Objetivo: Determinar el efecto protector del extracto acuoso de las hojas de Peumus boldus “Boldo” en la toxicidad hepática inducida por isoniazida en ratas Holtzman hembra. Materiales y métodos: se utilizaron 24 ratas Holtzman hembra, divididas en 4 grupos: A (control), B (isoniazida 50 mg/kg), grupo C (silimarina 200 mg/kg e isoniazida 50 mg/kg) y D (boldo 160 mg/kg e isoniazida 50 mg/kg). Dicho protocolo se siguió por 14 días. Se determinó el efecto protector mediante análisis clínico, bioquímico y morfológico. Se presentan los datos con sus medias y desviaciones estándares. Se compararon las medias de los grupos experimentales mediante la prueba de Kruskall-Wallis, considerándose significativo un p < 0.05. Resultados: se halló que el grupo B disminuyó más de peso (16,41 +/-17,94 gr), presentó mayor elevación de bilirrubinas totales (0,25 +/-0,13), bilirrubina directa (0,2 +/-0,11), TGO (51.83 +/-18.55) y TGP (29 +/- 13,72), en comparación con el grupo A, C y D. Se halló también menor elevación de proteínas totales (0,49 +/-0,62). y albuminas (0,33 +/- 0,35) en el grupo B, en comparación con los demás grupos. No se halló diferencia significativa entre los grupos en cuanto a la variación de bilirrubina indirecta (p =0,104) y globulinas (p=0,144). Los hígados del grupo B mostraron un aspecto congestivo, fueron más grandes y pesaron más; y mostraron mayor vacuolización perinuclear, congestión sinusoidal y desorganización de la arquitectura celular. Según la escala de Dalaklioglu et.al., el grupo B presentó mayor daño (5,83 +/-0,75) en comparación con los grupos A (0,33 +/- 0,51), C (2,5 +/- 1) y D (0,83 +/-0,4).Conclusiones: El extracto acuoso de Peumus boldus posee efecto protector en la toxicidad hepática inducida por isoniazida en ratas Holtzman hembra, evidenciado mediante parámetros clínicos, bioquímicos y morfológicos. Palabras claves: boldo, hepatotoxicidad, isoniazida

Objetivo: Determinar el efecto protector del extracto acuoso de las hojas de Peumus boldus “Boldo” en la toxicidad hepática inducida por rifampicina en ratas Holtzman hembra. Materiales y métodos: Se realizó un estudio experimental completo. Se adquirieron 24 ratas Holtzman hembra, y fueron divididas, aleatoriamente, en 4 grupos: A (control), B (rifampicina 100 mg/kg), C (silimarina 200 mg/kg y rifampicina 100 mg/kg) y D (boldo 160 mg/kg y rifampicina 100 mg/kg). Dicho protocolo se realizó por 14 días. Se analizaron variables clínica, bioquímicas (se realizó perfil hepático antes y después del experimento) y morfológica. Se compararon las medias de los grupos mediante la prueba de Kruskall Wallis y se consideró significativo p < 0,05. Resultados: Al finalizar el experimento, las ratas del grupo B perdieron más peso (16,41 +/-17,94 gr), tuvieron mayor elevación de bilirrubinas totales (0,25+/-0,13), bilirrubina directa (0,21 +/-0,12), TGP (48,83 +/-17,72) y sus hígados fueron más congestivos, pesaron y midieron más. Las proteínas totales (0,66 +/- 0,38) y albúmina (0,33 +/- 0,35) del grupo B fueron menores comparado con los grupos C y D. No se halló diferencia significativa en cuanto a la bilirrubina indirecta, globulina y TGO. Los hígados del grupo B mostraron mayores cambios histopatológicos (5,33 +/-0,51) en comparación con los demás grupos. Conclusiones: el extracto acuoso de las hojas de Peumus boldus posee efecto protector en la toxicidad hepática inducida por rifampicina en ratas Holtzman hembra. Palabras claves: hepatotoxicidad, rifampicina, boldo

LIMA, L. B. Contribuição para a padronização química de espécies do gênero Plectranthus: derivatização e validação de métodos analíticos para a quantificação de marcadores químicos. 2013. 137 f. Tese (Doutorado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2014-11-19T21:03:34Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_lblima.pdf: 6591035 bytes, checksum: 165aa5a79777f974fa2ffe660ef1f5fd (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-12-22T17:09:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_lblima.pdf: 6591035 bytes, checksum: 165aa5a79777f974fa2ffe660ef1f5fd (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-22T17:09:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_lblima.pdf: 6591035 bytes, checksum: 165aa5a79777f974fa2ffe660ef1f5fd (MD5) Previous issue date: 2013 / Plectranthus grandis (Cramer) Willense is a medicinal plant popularly known in Ceará as boldo-grande, used by population in substitution of P. barbatus (boldo), it shows gastroprotective activity already proven for herb and for some isolated diterpenes, scientifically validating this way its popular use. This work describes the analytical procedures used and obtained results, aiming to contribute to chemical standardization of four Plectranthus species. Barbatusin and 3β-hydroxy-3-deoxobarbatusin diterpenes were isolated by chromatographic techniques, being possible to develop selective extration method of barbatusin, which enabled to obtain significant amount of this substance. Derivatization reactions were performed, getting 3-hydroxy-3-deoxobarbatusin, having gastroprotective activity, in vivo, already reported in the literature, and oxyimine product of barbatusin, unpublished in the literature, with cytotoxic activity more potent than its precursor. Estrutural elucidation were performed by infra-red spectroscopy, NMR 1H and NMR 13C, compared with literature data. Using HPLC-DAD, methods were developed for quantification of barbatusin and 3β-hydroxy-3-deoxobarbatusin, in wich suitable parameters have been found of linearty (r2 > 0,99), for both analytes. The method was validated and presented linearty (r2 = 0,9931 for barbatusin and r2 = 0,9966 for 3β-hydroxy-3-deoxobarbatusin), selectivity, within-day precision (RSD < 2,8% for barbatusin and RSD < 3,5% for 3β-hydroxy-3-deoxobarbatusin), accuracy (recovery between 81,7% a 115,1%). The methods so developed have been applied to the leaves extracts of P. grandis, P. barbatus, P. amboinicus and P. ornatus. The larvicidal and cytotoxic potential of the four Plectranthus species were evaluated, as well as the purê compounds, showing promising cytotoxic activty for three strains of tumor cells. / Plectranthus grandis (Cramer) Willense, é uma planta medicinal conhecida popularmente no Ceará como boldo-grande, utilizada pela população em substituição a P. barbatus (boldo), que apresenta atividade gastroprotetora já comprovada para a planta e para alguns diterpenos isolados, validando cientificamente desta forma seu uso popular. Este trabalho descreve os procedimentos analíticos utilizados e resultados obtidos, visando contribuir para a padronização química de quatro espécies de Plectranthus. Os diterpenos barbatusina e 3β-hidroxi-3-desoxibarbatusina foram isolados através de técnicas cromatográficas, sendo possível desenvolver um método de extração seletiva para a barbatusina, o que possibilitou obter quantidade significativa desta substância. Foram realizadas reações de derivatização, obtendo-se a 3-hidroxi-3-desoxibarbatusina, que possui atividade gastroprotetora, in vivo, já reportada na literatura, e a oxima da barbatusina, inédita na literatura, com atividade citotóxica mais potente do que sua precursora. As elucidações estruturais foram realizadas através de espectroscopia na região do infravermelho, RMN 1H e RMN 13C, em comparação com dados da literatura. Utilizando CLAE-DAD desenvolveu-se métodos para a quantificação de barbatusina e 3β-hidroxi-3-desoxibarbatusina, em que foram encontrados parâmetros adequados de linearidade (r2 > 0,99), para as duas substâncias analisadas. O método foi validado e apresentou linearidade (r2 = 0,9931 para a barbatusina e r2 = 0,9966 para a 3β-hidroxi-3-desoxibarbatusina), seletividade, precisão intra-dia (DPR < 2,8% para a barbatusina e DPR < 3,5% para a 3β-hidroxi-3-desoxibarbatusina), exatidão (recuperação entre 81,7% e 115,1%). Os métodos então desenvolvidos foram aplicados aos extratos das folhas de P grandis, P. barbatus, P. amboinicus, P. ornatus. O potencial larvicida e citotóxico das quatro espécies de Plectranthus foram avaliados, bem como dos compostos puros, apresentando promissora atividade citotóxica para três linhagens de células tumorais.

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Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-08-13T13:28:57Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3973916 bytes, checksum: ec0ab2d11f3f4115ebc3866618e3b737 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-13T13:28:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3973916 bytes, checksum: ec0ab2d11f3f4115ebc3866618e3b737 (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de MInas Gerais / Vernonia condensata Baker é uma planta tradicionalmente utilizada pela medicina popular brasileira. Suas propriedades medicinais se devem aos metabólitos produzidos pela espécie, tais como flavonoides, alcaloides, cumarinas e esteroides. Devido ao seu potencial farmacológico, a espécie foi incluída em uma lista de plantas da flora brasileira que necessitam de mais estudos para gerar produtos ao sistema único de saúde. A cultura de tecidos é uma ferramenta viável para a produção de plantas com maior biomassa e teor de compostos bioativos de interesse, pois permite a manipulação das condições de cultivo. Entretanto, existem poucos trabalhos abordando o cultivo de V. condensata. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a influência de diferentes condições de meio e ambientes no cultivo in vitro de V. condensata. Para isso, foram conduzidos quatro experimentos: I) Avaliação do potencial fotoautotrófico, através do cultivo em diferentes concentrações de sacarose (0; 7,5; 15 e 30 g L - 1) e com o uso de tampas com membranas porosas de 0,45 m; II) Análise do desenvolvimento, fotossíntese e anatomia de V. condensata cultivados in vitro sob diferentes qualidades de luz: Branco; Vermelho/Azul; Vermelho/Branco/Azul; Vermelho/Branco/Vermelho distante/Azul; III) Avaliação do desenvolvimento e fotossíntese de plantas de V. condensata aclimatizadas em casa-de- vegetação, cultivadas inicialmente in vitro sob os diferentes espectros luminosos descritos no experimento II; IV) Avaliação das respostas de V. condensata à exposição à radiação UV-B. Nossos resultados demonstraram que V. condensata apresenta potencial para propagação fotoautotrófica, e plantas com maior crescimento e acúmulo de biomassa foram encontrados nas condições de cultivo com maiores trocas gasosas. A qualidade da luz afetou o desenvolvimento de V. condensata in vitro, e essa influência foi mantida após a aclimatização. O desenvolvimento de V. condensata também foi influenciado pela radiação UV-B, que induziu respostas antioxidantes enzimáticas e não-enzimáticas. Os resultados obtidos nesse trabalho contribuem para um melhor entendimento do desenvolvimento in vitro de V. condensata, e podem colaborar para futuros trabalhos futuros que explorem a biossíntese de compostos bioativos presentes em V. condensata, que são de grande interesse econômico e industrial. / Vernonia condensata is a species widely used by folk medicine. Its medicinal properties are due with the metabolites produced by the species, such as flavonoids, alkaloids, coumarins and steroids. Due to its pharmacological potential, the species was included in a list of plants of the Brazilian flora that need more studies to generate products to the single health system. Tissue culture is a viable tool for the production of plants with higher biomass and content of bioactive compounds of interest, because it allows the manipulation of the culture conditions. However, there are few studies addressing the cultivation of V. condensata. Thus, the objective of this work was to evaluate the influence of different environment conditions on the in vitro culture of V. condensata. For this, four experiments were carried out: I) Evaluation of the photoautotrophic potential, through the cultivation in different concentrations of sucrose (0; 7.5; 15 and 30 g L -1 ) and with the use of lids with porous membranes of 0.45 μm; II) Analysis of the development, photosynthesis and anatomy of V. condensata grown in vitro under different light spectral (White; White/Medium blue; Dark red/White/Medium blue; Dark red/White/Far red/Medium blue); III) Evaluation of the development and photosynthesis of plants of V. condensata acclimatized under greenhouse conditions, cultivated initially in vitro under the different light spectral described in experiment II; IV) Evaluation of the responses of V. condensata to the exposure to UV-B radiation. Our results demonstrate that V. condensata presents potential for photoautotrophic propagation, and the plants with the highest growth and accumulation of biomass were found in the culture conditions with the highest gas exchange. Light quality affected the development of V. condensata in vitro, and this influence was maintained after acclimatization. The development of V. condensata was also influenced by UV-B radiation, which induced enzymatic and non- enzymatic antioxidant responses. The results obtained in this work contribute to a better understanding of the in vitro development of V. condensata, and may contribute to future works that explore the biosynthesis of bioactive compounds present in V. condensata, which are of great economic and industrial interest.

Os gliomas malignos, tumores que normalmente originam-se de células da linhagem astrocítica, são os mais comuns e devastadores tumores primários do sistema nervoso central. O Glioblastoma multiforme (GBM) é a classe mais freqüente e uma das formas mais agressivas de câncer. Como conseqüência, a sobrevivência após o diagnóstico é geralmente de menos de um ano. Desta maneira, novas estratégias terapêuticas se fazem necessárias. Durante as últimas décadas, estudos sobre compostos naturais têm tido sucesso no que diz respeito à pesquisa de agentes anti-câncer, sendo que os alcalóides aporfinóides representam uma categoria com grande potencial. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da boldina, um alcalóide aporfinóide do Peumus boldus, em linhagens de glioma, e investigar os possíveis mecanismos de ação envolvidos com este efeito. A boldina foi capaz de diminuir o percentual de células das linhagens U138-MG, U87-MG e C6. Neste estudo, observamos células necróticas após tratamento na linhagem C6. O mesmo efeito não foi observado para baixas concentrações do tratamento nas linhagens U138-MG e U87-MG. A exposição à boldina por 24 h não causou ativação das caspases 3 e 9, executoras-chave da apoptose, ou clivagem do substrato PARP. De acordo com a análise do ciclo celular, boldina induziu parada na fase G2/M. O índice mitótico também demonstrou redução no número de mitoses. O tratamento com boldina não causou dano no DNA das células U138-MG e não afetou células normais (fatias organotípicas de hipocampo de ratos) com a mesma extensão que afetou as células tumorais. De acordo com estes resultados, sugerimos que a boldina pode ser um novo composto para o desenvolvimento de estratégias anticâncer. / Malignant gliomas, tumors that usually arise from cells of astrocytic lineage, are the most common and devastating primary tumors of the central nervous system. Glioblastoma multiforme (GBM) is the most frequent class and one of the most aggressive forms of cancer. As a consequence, survival after diagnosis is normally just less than 1 year. In this manner, new therapeutic strategies are urgently needed. During the last decades, works on natural compounds have been particularly successful in the field of anticancer drug research, and the aporphines alkaloids represent an interesting, potencially useful category of this agents. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of boldine, an aporphine alkaloid of Peumus boldus, in glioma cell lines, and investigate the possible mechanisms involved in this effect. Boldine was capable to decrease the percentage of cells in U138-MG, U87-MG and C6 glioma lineages. In this study we observed necrotic cells in C6 lineage after treatment. The same effect was not seen in low concentrations of treatment in U138-MG and U87-MG lineages. The exposure to boldine for 24 h did not result in increase of the activation of caspase-3 and caspase-9, key executioners in apoptosis. No increase in cleavage of the downstream substrate PARP was observed. According to cell cycle analysis, boldine appeared to induce G2/M arrest in U138-MG cells. Mitotic index also showed a reduction in the percentage of cells in mitosis. The treatment with boldine did not caused DNA damage in U138-MG cells and did not affect normal cells (rat organotypic hippocampal slices) to the extent that it affects tumor cells. According to these results, we suggest that boldine could be a new compound to the development of anticancer therapies.

A isquemia cerebral está entre as principais causas de mortalidade e morbidade em países industrializados e, apesar dos estudos constantes, ainda não existe um tratamento eficaz. Nesse estudo, investigamos o efeito neuroprotetor da boldina, um alcalóide presente nas folhas e casca de Peumus boldus Molina, sobre os danos causados pela isquemia cerebral. Para isso, foi utilizado um modelo in vitro de privação de oxigênio e glicose (POG) em culturas organotípicas de hipocampo de rato. Nossos resultados demonstraram que o tratamento com boldina nas concentrações de 120 µM e 250 µM diminuiu significativamente a morte celular induzida pela POG de 36% para 20 e 11%, respectivamente. A boldina não apresentou efeito tóxico em condições basais em nenhuma das concentrações testadas. O efeito neuroprotetor da boldina ocorreu apenas quando ela estava presente durante o período de POG, não havendo diferença quando ela foi utilizada somente durante o período de 24 horas de recuperação. O tratamento com boldina durante a POG foi capaz de induzir ativação microglial observada 24 horas após o tratamento através da marcação com isolectina B4. Ela também causou um aumento considerável na produção de espécies reativas, o que pode ser causa ou conseqüência da ativação da microglia. Não foram observadas diferenças na fosforilação das proteínas Akt e GSK-3ß 24 horas após o tratamento e, portanto, alterações nessas proteínas não parecem estar envolvidas com a neuroproteção causada pela boldina. Em conjunto, os resultados sugerem um efeito neuroprotetor promissor da boldina contra os danos causados pela POG, sendo que os mecanismos que desencadeiam esse efeito devem ser melhor elucidados. / Ischemic stroke is among the major causes of mortality and morbidity in industrialized countries and, in spite of several studies, no efficient treatment is available to the patients. In this work, we investigated the neuroprotective effect of boldine, an alkaloid present in leaves and bark of Peumus boldus Molina, against the damage caused by an in vitro lesion that mimics ischemic stroke. For these experiments, we used an in vitro model of oxygen and glucose deprivation (OGD) in rat organotypic hippocampal slice cultures. Our results showed that the treatment with boldine in the concentrations of 120 µM and 250 µM caused a significant reduction in cellular death after OGD from 36%, observed in OGDvehicle exposed cultures, to 20% and 11%, respectively. Boldine was not cytotoxic in basal conditions in any of the tested concentrations. The neuroprotective effect of boldine was observed when it was present during the period of OGD, showing no difference when it was used only during the recovery period of 24 hours. To elucidate a possible mechanism by which boldine exerts its neuroprotective effect we investigated the microglial activation, production of reactive species and the phosphorylation of Akt and GSK-3b proteins involved in PI3K cell signaling pathway. Our results showed that, when used during the OGD period, boldine 250 µM induced a marked microglial activation, as shown by isolectin B4 binding, increased reactive species production, as shown by DCF-DA oxidation and had no effect on Akt and GSK-3ß phosphorylation. Taken together, the results presented here suggest a promising neuroprotective effect of boldine against the damage caused by OGD, but the mechanism of action of this compound must be better elucidated.

Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento hasta el 3/11/2020. / Magíster en Gestión y Dirección de Empresas / El plan de negocio se refiere a la producción y comercialización de extracto de boldo como actividad adicional para una empresa de elaboración de infusiones en polvo establecida en Santiago de Chile. El boldo es un árbol autóctono de Chile que crece entre las regiones IV y X, cuyas hojas se usan como medicina natural en tratamientos de afecciones estomacales, del hígado y como diurético. Chile ofrece un entorno favorable para este negocio, por su estable situación política y económica y buen acceso a las tecnologías necesarias. El proyecto se inserta en la industria de los extractos naturales, para la que hay estadísticas limitadas a nivel nacional; de su estudio se concluye que tiene un atractivo medio. En el mercado nacional hay empresas que venden extracto de boldo procesado y diluido para el consumo humano, pero no extracto concentrado; tampoco se identificó empresas extranjeras que lo ofrecieran. Los clientes para el extracto concentrado serán elaboradoras de sustitutos medicinales y fabricantes de productos cosméticos. Existen al menos siete empresas de este tipo a nivel nacional, las que han manifestado su interés potencial en este nuevo producto. La estrategia competitiva para este proyecto será de enfoque por diferenciación. Los objetivos de marketing son posicionarse como una empresa responsable y con un producto (extracto de boldo) de calidad. Se proyectan ventas crecientes, alcanzando $339 millones al décimo año, con un precio de venta de $21.000 + IVA, calculado marginando un 50% sobre los costos de producción. La operación de la planta requiere de dos operarios que trabajan por turnos y un jefe de planta; no se necesita de más personal, ya que el proceso productivo es en un 90% autónomo. El nivel de producción será de 12.900 litros para el primer año, llegando a los 15.480 litros al décimo año. El principal insumo son hojas de boldo secas, las que se pueden comprar a los intermediarios durante todo el año; su valor suele ser estable y varía entre los $2.000 y $2.800 + IVA por kg. El alcohol, también necesario, es de fácil obtención en el mercado nacional. El análisis económico indica que el negocio es rentable, con una tasa de descuento del 20% y un horizonte de 10 años, tanto en la opción de comprar el terreno y construir la infraestructura necesaria, como en la de arrendarla. Para el primer caso, la inversión es de MM$134 y el VAN de MM$186; para el segundo, el VAN es de MM$107 y la inversión inicial de MM$36 (67% son equipos para la planta). Se elige la segunda alternativa por su mayor TIR (107%). El VAN se mantiene positivo con variaciones de hasta 14% en los costos (alza) y 9% en el precio (baja). La sensibilidad es menor al precio del arriendo, pudiendo éste subir hasta en un 52%.

Os gliomas malignos, tumores que normalmente originam-se de células da linhagem astrocítica, são os mais comuns e devastadores tumores primários do sistema nervoso central. O Glioblastoma multiforme (GBM) é a classe mais freqüente e uma das formas mais agressivas de câncer. Como conseqüência, a sobrevivência após o diagnóstico é geralmente de menos de um ano. Desta maneira, novas estratégias terapêuticas se fazem necessárias. Durante as últimas décadas, estudos sobre compostos naturais têm tido sucesso no que diz respeito à pesquisa de agentes anti-câncer, sendo que os alcalóides aporfinóides representam uma categoria com grande potencial. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da boldina, um alcalóide aporfinóide do Peumus boldus, em linhagens de glioma, e investigar os possíveis mecanismos de ação envolvidos com este efeito. A boldina foi capaz de diminuir o percentual de células das linhagens U138-MG, U87-MG e C6. Neste estudo, observamos células necróticas após tratamento na linhagem C6. O mesmo efeito não foi observado para baixas concentrações do tratamento nas linhagens U138-MG e U87-MG. A exposição à boldina por 24 h não causou ativação das caspases 3 e 9, executoras-chave da apoptose, ou clivagem do substrato PARP. De acordo com a análise do ciclo celular, boldina induziu parada na fase G2/M. O índice mitótico também demonstrou redução no número de mitoses. O tratamento com boldina não causou dano no DNA das células U138-MG e não afetou células normais (fatias organotípicas de hipocampo de ratos) com a mesma extensão que afetou as células tumorais. De acordo com estes resultados, sugerimos que a boldina pode ser um novo composto para o desenvolvimento de estratégias anticâncer. / Malignant gliomas, tumors that usually arise from cells of astrocytic lineage, are the most common and devastating primary tumors of the central nervous system. Glioblastoma multiforme (GBM) is the most frequent class and one of the most aggressive forms of cancer. As a consequence, survival after diagnosis is normally just less than 1 year. In this manner, new therapeutic strategies are urgently needed. During the last decades, works on natural compounds have been particularly successful in the field of anticancer drug research, and the aporphines alkaloids represent an interesting, potencially useful category of this agents. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of boldine, an aporphine alkaloid of Peumus boldus, in glioma cell lines, and investigate the possible mechanisms involved in this effect. Boldine was capable to decrease the percentage of cells in U138-MG, U87-MG and C6 glioma lineages. In this study we observed necrotic cells in C6 lineage after treatment. The same effect was not seen in low concentrations of treatment in U138-MG and U87-MG lineages. The exposure to boldine for 24 h did not result in increase of the activation of caspase-3 and caspase-9, key executioners in apoptosis. No increase in cleavage of the downstream substrate PARP was observed. According to cell cycle analysis, boldine appeared to induce G2/M arrest in U138-MG cells. Mitotic index also showed a reduction in the percentage of cells in mitosis. The treatment with boldine did not caused DNA damage in U138-MG cells and did not affect normal cells (rat organotypic hippocampal slices) to the extent that it affects tumor cells. According to these results, we suggest that boldine could be a new compound to the development of anticancer therapies.

A isquemia cerebral está entre as principais causas de mortalidade e morbidade em países industrializados e, apesar dos estudos constantes, ainda não existe um tratamento eficaz. Nesse estudo, investigamos o efeito neuroprotetor da boldina, um alcalóide presente nas folhas e casca de Peumus boldus Molina, sobre os danos causados pela isquemia cerebral. Para isso, foi utilizado um modelo in vitro de privação de oxigênio e glicose (POG) em culturas organotípicas de hipocampo de rato. Nossos resultados demonstraram que o tratamento com boldina nas concentrações de 120 µM e 250 µM diminuiu significativamente a morte celular induzida pela POG de 36% para 20 e 11%, respectivamente. A boldina não apresentou efeito tóxico em condições basais em nenhuma das concentrações testadas. O efeito neuroprotetor da boldina ocorreu apenas quando ela estava presente durante o período de POG, não havendo diferença quando ela foi utilizada somente durante o período de 24 horas de recuperação. O tratamento com boldina durante a POG foi capaz de induzir ativação microglial observada 24 horas após o tratamento através da marcação com isolectina B4. Ela também causou um aumento considerável na produção de espécies reativas, o que pode ser causa ou conseqüência da ativação da microglia. Não foram observadas diferenças na fosforilação das proteínas Akt e GSK-3ß 24 horas após o tratamento e, portanto, alterações nessas proteínas não parecem estar envolvidas com a neuroproteção causada pela boldina. Em conjunto, os resultados sugerem um efeito neuroprotetor promissor da boldina contra os danos causados pela POG, sendo que os mecanismos que desencadeiam esse efeito devem ser melhor elucidados. / Ischemic stroke is among the major causes of mortality and morbidity in industrialized countries and, in spite of several studies, no efficient treatment is available to the patients. In this work, we investigated the neuroprotective effect of boldine, an alkaloid present in leaves and bark of Peumus boldus Molina, against the damage caused by an in vitro lesion that mimics ischemic stroke. For these experiments, we used an in vitro model of oxygen and glucose deprivation (OGD) in rat organotypic hippocampal slice cultures. Our results showed that the treatment with boldine in the concentrations of 120 µM and 250 µM caused a significant reduction in cellular death after OGD from 36%, observed in OGDvehicle exposed cultures, to 20% and 11%, respectively. Boldine was not cytotoxic in basal conditions in any of the tested concentrations. The neuroprotective effect of boldine was observed when it was present during the period of OGD, showing no difference when it was used only during the recovery period of 24 hours. To elucidate a possible mechanism by which boldine exerts its neuroprotective effect we investigated the microglial activation, production of reactive species and the phosphorylation of Akt and GSK-3b proteins involved in PI3K cell signaling pathway. Our results showed that, when used during the OGD period, boldine 250 µM induced a marked microglial activation, as shown by isolectin B4 binding, increased reactive species production, as shown by DCF-DA oxidation and had no effect on Akt and GSK-3ß phosphorylation. Taken together, the results presented here suggest a promising neuroprotective effect of boldine against the damage caused by OGD, but the mechanism of action of this compound must be better elucidated.