Submitted by Ginamara Lima (ginaj@pucrs.br) on 2013-04-30T21:08:33Z No. of bitstreams: 1 447511.pdf: 1543889 bytes, checksum: f32bae75cdf85ab505b6c186240b2db8 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-30T21:08:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 447511.pdf: 1543889 bytes, checksum: f32bae75cdf85ab505b6c186240b2db8 (MD5) / Foram investigados os efeitos citotóxicos e genotóxicos da solda de prata e da soldagem a laser utilizadas em Ortodontia. Para tanto, avaliaram-se, nas linhagens celulares HepG2 e HOK, a citotoxicidade (redução MTT) e a genotoxicidade (cometa alcalino ou associado a enzimas de reparo e citoma de micronúcleos) de anéis contendo ou não uniões com solda de prata. Quantificaram-se, empregando espectrofotometria de absorção atômica, os íons metálicos liberados no meio de cultura. Também foram investigados os efeitos sobre o DNA em células da mucosa bucal de pacientes em tratamento com aparelhos auxiliares do tipo Hyrax contendo oito uniões soldadas com prata, empregando o ensaio cometa em células bucais e o citoma bucal de micronúcleos. Por fim, a citotoxicidade in vitro de anéis contendo ou não uniões soldadas a prata ou a laser foi investigada e comparada mediante o emprego de leveduras Saccharomyces cerevisiae. Os dados obtidos permitiram concluir que anéis ortodônticos sofreram corrosão e liberaram íons metálicos em condições laboratoriais, sendo inclusive detectada a presença de cádmio nas amostras. Os anéis contendo solda de prata foram capazes de causar importantes e significativos efeitos citotóxicos e genotóxicos em células de mamíferos em condições in vitro. Os efeitos genotóxicos observados estão, em parte, relacionados a efeitos diretos, assim como a efeitos indiretos, tais como danos oxidativos. Apesar do efeito tóxico observado in vitro, em humanos a resposta de toxicidade a aparelhos contendo uniões soldadas com liga de prata apresentou menor intensidade, sendo identificada genotoxicidade também in vivo. A soldagem a laser se mostrou menos citotóxica que a soldagem com liga de prata em condições in vitro, devendo ser melhor investigada por se tratar de uma alternativa promissora para a união de metais em Ortodontia. / In the present study, the cytotoxic and genotoxic effects of the silver solder and laser soldering used in Orthodontics were evaluated. For this, HepG2 e HOK cell lines were employed to evaluate the cytotoxicity (MTT reduction) and the genotoxicity (comet assay and cytokinesis block micronucleus cytome assay) of orthodontic bands containing or not silver soldered joints. Ionic metal release in the culture medium was verified by means of atomic absorption espectrophotometry. DNA effects on buccal mucosal cells of patients treated with Hyrax type expander appliances containing eight silver soldered joints were also evaluated through the buccal comet assay and the buccal micronucleus cytome assay. The in vitro cytotoxicity of orthodontic bands containing or not silver soldered or laser soldered joints was investigated and compared using the Saccharomyces cerevisiae model. Data obtained indicated that orthodontic bands suffer corrosion and are able to release ions to culture medium, being cadmium also detected in the samples evaluated. Silver soldered bands cause significant cytotoxic and genotoxic effects in mammal cells under in vitro conditions. The genotoxic effects are in part related to direct toxic effects and in part related to oxidative DNA damage. In humans, less intense genotoxic effects were observed. Laser soldering was less cytotoxic than silver soldering in in vitro conditions and should be more investigated since it seems to be a promising alternative to connect wires in Orthodontics.

Submitted by Ginamara Lima (ginaj@pucrs.br) on 2012-05-04T12:42:51Z No. of bitstreams: 1 437942.pdf: 14499337 bytes, checksum: 95040a95e0a346b6d9760a8fda191ce6 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-04T12:42:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 437942.pdf: 14499337 bytes, checksum: 95040a95e0a346b6d9760a8fda191ce6 (MD5) / Este estudo teve como objetivo avaliar a citotoxicidade e bioatividade do cimento de ionômero de vidro modificado com carbonato de cálcio de conchas. Para os testes de toxicidade celular foi utilizando a Saccharomyces cerevisiae como organismo modelo. A indução de citotoxicidade foi avaliada por dois testes diferentes usando a S. Cerevisiae cepa selvagem wild-type FF18733: (1) a sobrevivência da célula de levedura e (2) formação de colônias petite (mutantes respiratórios). Para os testes de bioatividade foi avaliada a variação de peso das amostras e análise de deposição de hidroxiapatita pela MEV e EDS após imersão em solução simuladora de plasma sangüíneo. Os resultados dos testes de sobrevivência mostraram que as diferentes concentrações de carbonato de cálcio adicionado ao CIV (1%, 5% e 10% em peso) induziram uma ligeira perda de viabilidade celular em S. cerevisiae em relação ao controle negativo, porém não foi o suficiente para ser considerado como uma indução de toxicidade significativa. Em relação às colônias petite, não foi observada a indução de formação de mutantes respiratórios em qualquer uma das concentrações testadas, indicando que o CIV modificado não induziu estresse oxidativo em células de S. cerevisiae. Na avaliação da bioatividade, os resultados mostraram que após a imersão todos os grupos testados apresentaram uma diminuição no peso das amostras, que pode ser atribuído à dissolução do cimento de ionômero de vidro. Na quarta semana de imersão houve uma variação significativa na percentual médio de peso para todos os grupos. A análise de MEV mostrou uma ligeira deposição de hidroxiapatita sobre a superfície dos grupos com a adição de pó de conchas em comparação ao grupo controle. / This study aimed to evaluate the cytotoxicity and bioactivity of the glass ionomer cement modified with calcium carbonate shells. For testing cell toxicity was using Saccharomyces cerevisiae as a model organism. The induction of cytotoxicity was evaluated by two different tests using wild-type strain FF18733 of S. cerevisiae: (1) yeast cell survival and (2) formation of petite colonies (respiratory mutants). For tests of bioactivity was evaluated weight change of samples and analysis of hydroxyapatite deposition by SEM and EDS after immersion in simulated blood plasma. The results of survival tests showed that different concentrations of calcium carbonate added to the GIC (1%, 5% and 10% by weight) induced a slight loss of cell viability in S. cerevisiae in relation to the negative control, but it was not enough to be considered as a significant induction of toxicity. In relation to the petite colonies, there was no induction of mutants respiratory formation in any of the concentrations tested, indicating that the GIC did not induce altered oxidative stress in cells of S. cerevisiae. In the evaluation of bioactivity, the results showed that after immersion all groups tested showed a decrease in weight of the samples, which can be attributed to the dissolution of glass ionomer cement. In the fourth week of immersion there was a significant variation in the average percentage of weight for all groups. The SEM analysis showed a slight deposition of hydroxyapatite on the surface of the groups with the addition of powdered shells compared to the control group.

Orientador: Tomomasa Yano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias / Made available in DSpace on 2018-08-13T16:19:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lopes_AnaCarolinaAmaral_M.pdf: 3074203 bytes, checksum: 0f5613fc1b5f356261b1158697b4d8c1 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Neste estudo foram analisadas 20 amostras de Aeromonas caviae, isoladas no Estado de Pernambuco, de fezes diarréicas, quanto à produção de fatores de virulência. Os isolados bacterianos apresentaram atividade hemolítica quando crescidos em placas de ágar sangue, porém quando analisados os sobrenadantes de cultura destas bactérias, a presença de hemolisinas não foi detectada. Foram observadas entre as amostras as presenças de enterotoxinas em camundongos recém-nascidos e de citotoxinas em células Vero, HeLa e CaCo-2. Essas atividades biológicas foram mantidas após aquecimento à 100ºC por 30 minutos, mostrando ser termo-estável. Ensaios de viabilidade celular conduzidos com células Vero demonstraram, no ensaio com vermelho neutro, uma redução de 50% após 6 horas de exposição dos sobrenadantes de cultura. Nos ensaios com MTT e LDH, as reduções na viabilidade apresentaram-se após 4 e 2 horas respectivamente. O desarranjo do citoesqueleto foi verificado em ensaios onde a faloidina conjugada com fluoresceína (FITC) foi empregada, revelando que os sobrenadantes de cultura provocaram contração e desordenamento dos filamentos de actina. Através de PCR foi verificado que as amostras de A. caviae não apresentaram amplificação para o gene Aer, responsável pela codificação da aerolisina, uma toxina termo-lábil de Aeromonas, o que demonstra que a toxina termoestável e a aerolisina são fatores de virulência diferentes. / Abstract: In this study we worked with 20 Aeromonas caviae samples isolated in the state of Pernambuco and associated to diarrheic stools. The samples were analysed for the production of virulence factors, as the bacterial isolates showed haemolytic activity when grown on blood agar plates, but when analyzed the culture supernatants, the presence of haemolysin wasn't detected. The presence of enterotoxins were observed among the samples by suckling mouse test and cytotoxins on Vero cells, HeLa and CaCo-2. The biological activities were kept after the heat treatment at 100ºC for 30 minutes, showing it to be thermo stable. Cell viability tests conducted with neutral red dye on Vero cells demonstrated a 50% reduction on cell viability after 6 hours of toxin exposure, what was confirmed by the MTT and LDH assays, where the cell viability reduction was presented after 4 and 2 hours respectively. The cytoskeleton disorders provoked by the enterotoxin were observed in trials where the fluorescein conjugated phalloidine (FITC) was used, showing that the culture supernatants caused contraction and lack of actin filaments. Tests to "aerolysin" gene detection were performed with the samples, but the amplification of this gene has not been verified. According to these results and by the fact that aerolysin is a thermo labile toxin, it shows that aerolysin and the thermo stable toxin produced by A. caviae are different. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Memoria para optar al título de químico farmacéutico / El cáncer oral es una enfermedad con gran impacto a nivel mundial, de hecho, ocupa el sexto lugar en el mundo en la categoría de canceres más frecuentes en hombres. En sí, el cáncer es una enfermedad en la cual las células del organismo experimentan un desequilibrio entre la división y la muerte celular, en donde se produce un crecimiento descontrolado de estas células que procede de una serie de alteraciones genéticas que les permiten multiplicarse fuera de contexto del desarrollo normal del tejido. Estas células cancerosas presentan características llamativas como potencial replicativo ilimitado, angiogénesis sostenida, evasión de apoptosis, autosuficiencia en señales de crecimiento, insensibilidad a señales anti-crecimiento, invasividad y metástasis. Todas estas mutaciones otorgan ventajas selectivas que finalizan en la progresión de la enfermedad; aunque también algunas características son esencialmente relevantes en la búsqueda de nuevas herramientas terapéuticas: un mayor potencial de transmembrana mitocondrial debido a modificaciones en la composición interna de esta, actividad altamente glicolítico y reducción en la masa mitocondrial. Por esto, la mitocondria es una diana farmacológica atractiva para la búsqueda de nuevas moléculas que permitan aumentar la eficacia y selectividad de los tratamientos. Nosotros hemos utilizado como agentes citotóxicos derivados de ácido 3,4,5-tri-hidroxibenzoico vinculados a trifenilfosfonios, ya que existen datos que afirman que los compuestos trifenilfosfonio pueden conducir al farmacóforo a la mitocondria. Los resultados de estos experimentos han sido exitosos en cuanto a citotoxicidad y selectividad. También se pudo establecer que estos compuestos generan un efecto como desacoplantes mitocondriales. Hemos probado estos derivados como sales de bromuro sobre líneas de células tumorales CAL-27 y células normales. Ensayo de viabilidad por MTT fue utilizado para medir la citotoxicidad a través de los respectivos IC50, el contenido de ATP fue medido por luminiscencia y la muerte por apoptosis fue determinada por citometría de flujo. Los resultados indican que los compuestos exhiben una mayor citotoxicidad en la línea celular que en las células normales. Además, los compuestos mostraron un efecto de desacoplante, gatillando un decrecimiento en el potencial de tranmembrana, caída en los niveles de ATP e inducen la apoptosis en un rango de concentración micromolar. Los resultados son prometedores en términos de citotoxicidad y selectividad, ofreciendo una oportunidad farmacológica para el tratamiento del cáncer oral / Oral cancer is a disease with hight impact worldwide, in fact, ranks sixth in the world in the category of most common cancers in men. As such, cancer is a disease in which cells undergo an imbalance between cell division and death. The uncontrolled growth of these cells come from a series of genetic alterations that allow them to multiply occurs out of context Normal tissue development. These cancer cells have striking features as unlimited replicative potential, sustained angiogenesis, evasion of apoptosis, self-sufficiency in growth signals, insensitivity to anti-growth signals, invasiveness and metastasis. All these features provide selective advantages ending in the progression disease. Some of these functions are essentially relevant in the search for new therapeutic, for example, increased mitochondrial transmembrane potential, highly glycolytic activity and reduced mitochondrial mass tools. This characteristic makes mitochondrial an attractive drug target for the search for new molecules that increase the efficiency and selectivity of the treatments. It was used as cytotoxic agents derived from mono and/or poly-hydroxybenzoic acids attached to the triphenylphosphonium group, as there is evidence that this group can lead to pharmacophore to the mitochondria. The results of these experiments have been successful in terms of cytotoxicity and selectivity. It could also establish that these compounds generate an effect as uncoupling. We have tested these derivatives as bromide salts on tumor cell lines CAL-27 and normal cells. MTT viability assay was used to measured cytotoxicity by calculating the respective IC50, ATP content through luminescence, mitochondrial transmembrane potential by fluorescence and induction of apoptotic death was determined by flow cytometry. The results indicate that the compounds exhibit enhanced cytotoxicity in the tumor cell line than normal cells. Furthermore, the compounds showed an uncoupling effect, and also triggered decreased transmembrane potential, falling ATP levels and induce apoptosis in a micromolar range of concentration. The results are promising in terms of cytotoxicity and selectivity and offer a pharmacological opportunity of treatment in oral cancer

Orientador: Tomomasa Yano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T08:32:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_Luciana_M.pdf: 438742 bytes, checksum: a5f9e3b963ae7457238c742a983b8733 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Aeromonas são bacilos Gram-negativos, anaeróbios facultativos, ermentadores, oxidase e catalase positivos, ubíquos em ambientes aquáticos e capazes de causar uma variedade de doenças em humanos, principalmente gastroenterite. As espécies mais comumente associadas com infecções em humanos são A. hydrophila, A.caviae e A. veronii biovar sobria. Entre os vários fatores de virulência descritos, Aerolisina é considerada um dos principais fatores de virulência do genero Aeromonas, sendo esta além de provocar a lise em eritrócitos de carneiro tem atividade enterotóxica. Recentemente foi descrito pelo nosso uma enterotoxina citotóxica denominada Fator Citotóxico Vacuolizante (VCF), diferente de Aerolisina biologica e molecularmente, no sobrenadante da cultura de Aeromonas veronni biovar sobria, isoladas de casos clinicos. O VCF purificado apresentou atividade citotóxica em linhagens de células tumorais humanas tais como, HEp-2, Caco-2, HeLa e NCI-H 292. No ensaio de efeito anti-proliferativo o VCF apresentou potencial atividade de inibição de crescimento de células tumorais NCI-ADR/RES, uma linhagem celular com resistência a múltiplas drogas de quimioterapia e K562, uma linhagem de células leucêmicas. Estes resultados sugerem que o VCF apresenta potencial toxigênico sobre células tumorais de origem humana / Abstract: Aeromonas is a Gram-negative, facultative anaerobic rod, fermenting, oxidase and catalase positive ubiquitous in fresh and brackish water and capable of causing several human diseases, specially gastroenteritis. The most important pathogens species associated with human infections are A. hydrophila, A. caviae, and A. veronii biovar sobria. Between the several virulence factors described, Aerolisin is considered as one of the main virulence factors of the Aeromonas genus, this one causing lysis in lamb erythrocytes and has an enterotoxic activity. Was recently described by our a citotoxic enterotoxin named as Vacuolating Cytotoxic Factor (VCF), differing biologicaly and molecularly from the Aerolisin, at the supernatant of a culture of A. veronii biovar sobria, isolated from clinic cases. The purified VCF presented citotoxic activitiy on lineages of human tumorous cells such as , HEp-2, Caco-2, HeLa and NCI-H 292. On the test antiproliferative effect the VCF presented a potencial activity of growth inhibition on tumour cells NCI-ADR/RES, a cellular lineage with resistance to multiple chemotherapy drugs and K562, a lineage of leukemic cells. This results sugests that the VCF presents toxigenic potencial over human tumorous cells / Mestrado / Clinica Medica / Mestra em Clínica Médica

Orientador: Tomomasa Yano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T12:09:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tibo_LuizHenriqueSoares_M.pdf: 5939486 bytes, checksum: b93497f16ad2e0392928acc05650e417 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: O sobrenadante de cultivo de Escherichia coli isolada de pacientes com sepse (SEPEC) causou alongamento e perda de junção intercelular em células endoteliais de veia umbilical humana (HUVEC) em menos de 18 horas de incubação. O fator citotóxico envolvido foi purificado em sistema de cromatografia líquida (FPLC) a partir do sobrenadante da amostra SEPEC 15 e, através de eletroforese desnaturante (SDS-PAGE), foi observado que este fator tem massa molecular de aproximadamente 150kDa e é formado por pelo menos duas subunidades. Ensaios de transcitose em Transwell e a monitoração da permeabilidade de monocamada de células HUVEC, por meio de medições da resistência elétrica transendotelial (TEER), indicaram que este fator citotóxico auxilia a passagem de SEPEC através de monocamada de células HUVEC, cultivadas em insertos Transwell, no período de 30 minutos. Porém, quando incubadas com a citotoxina por mais de 30 minutos, as células HUVEC morrem devido à citotoxicidade do fator citotóxico. Estes resultados sugerem que esta citotoxina pode ser um importante fator de virulência de SEPEC, auxiliando o acesso deste patógeno à corrente sanguínea / Abstract: The culture supernatant of Escherichia coli isolated from patients with sepsis (SEPEC) caused elongation and loss of intercellular junction in endothelial cells of human umbilical vein (HUVEC) in less than 18 hours of incubation. The cytotoxic factor involved was purified by liquid chromatography system (FPLC) from the SEPEC 15 sample supernatant and, by denaturing electrophoresis (SDS-PAGE), it was found that this factor has a molecular mass of approximately 150kDa and is formed by the least two subunits. Transwell Transcytosis assays and monitoring the permeability of HUVEC monolayer by measurements of transendothelial electrical resistance (TEER) indicated that this cytotoxic factor helps SEPEC passing through HUVEC monolayer cells cultured in Transwell inserts, in a 30 minutes period. However, when incubated with cytotoxin for more than 30 minutes, the HUVEC cells die due to the cytotoxicity of the cytotoxic factor. These results suggest that this cytotoxin can be an important virulence factor of SEPEC, assisting this pathogen access to the bloodstream / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Tesis presentada a la Universidad de Chile para optar al Grado de Doctor en Farmacología / La mitocondria ha sido recientemente reconocida como potencial blanco molecular en el tratamiento del cáncer, dado que exhibe un potencial de transmembrana (Ψm) significativamente mayor en células tumorales que en células normales y por tanto sería más susceptible de ser atacada con cationes lipofílicos deslocalizados con trifenilfosfonio (TPP+). Resultados previos de nuestro laboratorio mostraron que derivados TPP+ del ácido gálico son citotóxicos y eficaces desacoplantes de la generación de Ψm en células de cáncer de mama de ratón (TA3/Ha). Con el objetivo de incrementar la eficiencia y la eficacia citotóxica, se sintetizaron nuevos derivados TPP+ de los ácidos gentísico (GA) y protocatecuico (PCA), y se evaluó su potencial citotoxicidad en varias líneas celulares humanas de cáncer de mama, que difieren tanto en su expresión de receptores hormonales y de factores de crecimiento, como en su metabolismo basal. Las líneas celulares utilizadas representan además 4 subtipos distintos de CM: Luminal A (MCF-7; ER+/HER2/neu-), Luminal B (MDA-MB-361 y BT-474; ER+/HER2/neu+), HER2/neu sobreexpresado (AU565; ER-/HER2/neu+) y triple negativo (MDA-MB-231; ER-/HER2/neu-). Los resultados muestran que GA-TPP+ y PCA-TPP+ poseen una alta potencia citotóxica en todas las líneas celulares tumorales ensayadas, y que dicho efecto es significativamente menor en la línea celular MCF 10F de epitelio mamario humano normal. Se observó, sin embargo, que algunas líneas celulares mostraron leves diferencias en su sensibilidad (posiblemente dadas por su capacidad de activar vías metabólicas alternativas o por su mayor expresión de transportadores dependientes de ATP). Se demostró además que ambos compuestos son capaces de incrementar el consumo de oxígeno celular, desacoplando la fosforilación oxidativa e induciendo una importante pérdida de Ψm, junto con un incremento significativo en el estrés oxidativo celular y una caída en la razón GSH/GSSG, tanto en células altamente oxidativas como en aquellas preferentemente glicolíticas. Ambos derivados indujeron, además, una caída leve de ATP, la cual fue exacerbada tras la co-incubación con inhibidores de AMPK o adenilato quinasa. Esto último sugiere que ambas enzimas podrían activarse como respuesta a la acción de los compuestos a nivel mitocondrial. Adicionalmente, se observó que ambos compuestos incrementan la biogénesis mitocondrial, lo que podría representar un mecanismo compensatorio alternativo frente al efecto de los ácidos unidos a TPP+. Todos los efectos antes mencionados desencadenarían la activación de la muerte celular apoptótica. Finalmente, se demostró que PCA-TPP+ y GA-TPP+ son capaces de inhibir de manera importante la migración de células metastásicas de cáncer de mama humano. En base a nuestros resultados, postulamos que GA-TPP+ y PCA-TPP+ alteran de manera importante el funcionamiento mitocondrial, y que tal efecto podría subyacer su citotoxicidad selectiva frente a células de cáncer de mama. Lo anterior nos permite afirmar que ambos compuestos presentan un interesante potencial como posibles agentes farmacológicos anti-tumorales, e invita a continuar la investigación en torno a su efecto citotóxico selectivo en modelos animales de cáncer mamario / Mitochondria has been recently acknowledged as a potential molecular target in the treatment of cancer, especially considering that such organelle exhibits a significantly higher transmembrane potential (Ψm) in cancer cells than in normal cells, and is thus more susceptible to be targeted with lipophilic delocalized cations such as triphenylphosphonium (TPP+) derivatives. Previous work conducted by our laboratory has shown that TPP+-derivatives of gallic acid were cytotoxic and effective uncouplers of the Ψm generation in TA3/Ha mouse breast cancer cells. Therefore, and aiming to further expand our knowledge on the possible mechanisms underlying the cytotoxic effect of TPP+ derivatives, gentisic acid (GA) and protocatechuic acid (PCA), both linked to the TPP+ moiety, were evaluated as potential cytotoxic agents in several human breast cancer cell lines, that differ primarily in their expression of estrogen and epidermal growth factor receptors and in their metabolic profile. In addition, the cell lines represent the four clinical subtypes of breast cancer: Luminal A (MCF-7; ER+/HER2/neu-), Luminal B (MDA-MB-361 y BT-474; ER+/HER2/neu+), HER2/neu overexpressed (AU565; ER-/HER2/neu+) and triple negative (MDA-MB-231; ER-/HER2/neu-). Results obtained show that GA-TPP+ and PCA-TPP+ are highly cytotoxic to all tumoral cell lines tested, and that such effect is significantly lower in the normal human breast epithelial cell line MCF 10F. It was observed, nonetheless, that some cell lines showed minor differences in their sensitivity towards the cytotoxic effect (possibly due to their ability to activate alternative metabolic pathways or to their higher expression of ATP-dependent transporters). Additionally, GA-TPP+ and PCA-TPP+ were shown to increase oxygen consumption, uncoupling oxidative phosphorylation and inducing a significant loss of Ψm, together with an increase in cellular oxidative stress and a drop in the GSH/GSSG ratio, both in highly oxidative and highly glycolytic human breast cancer cells. Moreover, both derivatives were able to induce a minor drop in ATP, which was exacerbated upon the co-incubation with inhibitors of either AMPK or adenylate kinase. The latter suggests that the activation of both enzymes could represent a compensatory mechanism in response to the mitochondrial effect of TPP+ derivatives. In the same line, it was shown that GA-TPP+ and PCA-TPP+ are able to enhance mitochondrial biogenesis, an event that could represent another compensatory mechanism against the damage induced by both compounds. All the effects mentioned above would eventually trigger the activation of apoptotic cell death, evidenced as an increase in annexin V-staining. Finally, we demonstrated that both acids linked to TPP+ strongly inhibit the migration of highly metastatic breast cancer cells. Based on our results, we postulate that the GA-TPP+ and PCA-TPP+ derivatives are able to strongly alter mitochondrial functioning, and that such effect would underlie their selective cytotoxicity against cells that belong to different clinical subtypes of breast cancer. Such contention allows us to postulate GA-TPP+ and PCA-TPP+ as molecules with pharmacological potential in breast cancer treatment, and warrants future research regarding their Cytotoxicity and selectivity in “in vivo” breast cancer models

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-09-04T19:23:58Z No. of bitstreams: 1 474609 - Texto Completo.pdf: 859580 bytes, checksum: cb3a065e3f91d18ed57ee2c9c80a2a6f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-09-04T19:23:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 474609 - Texto Completo.pdf: 859580 bytes, checksum: cb3a065e3f91d18ed57ee2c9c80a2a6f (MD5) Previous issue date: 2015-06-17 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / A systematic review was performed on the cytotoxic and genotoxic effects of silver solder alloys in orthodontics. The search was conducted through medical databases, PubMed, EMBASE, Web of Science and Cochrane Library. The search of gray literature included the annals of the meetings of the Brazilian Society for Dental Research (SBPqO) and of the American Association of Orthodontists (AAO). The articles found were submitted to selection criteria and eligibility by two independent blind researchers. Afterwards, a manual search was conducted on articles?s references and study data were extracted by standardized forms. Sixty-four out of 76 articles were excluded because they did not reach the eligibility criteria. The remaining 12 articles and 3 other raised from manual search were included in this study. Two articles found on gray literature were repeated, though excluded. The level of agreement between researchers was adequate in the selection criteria (kappa = 0.916) and very precise for the eligibility (kappa = 1). As a conclusion of the systematic review, the silver solder alloy may cause cytotoxic, mutagenic and genotoxic effects when applied on orthodontic treatment. / Foi realizada uma revis?o sistem?tica dos efeitos citot?xicos e genot?xicos das ligas de solda de prata em Ortodontia. Para tanto, foi efetuada uma busca sistem?tica nas bases de dados PubMed, EMBASE, Web of Science e Biblioteca Cochrane. Foi pesquisado na literatura cinza os anais da Sociedade Brasileira de Pesquisa Odontol?gica (SBPqO) e os encontros anuais da American Association of Orthodontists (AAO). Os artigos encontrados foram submetidos a um crit?rio de sele??o e elegibilidade por dois pesquisadores de maneira cega e independente. Ap?s a sele??o dos estudos, uma busca manual foi realizada nas refer?ncias destes e foram extra?dos os dados dos estudos atrav?s de fichas padronizadas. Foram encontrados no total 76 artigos. Destes, 64 foram exclu?dos, pois n?o preencheram os crit?rios de elegibilidade. Os 12 estudos remanescentes foram selecionados para o presente trabalho. Al?m disso, outros tr?s artigos foram inclu?dos atrav?s da busca manual. Dois artigos encontrados na literatura cinza foram exclu?dos, pois eram repetidos. O n?vel de concord?ncia entre os pesquisadores na sele??o dos estudos foi considerado adequado (kappa=0,916) e para a elegibilidade dos estudos foi muito preciso (kappa=1). Ap?s avalia??o dos dados extra?dos concluiu-se que ligas de solda de prata podem provocar efeitos citot?xicos, genot?xicos e mutag?nicos.

Orientador: Tomomasa Yano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-11T07:05:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kota_DanielJiro_M.pdf: 555074 bytes, checksum: 910a5d4735f12d01edac8766de74e9c5 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A bactéria Enterobacter cloacae tem se destacado como importante agente de infecção hospitalar, muitas vezes levando ao óbito de pacientes imunodeprimidos. Estudando as propriedades de virulência desta bactéria em nosso laboratório, foi detectado que 18% das amostras estudadas demonstraram atividade citotóxica sobre células Vero. A citotoxina, de peso molecular de 100 KDa, foi purificada da amostra com maior atividade citotóxica (118.9) por cromatografia de troca iônica e exclusão molecular, não mostrou atividade letal em camundongos e não causou acúmulo de fluido em intestino de camundongos recém-nascidos. Além disso, não apresentou atividade leucotóxica. Quanto à sua propriedade hemolítica, constatou-se que a toxina purificada apresentou atividade hemolítica sobre eritrócitos de coelho, carneiro e boi, sendo não hemolítica sobre eritrócitos humanos, com presença ou ausência de ~mercaptoetanol. O mecanismo de ação desta toxina parece estar relacionado com o comprometimento da mitocôndria, o que ativaria a via apoptótica e a lise da membrana das células Vero. Quand~ aquecida por 100°C por 30 minutos, esta perdeu toda sua atividade citotóxica, demonstrando ser termolábil. Apesar da similaridade em sua citotoxicidade sobre as células Vero com os efeitos causados por verotoxinas, os genes STX (Shiga-Toxin) 1 e 2 e VT (Verotoxin)1 e 2, característicos de verotoxinas, não foram amplificados pela PCR / Abstract: The bacterium Enterobacter cloacae has been recognized as an important infectious agent in hospitaIs, sometimes leading patients to obit. Studying its virulence properties in our laboratory, 18% of the strains were characterized as cytotoxic against Vero cells. The cytotoxin was purified from the most cytotoxic strain (118.9) by means ionic exchange and molecular exclusion chromatography techniques respectively, increasing its relative activity in 62.5%. The purified toxin did not display either lethal activity nor did it cause fluid accumulation in neonatal mice intestine. Furthermore, no leukotoxic activity was detected and regarding its hemolytic activity, the purified toxin showed hemolytic activity against rabbit, bovine and sheep erythrocytes, but not against human erythrocytes, with or without beta-mercaptoethanol. The toxicity mechanism seems to be associated with a failure in the mitochondria's function, which would activate the apoptotic pathway and membrane lyses. When heated for 100°C for 30 minutes, the toxin lost completely its cytotoxicity. Despite the fact that the toxin displayed similar effects in Vero cells compared to verotoxins, PCR did not amplified the STXl and -2 and VTl and 2 genes, found in verotoxin expressing strains / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Tomomasa Yano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T01:56:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mantovani_RebecaPassarelli_M.pdf: 3691454 bytes, checksum: 62da767a8ae513cf2860f407c915aae6 (MD5) Previous issue date: 2018-08-18T22:55:56Z / Resumo: Fibrose cística (FC) é uma doença genética, autossômica recessiva, caracterizada por anormalidade no transporte eletrolítico. Achromobacter xylosoxidans é um bacilo Gram-negativo, não-fermentador e nos últimos anos tem sido encontrado em pacientes com FC, levando à doença pulmonar crônica. Neste estudo foram analisadas 17 amostras de A.xylosoxidans, isoladas de pacientes do Ambulatório de Fibrose Cística do Hospital das Clínicas (HC) da UNICAMP-SP. Os isolados foram analisados quanto as suas propriedades de virulência: atividade hemolítica, presença de hemaglutinação, atividade enzimática (caseinase, esterase, lecitina e hidrolise de elastina), adesão em célula, formação de biofilme e produção de atividade citotóxica. As amostras produziram hemolisinas, hemaglutininas e atividades enzimáticas. Catorze amostras de A.xylosoxidans (78%) formaram biofilme em microplacas, o que sugere o seu potencial em formar biofilme em cateteres e sondas. Entretanto essas bactérias não aderiram em células de pulmão NCI-H292 nas condições utilizadas. Os sobrenadantes de cultura de A.xylosoxindas apresentaram atividade citotóxica termoestável sobre célula NCI-H292, induzindo a formação de vacúolos, perda de contato celular, condensação da cromatina, núcleos picnoticos e morte celular. Foi verificado que a atividade citotóxica foi mantida mesmo após o tratamento dos sobrenadantes com polimixina B, sugerindo não ser uma endotoxina Ensaios de ELISA demonstraram significativa produção de IL-6 e IL-8 pelas células NCI-H292 após 24 horas de incubação com a fração >50kDa do sobrenadante de cultura da bacteria. Os resultados sugerem que o fator citotóxico produzido por A. xylosoxidans apresenta um importante papel na virulência, o qual provavelmente está associado à inflamação pulmonar crônica em pacientes com FC, levando a danos teciduais e declínio da função pulmonar / Abstract: Cystic fibrosis is a genetic disease, autosomal recessive, characterized by abnormal electrolyte transport. Achromobacter xylosoxidans is a Gram-negative non-fermenter and in recent years has been found in CF patients, leading to chronic lung disease. These studies were analyzed 17 samples of A.xylosoxidans isolated from patients in the Cystic Fibrosis Clinic, HC UNICAMP-SP. The isolates were analyzed for their virulence properties, such as haemolytic activity, the presence of hemagglutination, enzyme activity (caseinase, esterase, lecithin and hydrolysis of elastin), cell adhesion, biofilm formation and production of cytotoxic activity. The presence of hemolysins, hemagglutinins and enzymatic activities were not detected. Fourteen samples (78%) of A.xylosoxidans formed biofilms in microplates, suggesting the ability of bacteria to form biofilms on catheters and probes, but there was no adhesion in NCI-H292 cell lung. The culture supernatants of A.xylosoxindas isolated produced a heatstable cytotoxic factor in NCI-H292 cells, inducing the formation of vacuoles, loss of cell contact, chromatin condensation, pyknotic nuclei and cell death. ELISA assays to verify the release of IL-6 and IL-8, showed great production of these proinflammatory cytokines by NCI-H292 cells after 24 hours of incubation with the fraction> 50 kDa of culture supernatant of bacteria. It was also verified that the cytotoxic activity was maintained even after treatment with polymyxin B, suggesting may be not an endotoxin. Therefore, this cytotoxic factor produced by A. xylosoxidans may represent an important virulence factor, which is probably associated with chronic pulmonary inflammation in CF patients, leading to tissue damage and decline in lung function, decreasing the survival of these patients / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica