A identificação de potenciais fontes de contaminação por resíduos de fármacos citotóxicos é importante para a adequação de medidas de proteção. Devido à variedade de fármacos utilizados na rotina de manipulação é priorizada a monitorização das drogas mais tóxicas (grupo l/IARC) e as drogas manipuladas com maior freqüência. Objetivo: Estabelecer um método analítico específico para monitorização ambiental de fármacos citotóxicos (ciclofosfamida e fluorouracila) e avaliar a presença de resíduos de fluorouracila (5-FU) no local de manipulação desses medicamentos no HCPA. Método: A coleta de amostras foi realizada através da técnica de wipe test, por meio de papel-filtro umedecido em água e armazenado em tubo de ensaio fechado. Coletou-se 96 amostras, tendo como origem frascos de medicamento, superfícies e objetos da área de preparo e luvas utilizadas na manipulação. As amostras então eram encaminhadas a Unidade de Bioquímica e imunoensaios onde se realizava a extração e análise através da Cromatografia Líquida de alta Eficiência (CLAE) com detector UV/VIS. Resultados: O método demonstrou viabilidade para a análise de ambos os fármacos, tornando possível a realização da monitorização. De um total de 96 amostras coletadas para análise do 5-FU encontrou-se um percentual de contaminação de 19,8%. Destaque-se os resultados obtidos entre os frascos de medicamento em sua embalagem original com um percentual de contaminação de 22,25% (7/23). Conclusões: O estudo demostrou que o ambiente de manipulação de citotóxicos pode estar contaminado por resíduos dos fármacos mesmo na ausência de acidentes e desconformidades e a exposição pode começar antes da reconstituição ou diluição desses medicamentos. O método mostrou-se adequado para quantificação de ciclofosfamida e 5-FU, possibilitando fornecer o nível de contaminação do ambiente de manipulação de citotóxicos em um determinado momento e indicando possíveis rotas de exposição.

MENEZES, Ramon Róseo Paula Pessoa Bezerra de. Estudo da atividade enzimática e dos efeitos do veneno da serpente Bothropoides insularis sobre macrófagos RAW 264.7 in vitro. 2013. 95 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-17T12:55:11Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_rrppbmenezes.pdf: 1516830 bytes, checksum: 86a400657ecf5d9f932cff467f9e5916 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-17T12:55:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_rrppbmenezes.pdf: 1516830 bytes, checksum: 86a400657ecf5d9f932cff467f9e5916 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-17T12:55:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_rrppbmenezes.pdf: 1516830 bytes, checksum: 86a400657ecf5d9f932cff467f9e5916 (MD5) Previous issue date: 2013 / Around the world, there are recorded over 3 million accident involving bites of venomous animals per year, of which 125 to 150 thousand culminate in death. In Brazil, most cases occur with snakes from Bothrops and Bothropoides genus, causing several local and systemic complications, such myotoxicity, disseminated intravascular coagulation, cytotoxicity, acute renal failure and sepsis. Bothropoides insularis is a snake from Queimada Grande Island, whose venom shows pronounced toxicity. However, its effect over cells with defense function remains unclear, as well as how these effects can influence the toxicity observed in vivo. The present study aimed to investigate the cellular changes induced by Bothropoides insularis whole venom (BinsVT) over murine macrophage from RAW 264.7 lineage. In this context, colorimetric tests were performed to determine proteolytic activity and the production of hydrogen peroxide in vitro. The results showed high catalytic activity in both tests, suggesting that the biological effects of this venom may be related to the presence of enzymes such metalloproteinases (svMPs) and L-amino acid oxidases (LAAOs) at concentrations relevant in these experimental conditions. The determination of the cytotoxic potential was conducted by MTT reduction assay, a method of assessing redox metabolism, after 2, 6, 12 and 24 hours of incubation. It was observed cytotoxic effect at high concentrations in a time-dependent way, with cell death more evident at 200 and 100 µg/mL after 12 and 24 hours of treatment. In lower concentrations, there was a gradual increase in cell viability, reaching around 200% of cell viability in groups treated for 24 hours. This result suggests that BinsVT possess proliferative effect over these cells. Then, lactate dehydrogenase (LDH) activity was determined in culture supernatants from experimental groups for investigation of cell lysis induced by BinsVT. It was observed a significant increase in enzymatic activity in all groups, suggesting the coexistence of fractions with cytotoxic and proliferative effect and that concentration and exposure time determine its outcomes. For morphological evaluation of RAW 264.7 cells after exposure to BinsVT, the experiments were performed on the surface of coverslips for staining with May-Grunwald Giemsa method. The experimental groups were analyzed by optical microscopy and the most representative morphological characteristics were photographed. Various morphological changes were observed, such as appearance of cellular debris and bare nuclei, vacuolated cells, reduced cell volume and increased cytoplasmic projections. Finally, the mechanism of cell death induced by BinsVT was assessed by flow cytometry, by staining with propidium iodide (PI) and annexin V-FITC. The analysis revealed the presence of apoptosis and necrosis, and the appearance of doubly labeled cells with Annexin-FITC and PI, indicating the occurrence of late apoptosis. In conclusion, BinsVT has a cytotoxic effect on RAW 264.7 cell, which necrotic and apoptotic mechanisms, besides stimulatory effect on these cells in dose-and time-dependent ways. These effects may be related to the enzymatic activities found in vitro. / Em todo o mundo, são registrados mais de 3 milhões de acidentes envolvendo picadas de animais peçonhentos por ano, das quais 125 a 150 mil culminam em óbito. No Brasil, a maioria dos casos ocorre com serpentes dos gêneros Bothrops e Bothropoides, provocando uma grande variedade de complicações locais e sistêmicas, dentre os quais se destacam efeito mionecrótico, coagulação intravascular disseminada, citotoxicidade, insuficiência renal aguda e sepse. A serpente Bothropoides insularis é uma espécie nativa da Ilha de Queimada Grande, cujo veneno apresenta efeito tóxico acentuado em diversos modelos experimentais. Entretanto, pouco é conhecido a respeito do efeito dessa peçonha sobre células com função de defesa, nem o quanto esse efeito pode influenciar na toxicidade observada in vivo. O presente trabalho teve como objetivo investigar as alterações celulares induzidas pelo veneno total da serpente Bothropoides insularis (BinsVT) sobre macrófagos murinos da linhagem RAW 264.7. Nesse contexto, foi realizada a determinação da atividade proteolítica e da produção de peróxido de hidrogênio in vitro de BinsVT através de reações colorimétricas. Os resultados demonstraram alta atividade catalítica em ambos os testes, sugerindo que os efeitos biológicos desse veneno podem estar relacionados à presença de enzimas como metaloproteinases (svMPs) e L-aminoácido oxidases (LAAOs) em concentrações relevantes nas condições experimentais adotadas. A determinação do potencial citotóxico foi realizada pelo método de redução do MTT, um teste de avaliação da capacidade oxirredutora das células, após 2, 6, 12 e 24 horas de incubação. Foi observado efeito citotóxico em altas concentrações de forma tempo-dependente, com morte celular mais pronunciada nas concentrações de 200 e 100 µg/mL após 12 e 24 horas de tratamento. Nas menores concentrações estudadas, ocorreu um aumento gradativo da viabilidade celular, com valores percentuais em torno de 200% em relação ao grupo controle nos grupos tratados por 24 horas. Esse resultado sugere a presença de efeito proliferativo de BinsVT sobre essa linhagem celular. Em seguida, a atividade da enzima lactato desidrogenase (LDH) no sobrenadante de cultivo dos grupos experimentais foi determinado para investigação de lise celular induzida por BinsVT. Foi verificado aumento significativo da atividade dessa enzima em todos os grupos testados, sugerindo a coexistência de frações com efeito proliferativo e citotóxico, e a concentração e o tempo de exposição do veneno determinam qual irá prevalecer. Para avaliação morfológica das células RAW 264.7 após exposição à substância em estudo, os experimentos foram realizados na superfície de lamínulas, para coloração com May-Grunwald Giemsa. Os grupos experimentais foram analisados por microscopia óptica e as características morfológicas mais representativas foram fotomicrografadas. Foram observadas diversas alterações morfológicas, tais como aparecimento de fragmentos celulares e núcleos desnudos, células vacuolizadas, redução do volume celular e aumento de projeções citoplasmáticas. Por fim, o mecanismo de morte celular induzida por BinsVT foi avaliado por citometria de fluxo, pela marcação com o iodeto de propídio (PI) e a anexina V-FITC. A análise revelou a presença de envolvimento necrótico e apoptótico no efeito citotóxico da substância, além do aparecimento de células marcadas duplamente com PI e anexina-FITC, indicando a ocorrência de apoptose tardia. Em conclusão, BinsVT apresenta efeito citotóxico sobre macrófagos RAW 264.7, com aparente envolvimento de necrose e apoptose, além de provável efeito estimulatório sobre essas células, de forma concentração- e tempo-dependente. Esses efeitos podem estar relacionados às atividades enzimáticas encontradas in vitro.

BARRETO, Francisco Stefânio. Estudo da atividade citotóxica de compostos obtidos do extrato acetônico das folhas de Annona muricata L. por fracionamento bioguiado. 89 f. 2014. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-06-30T12:16:59Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_fsbarreto.pdf: 2117438 bytes, checksum: db53fc399991c1dcddb3b5a9a16c79a3 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-06-30T12:17:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_fsbarreto.pdf: 2117438 bytes, checksum: db53fc399991c1dcddb3b5a9a16c79a3 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-30T12:17:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_fsbarreto.pdf: 2117438 bytes, checksum: db53fc399991c1dcddb3b5a9a16c79a3 (MD5) Previous issue date: 2014 / Cancer is a complex disease of genetic origin, resulting from mutations in proto-oncogenes and / or tumor suppressor genes. It is considered one of the major causes of death in the world. Preliminary studies with the acetone extract and isolated compounds from the Annona muricata species demonstrated their antitumor potential. Annona muricata L. (Annonaceae), popularly known as soursop, has wide distribution, mainly in the tropical regions. In Brazil, the species is widely used as analgesic, hypoglycemic, anti-inflammatory, antipyretic, hepatoprotective, anti-neuralgic, anti-parasitic and anti-rheumatic. This study reports the isolation of an acetogenin, called Annonacin, with a mono-tetrahydrofuran ring, the molecular formula: C35H64O7 and a mass of 596 u.m.a from the acetone extract of Annona muricata leaves through a bioguided chemical prospecting by cytotoxicity using the MTT assay. All the obtained fractions and the isolated acetogenin showed a cytotoxic potential in the tested tumor cell lines. The values of the mean inhibitory concentration of this acetogenin, had an order of nano-molar. The cytotoxicity assay demonstrated that the compound has anti-proliferative activity against all the tested tumor cell lines, with an IC50 ranging from 3.280 nM to 1.56 nM in HL-60 and HCT-116, respectively, after 72 hours of incubation, where the substance was most active against the following tumor cell lines: HCT-116, OVCAR-8, SF-295 and PC-3M. This acetogenin was not able to inhibit the proliferation of normal peripheral blood cells, although it showed a hemolytic effect on mice erythrocytes. The Annonacin, in a colorectal cancer cell line, showed a cytotoxic effect strongly related to the dose and incubation time, being able to change the number of viable and non-viable cells after 48 and 72 h of exposure. In both incubation times, this molecule was able to modify the HCT-116 cell morphology, where it had an increase on the cytoplasm and nucleus size, besides a fusiform appearance. This study showed that the acetone extract from the A. muricata leaves is a promising source for obtaining compounds belonging to the acetogenins class with significant cytotoxic activity on tumor cells of human origin. / O câncer é uma complexa doença de origem genética, resultante de mutações em proto-oncogenes e/ou genes supressores tumorais. É considerada uma das principais causas de morte por doença no mundo. Estudos preliminares com o extrato acetônico e compostos isolados da espécie Annona muricata evidenciaram o seu potencial antitumoral. Annona muricata L. (Annonaceae) é popularmente conhecida como gravioleira; possui ampla distribuição, principalmente em regiões tropicais. No Brasil, a espécie é utilizada como analgésico, hipoglicemiante, anti-inflamatório, antitérmico, hepatoprotetor, antinevrálgico, antiparasitário e antirreumático. O presente trabalho descreve o isolamento de uma acetogenina, denominada anonacina, com anel mono-tetrahidrofurano, fórmula molecular C35H64O7 e massa de 596 u.m.a à partir do extrato acetônico das folhas da referida espécie, através de prospecção química bioguiada pela citotoxicidade usando o ensaio do MTT. Todas as frações obtidas e a acetogenina isolada na prospecção apresentaram potencial citotóxico nas linhagens tumorais testadas. Os valores de concentração inibitória média dessa acetogenina, apresentaram-se na ordem de nano-molar. O ensaio de citotoxicidade mostrou que esse composto apresenta atividade antiproliferativa frente à todas as linhagens tumorais testadas, com CI50 variando de 3.280 nM a 1,56 nM em HL-60 e HCT-116, respectivamente após 72 horas de incubação, onde a substância foi mais ativa frente às linhagens HCT-116, OVCAR-8, SF-295 e PC-3M. Essa acetogenina não foi capaz de inibir a proliferação de células mononucleares do sangue periférico, embora tenha apresentado efeito hemolítico em eritrócitos de camundongos. A acetogenina AMFA-4, em linhagem de célula de câncer colorretal, apresentou efeito citotóxico dependente da dose e do tempo de incubação, sendo capaz de alterar o número de células viáveis e não-viáveis após 48 e 72 h de exposição. Nesses dois tempos de incubação, essa molécula foi capaz de alterar a morfologia das células HCT-116, onde a mesma teve aumento do núcleo e citoplasma e aspecto fusiforme. O presente trabalho mostrou que o extrato acetônico das folhas de A. muricata é uma fonte promissora para obtenção de compostos pertencentes a classe das acetogeninas com atividade citotóxica relevante em células tumorais de origem humana.

LIMA, L. B. Contribuição para a padronização química de espécies do gênero Plectranthus: derivatização e validação de métodos analíticos para a quantificação de marcadores químicos. 2013. 137 f. Tese (Doutorado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2014-11-19T21:03:34Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_lblima.pdf: 6591035 bytes, checksum: 165aa5a79777f974fa2ffe660ef1f5fd (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-12-22T17:09:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_lblima.pdf: 6591035 bytes, checksum: 165aa5a79777f974fa2ffe660ef1f5fd (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-22T17:09:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_lblima.pdf: 6591035 bytes, checksum: 165aa5a79777f974fa2ffe660ef1f5fd (MD5) Previous issue date: 2013 / Plectranthus grandis (Cramer) Willense is a medicinal plant popularly known in Ceará as boldo-grande, used by population in substitution of P. barbatus (boldo), it shows gastroprotective activity already proven for herb and for some isolated diterpenes, scientifically validating this way its popular use. This work describes the analytical procedures used and obtained results, aiming to contribute to chemical standardization of four Plectranthus species. Barbatusin and 3β-hydroxy-3-deoxobarbatusin diterpenes were isolated by chromatographic techniques, being possible to develop selective extration method of barbatusin, which enabled to obtain significant amount of this substance. Derivatization reactions were performed, getting 3-hydroxy-3-deoxobarbatusin, having gastroprotective activity, in vivo, already reported in the literature, and oxyimine product of barbatusin, unpublished in the literature, with cytotoxic activity more potent than its precursor. Estrutural elucidation were performed by infra-red spectroscopy, NMR 1H and NMR 13C, compared with literature data. Using HPLC-DAD, methods were developed for quantification of barbatusin and 3β-hydroxy-3-deoxobarbatusin, in wich suitable parameters have been found of linearty (r2 > 0,99), for both analytes. The method was validated and presented linearty (r2 = 0,9931 for barbatusin and r2 = 0,9966 for 3β-hydroxy-3-deoxobarbatusin), selectivity, within-day precision (RSD < 2,8% for barbatusin and RSD < 3,5% for 3β-hydroxy-3-deoxobarbatusin), accuracy (recovery between 81,7% a 115,1%). The methods so developed have been applied to the leaves extracts of P. grandis, P. barbatus, P. amboinicus and P. ornatus. The larvicidal and cytotoxic potential of the four Plectranthus species were evaluated, as well as the purê compounds, showing promising cytotoxic activty for three strains of tumor cells. / Plectranthus grandis (Cramer) Willense, é uma planta medicinal conhecida popularmente no Ceará como boldo-grande, utilizada pela população em substituição a P. barbatus (boldo), que apresenta atividade gastroprotetora já comprovada para a planta e para alguns diterpenos isolados, validando cientificamente desta forma seu uso popular. Este trabalho descreve os procedimentos analíticos utilizados e resultados obtidos, visando contribuir para a padronização química de quatro espécies de Plectranthus. Os diterpenos barbatusina e 3β-hidroxi-3-desoxibarbatusina foram isolados através de técnicas cromatográficas, sendo possível desenvolver um método de extração seletiva para a barbatusina, o que possibilitou obter quantidade significativa desta substância. Foram realizadas reações de derivatização, obtendo-se a 3-hidroxi-3-desoxibarbatusina, que possui atividade gastroprotetora, in vivo, já reportada na literatura, e a oxima da barbatusina, inédita na literatura, com atividade citotóxica mais potente do que sua precursora. As elucidações estruturais foram realizadas através de espectroscopia na região do infravermelho, RMN 1H e RMN 13C, em comparação com dados da literatura. Utilizando CLAE-DAD desenvolveu-se métodos para a quantificação de barbatusina e 3β-hidroxi-3-desoxibarbatusina, em que foram encontrados parâmetros adequados de linearidade (r2 > 0,99), para as duas substâncias analisadas. O método foi validado e apresentou linearidade (r2 = 0,9931 para a barbatusina e r2 = 0,9966 para a 3β-hidroxi-3-desoxibarbatusina), seletividade, precisão intra-dia (DPR < 2,8% para a barbatusina e DPR < 3,5% para a 3β-hidroxi-3-desoxibarbatusina), exatidão (recuperação entre 81,7% e 115,1%). Os métodos então desenvolvidos foram aplicados aos extratos das folhas de P grandis, P. barbatus, P. amboinicus, P. ornatus. O potencial larvicida e citotóxico das quatro espécies de Plectranthus foram avaliados, bem como dos compostos puros, apresentando promissora atividade citotóxica para três linhagens de células tumorais.

A identificação de potenciais fontes de contaminação por resíduos de fármacos citotóxicos é importante para a adequação de medidas de proteção. Devido à variedade de fármacos utilizados na rotina de manipulação é priorizada a monitorização das drogas mais tóxicas (grupo l/IARC) e as drogas manipuladas com maior freqüência. Objetivo: Estabelecer um método analítico específico para monitorização ambiental de fármacos citotóxicos (ciclofosfamida e fluorouracila) e avaliar a presença de resíduos de fluorouracila (5-FU) no local de manipulação desses medicamentos no HCPA. Método: A coleta de amostras foi realizada através da técnica de wipe test, por meio de papel-filtro umedecido em água e armazenado em tubo de ensaio fechado. Coletou-se 96 amostras, tendo como origem frascos de medicamento, superfícies e objetos da área de preparo e luvas utilizadas na manipulação. As amostras então eram encaminhadas a Unidade de Bioquímica e imunoensaios onde se realizava a extração e análise através da Cromatografia Líquida de alta Eficiência (CLAE) com detector UV/VIS. Resultados: O método demonstrou viabilidade para a análise de ambos os fármacos, tornando possível a realização da monitorização. De um total de 96 amostras coletadas para análise do 5-FU encontrou-se um percentual de contaminação de 19,8%. Destaque-se os resultados obtidos entre os frascos de medicamento em sua embalagem original com um percentual de contaminação de 22,25% (7/23). Conclusões: O estudo demostrou que o ambiente de manipulação de citotóxicos pode estar contaminado por resíduos dos fármacos mesmo na ausência de acidentes e desconformidades e a exposição pode começar antes da reconstituição ou diluição desses medicamentos. O método mostrou-se adequado para quantificação de ciclofosfamida e 5-FU, possibilitando fornecer o nível de contaminação do ambiente de manipulação de citotóxicos em um determinado momento e indicando possíveis rotas de exposição.

A identificação de potenciais fontes de contaminação por resíduos de fármacos citotóxicos é importante para a adequação de medidas de proteção. Devido à variedade de fármacos utilizados na rotina de manipulação é priorizada a monitorização das drogas mais tóxicas (grupo l/IARC) e as drogas manipuladas com maior freqüência. Objetivo: Estabelecer um método analítico específico para monitorização ambiental de fármacos citotóxicos (ciclofosfamida e fluorouracila) e avaliar a presença de resíduos de fluorouracila (5-FU) no local de manipulação desses medicamentos no HCPA. Método: A coleta de amostras foi realizada através da técnica de wipe test, por meio de papel-filtro umedecido em água e armazenado em tubo de ensaio fechado. Coletou-se 96 amostras, tendo como origem frascos de medicamento, superfícies e objetos da área de preparo e luvas utilizadas na manipulação. As amostras então eram encaminhadas a Unidade de Bioquímica e imunoensaios onde se realizava a extração e análise através da Cromatografia Líquida de alta Eficiência (CLAE) com detector UV/VIS. Resultados: O método demonstrou viabilidade para a análise de ambos os fármacos, tornando possível a realização da monitorização. De um total de 96 amostras coletadas para análise do 5-FU encontrou-se um percentual de contaminação de 19,8%. Destaque-se os resultados obtidos entre os frascos de medicamento em sua embalagem original com um percentual de contaminação de 22,25% (7/23). Conclusões: O estudo demostrou que o ambiente de manipulação de citotóxicos pode estar contaminado por resíduos dos fármacos mesmo na ausência de acidentes e desconformidades e a exposição pode começar antes da reconstituição ou diluição desses medicamentos. O método mostrou-se adequado para quantificação de ciclofosfamida e 5-FU, possibilitando fornecer o nível de contaminação do ambiente de manipulação de citotóxicos em um determinado momento e indicando possíveis rotas de exposição.

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Estudios previos han demostrado que derivados del ácido gálico unidos a trifenilfosfonio mediante una cadena alifática de diez carbonos son efectivos agentes citotóxicos, desacoplando la cadena transportadora de electrones del complejo ATP sintasa mitocondrial en células de adenocarcinoma murinas. En el presente trabajo se demostró dicho efecto en células de cáncer de mama humano, así como también se determinó la relación estructura-actividad de derivados de este compuesto. Fueron analizados derivados mono- y di-hidroxilados del ácido benzoico en diferentes líneas celulares de cáncer de mama humanas, las cuales se diferencian en su perfil metabólico y en la expresión de receptores de crecimiento y hormonales. Se observó que dos de los nuevos derivados presentan un mayor efecto citotóxico que los previamente estudiados, los cuales son 2-OH TPP+C10 y Gent TPP+C10, debido a una mayor actividad desacoplante de la fosforilación oxidativa. En forma exhaustiva fueron estudiadas las líneas celulares, MCF7 caracterizada por la presencia de receptores hormonales y la línea MDA-MB-231, la cual posee un fenotipo triple negativo con características metastásica y un metabolismo altamente glicolítico. Se evidenció que los derivados presentan un tropismo mitocondrial, afectando las funciones de este organelo debido a que son capaces de desencadenar una disminución del potencial de transmembrana mitocondrial, lo que conlleva a una disminución de la razón NAD(P)H/NAD(P)+ y una caída del ATP total, parcialmente compensada por la actividad de AMP-kinasa y adenilato kinasa. Como consecuencia, se desencadena una muerte de tipo apoptótica. Además, se observó que los derivados son capaces de inhibir la migración celular en la línea metastásica. La selectividad de estos compuestos fue evaluada al comparar el efecto citotóxico con la línea mamaria epitelial MCF 10F, demostrando que los compuestos 2-OH TPP+C10 y Gent TPP+C10 presentan selectividad a las concentraciones utilizadas, ya que no inducen una muerte significativa a las 48 horas, ni una caída del ATP total en las condiciones analizadas. Como conclusión, todas las moléculas analizadas presentan actividad citotóxica similar en células de cáncer de mama humanas; además, la modificación realizada al grupo farmacóforo la aumenta / Previous studies have shown that gallic acid derivatives bound to an aliphatic chain of ten carbons length to triphenylphosphonium are effective cytotoxic agents, inducing an uncoupler effect to the electron transport chain of the mitochondrial ATPsynthase complex in murine adenocarcinoma cells. The present work displays the effect of these derivatives in human breast cancer cells, as well as the study of the structure-activity relationship derived from these compounds. Mono- and di-hydroxyl derivatives of benzoic acid were analyzed in different human breast cancer cell lines, which differ in their metabolic profile, hormone receptors expression and growth. It was observed that two new derivatives exhibit greater cytotoxic effect than those previously studied, which are: 2-OH TPP+C10 and Gent TPP+C10, due to an increased activity of uncoupling oxidative phosphorylation process. Two cell lines were exhaustively studied, MCF7 characterized by the presence of hormone receptors and MDA-MB-231, which has a triple negative phenotype, metastatic features and a highly glycolytic metabolism. It was demonstrated that the derivatives possess a mitochondrial tropism, affecting the functions of this organelle because they are capable of triggering a decrease in mitochondrial transmembrane potential, leading to a decrease in NAD(P)H/NAD(P)+ ratio and drop of total ATP, partially offset by the activity of AMP-kinase and adenylate kinase. As a result, the intrinsic apoptotic death via is triggered. It was further noted that the derivatives are capable of inhibiting cell migration in metastatic cell line. The selectivity of these compounds was evaluated by comparing the cytotoxic effect with MCF 10F mammary epithelial cell line, showing that compounds 2-OH TPP+C10 and Gent TPP+C10 revealed selectivity at the concentrations used, as they did not induce significant death at 48 hours of treatment, or a drop of the total ATP in the conditions analyzed. In conclusion, all tested molecules shown similar cytotoxic activity on breast human cancer cell lines where, the modification in the pharmacophore moiety increased this activity

Made available in DSpace on 2015-09-05T02:05:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000474609-Texto+Completo-0.pdf: 859580 bytes, checksum: cb3a065e3f91d18ed57ee2c9c80a2a6f (MD5) Previous issue date: 2015 / A systematic review was performed on the cytotoxic and genotoxic effects of silver solder alloys in orthodontics. The search was conducted through medical databases, PubMed, EMBASE, Web of Science and Cochrane Library. The search of gray literature included the annals of the meetings of the Brazilian Society for Dental Research (SBPqO) and of the American Association of Orthodontists (AAO). The articles found were submitted to selection criteria and eligibility by two independent blind researchers. Afterwards, a manual search was conducted on articles’s references and study data were extracted by standardized forms. Sixty-four out of 76 articles were excluded because they did not reach the eligibility criteria. The remaining 12 articles and 3 other raised from manual search were included in this study. Two articles found on gray literature were repeated, though excluded. The level of agreement between researchers was adequate in the selection criteria (kappa = 0. 916) and very precise for the eligibility (kappa = 1). As a conclusion of the systematic review, the silver solder alloy may cause cytotoxic, mutagenic and genotoxic effects when applied on orthodontic treatment. / Foi realizada uma revisão sistemática dos efeitos citotóxicos e genotóxicos das ligas de solda de prata em Ortodontia. Para tanto, foi efetuada uma busca sistemática nas bases de dados PubMed, EMBASE, Web of Science e Biblioteca Cochrane. Foi pesquisado na literatura cinza os anais da Sociedade Brasileira de Pesquisa Odontológica (SBPqO) e os encontros anuais da American Association of Orthodontists (AAO). Os artigos encontrados foram submetidos a um critério de seleção e elegibilidade por dois pesquisadores de maneira cega e independente. Após a seleção dos estudos, uma busca manual foi realizada nas referências destes e foram extraídos os dados dos estudos através de fichas padronizadas. Foram encontrados no total 76 artigos. Destes, 64 foram excluídos, pois não preencheram os critérios de elegibilidade. Os 12 estudos remanescentes foram selecionados para o presente trabalho. Além disso, outros três artigos foram incluídos através da busca manual. Dois artigos encontrados na literatura cinza foram excluídos, pois eram repetidos. O nível de concordância entre os pesquisadores na seleção dos estudos foi considerado adequado (kappa=0,916) e para a elegibilidade dos estudos foi muito preciso (kappa=1). Após avaliação dos dados extraídos concluiu-se que ligas de solda de prata podem provocar efeitos citotóxicos, genotóxicos e mutagênicos.

Made available in DSpace on 2015-05-08T02:02:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000468069-Texto+Completo-0.pdf: 1430495 bytes, checksum: 0bb6fedf792362692d6371829315b2e1 (MD5) Previous issue date: 2015 / Hyaluronic acid (HA) and polymethylmethacrylate (PMMA) are the most used dermal fillers nowadays. The indiscriminate use of such substances has brought to light unwanted adverse effects. Thus biocompatibility studies are a necessity, since the scientific literature does not clarify the etiology of these effects. The current research has evaluated cytotoxic, genotoxic and mutagenic responses from distinct in vitro tests performed in an independent manner. The cytotoxicity potential of the materials was evaluated by the induction of an inhibition halo in a solid yeast cultures. To conduce a preliminary view, the dilutions ranging from 10-2 to 10-5 were verified. For quantitative test, the colonies were counted to estimate the CFU/mL (colony-forming units per milliliter) values. Halo inhibition test showed that only silicone, used as a positive control, was capable of inducing cytotoxicity in this yeast. The preliminary experiment also indicated silicone and HA 16 mg/mL as a cellular toxicity inductor material. Quantitative test indicated that HA 20 mg/mL and 0. 1mL volume inhibited cell proliferation (ANOVA, Tukey test, p≤ 0. 05). PMMA was dosedependent to 2 and 10% concentrations (Tukey test, p≤ 0. 05). 30% PMMA showed cell proliferation inhibition similar to the negative control. Silicone proved to inhibit S. cerevisiae cell proliferation (Tukey test, p≤ 0. 05). In a second investigation, in Chinese hamster lung fibroblasts (V79 cells), the cytotoxic, genotoxic and mutagenic potentials of 20 mg/mL HA and 30% PMMA were determined. For testing these effects, clonogenic survival, comet and micronucleus assay were performed. HA and PMMA were able to decrease the colony formation when cultures were exposed to compounds by 24 h followed by 6 days in drug-free media. In addition, no genotoxic effects were detected in the 3 or 24 h of exposure to HA or PMMA. In the same manner, both dermal fillers did not induce increase in the micronucleus frequency in binucleated cells. Taken together, these results suggest that (1) 20 mg/mL HA and 10% PMMA are cytotoxicity inductors for the eukaryotic model S. cerevisiae; (2) 20 mg/mL HA and 30% PMMA have a weak cytotoxic activity in V79 cells; (3) the tested substances do not cause detectable DNA damage and chromosome alterations in V79 cells. / O ácido hialurônico (AH) e o polimetilmetacrilato (PMMA) são os materiais de preenchimento estético mais empregados na atualidade. Seu uso indiscriminado tem evidenciado efeitos indesejáveis nos usuários destes produtos, tornando necessário o estudo da biocompatibilidade dos mesmos, uma vez que a literatura científica disponível não esclarece, de forma conclusiva, a etiologia das reações adversas que podem se desenvolver a partir da sua injeção. A presente pesquisa avaliou a resposta citotóxica, genotóxica e mutagênica, a partir de testes in vitro distintos e efetuados de maneira independente. Utilizando a levedura Saccharomyces cerevisiae averiguou-se a citotoxicidade do AH (16 mg/mL e 20 mg/mL) e do PMMA (2%, 10% e 30%), por meio de experimentos qualitativos e quantitativos. O primeiro procedeu-se pela indução de halo de inibição. Para conduzir uma análise preliminar, as diluições 10-2 a 10-5 foram verificadas. No teste quantitativo, as colônias formadas foram contadas em UFC/mL (unidades formadoras de colônias por mililitro).Os dados observados em levedura demonstraram que no teste do halo de inibição, o silicone, utilizado como controle positivo, foi o único material capaz de induzir citotoxicidade. O exame preliminar também indicou o silicone e o AH 16 mg/mL como indutores de toxicidade celular. Na análise quantitativa, o AH 20 mg/mL no volume de 0,1 mL inibiu a proliferação celular (ANOVA, teste de Tukey, p≤ 0,05). O PMMA apresentou resposta dose-dependente nas concentrações de 2% e 10% (teste de Tukey, p≤ 0,05). Por outro lado, o PMMA 30% exibiu níveis de crescimento celular semelhantes ao controle negativo. O silicone confirmou o impedimento de proliferação celular em S. cerevisiae (teste de Tukey, p≤ 0,05). Numa segunda investigação, em cultura de fibroblastos pulmonares de hamster Chinês (linhagem V79), foram determinados os potenciais de citotoxicidade, genotoxicidade e mutagenicidade do AH 20 mg/mL e do PMMA 30%. Para esses parâmetros, a abordagem envolveu os ensaios clonogênico, cometa e micronúcleos. O AH e o PMMA foram capazes de diminuir o crescimento de colônias quando as culturas foram expostas aos produtos por 24 h, seguidos por 6 dias em meio com ausência das drogas. Não foram detectados efeitos genotóxicos em 3 h ou 24 h de exposição ao AH ou PMMA. Da mesma maneira, ambas as substâncias não induziram aumento na frequência de micronúcleos em células binucleadas. Os resultados obtidos permitem sugerir que (1) o AH 20 mg/mL e o PMMA 10% são indutores de citotoxicidade em modelo eucarioto S. cerevisiae; (2) o AH e o PMMA possuem fraca citotoxicidade sobre a linhagem V79; (3) os materiais testados não provocam danos no DNA e alterações cromossômicas detectáveis.

Made available in DSpace on 2014-07-12T02:02:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000459191-Texto+Completo-0.pdf: 819229 bytes, checksum: 3f5f2f0e1d369ad5b2e6c1504cd4c144 (MD5) Previous issue date: 2014 / The reposition of a lost osseous structure is challenging in oral rehabilitations involving osseointegrated implants. Tissue engineering techniques aiming reposition of lost calcified tissues has evolved in the last years as an alternative to the autologous bone graft, without the need of a donor site. Among the required techniques and biomaterials, the hyaluronic acid (HA) presents itself as promising alternative for tissue engineering. HA is present in the extracellular matrix of all living tissues, and also allows modifications in its structure, serving as a carrier for several compounds utilized in bone repair. Depending on its molecular weight, studies show that different cytotoxic effects might be observed. Thus, the present study evaluated, in vitro, the cytotoxicity of high and low molecular weight HA on NIH-3T3 cells, following the ISO 10993-12 test standards for cytotoxicity analysis. A MTT test was conducted with the following groups: (G1) cells + high molecular weight hyaluronic acid; (G2) cells + low molecular weight hyaluronic acid; (G3) cells + high molecular weight hyaluronic acid + hydroxyapatite; (G4) cells + low molecular weight hyaluronic acid + hydroxyapatite; (G5) cells (positive control); (G6) cells+ hypochlorite (negative control). The results show that most groups presented higher cellular viability when compared to the negative control and lower than the positive control group (p<0. 05). Group G1 presented no statistical difference when compared to the positive control (G5) (p<0. 05), indicating that high molecular weight HA might be applicable as a cell carrier for tissue engineering. / A reposição de base óssea perdida é um fator de grande complexidade nas reabilitações orais envolvendo implantes osseointegrados. A engenharia tecidual tem evoluído nos últimos anos por apresentar-se como uma alternativa ao enxerto ósseo autógeno, não exigindo um sitio doador de tecido para tal. Dentre as principais técnicas e biomateriais utilizados em engenharia tecidual, o acido hialurônico (AH) apresenta-se como um composto promissor como veículo celular. Presente na matriz extracelular de todos os tecidos vivos, ele permite sua modificação estrutural, maximizando seu potencial como veículo celular em reparos ósseos. Dependendo do seu peso molecular, estudos mostram diferentes efeitos citotóxicos podem ser verificados. Desta forma, este estudo procurou avaliar, in vitro, a citotoxicidade do AH de alto e de baixo peso molecular, sobre células da linhagem NIH-3T3, segundo o teste padrão da norma ISO 10993-12 para analise de citotoxicidade. Para isso, um teste de MTT foi realizado com o seguinte arranjo de grupos: (G1) Células + AH de alto peso molecular; (G2) Células + AH de baixo peso molecular; (G3) Células + AH de alto peso molecular + Hidroxiapatita; (G4) Células + AH de baixo peso molecular + Hidroxiapatita; (G5) Células (controle positivo); (G6) Células + hipoclorito (controle negativo). Os resultados mostram que todos os grupos apresentam viabilidade superior ao controle negativo e inferior ao controle positivo exceto o grupo G1, onde verificou-se ausência de diferença estatística entre este e o controle positivo. Resultados preliminares apontam para o emprego do AH de alto peso molecular como compatível para veículo celular em engenharia tecidual.