Orientador: Tomomasa Yano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T12:09:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tibo_LuizHenriqueSoares_M.pdf: 5939486 bytes, checksum: b93497f16ad2e0392928acc05650e417 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: O sobrenadante de cultivo de Escherichia coli isolada de pacientes com sepse (SEPEC) causou alongamento e perda de junção intercelular em células endoteliais de veia umbilical humana (HUVEC) em menos de 18 horas de incubação. O fator citotóxico envolvido foi purificado em sistema de cromatografia líquida (FPLC) a partir do sobrenadante da amostra SEPEC 15 e, através de eletroforese desnaturante (SDS-PAGE), foi observado que este fator tem massa molecular de aproximadamente 150kDa e é formado por pelo menos duas subunidades. Ensaios de transcitose em Transwell e a monitoração da permeabilidade de monocamada de células HUVEC, por meio de medições da resistência elétrica transendotelial (TEER), indicaram que este fator citotóxico auxilia a passagem de SEPEC através de monocamada de células HUVEC, cultivadas em insertos Transwell, no período de 30 minutos. Porém, quando incubadas com a citotoxina por mais de 30 minutos, as células HUVEC morrem devido à citotoxicidade do fator citotóxico. Estes resultados sugerem que esta citotoxina pode ser um importante fator de virulência de SEPEC, auxiliando o acesso deste patógeno à corrente sanguínea / Abstract: The culture supernatant of Escherichia coli isolated from patients with sepsis (SEPEC) caused elongation and loss of intercellular junction in endothelial cells of human umbilical vein (HUVEC) in less than 18 hours of incubation. The cytotoxic factor involved was purified by liquid chromatography system (FPLC) from the SEPEC 15 sample supernatant and, by denaturing electrophoresis (SDS-PAGE), it was found that this factor has a molecular mass of approximately 150kDa and is formed by the least two subunits. Transwell Transcytosis assays and monitoring the permeability of HUVEC monolayer by measurements of transendothelial electrical resistance (TEER) indicated that this cytotoxic factor helps SEPEC passing through HUVEC monolayer cells cultured in Transwell inserts, in a 30 minutes period. However, when incubated with cytotoxin for more than 30 minutes, the HUVEC cells die due to the cytotoxicity of the cytotoxic factor. These results suggest that this cytotoxin can be an important virulence factor of SEPEC, assisting this pathogen access to the bloodstream / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular