiotics are able to balance the resident microbiota and modulate the immune response to different microbial stimuli, however its immunomodulatory effects are not clearly understood. This study intends to evaluate the immunomodulatory effect of Lactobacillus rhamnosus or its products on macrophages (RAW 264.7) activated by lipopolysaccharide (LPS), lipoteicoic acid (LTA) or mannan through the analysis of the production of pro and anti-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1 β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12). It was used the standard strain of L. rhamnosus ATCC 7469, seeded on Agar Man-Rogosa-Shape (MRS) and grown at 37°C/5% CO2 for 24 h. Three different preparations of probiotics were prepared: 1) L. rhamnosus solution at a concentration of 5 x 107 cells/mL; 2) Heat-killed L. rhamnosus, obtained by autoclaving previous preparation at 121°C/15 min, 3) Supernatant of L. rhamnosus suspension, obtained through centrifugation of the suspension with heat-killed probiotic at 8300 xg/10 min. Mouse macrophages (RAW 264.7) grown in complete DMEM medium (supplemented with 10% fetal bovine serum) were distributed in polystyrene microplates at a concentration of 1 x 106 viable cells/well/ml complete DMEM medium. After 24 h incubation (37°C/5% CO2) for cell adhesion, plates were washed with sterile-apirogenic physiologic saline and cells were stimulated with Escherichia coli LPS, Enterococcus faecalis LTA or Saccharomyces cerevisiae mannan at a concentration of 1 μg/mL, in the presence or absence of the different preparations of probiotics at the same time for 2,5 h. Then the plates were washed, had its medium traded and were incubated for 16 h (37°C/5% CO2). Culture supernatants were 14 collected for the detection and quantification of cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10 and IL-12) by ELISA immunoenzymatic method. The results were statistically analyzed by ANOVA and Tukey tests (p≤0,05). With ... / Mestre
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Caracterização da ação modulatória de citocinas inflamatórias pelo óleo de Melaleuca alternifolia e seus componentes (terpinen-4ol e alfa-terpineol) em macrófagos humanos ativados lipopolissacarídeos de Porphyromonas gingivalis e Escherichia coli /

Nogueira, Marianne Nicole Marques. January 2013 (has links)
Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Coorientador: Carlos Rossa Junior / Banca: Flavia Sammartino Mariano Rodrigues / Banca: Juliana Rico Pires / Banca: Raquel Mantuaneli Scarel Caminaga / Banca: Joni Augusto Cirelli / Resumo: O óleo de Melaleuca alternifolia (TTO) tem propriedades antimicrobianas e somado a isso, sugere-se que apresente características anti-inflamatórias. Este estudo investigou o potencial do TTO e seus componentes (terpinen-4-ol e alfa-terpineol) em modular citocinas e os mecanismos intracelulares participantes desta ação. Células monocíticas (U937) foram diferenciados em macrófagos com 40ng/mL de 12-miristato 13-acetato de forbol. A citotoxicidade dos óleos foi determinada com o ensaio de redução de Metil-tetrazolium (MTT). A habilidade em modular a produção das citocinas após o estímulo com LPS de Porphyromonas gingivalis (agonista de TLR2) e Escherichia coli (agonista de TLR4), foi estabelecida por meio de ensaios ELISA. Os efeitos dos compostos testados, na ativação de vias de sinalização intracelular, foram avaliados por western blot. As concentrações selecionadas pelo MTT foram: 0,015% e 0,004% para o TTO, 0,059% e 0,0073% para o terpinen-4-ol e 0,0064% e 0,0007% para alfa-terpineol. A influência do TTO na produção de citocinas foi mais marcante após estímulo de TLR4, com diminuição de IL-1β, IL-6 e IL-10. O terpinen-4-ol reduziu a produção de INF-γ, IL-1β, IL-6, IL-4, IL-10 e IL-17 após ativação tanto TLR4 quanto TLR2. O alfa-terpienol atua após ativação de TLR2 e 4 inibindo a produção de IL-1β, IL-6 e IL-10. Nenhuma das vias analisadas (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) sofreram interferência dos óleos. O TTO tem ação 8 modulatória inibindo produção de citocinas inflamatórias e o terpinen-4-ol é o seu maior componente ativo, entretanto este mecanismo não ocorre via inibição de NF-kB, ERK e p38 MAP-Kinase / Abstract: The oil of Melaleuca alternifolia (TTO) has antimicrobial properties, coupled with this, it is suggested that it also has antiinflammatory characteristics. This study investigated the potential of TTO and its components (terpinen-4-ol and alpha-terpineol) and cytokines in modulating the intracellular mechanisms that participate in this action. Monocytic cells (U937) were differentiated into macrophages with 40ng/mL 12-myristate 13-acetate phorbol. The olil cytotoxicity was determined with the reduction assay Methyl-tetrazolium (MTT). The ability to modulate cytokine production after stimulation with LPS of Porphyromonasgingivalis (TLR2 agonist) and Escherichia coli (TLR4 agonist), was established by ELISA assays. The effects of the tested compounds, the activation of intracellular signaling pathways were evaluated by western blot. The concentrations selected by the MTT were 0.015% and 0.004% for the TTO, 0.059% and 0.0073% to terpinen-4-ol and 0.0064% and 0.0007% for alpha-terpineol. The influence of TTO in cytokine production was more marked after TLR4 stimulation, with decreased IL-1β, IL-6 and IL-10. The terpinen-4-ol reduced the production of INF-γ, IL-1β, IL-6, IL-4, IL-10 and IL-17 activation after both TLR4 as TLR2. The alpha-terpienol acts upon activation of TLR2 and four inhibiting the production of IL-1β, IL-6 and IL-10. None of the analyzed pathways (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) suffered interference oils. The TTO has modulatory action by 10 inhibiting the production of inflammatory cytokines and terpinen-4-ol is your greatest asset component however, this mechanism does not occur via inhibition of NF-kB, ERK and p38 MAP-kinase / Doutor
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Participación de los sistemas de secreción tipo VI codificados en el genoma de Salmonella enterica serovar Dublin en la interacción con macrófagos murinos

Pinto Anwandter, Bernardo Ismael 10 1900 (has links)
Magíster en Bioquímica área de Especialización en Bioquímica de Proteínas y Biotecnología / Memoria para optar al Título de Bioquímico / El género Salmonella agrupa a más de 2500 serovares, muchos de los cuales son patógenos humanos y animales. El serovar Dublin afecta principalmente al ganado bovino pudiendo llegar a infectar a seres humanos por el consumo de alimentos contaminados. Salmonella presenta diversos mecanismos que le permiten ingresar y colonizar sistémicamente a sus hospederos. Algunos de estos mecanismos se relacionan con la capacidad de invadir el epitelio intestinal y sobrevivir al interior de las células del sistema inmune del hospedero, principalmente macrófagos. En ambos procesos los sistemas de secreción de proteínas juegan un papel fundamental. El Sistema de Secreción Tipo VI (T6SS) es el sistema de secreción más recientemente descrito en bacterias Gram negativo. Este sistema se encuentra codificado en el genoma de cerca del 25% de las bacterias secuenciadas y su importancia en las relaciones interbacterianas y en la relación bacteria-hospedero lo han convertido en un blanco de estudio de gran interés. Previamente, hemos identificado la presencia de 5 T6SS filogenéticamente distintos y distribuidos diferencialmente en representantes del género Salmonella. S. Dublin posee dos T6SS codificados en las islas de patogenicidad SPI-6 y SPI-19. El objetivo de este proyecto fue determinar si los T6SS codificados en SPI-6 y SPI-19 se expresan al interior de macrófagos murinos y si cumplen un papel en los procesos de invasión y supervivencia intracelular de S. Dublin en estas células. Para esto, se evaluó la expresión intracelular y translocación de un componente fundamental del sistema (VgrG) y se compararon mutantes de los T6SS de SPI-6 y SPI-19 respecto a la cepa silvestre en su capacidad de invadir y sobrevivir en macrófagos murinos en cultivo in vitro. Para evaluar la expresión del gen vgrG y de la proteína VgrG codificada en cada uno de los T6SS presentes en el genoma de S. Dublin al interior de macrófagos, se construyeron en el cromosoma de la bacteria fusiones transcripcionales y traduccionales a la proteína fluorescente verde y se infectaron macrófagos RAW 264.7 con las cepas que contenían estas fusiones. Mediante microscopía de epifluorescencia se observó la expresión de las fusiones transcripcionales y traduccionales del componente VgrG de ambos T6SS desde tiempos tempranos de infección. Para determinar la translocación de VgrG al citoplasma de macrófagos infectados in vitro, se utilizaron fusiones traduccionales de VgrGSPI-6 y VgrGSPI-19 al reportero TEM-1 construidas en el plasmidio pFlagTEM. La translocación de cada proteína de fusión se determinó mediante un ensayo de fluorescencia acoplado a FRET. Para ello, se infectaron macrófagos RAW 264.7 con las cepas que contenían estas fusiones y posteriormente se analizaron los macrófagos infectados mediante microscopía de epifluorescencia. Se observó la translocación de VgrGSPI-19 a tiempos tempranos de infección y la translocación de VgrGSPI-6 a tiempos tardíos de infección. Sin embargo, la baja frecuencia de los eventos de translocación observados hace necesario realizar la comprobación del fenómeno mediante metodologías más sensibles. Para determinar si los T6SS codificados en el genoma de S. Dublin participan en los procesos de internalización y supervivencia de la bacteria al interior de macrófagos murinos, se realizaron ensayos de protección a gentamicina. En ellos se comparó la capacidad de ingresar y sobrevivir al interior de macrófagos RAW 264.7 de la cepa silvestre y cepas mutantes de los T6SS o del componente ClpV. Los resultados obtenidos en este trabajo demostraron que ninguno de los T6SS contribuye a la invasión y supervivencia intracelular de S. Dublin en macrófagos murinos. En conclusión, los T6SS codificados en las islas de patogenicidad SPI-6 y SPI-19 de S. Dublin se expresan al interior de macrófagos murinos, pero no participan en la capacidad de la bacteria para invadir y sobrevivir al interior de éstos. / The Salmonella genus includes over 2500 serovars, many of which are human and animal pathogens. Although the serovar Dublin affects mainly livestock, it constitutes a threat to humans who consume contaminated foods. Salmonella has several mechanisms to colonize its hosts systemically. These mechanisms allow it to invade the intestinal epithelium and survive within immune cells, mainly macrophages. Of note, protein secretion systems play a central role in these processes. The Type VI Secretion System (T6SS) is the most recently described protein secretion system in Gram-negative bacteria. This secretion system is present in about 25% of all bacterial genomes and its putative role in inter-bacteria and bacteria-host relationships makes it an important target for scientific research. Previously we have identified the presence of 5 phylogenetically diverse T6SS distributed differentially in the Salmonella genus. S. Dublin carries two of these systems codified in the pathogenicity islands SPI-6 and SPI-19. The aim of this thesis was to determine if the T6SSs codified in SPI-6 and SPI-19 are expressed in and translocated to the cytosol of murine macrophages, and if they play a role in the internalization and survival of S. Dublin inside these cells. To achieve this, intracellular expression and translocation of a core component of T6SSs (VgrG) was analyzed and T6SS mutants were compared with the parental strain in their ability to invade and survive within murine macrophages in vitro. To asses the expression of the vgrG gene and VgrG protein codified in each S. Dublin T6SS within murine macrophages, transcriptional and translational fusions to the green fluorescent protein were constructed and macrophages RAW 264.7 were infected using the strains bearing these fusions. Using epifluorescence microscopy, expression was observed for the transcriptional and translational fusions of the VgrG component of both T6SSs. To determine the translocation of VgrG to the cytosol of infected macrophages in vitro, translational fusions of VgrGSPI-6 and VgrGSPI-19 to the TEM-1 reporter were constructed in plasmid pFlagTEM. Translocation of each protein was determined using a FRET-coupled fluorescence assay. To achieve this, RAW 264.7 macrophages were infected using strains bearing these fusions and subsequent analysis of the infected macrophages was carried out by epifluorescence microscopy. VgrGSPI-19 translocation was observed shortly after infection and VgrGSPI-6 translocation was observed several hours after infection. Noteworthy, due to the low frequency of the translocation events observed it is necessary to confirm this observation by means of more sensitive methods. To determine if the T6SSs codified in the S. Dublin genome play a role in the internalization and survival processes of the bacteria within murine macrophages, gentamicin protection assays where conducted. In these experiments, the ability to enter and survive in RAW 264.7 macrophages in vitro was compared between T6SS and ClpV mutant strains and the parental strain. The results of this work show that none of the T6SSs contribute to the ability of S. Dublin to invade and survive in murine macrophages. In conclusion, the T6SS encoded in pathogenicity islands SPI-6 and SPI-19 of S. Dublin are expressed in murine macrophages, but these do not play a role in the invasion or intracellular survival of the bacteria in these cells. / Fondecyt
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Trypanosoma cruzi calreticulin expression in parasites infecting murine macrophages

González Zúñiga, Andrea Elizabeth 03 1900 (has links)
Doctor en Bioquímica / La calreticulina de Trypanosoma cruzi (TcCRT), una chaperona pleiotrópica de 47 kDa, se transloca desde el retículo endoplásmico (RE) a la zona de emergencia flagelar, donde actúa como un factor de virulencia principal, además de sus roles funcionales intracelulares. La TcCRT extracelular media la infectividad del parásito en virtud de su capacidad para interactuar con los componentes del complemento C1 y MBL. La inhibición de las vías del complemento clásica y de las lectinas también son consecuencias de estas interacciones. No se ha reportado respecto a la localización y funciones de TcCRT una vez que el parásito se encuentra en el interior de la célula hospedera. Aquí proponemos que, durante la infección por T. cruzi, y mediante el uso de anticuerpos específicos, es posible detectar TcCRT, una vez que el parásito se encuentra el interior de la célula hospedera de mamífero. También proponemos que la expresión de TcCRT en la célula hospedera se correlaciona inversamente con la expresión de antígenos MHC-I. Al abordar experimentalmente estos temas queremos contribuir al conocimiento de los términos moleculares que regulan la interacción células hospederas-T.cruzi, centrándose en el papel de TcCRT en particular, dentro de la célula hospedera infectada. Para alcanzar este objetivo apuntamos a la validación de la especificidad de los anticuerpos para ser utilizados como sondas detectoras de TcCRT, con ello identificar TcCRT interior de los macrófagos murinos infectados y, por último, evaluar las variaciones en la superficie de las moléculas de MHC- I en los macrófagos murinos infectados. Por lo tanto, específica y topográficamente se monitoreó la presencia de TcCRT en los parásitos que infectan a una línea celular de macrófagos murinos, en comparación con tripomastigotes libres y epimastigotes no infecciosos. Para ello, se probaron tres anticuerpos diferentes como sondas detectoras para procedimientos inmunocitoquímicos. Anticuerpos anti-TcCRT policlonales y monoclonales se validaron como sondas detectoras, ya que mostraron poca o nula reactividad cruzada. En inmunocitoquímica, el anticuerpo policlonal de conejo, y los anticuerpos monoclonales murinos anti-TcCRT, detectan TcCRT con diferentes sensibilidades y especificidades, cuando son revelados con inmunosondas conjugadas con oro coloidal, seguido por microscopía electrónica de transmisión. Con los anticuerpos policlonales de conejo, se observaron partículas de CRT, tanto en parásitos libres como en aquellos que se encuentran dentro del interior de células hospederas infectadas, principalmente en el núcleo y kinetoplasto del parásito. Con un anticuerpo monoclonal murino anti-TcCRT, y el uso de partículas de oro de tamaño más grande, se obtuvo una mejora drástica en la sensibilidad y especificidad para la detección TcCRT. Se detectaron moléculas de TcCRT principalmente en el kinetoplasto del tripomastigote. Proponemos que este organelo puede representar una escala para TcCRT, generada en el RE, previo a su translocación a la zona de emergencia flagelar. Esta movilización puede estar influenciada por las nuevas condiciones ambientales con las que el parásito se encuentra en el interior de la célula hospedera. Queda por determinar las consecuencias funcionales de la presencia acumulada de TcCRT en el kinetoplasto. La posibilidad de que TcCRT regule la transcripción en el ADN del kinetoplasto, según lo propuesto anteriormente para la CRT de mamífero en el núcleo, podría ser considerada, aunque la organización de ADN en el kinetoplasto es diferente. Además, TcCRT podría regular vías de transducción de señales dependientes de Ca+2. Finalmente, por mecanismos desconocidos, la infección por T. cruzi disminuye el número de células positivas MHC de clase I, tan temprano como 2 horas después de la infección. Queda por determinar si TcCRT accede al RE de la célula huésped e interfiere en el proceso de plegamiento de moléculas MHC clase I / Trypanosoma cruzi calreticulin (TcCRT), a 47 kDa pleiotropic chaperone, besides its intracellular functional roles, is translocated from the endoplasmic reticulum (ER) to the area of flagellum emergence where it acts as a main virulence factor. Extracellular TcCRT mediates parasite infectivity by virtue of its capacity to interact with complement components C1 and MBL. Both inhibitions of the classical and lectin complement pathways are also consequences of these interactions. The localization and functions of TcCRT once the parasite is inside the host cell has not been reported. Herein we hypothesize that, during T. cruzi infection, and using specific antibodies, it is possible to detect TcCRT, once the parasite is inside the mammalian host cell. We also propose that TcCRT expression in the host cell inversely correlates with the MHC-I antigen expression. By experimentally addressing these issues we expect to contribute to the knowledge of the molecular terms governing the T. cruzi-host cell interplay, focusing on the role of TcCRT in particular inside the infected host cell. To reach this goal we will aim at validating the specificity of the antibodies to be used as TcCRT detector probes to identify TcCRT inside infected murine macrophages and, finally, to evaluate variations in surface MHC-I molecules on infected murine macrophages. Thus, we specifically and topographically monitor the TcCRT presence in parasites infecting a murine macrophage cell line, as compared to free trypomastigotes and non-infective epimastigotes. For that purpose, three different antibodies were tested as detector probes for immunocytochemical procedures. Polyclonal and monoclonal anti-TcCRT antibodies were validated as detector probes, as they showed minimal or null cross reactivity. In immunocytochemistry, polyclonal rabbit, and monoclonal murine anti- TcCRT antibodies, detected TcCRT with different sensitivities and specificities, when revealed with immune probes conjugated to colloidal gold, followed by transmission electron microscopy. With the rabbit polyclonal antibodies, CRT particles were observed, both in free parasites and infected host cells, mainly in the parasite nucleus and kinetoplast. With a murine monoclonal anti-TcCRT antibody, and using larger size gold particles, a drastic improvement in sensitivity and specificity for TcCRT detection, was obtained. TcCRT molecules were detected mainly in the trypomastigotes kinetoplast. We propose that t his organelle may represent a stopover for TcCRT, generated in the ER, previous its translocation to the area of flagellum emergence. This mobilization may be influenced by the new environmental conditions that the parasite meets inside the host cell. It remains to be determined the functional consequences of TcCRT cumulative presence in the kinetoplast. The possibility that TcCRT regulates transcription in kinetoplast DNA, as previously proposed for mammalian CRT in the nucleus, could be considered, although the DNA organization in the kinetoplast is different. Also, TcCRT may regulate Ca+2-dependent transduction signalling pathways. Finally, by unknown mechanisms, T. cruzi infection seems to decrease the number of MHC class I positive cells, as early as 2h post-infection. It remains to be determined whether TcCRT accesses to the host cell ER and interferes in the MHC class I molecule-folding process / Conicyt Fondecyt
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Avaliação da capacidade fagocitária, produção de peróxido de hidrogênio e fator de necrose tumoral por monócitos de pacientes com leishmaniose tegumentar americana

Papa, Marianna Carminatti Martins January 2007 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by Kathryn Cardim Araujo (kathryn.cardim@gmail.com) on 2009-12-10T16:07:08Z No. of bitstreams: 1 2007_MariannaCarminattiMartinsPapa.PDF: 316803 bytes, checksum: d82df5e83e6990e312f5a5e758fafa82 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-01-08T00:02:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_MariannaCarminattiMartinsPapa.PDF: 316803 bytes, checksum: d82df5e83e6990e312f5a5e758fafa82 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-08T00:02:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_MariannaCarminattiMartinsPapa.PDF: 316803 bytes, checksum: d82df5e83e6990e312f5a5e758fafa82 (MD5) Previous issue date: 2007 / A leishmaniose é endêmica em 88 paises e é estimado que mais de 12 milhões de indivíduos são infectados pelas várias espécies do parasita, ocorrendo aproximadamente 1,5 a 2 milhões de casos clínicos por ano da doença no mundo. Os macrófagos são importantes na defesa contra a doença, pela fagocitose e os mecanismos microbicidas intracelulares. Este trabalho teve como objetivo avaliar a capacidade fagocitária, a capacidade de produção de peróxido de hidrogênio e a capacidade de produção de fator de necrose tumoral- pelos monócitos de indivíduos com leishmaniose tegumentar americana. A capacidade fagocitária foi avaliada em 18 indivíduos com leishmaniose e 15 indivíduos controles normais utilizando-se Saccharomyces cerevisiae, pelos receptores que reconhecem padrões moleculares de patógenos e pelos receptores que reconhecem opsoninas. A produção de peróxido de hidrogênio foi avaliada pela técnica de oxidação do vermelho fenol na presença de peroxidase, e a avaliação da produção de fator de necrose tumoral- foi realizada pela técnica de ELISA no sobrenadante das culturas dos monócitos. A capacidade fagocitária dos monócitos dos indivíduos com leishmaniose tegumentar americana foi menor do que a dos indivíduos normais, tanto pelos receptores que reconhecem padrões moleculares de patógenos quanto pelos receptores para opsoninas. A menor capacidade fagocitária deveu-se ao menor envolvimento de macrófagos na fagocitose, não havendo alteração no número médio de leveduras fagocitadas, para a fagocitose testada por ambos os tipos de receptores. A produção de peróxido de hidrogênio pelos monócitos dos indivíduos com LTA foi maior do que a do grupo controle, tanto basal quanto após estímulo com LPS e PMA. A produção de fator de necrose tumoral- também foi maior nos indivíduos com leishmaniose. Nossos dados mostraram pela primeira vez que a capacidade fagocitária dos monócitos de indivíduos com LTA é menor do que a dos indivíduos normais, embora a produção de substâncias microbicidas, como radicais de oxigênio e FNT- foi maior do que os valores dos indivíduos normais. É possível que estas alterações das funções dos fagócitos tenham repercussões tanto nos mecanismos de defesa antiparasitária quanto nos mecanismos de imunopatogenia da doença. ____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leishmaniasis threatens 350 million people in 88 countries and remains a serious public health problem in several parts of the world with more than 12 million infected individuals by some species of the parasite, and about 1,5 million clinical cases by year. Macrophages are important in defense against parasite through phagocytosis and microbicidal mechanisms. This work aimed to evaluate the phagocytosis, hydrogen peroxide and TNF- production by monocytes from leishmaniasis individuals. Phagocytosis was assessed in 18 infected individuals and 15 normal control using Saccharomyces cerevisiae, through pattern recognition receptors and opsonin receptors. The hydrogen peroxide production was assessed by the phenol red oxidation technique. Tumor necrosis factor-a was assessed in the supernatant of monocyte cultures by an immunoassay test. Phagocytosis was decreased in leishmaniasis individuals, through pattern recognition receptors and opsonin receptors. However, hydrogen peroxide and TNF-a production were increased in leishmaniasis individuals. Our data showed for the first time that phagocytic index of monocytes were decreased in leishmaniasis individuals. However, TNF-a production and the microbicidal hydrogen peroxide were increased in these individuals. These data suggest these alterations in monocytes might play a role both in defense against parasites as in pathogenesis of the disease.
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Forma mucosa da Leishmaniose Tegumentar Americana : estudo histopatológico e imuno-histoquímico de casos do Hospital Universitário de Brasília

Peixoto, Marco Aurélio da Silva 05 February 2009 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2009. / Submitted by Thaíza da Silva Santos (thaiza28@hotmail.com) on 2010-03-07T17:17:10Z No. of bitstreams: 1 2009_MarcoAurelioSilvaPeixoto.pdf: 2637387 bytes, checksum: 1a76f8f7944669c1b032e4ab59d38fed (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2010-03-11T13:37:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_MarcoAurelioSilvaPeixoto.pdf: 2637387 bytes, checksum: 1a76f8f7944669c1b032e4ab59d38fed (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-11T13:37:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_MarcoAurelioSilvaPeixoto.pdf: 2637387 bytes, checksum: 1a76f8f7944669c1b032e4ab59d38fed (MD5) Previous issue date: 2009-02-05 / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença parasitária endêmica, principalmente na região Centro-Oeste. A Leishmania é um parasita que através de seus antígenos secretados e não secretados desencadeiam, respectivamente, uma resposta imune predominantemente celular (inata e adquirida) e em menor proporção humoral. Na resposta inata participam o sistema complemento, polimorfonucleares, macrófagos e células natural killer numa resposta inicial. Desta resposta inicial, há produção de citocinas (IL-12 e INF-γ e TNF-α) que ativam linfócitos T CD4+ e T CD8+ para resposta imune celular adquirida. A IL-12 diferencia os linfócitos T CD4 numa resposta Th1, com produção de INF-γ, ativação de macrófagos e resolução da doença. Enquanto, a IL-4 tem efeito reverso direcionando para uma resposta Th2 com diminuição da ativação de macrófagos, prevenindo o dano tecidual e permitindo a persistência do parasita. Foram descritos casos de pacientes com a forma mucosa da LTA do Hospital Universitário de Brasília, analisando dados epidemiológicos, clínico-laboratoriais e correlacionando com os aspectos histopatológicos e imuno-histoquímico (CD45ro, CD4, CD8, CD20, CD15, CD68 e Bcl-2). Perfil mais freqüente dos pacientes: sexo masculino, com média de idade de 50 anos, da região Centro-Oeste, com queixa de obstrução nasal e lesão de mucosa nasal infiltrada com ulceração e perfuração de septo ao exame otorrinolaringológico. A maioria com exames laboratoriais (IFA, inoculação em hamster, cultura, esfregaço e intradermorreação de Montenegro) compatíveis com a doença, sendo que em 44,44% dos casos foi possível a identificação da Leishmania por algum método auxiliar. Na histopatologia, de maneira geral, encontrou-se um infiltrado inflamatório linfohistioplasmocitário, às vezes acompanhado de uma reação granulomatosa com ou sem necrose. As classes histopatológicas encontradas foram: REC (reação exsudativa celular), REN (reação exsudativa necrótica), RENG (reação exsudativa necrótico-granulomatosa) e REG (reação exsudativa granulomatosa), sendo a primeira a mais freqüente (66,67%). Essas classes são estatisticamente significantes (p<0,05) diferentes quando comparadas entre si em relação à quantidade de células positivas na imuno-histoquímica, exceto entre as classes REG e REN (p>0,05). Esse estudo atestou a aplicabilidade e a praticidade do programa UnBVision na análise quantitativa das células nas reações imuno-histoquímicas. Na imuno-histoquímica, os linfócitos T predominaram em relação aos linfócitos B, comprovando que a doença tem reação imune mais celular do que humoral, sendo que dentre os linfócitos T, prevaleceu os linfócitos T CD4+ em relação aos linfócitos T CD8+, exceto em único exemplo de caso REG. Houve expressão considerável de Bcl- 2 no infiltrado inflamatório. Grupos com contato prévio com o antimonial pentavalente e com presença de granulomas ou de Leishmania ao método histopatológico não tiveram significância estatística (p>0,05) para explicar a diferença de número de células positivas para todos os marcadores aplicados no estudo. Em estudos complementares, o uso da imuno-histoquímica para identificar as citocinas e marcadores pró e antiapoptóticos podem contribuir para melhores esclarecimentos da imunopatologia da doença. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The American Integumentary Leishmaniasis (AIL) is a parasitic endemic disease, mainly in the Center-West region. Leishmania is a parasite that through its secreted and not secreted antigens trigger, respectively, a predominantly cellular immune response (innate and acquired) and to a lesser extent humoral. In the innate response, complement system, neutrophils, macrophages and natural killer cells work in an initial response. In this initial response, there is production of cytokines (IL-12, INF-γ and TNF-α) that activate T CD4+ and T CD8+ cells for acquired cellular immune response. The IL-12 action differentiates CD4 T cell to Th1 response and production of INF-γ, activation of macrophages and resolution of the disease. While the IL-4 has reverse effect directing to Th2 response with decreased activation of macrophages, this reaction prevents tissue damage and allows the persistence of the parasite. In this study, we have described patients with the mucosal form of AIL, they were treated in the University Hospital of Brasilia, analyzing epidemiological, clinical and laboratory data and correlating with the histopathologic features and the following immunohistochemical antibodies: CD45RO, CD4, CD8, CD20, CD15, CD68 and Bcl-2. Most common profile of patients: male, mean age 50 years, from Center-West region, with complaint of nasal obstruction and injury of nasal mucosa infiltrated with septum ulceration and perforation detected in the otorhinolaryngologic examination. Most of them with laboratory tests (indirect immunofluorescence, inoculation in hamster, smear, culture and Montenegro Skin Test) compatible with the disease, and in 44.44% of the cases it was possible the identification of Leishmania by some auxiliary method. In histopathology, in general, there was an inflammatory infiltrate lynphohistioplasmocitary sometimes accompanied by a granulomatous reaction with or without necrosis. The histopathological grades found were: ECR (exudative cellular reaction), ENR (exudative necrotic reaction), NEGR (necrotic-exudative granulomatous reaction) and EGR (exudative granulomatous reaction), the first one was the most frequent (66.67%) These classes are statistically significant (p <0.05) different when compared to each other with the amount of positive cells in immunohistochemistry, except between ENR and EGR classes (p> 0.05). This study attested the applicability and practicality of the program UnBVision in quantitative analysis of cells in immunohistochemical reactions. In immunohistochemistry, the T cells were predominant on B cells, confirming that the disease as more cellular immune response than humoral, and in T cells, prevailed the CD4+ T on CD8+ T cells, except in only one instance case EGR. There was considerable expression of Bcl-2 in inflammatory infiltrate. In groups with previous contact with pentavalent antimony and presence of granulomas or Leishmania the histopathologic method were not statistically significant (p> 0.05) to explain the difference in the number of positive cells for all markers used in the study. In further studies, the use of immunohistochemistry to identify the cytokines and markers pro and antiapoptosis can contribute to better explanations of the immunopathology of disease.
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Participação da proteína Beta-2 integrina no curso da infecção experimental induzida pelo Paracoccidioides brasiliensis

Reis, Janayna Nunes dos January 2009 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-24T18:02:11Z No. of bitstreams: 1 2009_JanaynaNunesReis.pdf: 1420472 bytes, checksum: 7304e910ea878ca163555f1fe65a4206 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-06T19:31:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_JanaynaNunesReis.pdf: 1420472 bytes, checksum: 7304e910ea878ca163555f1fe65a4206 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-06T19:31:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_JanaynaNunesReis.pdf: 1420472 bytes, checksum: 7304e910ea878ca163555f1fe65a4206 (MD5) Previous issue date: 2009 / Paracoccidioides brasiliensis é um fungo intracelular facultativo causador da Paracoccidioidomicose (PCM), doença crônica e granulomatosa, frequente na América Latina. O principal mecanismo de defesa do hospedeiro contra a PCM é a imunidade celular mediada principalmente por macrófagos ativados por IFN-γ. A interação inicial entre macrófago-fungo é mediada pelas interações entre proteínas de superfície, tais como as moléculas de adesão β2 integrinas. Os mecanismos pelos quais as integrinas interferem no curso da PCM são desconhecidos até o momento. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar a participação da β2 integrina na evolução da PCM. Para isso, foram utilizados camundongos C57BL/6 selvagens (WT) e geneticamente deficientes para a produção dessa proteína (β2-/-), ambos infectados com 1x106 células do isolado virulento P. brasiliensis (Pb18) por via endovenosa. Após 15, 30 e 60 dias de infecção os animais foram sacrificados e a análise histológica e histocitométrica de tecidos do fígado e pulmão foi realizada. A carga fúngica, os níveis de NO3, a concentração de anticorpos no soro e de citocinas em sobrenadante de culturas também foram determinados. Os resultados encontrados mostraram que nos camundongos β2-/- a carga fúngica foi menor quando comparada aos animais WT. No 15° dia após a infecção, tecidos do fígado de ambos os grupos de animais analisados apresentaram lesões granulomatosas bem caracterizadas; além disso, nesse mesmo período, o tamanho da área granulomatosa de tecido pulmonar foi significantemente maior nos camundongos β2-/- do que nos WT. No 60° dia após infecção, camundongos β2-/-apresentaram lesões granulomatosas mais compactas, bem formadas no tecido pulmonar, caracterizada por pouco espaço alveolar e presença de muito fungo nas lesões. Os níveis de NO3 detectados nos períodos de 15 e 60 dias após infecção foram significativamente menores em camundongos β2-/-. Os níveis de anticorpos IgG1 foram significativamente maiores em animais β2-/-. A produção de IL-12 e IL-10 foi semelhante em ambos os grupos, mas o estímulo específico com antígenos protéicos da parede celular de Pb18 induziu um leve aumento da produção apenas de IL-10. A capacidade de proliferação celular avaliada em linfócitos do baço estimulados com extrato protéico da parede celular do fungo foi mais significativa em animais β2-/-, quando comparados aos animais WT. Finalmente, foi observado que macrófagos de ambos os grupos de animais estudados, infectados in vitro com P. brasiliensis aumentaram o número de leveduras internalizadas após o tempo de 24 horas de co-cultivo. Nossos dados sugerem que as β2 integrinas participam do processo de internalização de leveduras de P. brasiliensis, contribuindo para a permanência do fungo no interior dos macrófagos e conseqüente sobrevivência do fungo. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Paracoccidioides brasiliensis is a facultative intracellular fungus that causes paracoccidioidomycosis (PCM), a chronic and granulomatous disease, frequently diagnosed in Latin America. As in other systemic mycoses, the host's principal defense mechanism against PCM is the cellular immunity mediated mainly by IFN-gamma activation of macrophages. Macrophages appear to play a fundamental role in this infection acting as the first line of defense for organism. The first interaction between macrophages-fungi is very important in this mycosis progression and this interaction is mediated by surface proteins, like β2 integrin. The role of β2 integrin in the curse of PCM is still unclear, then in the present study the importance of β2 integrin to progression of the disease was investigated. We used β2 - deficient (β2-/-) and wildtype (WT) C57BL/6 mice both endovenous infected with 1x106 the virulent P. brasiliensis strain (Pb18). After 15, 30 and 60 days post infection the mice were killed and we evaluated the disease progression by histology and histocytometry of liver and lung sections and also the fungal burden. Besides we analyzed the NO3 levels, antibodies in the serum and the production of cytokines. Our data showed that in the β2-/- mice there was less fungal burden when compared with the WT mice. After 15 days of infection, liver sections from both mouse groups presented granulomatous lesions well characterized with organized cells. Conversely, 60 days post infection we observed less alveolar space and many fungi inside the lesions in lung tissue from β2-/- mice. The size of granulomas from lung sections was significantly higher in β2-/- mice than in the WT only 15 days after infection, and this result was inverted in the 60º day post infection. Analysis of the NO3 levels from WT mice showed incresead after 8 weeks post infection; moreover IgG1a and IgG2 levels were higher in β2-/-mice. IL-12 and IL-10 production was similar in both groups, but the specific stimulus with the fungi antigens increased the IL-10 production. The spleen cell proliferation stimulated by protein extract from fungus (Pb 1:500) was more significative in β2-/- mice, while WT mice presented less efficient linfoproliferative response. We also observed that macrophages infected with P. brasiliensis in vitro from the two mouse strains had increased in internalized yeasts after 24h of co-culture. Our data suggest that β2 integrins that are probably involved with the fungi internalization contribute with the survival of the fungi inside macrophages and this phagocytosis may serve as a protected environment for the P. brasiliensis.
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Produção de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio e índice de infecção por macrófagos peritoneais de camundongos suscetíveis ou resistentes à leishmaniose infectados in vitro com Leishmania amazonensis

Miranda, Marthina Gomes de 10 July 2012 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-09-25T15:49:45Z No. of bitstreams: 1 2012_MarthinaGomesMiranda.pdf: 2033955 bytes, checksum: efb3978c46cb7852b5438193e339efaf (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-10-02T11:12:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_MarthinaGomesMiranda.pdf: 2033955 bytes, checksum: efb3978c46cb7852b5438193e339efaf (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-02T11:12:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_MarthinaGomesMiranda.pdf: 2033955 bytes, checksum: efb3978c46cb7852b5438193e339efaf (MD5) / A leishmaniose é endêmica em várias partes do mundo, e ainda nos dias atuais a doença permanece um sério problema de saúde pública. A doença tem diferentes formas clínicas, afeta cerca de 12 milhões de pessoas no mundo com um aumento de 1,5 a 2 milhões de novos casos ao ano. A Leishmania amazonensis é uma das espécies causadora da leishmaniose tegumentar americana que pode manifestar a forma cutânea ou difusa dependendo do estado imunológico do indivíduo. A imunidade inata participa da defesa inicial contra o parasita e pode determinar a evolução da doença. Camundongos da linhagem BALB/c são suscetíveis à infecção pela leishmânia desenvolvendo uma forma disseminada que evolui para morte, enquanto que camundongos C57BL/6 possuem características de resistência parcial, desenvolvem lesão, porém exercem controle sobre o crescimento do parasito, evoluindo para a cura. O objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta imune inata dos macrófagos de camundongos suscetíveis e resistentes nas primeiras 24 h de contato do parasita com o fagócito. De 14 camundongos BALB/c e C57BL/6 foram obtidos macrófagos peritoneias para análise do índice de infecção, da capacidade microbicida dos macrófagos dos dois modelos e capacidade de produção de óxido nítrico e peróxido de hidrogênio na presença ou ausência da Leishmania amazonensis. Não houve diferença no índice de infecção dos macrófagos dos camundongos dos dois modelos estudados. A capacidade microbicida dos macrófagos obtidos dos camundongos resistentes foi mais efetiva do que a dos macrófagos dos camundongos suscetíveis, sendo que observamos um retardo e um menor crescimento em cultura dos parasitos recuperados dos macrófagos dos animais resistentes, que foram estatisticamente significantes a partir do quarto dia de acompanhamento. Ocorreu produção inicial de óxido nítrico pelos macrófagos peritoneais dos camundongos suscetíveis à infecção na presença de L. amazonensis, entretanto, estes animais não conseguiram manter a produção deste radical após 24 h em cultura, ocorrendo uma modulação negativa da produção deste radical na presença da leishmânia. Enquanto a produção do NO pelos macrófagos dos animais resistentes aumentou progressivamente e manteve-se 24 horas após. A produção do peróxido de hidrogênio pelos macrófagos peritoneais dos camundongos C57BL/6 foi maior do que o dos camundongos BALB/c mesmo quando infectados com L. amazonensis. Concluímos que a interação da Leishmania amazonensis com os macrófagos modulou negativamente a produção de óxido nítrico em camundongos suscetíveis, mas não nos camundongos resistentes. Os macrófagos dos camundongos C57BL/6, resistentes à leishmânia, foram capazes de eliminar o parasito mais eficientemente do que os macrófagos da linhagem suscetível BALB/c. A produção precoce mais elevada de H2O2 e a capacidade de manter a resposta de NO por tempo mais prolongado parecem ter sido fatores importantes para a resposta de suscetibilidade ou resistência a Leishmania amazonensis. Nossos dados, portanto, contribuíram para esclarecer alguns mecanismos iniciais envolvidos nas respostas de suscetibilidade ou resistência à infecção pela Leishmania amazonensis. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leishmaniasis is endemic in several parts of the world and still remains an important healthy problem. The disease affects about 12 million people worldwide, with an increase of 1.5 to 2 million new cases by year. There are different clinical forms of the disease depending on the host, parasite species, and immunological response to infection. The innate immunity response is responsible by the initial defense against the parasite and may determine the evolution of the disease. BALB/c mice are susceptible to Leishmania infection and show disseminated disease that progress to death, whereas C57BL/6 mice show partial resistance to the disease, develop lesions, but control the growth of the parasite evolving to healing. This work aimed to evaluate the innate immune response of macrophages from susceptible or resistant mice during the first 24h in culture. The macrophage infection rate, the microbicidal activity of macrophages, and the nitric oxide and hydrogen peroxide production by macrophages of 14 BALB/c and 14 C57BL/6 mice were in vitro assessed in presence or absence of Leishmania amazonensis. There was no difference in macrophage infection rate by Leishmania between both models evaluated. The microbicidal capacity of macrophages from resistant mice was more effective than that of macrophages from susceptible animals, which showed statistical difference in the fourth day. Enhanced nitric oxide production by peritoneal macrophages from BALB/c susceptible mice stimulated with L. amazonensis occurred at the beginning of the incubation, but there was a decrease in production after that, showing a downmodulation of nitric oxide production by Leishmania in this mouse model. However, differently, the nitric oxide production by C57BL/6 resistant mice gradually increased until 24 h. The hydrogen peroxide production by peritoneal macrophages from C57BL/6 mice was higher than that of BALB/c mice when infected with L. amazonensis. We conclude that the interaction of macrophages with Leishmania amazonensis dowmodulates nitric oxide production in susceptible but not in resistant mice. Furthermore, macrophages from C57BL6 mice resistant to Leishmania were able to eliminate the parasite more efficiently than macrophages from the susceptible strain BALB/c. The higher early production of H2O2 and the capacity to maintain NO production for a longer period appear to be important factors in the response of susceptibility or resistance to Leishmania amazonensis. Our data therefore may clarify some mechanisms involved in the initial responses of susceptibility or resistance to Leishmania amazonensis infection.

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