Submitted by Cibele Nogueira (cibelenogueira@ufgd.edu.br) on 2016-03-10T14:32:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) encrypted_VANESSASOUZA.pdf: 971182 bytes, checksum: 44d1c3ca8c2ebd3c60d5a11f78bcbf86 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-10T14:32:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) encrypted_VANESSASOUZA.pdf: 971182 bytes, checksum: 44d1c3ca8c2ebd3c60d5a11f78bcbf86 (MD5) Previous issue date: 2014-08-19 / Flavonoids are polyphenolic compounds found in medicinal plants, scientific studies show that some flavonoids have anti-inflammatory activity, antioxidant and anticarcinogenic. The flavone (2-phenyl-4H-1-benzopyran-4-one) is a flavonoid with heart stimulating activity, antibacterial, antiallergic and inhibition or stimulation of enzymes. Thus, this study evaluated the anti-mycobacterial effects of flavone in vitro on H37Rv ATCC 27294. strain was also performed acute toxicity tests, genotoxicity and mutagenicity with flavone in vivo. The minimum inhibitory concentration (MIC) flavone was measured at concentrations of 0.98 to 250 mg / mL. Experimental models of acute toxicity and genotoxicity have been developed in female mice orally is flavone administered by gavage in test of acute toxicity at doses of 175, 560, 1792 and 2000 mg / kg-1 and 175 560, 1792 mg / Kg1 in genotoxicity and mutagenicity assays. Hippocratic signs were observed as well as biochemical analyzes were performed, hematological, genotoxic (comet assay, micronucleus) and mutagenic (phagocytosis). The flavone presented antimycobacterial activity MIC = 31.25 mm / ml. The data obtained was found to increase in macrophage recruitment into the splenic tissue was an average 55% phagocytosis of cells compared to the negative control in 37% phagocytosed cells, these data demonstrate that the flavone could play immunostimulatory activity. In vivo tests were not observed signs of toxicity and no changes in biochemical, hematological, genotoxic and mutagenic parameters. Macroscopic examination of organs such as kidneys, liver and lungs showed no significant difference between groups. Thus, this study demonstrates the flavone has vitro antimycobacterial activity (efficacy against Mycobacterium tuberculosis). In addition, the flavone is not toxic in the models made in this work. These results together lead to the demonstration of efficacy against mycobacteria flavone and safety of a compound present in nature. / Flavonóides são compostos polifenólicos encontrados em algumas plantas medicinais, estudos científicos demonstram que, alguns flavonóides tem atividades anti-inflamatória, anticarcinogênica e antioxidante. A flavona (2-fenil-4H-1-benzopirano-4-ona) é um flavonóide com atividade de estimulação cardíaca, antibacteriana, antialérgica e de inibição ou estimulação de enzimas. Dessa forma, esse trabalho avaliou os efeitos antimicobacterianos da flavona in vitro sobre a cepa H37Rv ATCC 27294. Foi realizado também os testes de toxicidade aguda, genotoxicidade e mutagenicidade com a flavona in vivo. A concentração inibitória mínima (CIM) da flavona foi mensurada nas concentrações de 0.98 a 250 µg/mL. Modelos experimentais de toxicidade aguda, genotoxicidade e mutagenicidade foram desenvolvidos em camundongos fêmea por via oral, sendo a flavona administrada por gavagem no ensaio de toxicidade aguda nas doses de 175, 560, 1792 e 2000 mg/Kg-1 e em 175, 560, 1792 mg/Kg1 nos ensaios de genotoxicidade e mutagenicidade. Foram observados sinais hipocráticos bem como, foram efetuadas análises bioquímicas, hematológicas, genotóxicas (ensaio cometa, micronúcleo) e mutagênicas (fagocitose). A flavona apresentou atividade antimicobacteriana de CIM = 31,25 mm/mL. Nos dados obtidos verificou-se aumento no recrutamento de macrófagos para o tecido esplênico houve uma média de 55% de células fagocitadas, quando comparado ao controle negativo com 37% de células fagocitadas, estes dados demonstram que a flavona poderia desempenhar atividade imunoestimulatória. Nos testes in vivo, não foram observados sinais de toxicidade e nem alterações nos parâmetros bioquímicos, hematológicos, genotóxicos e mutagênicos. A análise macroscópica de órgãos como: rins, fígado e pulmões não apresentou nenhuma diferença significativa entre os grupos. Desta forma, o presente estudo demonstra a flavona apresenta atividade antimicobacteriana in vitro (eficácia contra Mycobacterium tuberculosis). Além disso, a flavona não é tóxica nos modelos realizados nesse trabalho. Esses resultados juntos levam a demonstração da eficácia da flavona contra micobactérias e a segurança de um composto presente na natureza.

Made available in DSpace on 2015-05-08T02:02:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000468069-Texto+Completo-0.pdf: 1430495 bytes, checksum: 0bb6fedf792362692d6371829315b2e1 (MD5) Previous issue date: 2015 / Hyaluronic acid (HA) and polymethylmethacrylate (PMMA) are the most used dermal fillers nowadays. The indiscriminate use of such substances has brought to light unwanted adverse effects. Thus biocompatibility studies are a necessity, since the scientific literature does not clarify the etiology of these effects. The current research has evaluated cytotoxic, genotoxic and mutagenic responses from distinct in vitro tests performed in an independent manner. The cytotoxicity potential of the materials was evaluated by the induction of an inhibition halo in a solid yeast cultures. To conduce a preliminary view, the dilutions ranging from 10-2 to 10-5 were verified. For quantitative test, the colonies were counted to estimate the CFU/mL (colony-forming units per milliliter) values. Halo inhibition test showed that only silicone, used as a positive control, was capable of inducing cytotoxicity in this yeast. The preliminary experiment also indicated silicone and HA 16 mg/mL as a cellular toxicity inductor material. Quantitative test indicated that HA 20 mg/mL and 0. 1mL volume inhibited cell proliferation (ANOVA, Tukey test, p≤ 0. 05). PMMA was dosedependent to 2 and 10% concentrations (Tukey test, p≤ 0. 05). 30% PMMA showed cell proliferation inhibition similar to the negative control. Silicone proved to inhibit S. cerevisiae cell proliferation (Tukey test, p≤ 0. 05). In a second investigation, in Chinese hamster lung fibroblasts (V79 cells), the cytotoxic, genotoxic and mutagenic potentials of 20 mg/mL HA and 30% PMMA were determined. For testing these effects, clonogenic survival, comet and micronucleus assay were performed. HA and PMMA were able to decrease the colony formation when cultures were exposed to compounds by 24 h followed by 6 days in drug-free media. In addition, no genotoxic effects were detected in the 3 or 24 h of exposure to HA or PMMA. In the same manner, both dermal fillers did not induce increase in the micronucleus frequency in binucleated cells. Taken together, these results suggest that (1) 20 mg/mL HA and 10% PMMA are cytotoxicity inductors for the eukaryotic model S. cerevisiae; (2) 20 mg/mL HA and 30% PMMA have a weak cytotoxic activity in V79 cells; (3) the tested substances do not cause detectable DNA damage and chromosome alterations in V79 cells. / O ácido hialurônico (AH) e o polimetilmetacrilato (PMMA) são os materiais de preenchimento estético mais empregados na atualidade. Seu uso indiscriminado tem evidenciado efeitos indesejáveis nos usuários destes produtos, tornando necessário o estudo da biocompatibilidade dos mesmos, uma vez que a literatura científica disponível não esclarece, de forma conclusiva, a etiologia das reações adversas que podem se desenvolver a partir da sua injeção. A presente pesquisa avaliou a resposta citotóxica, genotóxica e mutagênica, a partir de testes in vitro distintos e efetuados de maneira independente. Utilizando a levedura Saccharomyces cerevisiae averiguou-se a citotoxicidade do AH (16 mg/mL e 20 mg/mL) e do PMMA (2%, 10% e 30%), por meio de experimentos qualitativos e quantitativos. O primeiro procedeu-se pela indução de halo de inibição. Para conduzir uma análise preliminar, as diluições 10-2 a 10-5 foram verificadas. No teste quantitativo, as colônias formadas foram contadas em UFC/mL (unidades formadoras de colônias por mililitro).Os dados observados em levedura demonstraram que no teste do halo de inibição, o silicone, utilizado como controle positivo, foi o único material capaz de induzir citotoxicidade. O exame preliminar também indicou o silicone e o AH 16 mg/mL como indutores de toxicidade celular. Na análise quantitativa, o AH 20 mg/mL no volume de 0,1 mL inibiu a proliferação celular (ANOVA, teste de Tukey, p≤ 0,05). O PMMA apresentou resposta dose-dependente nas concentrações de 2% e 10% (teste de Tukey, p≤ 0,05). Por outro lado, o PMMA 30% exibiu níveis de crescimento celular semelhantes ao controle negativo. O silicone confirmou o impedimento de proliferação celular em S. cerevisiae (teste de Tukey, p≤ 0,05). Numa segunda investigação, em cultura de fibroblastos pulmonares de hamster Chinês (linhagem V79), foram determinados os potenciais de citotoxicidade, genotoxicidade e mutagenicidade do AH 20 mg/mL e do PMMA 30%. Para esses parâmetros, a abordagem envolveu os ensaios clonogênico, cometa e micronúcleos. O AH e o PMMA foram capazes de diminuir o crescimento de colônias quando as culturas foram expostas aos produtos por 24 h, seguidos por 6 dias em meio com ausência das drogas. Não foram detectados efeitos genotóxicos em 3 h ou 24 h de exposição ao AH ou PMMA. Da mesma maneira, ambas as substâncias não induziram aumento na frequência de micronúcleos em células binucleadas. Os resultados obtidos permitem sugerir que (1) o AH 20 mg/mL e o PMMA 10% são indutores de citotoxicidade em modelo eucarioto S. cerevisiae; (2) o AH e o PMMA possuem fraca citotoxicidade sobre a linhagem V79; (3) os materiais testados não provocam danos no DNA e alterações cromossômicas detectáveis.

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000386676-0.pdf: 3018083 bytes, checksum: d24f83f7441985d1dc1910ac8f3fa8e9 (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / The aim of this study was to evaluate the hypersensitivity to metals and the genetic toxicity associated with the use of fixed orthodontic appliances. Hypersensitivity reactions were verified through the patch test carried out by a dermatologist before and two months after the placement of orthodontic appliances in a group of patients. The genetic toxicity was evaluated by using the micronucleus test and the comet assay. The sample was constituted of cells of the oral epithelium of the patients. For micronucleus test, cells were sampled before and 30 days after the placement of orthodontic appliance. For comet assay, the sample was obtained before and 10 days after the placement of orthodontic appliance. For either the micronucleus test or the comet assay, slides were mounted and processed according to standard protocols and analyzed under light microscope. Statistical analysis was performed by non-parametric tests (Fisher’s Exact Test, McNemar and Wilcoxon) and descriptive analysis. Regarding hypersensitivity, no differences were observed between the reactions before and after placement of the orthodontic appliances, which indicates that they did not sensitize patients. The comet assay showed low DNA damage level either before or after orthodontic appliance placement. Conversely, micronucleus test revealed a significant increase of permanent chromosomal damages in the period of 30 day after the placement of orthodontic appliance. Thus, more studies are still needed to understand the genetic toxicity potential of orthodontic devices, and long term studies of follow-up of the orthodontic patients are suggested. / O objetivo desse estudo foi avaliar a hipersensibilidade a metais e a toxicidade genética associadas ao uso de aparelhos ortodônticos fixos. As reações de hipersensibilidade foram verificadas por análise dermatológica utilizando o teste de contato, antes e dois meses após a montagem do aparelho ortodôntico em um grupo de pacientes. A toxicidade genética foi avaliada pelo teste de micronúcleos e pelo ensaio cometa, a partir de células da mucosa bucal dos pacientes. Para o teste de micronúcleos, as células foram coletadas antes e 30 dias após a montagem do aparelho ortodôntico. Para o ensaio cometa, a amostra foi obtida antes e 10 dias após o início do tratamento ortodôntico. Para os dois testes foram preparadas lâminas, cuja leitura foi realizada em microscópio óptico. Na análise estatística empregaram-se testes não paramétricos (Teste Exato de Fisher, McNemar, Wilcoxon) e análise descritiva. Em relação às reações de hipersensibilidade, não foi observada diferença antes e após a montagem do aparelho ortodôntico, o que indica que os pacientes não foram sensibilizados pelo aparelho. O ensaio cometa mostrou baixos níveis de dano no DNA nas células avaliadas, tanto antes quanto após a montagem do aparelho. No entanto, no teste de micronúcleos foi observado um aumento significativo de danos cromossômicos permanentes no período de trinta dias após a montagem do aparelho ortodôntico. Dessa forma, pesquisas adicionais são necessárias a fim de avaliar o potencial genotóxico dos aparelhos ortodônticos fixos, em associação a estudos de longo prazo de acompanhamento dos pacientes.

Submitted by Ginamara Lima (ginaj@pucrs.br) on 2013-04-30T21:08:33Z No. of bitstreams: 1 447511.pdf: 1543889 bytes, checksum: f32bae75cdf85ab505b6c186240b2db8 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-30T21:08:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 447511.pdf: 1543889 bytes, checksum: f32bae75cdf85ab505b6c186240b2db8 (MD5) / Foram investigados os efeitos citotóxicos e genotóxicos da solda de prata e da soldagem a laser utilizadas em Ortodontia. Para tanto, avaliaram-se, nas linhagens celulares HepG2 e HOK, a citotoxicidade (redução MTT) e a genotoxicidade (cometa alcalino ou associado a enzimas de reparo e citoma de micronúcleos) de anéis contendo ou não uniões com solda de prata. Quantificaram-se, empregando espectrofotometria de absorção atômica, os íons metálicos liberados no meio de cultura. Também foram investigados os efeitos sobre o DNA em células da mucosa bucal de pacientes em tratamento com aparelhos auxiliares do tipo Hyrax contendo oito uniões soldadas com prata, empregando o ensaio cometa em células bucais e o citoma bucal de micronúcleos. Por fim, a citotoxicidade in vitro de anéis contendo ou não uniões soldadas a prata ou a laser foi investigada e comparada mediante o emprego de leveduras Saccharomyces cerevisiae. Os dados obtidos permitiram concluir que anéis ortodônticos sofreram corrosão e liberaram íons metálicos em condições laboratoriais, sendo inclusive detectada a presença de cádmio nas amostras. Os anéis contendo solda de prata foram capazes de causar importantes e significativos efeitos citotóxicos e genotóxicos em células de mamíferos em condições in vitro. Os efeitos genotóxicos observados estão, em parte, relacionados a efeitos diretos, assim como a efeitos indiretos, tais como danos oxidativos. Apesar do efeito tóxico observado in vitro, em humanos a resposta de toxicidade a aparelhos contendo uniões soldadas com liga de prata apresentou menor intensidade, sendo identificada genotoxicidade também in vivo. A soldagem a laser se mostrou menos citotóxica que a soldagem com liga de prata em condições in vitro, devendo ser melhor investigada por se tratar de uma alternativa promissora para a união de metais em Ortodontia. / In the present study, the cytotoxic and genotoxic effects of the silver solder and laser soldering used in Orthodontics were evaluated. For this, HepG2 e HOK cell lines were employed to evaluate the cytotoxicity (MTT reduction) and the genotoxicity (comet assay and cytokinesis block micronucleus cytome assay) of orthodontic bands containing or not silver soldered joints. Ionic metal release in the culture medium was verified by means of atomic absorption espectrophotometry. DNA effects on buccal mucosal cells of patients treated with Hyrax type expander appliances containing eight silver soldered joints were also evaluated through the buccal comet assay and the buccal micronucleus cytome assay. The in vitro cytotoxicity of orthodontic bands containing or not silver soldered or laser soldered joints was investigated and compared using the Saccharomyces cerevisiae model. Data obtained indicated that orthodontic bands suffer corrosion and are able to release ions to culture medium, being cadmium also detected in the samples evaluated. Silver soldered bands cause significant cytotoxic and genotoxic effects in mammal cells under in vitro conditions. The genotoxic effects are in part related to direct toxic effects and in part related to oxidative DNA damage. In humans, less intense genotoxic effects were observed. Laser soldering was less cytotoxic than silver soldering in in vitro conditions and should be more investigated since it seems to be a promising alternative to connect wires in Orthodontics.

Violence is a dreadful phenomenon spread throughout the world, resulting in unfortunate events that can ultimately cause death. It is known that some countries play a much worrying role in this scenario than others. Brazil is one of them. The present study has focused on identifying the use of cocaine within 105 postmortem cases arriving at the Institute of Legal Medicine of São Paulo (IML-SP) through analytic toxicological methods and latter applying genetic testing to see whether the presence of certain single nucleotide polymorphisms (SNPs) is more predominant within users rather than non-users, which would help to better understand one\'s susceptibility to abuse the drug. Both blood and hair samples have been analysed through ultra-performance liquid chromatography coupled to electrospray ionization tandem mass spectrometry (UPLC-ESI-MS/MS) in order to distinguish between recent or chronic cocaine use among violent individuals whose violence has ultimately leaded to their death. Two dilute-and-shoot methods have been validated and used for this purpose, and the final residue was analysed through the UPLC-ESIMS/ MS system. From the 105 postmortem cases, a rather high proportion of cocaine and its metabolites was found. A chronic use of the drug was denoted in 53% of the cases, which were positive for cocaine and benzoylecgonine, followed by 43% for norcocaine, 40% for cocaethylene and 13% for anhydroecgonine methyl ester, in hair. As for blood, reflecting the use of cocaine prior to death, 51% of the cases have shown to be positive for benzoylecgonine, followed by 41% for cocaine, 23% for cocaethylene and 20% for norcocaine. These findings suggest a probable association between the use of the drug and risky/violent behaviours. Genetic wise, a significant difference has been observed for SNP rs4263329 from the BCHE gene in its dominant model, with higher frequencies of the genotypes A/G and G/G seen in cocaine users rather than non-users (OR=8.91; 95%CI=1.58-50.21; ρ=0.01). Likewise, also SNP rs6280 from the DRD3> gene presented a significant association in both its additive and dominant model, suggesting that the C allele may be playing a role in cocaine use as both genotypes T/C and C/C were significantly more frequent in users than non-users. This association was not lost when adjusted for covariants using logistic regression (OR=4.96; 95%CI=1.07; ρ=0.04). Finally, a statistically significant association (ρ = 0.003) was also encountered among individuals with both A/G and G/G genotypes within SNP rs4263329 and the use of cocaine HCl (f(A/G+G/G)=44.7%) versus crack-cocaine (f(A/G+G/G)=7.7%) and nonusers (f(A/G+G/G)=16.2%). In conclusion, this study has found significant associations within two SNPs related to cocaine use, however, due to several inherent limitations, these must be confirmed by further studies with a higher number of subjects and within a more controlled setting. Definite assumptions may not be made at this point and future researches are to be conducted. / A violência é um fenômeno aterrador espalhado por todo o mundo, resultando em eventos que podem, em última instância, causar a morte. Sabe-se que, em alguns países esse cenário é mais preocupante que em outros. O Brasil é um deles. O presente estudo teve como objetivo identificar o uso de cocaína em 105 casos postmortem provenientes do Instituto de Medicina Legal de São Paulo (IML-SP) por meio de métodos toxicológicos analíticos e posterior aplicação de testes genéticos para verificar se a presença de determinados polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) é mais predominante dentro dos usuários do que dos não usuários, o que explicaria uma possível suscetibilidade de um indivíduo ao abuso da droga. Amostras de sangue e cabelo foram analisadas através de cromatografia líquida de ultra-eficiência acoplada a espectrometria de massas e ionização por electrospray (UPLC-ESI-MS/MS) para distinguir entre uso recente ou crônico de cocaína entre indivíduos violentos cuja violência levou à sua morte. Para tal, dois métodos de extração baseados na técnica de \"dilute-and-shoot\" foram validados e utilizados para esse fim, e o resíduo final foi analisado através de um sistema UPLC-ESI-MS/MS. Dos 105 casos postmortem, foi encontrada uma proporção significativa de cocaína e seus produtos de biotransformação. O uso crônico da droga foi denotado em 53% dos casos, sendo estes positivos para cocaína e benzoilecgonina, seguidos de 43% para norcocaína, 40% para cocaetileno e 13% para anidroecgonina metil éster, no cabelo. Quanto ao sangue, refletindo o uso de cocaína antes da morte, 51% dos casos mostraram-se positivos para benzoilecgonina, seguido de 41% para cocaína, 23% para cocaetileno e 20% para norcocaína. Esses dados corroboram a hipótese provável da relação entre o uso da droga e comportamentos de risco/violentos. Quanto à genética, uma diferença significativa foi observada para o SNP rs4263329 do gene BCHE em seu modelo dominante, com maiores frequências dos genótipos A/G e G/G vistos em usuários de cocaína ao contrário de não usuários (OR=8,91; 95%IC=1,58-50,21; ρ=0,01). Da mesma forma, também o SNP rs6280 do gene DRD3 apresentou uma associação significativa tanto no seu modelo aditivo quanto dominante, sugerindo que o alelo C pode estar desempenhando um papel no uso de cocaína, pois ambos os genótipos T/C e C/C foram significativamente mais frequentes nos usuários do que não usuários. Essa associação não foi perdida quando ajustada para co-variáveis usando regressão logística (OR=4,96; 95%IC=1,07; ρ=0,04). Finalmente, uma associação estatisticamente significativa (ρ=0,003) também foi encontrada entre indivíduos com ambos os genótipos A/G e G/G dentro do SNP rs4263329 e o uso de cocaína HCl (f(A/G + G/G)=44,7%) versus crack (f(A/G + G/G)=7,7%) e não usuários (f(A/G + G/G)=16,2%). Em conclusão, este estudo encontrou associações significativas em dois SNPs relacionados ao uso de cocaína, no entanto, devido a várias limitações inerentes, estas devem ser confirmadas por mais estudos com um maior número de indivíduos e dentro de um cenário mais controlado. Hipóteses definitivas não poderão ser feitas neste momento e futuras pesquisas devem ser conduzidas.

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000425578-0.pdf: 1317181 bytes, checksum: b20aaf08d45d26e52a920073367ead4a (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / The aim of present study was to evaluate the local tissue reaction in the skull of rats using the implantation of disks of poly (lactic L/D-acid) and evaluate its genotoxicity, throught the induction of micronuclei in polychromatic erythrocytes (PCE) in the bone marrow of mice. It used 25 male Wistar rats, with 200 and 300 grams. 20 animals underwent surgical procedures and had the discs implanted, and 5 animals received postoperative medication in the same way, serving as a control group for genotoxicity. With a 4. 1 mm trephine drill, two ostectomies circular were done, one in each parietal bone. On the right drilling a disc of poly (lactic L/D-acid ) was inserted, and on the left one it was filled by blood clot (control group). The animals were killed at the appropriate times (15, 30, 90 and 120 days after surgery), by inhalation of isoflurane. In the 20 operated animals the skull was removed and fixed in formalin 10%. The samples were subjected to decalcification and then to paraffinembedded and subjected to cuts of 6 microns in the transverse direction, at the portion of larger diameter discs. The slides obtained were subjected to histochemical technique of staining EH. To evaluate the genotoxicity, both femurs of each animal were removed and the contents of the bone marrow extracted directly on a slide with a drop of fetal calf serum, and mixed. It was made a smear with this material. The slides were dried, fixed in methanol and stained one section of each femur with Giemsa and the other with Acridine Orange. The results were subjected to statistical evaluation by analysis of variance (ANOVA). In histological evaluation, between 15 and 30 days, the bone defect was made clear in both groups, and it is not observed bone formation and resorption episodes or foreign body reaction. In periods of 90 and 120 days in the control group, it was noticed a new formation at the edges of the defect. In the experimental group, there was new bone formation at the edges of the defect and migrating below the site occupied by the disk and the absence of inflammatory infiltrate. Regarding to the evaluation of genotoxicity it was not detected a significant reduction (p <0. 05) in the frequency of EPC in relation to negative control or significant increase (p <0. 05) in the EPC with micronuclei. It can be concluded that the material used in this study is biocompatible and well tolerated by the tissues studied, and found negative for chromosomal mutagenicity when tested. / O objetivo do presente estudo foi avaliar a reação tecidual local, em calota craniana de ratos, frente à implantação de discos de poli (ácido L/D-láctico) e avaliar a sua toxicidade genética, pela indução de micronúcleos em eritrócitos policromáticos (EPC) na medula óssea de ratos. Foram utilizados 25 ratos Wistar, machos, com 200 e 300 gramas. 20 animais sofreram procedimento cirúrgicos e tiveram os discos implantados, e 5 animais receberam medicação pós-operatória da mesma maneira, servindo como grupo controle para genotoxicidade. Com uma broca trefina 4,1mm foram realizadas duas ostectomias circulares, uma em cada osso parietal. Na perfuração direita foi inserido um disco de poli(ácido L/D-láctico), e a do lado esquerdo foi preenchida por coágulo sanguíneo (grupo controle). Os animais foram eutanasiados nos tempos apropriados (15, 30, 90 e 120 dias após a cirurgia), por inalação de isoflurano. Nos 20 animais operados foi retirada a calota craniana e fixada em formalina tamponada a 10%. As amostras foram submetidas à descalcificação e após emblocados em parafina e submetidos a cortes de 6 μm, no sentido transversal, na porção de maior diâmetro dos discos. As lâminas obtidas foram submetidas à técnica histoquímica de coloração HE. Para avaliação da genotoxicidade, ambos os fêmures de cada animal foram removidos e o conteúdo da medula óssea extraído diretamente sobre uma lâmina com uma gota de soro bovino fetal, e homogeinizada. Com este material foi feito um esfregaço. As lâminas foram secas, fixadas em metanol e coradas uma lâmina de cada fêmur com Giemsa e a outra com Acridine Orange. Os resultados obtidos foram submetidos a avaliação estatística pela Análise de Variância (ANOVA). Na avaliação histológica, no período de 15 e 30 dias, em ambos os grupos o defeito ósseo foi bem evidenciado, não sendo observados neoformação óssea, episódios de reabsorção óssea nem reação de corpo estranho. Nos períodos de 90 e 120 dias, no grupo controle, observou-se neoformação nas bordas do defeito. No grupo experimental, houve neoformação óssea nas bordas do defeito e migrando abaixo do local ocupado pelo disco e ausência de infiltrado inflamatório. Quanto a avaliação de genotoxicidade, não foi detectada redução significativa (p < 0,05) da frequência de EPC em relação ao controle negativo nem aumento significante (p < 0,05) nos EPC com micronúcleos. Pode-se concluir que o material utilizado neste estudo é biocompatível e bem tolerado pelos tecidos estudados, sendo considerado negativo para mutagenicidade cromossômica no ensaio realizado.

Violence is a dreadful phenomenon spread throughout the world, resulting in unfortunate events that can ultimately cause death. It is known that some countries play a much worrying role in this scenario than others. Brazil is one of them. The present study has focused on identifying the use of cocaine within 105 postmortem cases arriving at the Institute of Legal Medicine of São Paulo (IML-SP) through analytic toxicological methods and latter applying genetic testing to see whether the presence of certain single nucleotide polymorphisms (SNPs) is more predominant within users rather than non-users, which would help to better understand one\'s susceptibility to abuse the drug. Both blood and hair samples have been analysed through ultra-performance liquid chromatography coupled to electrospray ionization tandem mass spectrometry (UPLC-ESI-MS/MS) in order to distinguish between recent or chronic cocaine use among violent individuals whose violence has ultimately leaded to their death. Two dilute-and-shoot methods have been validated and used for this purpose, and the final residue was analysed through the UPLC-ESIMS/ MS system. From the 105 postmortem cases, a rather high proportion of cocaine and its metabolites was found. A chronic use of the drug was denoted in 53% of the cases, which were positive for cocaine and benzoylecgonine, followed by 43% for norcocaine, 40% for cocaethylene and 13% for anhydroecgonine methyl ester, in hair. As for blood, reflecting the use of cocaine prior to death, 51% of the cases have shown to be positive for benzoylecgonine, followed by 41% for cocaine, 23% for cocaethylene and 20% for norcocaine. These findings suggest a probable association between the use of the drug and risky/violent behaviours. Genetic wise, a significant difference has been observed for SNP rs4263329 from the BCHE gene in its dominant model, with higher frequencies of the genotypes A/G and G/G seen in cocaine users rather than non-users (OR=8.91; 95%CI=1.58-50.21; &#961;=0.01). Likewise, also SNP rs6280 from the DRD3> gene presented a significant association in both its additive and dominant model, suggesting that the C allele may be playing a role in cocaine use as both genotypes T/C and C/C were significantly more frequent in users than non-users. This association was not lost when adjusted for covariants using logistic regression (OR=4.96; 95%CI=1.07; &#961;=0.04). Finally, a statistically significant association (&#961; = 0.003) was also encountered among individuals with both A/G and G/G genotypes within SNP rs4263329 and the use of cocaine HCl (f(A/G+G/G)=44.7%) versus crack-cocaine (f(A/G+G/G)=7.7%) and nonusers (f(A/G+G/G)=16.2%). In conclusion, this study has found significant associations within two SNPs related to cocaine use, however, due to several inherent limitations, these must be confirmed by further studies with a higher number of subjects and within a more controlled setting. Definite assumptions may not be made at this point and future researches are to be conducted. / A violência é um fenômeno aterrador espalhado por todo o mundo, resultando em eventos que podem, em última instância, causar a morte. Sabe-se que, em alguns países esse cenário é mais preocupante que em outros. O Brasil é um deles. O presente estudo teve como objetivo identificar o uso de cocaína em 105 casos postmortem provenientes do Instituto de Medicina Legal de São Paulo (IML-SP) por meio de métodos toxicológicos analíticos e posterior aplicação de testes genéticos para verificar se a presença de determinados polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) é mais predominante dentro dos usuários do que dos não usuários, o que explicaria uma possível suscetibilidade de um indivíduo ao abuso da droga. Amostras de sangue e cabelo foram analisadas através de cromatografia líquida de ultra-eficiência acoplada a espectrometria de massas e ionização por electrospray (UPLC-ESI-MS/MS) para distinguir entre uso recente ou crônico de cocaína entre indivíduos violentos cuja violência levou à sua morte. Para tal, dois métodos de extração baseados na técnica de \"dilute-and-shoot\" foram validados e utilizados para esse fim, e o resíduo final foi analisado através de um sistema UPLC-ESI-MS/MS. Dos 105 casos postmortem, foi encontrada uma proporção significativa de cocaína e seus produtos de biotransformação. O uso crônico da droga foi denotado em 53% dos casos, sendo estes positivos para cocaína e benzoilecgonina, seguidos de 43% para norcocaína, 40% para cocaetileno e 13% para anidroecgonina metil éster, no cabelo. Quanto ao sangue, refletindo o uso de cocaína antes da morte, 51% dos casos mostraram-se positivos para benzoilecgonina, seguido de 41% para cocaína, 23% para cocaetileno e 20% para norcocaína. Esses dados corroboram a hipótese provável da relação entre o uso da droga e comportamentos de risco/violentos. Quanto à genética, uma diferença significativa foi observada para o SNP rs4263329 do gene BCHE em seu modelo dominante, com maiores frequências dos genótipos A/G e G/G vistos em usuários de cocaína ao contrário de não usuários (OR=8,91; 95%IC=1,58-50,21; &#961;=0,01). Da mesma forma, também o SNP rs6280 do gene DRD3 apresentou uma associação significativa tanto no seu modelo aditivo quanto dominante, sugerindo que o alelo C pode estar desempenhando um papel no uso de cocaína, pois ambos os genótipos T/C e C/C foram significativamente mais frequentes nos usuários do que não usuários. Essa associação não foi perdida quando ajustada para co-variáveis usando regressão logística (OR=4,96; 95%IC=1,07; &#961;=0,04). Finalmente, uma associação estatisticamente significativa (&#961;=0,003) também foi encontrada entre indivíduos com ambos os genótipos A/G e G/G dentro do SNP rs4263329 e o uso de cocaína HCl (f(A/G + G/G)=44,7%) versus crack (f(A/G + G/G)=7,7%) e não usuários (f(A/G + G/G)=16,2%). Em conclusão, este estudo encontrou associações significativas em dois SNPs relacionados ao uso de cocaína, no entanto, devido a várias limitações inerentes, estas devem ser confirmadas por mais estudos com um maior número de indivíduos e dentro de um cenário mais controlado. Hipóteses definitivas não poderão ser feitas neste momento e futuras pesquisas devem ser conduzidas.

O chumbo (Pb) é um metal altamente tóxico no qual os sinais de intoxicação variam bastante ao considerar as diferenças interindividuais. Um dos principais mecanismos de toxicidade do Pb ocorre pela inibição da enzima ácido delta aminolevulínico desidratase (ALAD) no sistema hematopoiético. O Pb também desempenha um importante papel no desbalanço do estado redox, pois sabe-se que ele tem o potencial de aumentar a concentração de espécies reativas de oxigênio (EROS) e inibir enzimas antioxidantes, como por exemplo a glutationa peroxidase (GPx). No entanto, poucos estudos avaliaram estes parâmetros em população ocupacionalmente exposta brasileira. Assim, o presente estudo, objetiva estudar a correlação entre as concentrações de Pb no sangue (Pb-S) de trabalhadores de fábricas de bateria e as atividades das enzimas ALAD e GPx associados com os polimorfismos genéticos da ALAD e GPx. Para tal, foram utilizadas 278 amostras de sangue de trabalhadores expostos ao Pb. As determinações de Pb foram realizadas por espectrometria de massas com plasma acoplado indutivamente (ELAN DRCII Perkin- Elmer). As genotipagens dos polimorfismos genéticos da ALAD e da GPx foram realizadas pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em tempo real e as atividades das enzimas ALAD e GPx foram determinadas no sangue por espectrofotometria de UV/VIS. A média da concentração de Pb-S foi de 22,8 ± 14,7 ?g/dL. Foram observadas correlações negativas entre Pb-S e atividade da ALAD (rs -0,24 p<0,01) e Pb-S e atividade de GPx (rs -0,27 p<0,05). Também foi verificada correlação negativa entre a porcentagem de inibição da ALAD e a atividade de GPx (rs -0,21 p<0,01). Em relação aos polimorfismos genéticos, não observamos associação entre os genótipos do ALAD (? -0,19 P>0,05) e GPx (genótipo CT: ? -1,37 P>0,05; genótipo TT: ? -8,37 P>0,05) e a concentração de Pb-S. Não foram observadas associações entre o polimorfismo rs1800668 e a atividade de GPx (genótipo CT: ? -0,016 P>0,05; genótipo TT: ? -0,004 P>0,05). No entanto, foi constatada uma associação entre o genótipo ALAD 1-1 do polimorfismo rs1800435 e a atividade da enzima ALAD (? 3,5 P<0,05). Neste sentido, os resultados deste estudo mostram que o genótipo ALAD 1-1 do polimorfismo rs1800435 do gene ALAD está associado a uma maior atividade da enzima ALAD nos indivíduos expostos ao Pb. Além disso, o polimorfismo rs1800668, localizado no gene que codifica a enzima GPx, não modula a atividade desta enzima nos indivíduos expostos ao metal. Ambos os polimorfismos dos genes ALAD e GPx parecem não influenciar nas concentrações de Pb-S na população estudada. / Lead (Pb) is a highly toxic metal which signs of intoxication vary greatly when considering the interindividual differences. One of the main mechanism of toxicity of Pb is due to inhibition of the enzyme acid delta aminolevulinic dehydratase (ALAD) in the hematopoietic system. Pb also plays an important role in the redox state of unbalance, since it is known that it has the potential of increasing the concentrations of reactive oxygen species (ROS) and inhibit antioxidant enzymes such as glutathione peroxidase (GPx). However, few studies have evaluated these parameters in Brazilian population occupationally exposed. Thus, the present study aims to study the correlation between the concentrations of Pb in the blood (B-Pb) of workers of battery factories and the activities of ALAD and GPx enzymes associated with genetic polymorphisms in ALAD and GPx. Then, blood samples of 278 workers exposed to Pb were collected. Pb was measured by Inductively Coupled Plasma-Mass Spectrometry (Perkin-Elmer ELAN DRCII). The genotyping of genetic polymorphisms of ALAD and GPx was performed by Real-Time Polymerase Chain Reaction (PCR) and activity of ALAD and GPx enzymes in the blood was determined by spectrophotometry UV / VIS. The mean concentration of B-Pb was 22.81 ± 14.73 mg / dL. Negative correlation was found between B-Pb and ALAD activity (rs -0.24 p < 0.01) and B-Pb and GPx activity (rs -0.27 p < 0.05). There was also a negative correlation between the percentage of inhibition of ALAD and GPx activity (rs -0.21 p < 0.01). Considering the genetic polymorphisms, no association between ALAD genotypes (? -0.19 P < 0.05) and GPx (CT genotype: ? -1.37 P > 0.05, TT genotype : ? -8.37 P > 0.05 ) and the concentration of B-Pb. No association between rs1800668 polymorphism and GPx activity (CT genotype: ? -0.016 P > 0.05, TT genotype : ? -0.004 P > 0.05). However an association was found between ALAD 1-1 rs1800435 genotype and ALAD enzyme activity (? 3.5 P < 0.05). Accordingly, the results of this study show that the ALAD 1-1 genotype of rs1800435 polymorphism in ALAD gene is associated with increased activity of ALAD enzyme in individuals exposed to Pb. Furthermore the rs1800668 polymorphism located in a gene encoding the enzyme GPx does not modulate the activity of this enzyme in individuals exposed to the metal. Both polymorphisms of ALAD and GPx genes seem to have no influence in the concentrations of B-Pb in the population studied.

O chumbo (Pb) é um metal altamente tóxico no qual os sinais de intoxicação variam bastante ao considerar as diferenças interindividuais. Um dos principais mecanismos de toxicidade do Pb ocorre pela inibição da enzima ácido delta aminolevulínico desidratase (ALAD) no sistema hematopoiético. O Pb também desempenha um importante papel no desbalanço do estado redox, pois sabe-se que ele tem o potencial de aumentar a concentração de espécies reativas de oxigênio (EROS) e inibir enzimas antioxidantes, como por exemplo a glutationa peroxidase (GPx). No entanto, poucos estudos avaliaram estes parâmetros em população ocupacionalmente exposta brasileira. Assim, o presente estudo, objetiva estudar a correlação entre as concentrações de Pb no sangue (Pb-S) de trabalhadores de fábricas de bateria e as atividades das enzimas ALAD e GPx associados com os polimorfismos genéticos da ALAD e GPx. Para tal, foram utilizadas 278 amostras de sangue de trabalhadores expostos ao Pb. As determinações de Pb foram realizadas por espectrometria de massas com plasma acoplado indutivamente (ELAN DRCII Perkin- Elmer). As genotipagens dos polimorfismos genéticos da ALAD e da GPx foram realizadas pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em tempo real e as atividades das enzimas ALAD e GPx foram determinadas no sangue por espectrofotometria de UV/VIS. A média da concentração de Pb-S foi de 22,8 ± 14,7 ?g/dL. Foram observadas correlações negativas entre Pb-S e atividade da ALAD (rs -0,24 p<0,01) e Pb-S e atividade de GPx (rs -0,27 p<0,05). Também foi verificada correlação negativa entre a porcentagem de inibição da ALAD e a atividade de GPx (rs -0,21 p<0,01). Em relação aos polimorfismos genéticos, não observamos associação entre os genótipos do ALAD (? -0,19 P>0,05) e GPx (genótipo CT: ? -1,37 P>0,05; genótipo TT: ? -8,37 P>0,05) e a concentração de Pb-S. Não foram observadas associações entre o polimorfismo rs1800668 e a atividade de GPx (genótipo CT: ? -0,016 P>0,05; genótipo TT: ? -0,004 P>0,05). No entanto, foi constatada uma associação entre o genótipo ALAD 1-1 do polimorfismo rs1800435 e a atividade da enzima ALAD (? 3,5 P<0,05). Neste sentido, os resultados deste estudo mostram que o genótipo ALAD 1-1 do polimorfismo rs1800435 do gene ALAD está associado a uma maior atividade da enzima ALAD nos indivíduos expostos ao Pb. Além disso, o polimorfismo rs1800668, localizado no gene que codifica a enzima GPx, não modula a atividade desta enzima nos indivíduos expostos ao metal. Ambos os polimorfismos dos genes ALAD e GPx parecem não influenciar nas concentrações de Pb-S na população estudada. / Lead (Pb) is a highly toxic metal which signs of intoxication vary greatly when considering the interindividual differences. One of the main mechanism of toxicity of Pb is due to inhibition of the enzyme acid delta aminolevulinic dehydratase (ALAD) in the hematopoietic system. Pb also plays an important role in the redox state of unbalance, since it is known that it has the potential of increasing the concentrations of reactive oxygen species (ROS) and inhibit antioxidant enzymes such as glutathione peroxidase (GPx). However, few studies have evaluated these parameters in Brazilian population occupationally exposed. Thus, the present study aims to study the correlation between the concentrations of Pb in the blood (B-Pb) of workers of battery factories and the activities of ALAD and GPx enzymes associated with genetic polymorphisms in ALAD and GPx. Then, blood samples of 278 workers exposed to Pb were collected. Pb was measured by Inductively Coupled Plasma-Mass Spectrometry (Perkin-Elmer ELAN DRCII). The genotyping of genetic polymorphisms of ALAD and GPx was performed by Real-Time Polymerase Chain Reaction (PCR) and activity of ALAD and GPx enzymes in the blood was determined by spectrophotometry UV / VIS. The mean concentration of B-Pb was 22.81 ± 14.73 mg / dL. Negative correlation was found between B-Pb and ALAD activity (rs -0.24 p < 0.01) and B-Pb and GPx activity (rs -0.27 p < 0.05). There was also a negative correlation between the percentage of inhibition of ALAD and GPx activity (rs -0.21 p < 0.01). Considering the genetic polymorphisms, no association between ALAD genotypes (? -0.19 P < 0.05) and GPx (CT genotype: ? -1.37 P > 0.05, TT genotype : ? -8.37 P > 0.05 ) and the concentration of B-Pb. No association between rs1800668 polymorphism and GPx activity (CT genotype: ? -0.016 P > 0.05, TT genotype : ? -0.004 P > 0.05). However an association was found between ALAD 1-1 rs1800435 genotype and ALAD enzyme activity (? 3.5 P < 0.05). Accordingly, the results of this study show that the ALAD 1-1 genotype of rs1800435 polymorphism in ALAD gene is associated with increased activity of ALAD enzyme in individuals exposed to Pb. Furthermore the rs1800668 polymorphism located in a gene encoding the enzyme GPx does not modulate the activity of this enzyme in individuals exposed to the metal. Both polymorphisms of ALAD and GPx genes seem to have no influence in the concentrations of B-Pb in the population studied.