Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Denise Fecchio / Banca: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Resumo: O câncer destaca-se pela alta incidência e mortalidade. O tratamento do câncer compreende cada vez mais a quimioterapia combinada, ou seja, substâncias antitumorais agindo conjuntamente com as células do sistema imune, potencializando-as ou apenas mantendo-as viáveis para exercerem sua função. Dentre os tipos celulares que constituem o sistema imunológico, os macrófagos são apontados como os principais elementos do organismo de combate aos tumores. Os macrófagos ativados agem liberando produtos tais como radicais de oxigênio (H2O2) e nitrogênio (NO), interleucina-1ß (IL-1ß) e fator de necrose tumoral (TNF-a), que são prejudiciais às células tumorais dependendo da concentração, além de sua ação indireta através da secreção de interferon-gama (IFN-.). Complexos de paládio(II) são investigados há décadas, destacando-se por sua potencialidade como agente antitumoral. Neste trabalho avaliou-se a ação dos compostos [Pd(dmba)(X)(dppp)] (X= SCN, NCO, N3 ou Cl) sobre as células tumorais de Ehrlich e macrófagos in vitro, utilizando como padrão a cis-platina (cis-Pt). Para tanto, foram realizados ensaios para determinação do índice de citotoxicidade mediano, o IC50, para cada composto pelos períodos de 24 e 48h e com base em tais concentrações investigadas para os macrófagos verificou-se a produção e/ou inibição de NO e H2O2, além das citocinas TNF-a, IFN-. e IL-1 bem como a atividade citotóxica/citolítica. Os compostos demonstraram ser agentes promissores por seus efeitos sobre as células tumorais e imunes, muitas vezes de forma igual ou superior à cis-Pt, droga de uso corrente na quimioterapia do câncer. / Abstract: The cancer is a disease with high incidence and mortality. The cancer treatment involves the combinated chemotherapy wich one involves antitumour substances acting along with the immune cells, stimulating or only keeping them able to act in the immune response. Between the cell types that belong to the immunological system, the macrophages are considered the main elements of the body that can act against tumours. The activated macrophages act releasing substances like oxygen (H2O2) and nitrogen (NO) radicals, interleukin-1 (IL-1) and tumour necrosis factor alpha (TNF-á), wich are not beneficial to the tumour cells in some concentrations, besides its indirect action towards interferon-gama (IFN-ã) release. Palladium(II) complexes are employed in many studies to verify its antitumour properties. For example we can describe the four following compounds: [Pd(dmba)(X)(dppp)], X= SCN, NCO, N3 or Cl. This work had as goal the evaluation of the action of such compounds towards Ehrlich tumour cells, macrophages and lymphocytes in vitro, employing cis-platin (cis-Pt) as standard. The following parameters were evaluated: the cytotoxic index (IC50) of each compound after 24 and 48h incubation for Ehrlich tumour cells, macrophages and lymphocytes; the immunological behaviour of the compounds in the concentrations previously determined such as NO and H2O2 production or inhibition, besides the cytokines TNF-á, IFN-ã and IL-1 as well as the cytotoxic/cytolitic activity. The compounds presented a good behaviour, based on their efects towads tumour and immune cells, many times like or even better than cis-Pt, standard drug in cancer chemotherapy. / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2011. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-10-17T10:58:32Z No. of bitstreams: 1 2011_FlaviaArrudaPortilho.pdf: 2244703 bytes, checksum: 3ddf4efa70a7700021801ca4fb6c5a6e (MD5) / Approved for entry into archive by Leila Fernandes (leilabiblio@yahoo.com.br) on 2011-10-17T14:00:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_FlaviaArrudaPortilho.pdf: 2244703 bytes, checksum: 3ddf4efa70a7700021801ca4fb6c5a6e (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-17T14:00:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_FlaviaArrudaPortilho.pdf: 2244703 bytes, checksum: 3ddf4efa70a7700021801ca4fb6c5a6e (MD5) / O aumento crescente da incidência de câncer e a necessidade de se desenvolver terapias mais eficazes com o mínimo de efeitos adversos têm suscitado a busca de tratamentos alternativos. Entre estes, duas terapias promissoras são a magnetohipertermia (MHT) e a terapia fotodinâmica (TFD), as quais podem proporcionar ainda maior eficácia se realizadas com materiais nanoestruturados. O presente trabalho teve o objetivo de, utilizando modelos de tumor sólido de Ehrlich, verificar a atividade antitumoral de duas amostras à base de nanoesferas de albumina: (1) amostra contendo nanopartículas magnéticas à base de maghemita (PAM) usadas na concentração de 1,2 × 1015 partículas magnéticas/mL foi testada para MHT de tumores localizados na cabeça após administração de 5,5 × 104 células tumorais e (2) amostra contendo 0,5 mM zinco-ftalocianina tetrassulfonada (PAF) para TFD na orelha após administração de 2,75 x 104 células tumorais. PAM e PAF foram usadas, respectivamente, em diferentes protocolos de MHT e TFD. MHT foi feita com equipamento operando a 1 MHz e 40 Oe de amplitude de campo e foram realizadas análises histológicas do tumor para verificar o grau de necrose. As análises mostraram que dois dos animais submetidos à MHT duas vezes ao dia, durante três dias consecutivos, apresentaram 100% de necrose e ausência de proliferação celular. Para a realização da TFD foi usado luz laser com comprimento de onda de 670 nm e animais distribuídos em três grupos experimentais. A avaliação dos procedimentos foi feita por observações clínicas (peso do animal, peso e volume do tumor), testes hematológicos e bioquímicos, análise morfológica, tanto do fígado, quanto dos rins para avaliar possíveis alterações teciduais, e análises morfométricas do tumor para avaliar o grau de necrose obtido. Para validar os experimentos de TFD, grupos tratados com o quimioterápico doxorrubicina (Dox) foram investigados. Os resultados mostraram que a TFD, quando realizada de três em três dias durante nove dias experimentais induziu necrose equiparável ao do tratamento com Dox, com menos efeitos adversos, sobretudo no fígado; Já os tratamentos combinados com TFD e Dox não apresentaram efeitos sinérgico ou antagônico. Em geral, os melhores protocolos de MHT e TFD levaram a pelo menos 60% de necrose. Conclui-se que as nanoesferas de albumina, além de altamente biocompatíveis, representam material nanoestruturado eficaz na realização da MHT e TFD que, embora nem sempre tenham causado a remissão total do tumor, revelaram significativa atividade antiproliferativa, apresentando alto potencial para tratamento do câncer. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The increasing incidence of cancer and the need to develop more effective therapies with minimal collateral effects have prompted the search for alternative treatments. Among these, two promising therapies are magnetohyperthermia (MHT) and photodynamic therapy (PDT), which can be even more efficient if performed with nanostructured materials. The present work was aimed to investigate the antitumor activity of two samples based on albumin nanospheres: one containing magnetic nanoparticles (PAM) and another containing zinc-phthalocyanine tetrasulfonated (PAF) while using the model of Ehrlich solid tumor (head for MHT and ear for PDT). PAM and PAF were used in different protocols of MHT and PDT, respectively. MHT was performed with the equipment operating at 1 MHz and 40 Oe, while PDT have used light source at 670nm. The evaluation of both procedures was made by clinical observations (weight of animal, weight, volume, and size of tumor), cytometry, haematological, and biochemical tests, and morphological analysis of the liver and kidney tissue to evaluate possible changes, and also morphology of tumor to assess the degree of necrosis induced. Two animals submitted to MHT showed 100% necrosis. In general, the best protocols of MHT and PDT led to at least 60% necrosis. To validate the PDT experiments, groups treated with the chemotherapeutic agent doxorubicin (Dox) were investigated. PDT and Dox induced comparable necrosis. PDT showed fewer side effects than Dox. PDT and Dox showed no synergistic or antagonistic effect. We conclude that the highly biocompatible albumin nanospheres represent nanostructured material efficient in performing the MHT and PDT procedures. Though they not caused total remission of the tumor, they showed significant antiproliferative activity evidencing a high potential for cancer treatment.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-06-05Bitstream added on 2014-06-13T19:13:53Z : No. of bitstreams: 1 rocha_mc_me_arafcf.pdf: 757379 bytes, checksum: f386cabb4d38b8f9552bfba42f8b50aa (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O câncer destaca-se pela alta incidência e mortalidade. O tratamento do câncer compreende cada vez mais a quimioterapia combinada, ou seja, substâncias antitumorais agindo conjuntamente com as células do sistema imune, potencializando-as ou apenas mantendo-as viáveis para exercerem sua função. Dentre os tipos celulares que constituem o sistema imunológico, os macrófagos são apontados como os principais elementos do organismo de combate aos tumores. Os macrófagos ativados agem liberando produtos tais como radicais de oxigênio (H2O2) e nitrogênio (NO), interleucina-1ß (IL-1ß) e fator de necrose tumoral (TNF-a), que são prejudiciais às células tumorais dependendo da concentração, além de sua ação indireta através da secreção de interferon-gama (IFN-.). Complexos de paládio(II) são investigados há décadas, destacando-se por sua potencialidade como agente antitumoral. Neste trabalho avaliou-se a ação dos compostos [Pd(dmba)(X)(dppp)] (X= SCN, NCO, N3 ou Cl) sobre as células tumorais de Ehrlich e macrófagos in vitro, utilizando como padrão a cis-platina (cis-Pt). Para tanto, foram realizados ensaios para determinação do índice de citotoxicidade mediano, o IC50, para cada composto pelos períodos de 24 e 48h e com base em tais concentrações investigadas para os macrófagos verificou-se a produção e/ou inibição de NO e H2O2, além das citocinas TNF-a, IFN-. e IL-1 bem como a atividade citotóxica/citolítica. Os compostos demonstraram ser agentes promissores por seus efeitos sobre as células tumorais e imunes, muitas vezes de forma igual ou superior à cis-Pt, droga de uso corrente na quimioterapia do câncer. / The cancer is a disease with high incidence and mortality. The cancer treatment involves the combinated chemotherapy wich one involves antitumour substances acting along with the immune cells, stimulating or only keeping them able to act in the immune response. Between the cell types that belong to the immunological system, the macrophages are considered the main elements of the body that can act against tumours. The activated macrophages act releasing substances like oxygen (H2O2) and nitrogen (NO) radicals, interleukin-1 (IL-1) and tumour necrosis factor alpha (TNF-á), wich are not beneficial to the tumour cells in some concentrations, besides its indirect action towards interferon-gama (IFN-ã) release. Palladium(II) complexes are employed in many studies to verify its antitumour properties. For example we can describe the four following compounds: [Pd(dmba)(X)(dppp)], X= SCN, NCO, N3 or Cl. This work had as goal the evaluation of the action of such compounds towards Ehrlich tumour cells, macrophages and lymphocytes in vitro, employing cis-platin (cis-Pt) as standard. The following parameters were evaluated: the cytotoxic index (IC50) of each compound after 24 and 48h incubation for Ehrlich tumour cells, macrophages and lymphocytes; the immunological behaviour of the compounds in the concentrations previously determined such as NO and H2O2 production or inhibition, besides the cytokines TNF-á, IFN-ã and IL-1 as well as the cytotoxic/cytolitic activity. The compounds presented a good behaviour, based on their efects towads tumour and immune cells, many times like or even better than cis-Pt, standard drug in cancer chemotherapy.

Made available in DSpace on 2016-08-19T17:47:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ANILDES IRAN PEREIRA SOUSA.pdf: 116617 bytes, checksum: 14ba38e42bfb1dbd3eba6477cff88f65 (MD5) Previous issue date: 2008-04-16 / The babassu mesocarp (Orbignya phalerata, Arecaceae) is popularly used in Maranhão, northeast of Brazil, as food and as medicine. It was the aim of this work to evaluate the effect of the babassu mesocarp extract (BME) on the biochemical parameters in mice bearing Ehrlich Ascitic tumor. C3H/HePas (N = l0 for group) with age of 120 and 240 days, were treated orally with BME (2mg/mL) during 15 or 30 days. At the end of this period the animals received, by intraperitoneal route, l06 cells of Ehrlich tumor. The animals were sacrificed ten days after the tumor implantation, when it was obtained the serum and the tumoral cells. The total number of tumoral cells was quantified in Neubauer chamber with aid of an optic microscope. The concentration of cholesterol, LDL, HDL, VLDL, triglicérides, total proteins and albumin was determined in serum, by colorimetric assay. The oral treatment with BME significantly increases on the number of tumoral cells. BME also affect the lipidic profile due to a strong reduction on the concentration of total cholesterol and HDL, LDL fractions. It was also observed a significant increase on the triglycerides concentration. Besides, the values of VLDL and total proteins were larger than the control in animals treated with EAB. Based on this, it is reasonable to propose that the reduction of cholesterol seems to be increased the tumor virulence. Additionally it was observed that BME induced a variable effect on blood biochemistry. Those results altogether makes BME unfeasible for using in the treatment of tumors with the same characteristics of the Ehrlich ascitic tumor. / O mesocarpo de babaçu (Orbignya phalerata, Arecaceae) é popularmente usado no Maranhão, nordeste do Brasil, como alimento e medicamento. Esse trabalho avaliou o efeito do tratamento com extrato bruto aquoso do mesocarpo de babaçu (EAB) na bioquímica sanguinea de camundongos C3H/HePas que desenvolveram o tumor de Ehrlich. Camundongos C3H/HePas (n= l0 por grupo), com idade de 120 e 240 dias, receberam, via oral, ad libitum, EAB (2mg/mL) durante 15 ou 30 dias. Em seguida ao último dia do tratamento os animais receberam, via intraperitoneal, l06 células de tumor de Ehrlich. Os animais foram sacrificados dez dias após a implantação do tumor, quando foram obtidos o soro e as células tumorais. As células foram quantificadas em câmara de Neubauer com auxílio de microscópio ótico de luz comum e o soro foi utilizado para determinar, por ensaios colorimétricos, a concentração de colesterol, triglicérides, proteínas totais e albumina. O tratamento com EAB induziu aumento significativo no número de células tumorais em camundongos C3H/HePas. A determinação do perfil lipídico mostrou que o tratamento com EAB resultou na redução da concentração de colesterol total e das frações HDL, LDL e no aumento da concentração de triglicérides . Além disso, os valores de VLDL e de proteínas totais foram maiores do que o controle em animais tratados previamente com EAB. Assim, é possível concluir que o tratamento oral com EAB aumenta a invasividade do tumor, possivelmente por reduzir a concentração de colesterol. Adicionalmente, o consumo de EAB tem efeitos variáveis sobre alguns parâmetros bioquímicos do sangue, dependendo da idade e do tempo de tratamento, o que inviabiliza o seu uso no tratamento de tumores com as mesmas características do tumor ascítico de Ehrlich.

Neste trabalho foram pesquisados os efeitos in vitro da metaloproteinase jararagina, em modelo de células de tumores de mama humana MCF7, T47D e murina (Tumor de Ehrlich), além de células normais, avaliando-se a viabilidade celular, morfologia, modificações nas fases do ciclo celular e tipo de morte celular; como os efeitos no modelo murino nas formas ascítica e sólido-ortotópica de Ehrlich. Os resultados obtidos mostraram que a jararagina diminui significativamente a viabilidade e adesão de maneira dose dependente, formação de agregados e estruturas tipo esferoides com formação túbulo-acinar. Os parâmetros antitumorais in vivo, não mostraram diminuição no volume tumoral ascítico, entretanto, no modelo ortotópico, a jararagina induz resposta inflamatória e remodelação da matriz extracelular e resulta em alterações na distribuição e organização do colágeno. Conclui-se que a jararagina induz citotoxicidade nas linhagens de células tumorais de mama e normais, e foi capaz de induzir infiltrado inflamatório durante o crescimento e disseminação das células tumorais. / The present study investigated the in vitro effects of metalloproteinase jararhagin in human breast tumor cells model MCF7 and T47D, murine tumor cells (Ehrlich\'s tumor), and normal cells, assessing cell viability, morphological alterations, changes in the cell cycle phases and death cell, as the effects on ascitic and solid orthotopic murin Ehrlich tumor. The results showed that jararhagin significantly decreases adhesion and cell viability in a dose dependent, with cells aggregates and spheroids with tubulo-acinar formation. The in vivo parameters showed no decrease in ascites tumor volume, however, the orthotopic model, jararhagin induces the inflammatory response and extracellular matrix remodeling with changes in the collagen distribution and organization. It is concluded that jararhagin induces cytotoxicity in breast tumor and normal cell lines, and was able to induce inflammatory infiltrate during the growth and dissemination of tumor cells.

As raízes de Pfaffia paniculata têm sido popularmente utilizadas com vários propósitos, assim como adjuvante na terapia contra o câncer. Recentemente demonstramos que as raízes pulverizadas de Pfaffia paniculata causam uma atenuação do crescimento do tumor de Ehrlich em sua forma ascítica. Os objetivos do presente estudo foram caracterizar os efeitos do extrato etanólico, resíduos aquoso ou butanólico de Pfaffia paniculata sobre o desenvolvimento do tumor de Ehrlich, assim como investigar seus possíveis mecanismos. Em um primeiro experimento, foi demonstrado que camundongos machos Swiss, portadores do tumor de Ehrlich ascítico, tratados com resíduo aquoso ou butanólico, apresentaram uma maior sobrevida em relação aos animais controle. Nos experimentos com o tumor na forma sólida ou ascítica, os animais receberam, diariamente, o resíduo butanólico por 16 dias (experimento com o tumor sólido) ou 15 dias (experimento com o tumor ascítico). No 8º dia de tratamento, foram inoculados com 2,5 x 106 células tumorais, no coxim plantar esquerdo, ou com 5,0 x 106 células tumorais, Intraperitonealmente. O tumor ascítico foi avaliado, 7 dias após a inoculação do tumor, pela quantificação do volume de fluído ascítico, concentração de células tumorais e número total de células tumorais. O tumor sólido foi avaliado pela mensuração diária das patas e pela morfometria da área de necrose em meio à massa tumoral em cortes corados por HE, e proliferação celular, por imunoistoquímica, 8 dias após a inoculação do tumor. Nesses experimentos, nenhum destes parâmetros avaliados apresentaram alterações nos camundongos tratados com este resíduo. A fim de se avaliar a toxicidade do resíduo butanólico, os animais foram tratados com este resíduo por 14 dias. Os animais tratados com este resíduo apresentaram uma discreta diminuição de ganho de peso. Não houve evidências de toxicidade hepática e renal, pela mensuração das atividades de enzimas indicativas de necrose e pelo exame histopatológico de figado e rim, onde não se observou necrose. Em outro experimento, alguns parâmetros da atividade macrofágica, 24 após a inoculação do tumor, foram avaliados, por citometria de fluxo. Os animais receberam o resíduo butanólico por 7 dias, e foram inoculados com 5 x 106 células tumorais, intraperitonealmente. O burst oxidativo ativado por Staphylococcus aureus foi menor em animais tratados com o resíduo, porém não foram observadas diferenças ma fagocitose e burst oxidativo espontâneo ou ativado por PMA. Por fim, estudos in vitro foram realizados. Os efeitos deste resíduo sobre a viabilidade, medido pelo ensaio do MTT, e sobre o ciclo celular, utilizando citometria de fluxo, de células do tumor de Ehrlich foram avaliados. As maiores concentrações do resíduo levaram a uma diminuição da viabilidade e um aumento de morte celular. Assim, o tratamento com este resíduo, in vivo, causou uma atenuação do desenvolvimento tumoral, provavelmente devido a uma diminuição na formação do fluído ascítico ou a morte celular. Os efeitos deste resíduo foram mais pronunciados em cultura celular. / The roots of Pfaffia paniculata have been popularly used for various purposes, as well as an adjuvant for cancer therapy. Recently we have shown that the powdered roots of Pfaffia paniculata promote an attenuation of the Ehrlich tumor growth in its ascitic form. The aims of the present study were to characterize the effects of the ethanolic extract, aqueous or butanolic residues of Pfaffia paniculata on Ehrlich tumor development in mice, as well as investigate its possible mechanisms. In a first experiment, it was shown that aqueous or butanolic residues-treated Swiss mice bearing Ehrlich ascites tumor presented a higher survival time than control animal. In the experiments with the tumor in its solid or ascitic forms, the animals were given, daily, the butanolic residue for 16 days (experiment with solid tumor) or 15 days (experiment with ascitic tumor). On the 8o day of treatment, they were inoculated with 2,5 x 106 tumor cells, on the left footpad, or with 5 x 106 tumor cells, intraperitoneally. The ascitic tumor was evaluated, 7 days after the inoculation of the tumor, by the quantification of the volume of the ascitic fluid, concentration of tumor cells and total number of tumor cells. The solid tumor was evaluated by the daily measurement of the footpads and morphometry of the necrosis within the tumor area on HE stained slices, and cell proliferation by immunohistochemistry, 8 days after the inoculation of the tumor. In these experiments, none of these parameters showed any alterations in mice treated with the residue. In order to evaluate the toxicity of butanolic residue, the animals were treated with this residue (200mg/Kg) for 14 days. The animals treated with the residue showed a discrete decrease on weight gain. There were no evidences of hepatic and renal toxicity, by measurement of enzymes activities of necrosis, and also lack of necrosis by histopathological analysis of liver and kidney. In another experiment, some parameters of macrofagic activity, 24 hours after the inoculation of tumor, were evalueted, by flow citometry. The animals received the butanolic residue for 7 days and then were inoculated with 5 x 106 tumor cells, intraperitoneally. The oxidative burst activated by Staphylococcus aureus was reduced on animals treated with the residue, but no differences on fagocytosis and spontaneous or oxidative burst esimulated by PMA were found. Finally, in vitro studies were performed. The effects of this residue on the cell viability, measured by the MTT assay, and on the cell cycle, by flow cytometry, in Ehrlich tumor cells were evaluated. The highest concentrations of the residue caused a decrease of the cell viability and an increase of death cell. Thus, the treatment with this residue, in vivo, caused an attenuation of the tumor development, likely due to a decrease in the ascitic fluid formation or cell death. The effects of this residue on cell death were more pronounced in cultured cells. These results point to a novel agent for the cancer therapy, but further studies must be performed to elucidate the mechanisms responsible for these effects.

A eletroquimioterapia (EQT) é uma modalidade de tratamento recente que se baseia na associação de quimioterápicos potencializados pela eletroporação. Possui indicação para neoplasias sólidas de origens histológicas distintas, apresentando baixa morbidade e elevada eficiência. A ação da EQT ocorre em múltiplos sítios, tanto envolvendo a quebra da molécula de DNA, quanto exercendo efeito sobre a vasculatura tumoral. No presente estudo buscou-se maior compreensão dos eventos vasculares, avaliando-se qualitativamente e quantitativamente, com auxílio de marcação imunológica, com fator VIII e VEGF-A, a vascularização do tumor de Ehrlich implantado na forma sólida em camundongos, não tratados e submetidos à EQT com bleomicina, após sete dias de tratamento. No intuito de melhor elucidar os fenômenos vasculares, também foi investigado o efeito do resveratrol associado à EQT. O resveratrol, presente em vegetais como as uvas, possui efeitos de inibição do HIF1-α, reconhecida proteina que estimula a angiogênese em condições de hipoxia tumoral. Os animais submetidos à quimioterapia com bleomicina não apresentaram redução de volume tumoral, ao contrário dos que sofreram EQT com o mesmo fármaco. Evidenciou-se maior densidade microvascular tumoral em animais tratados com quimioterapia, quando comparados aos não tratados e aos submetidos à EQT. O tratamento com resveratrol diminuiu a expressão de VEGF-A e obteve efeito mais pronunciado quando associado à EQT com bleomicina. Através dos fenômenos pesquisados pôde-se evidenciar que a EQT com bleomicina foi efetiva na redução do volume do tumor de Ehrlich e que houve redução da atividade proliferativa assim como da densidade microvascular tumoral. Também observou-se que o resveratrol, ainda mais quando associado à EQT com bleomicina, reduz a proliferação tumoral e a expressão de VEGF-A / The electrochemotherapy (EQT) is a new treatment modality based on the association of chemotherapy potentiated by electroporation. Has indication for solid neoplasms of histological distinct origins, presenting low morbidity and high efficiency. The action of the EQT occurs in multiple sites, both involving the breakage of the DNA molecule, as having an effect on the tumor vasculature. The present study aimed at better understanding of vascular events, evaluating qualitatively and quantitatively, using immune labeling, with factor VIII and VEGF-A, the vascularization of the Ehrlich tumor implanted in solid form in mice, untreated and submitted to EQT with bleomycin, after seven days of treatment. In order to better elucidate the vascular phenomena, was also investigated the effect of resveratrol associated with EQT. The resveratrol present in plants such as grapes, has inhibitory effects of HIF1-α, a protein that is recognized to stimulates angiogenesis in tumor hypoxia. The animals submitted to chemotherapy with bleomycin showed no reduction of tumor volume, unlike those who suffered EQT with the same drug. It was evidenced increased microvessel density tumor in animals treated with chemotherapy, when compared to untreated and those submitted to EQT. The treatment with resveratrol decreased the expression of VEGF-A and obtained effect was more pronounced when associated to the EQT with bleomycin. This research can prove that the EQT with bleomycin was effective in reducing the volume of Ehrlich tumor and that there was a reduction of proliferative activity as well as of microvascular density tumor. Also it was observed that the resveratrol, even more when associated with EQT with bleomycin, reduces the tumor proliferation and the expression of VEGF-A

Atualmente, os estudos Ômicos, principalmente no campo da metabolômica, têm tido grandes avanços contribuindo para a descoberta de novos biomarcadores e consequentemente aumentando a eficiência do tratamento do câncer. A lipidômica é um novo ramo da metabolômica que visa o estudo abrangente dos lipídeos presentes em um determinado organismo dando ênfase ao metabolismo dos lipídeos e como estão relacionados à progressão da doença. A utilização da espectrometria de massas aliada a abordagens bionalíticas tem progredido rapidamente nos últimos anos, possibilitando a análise e compreensão de pequenas moléculas no contexto biológico e de desenvolvimento do câncer. Dessa forma, para a obtenção de uma boa cobertura lipídica, o preparo de amostra, os parâmetros cromatográficos e o processamento de dados são de suma importância. Nesse trabalho foi avaliado o perfil lipídico de amostras de plasma advindas do modelo animal de Ehrlich, um adenocarcinoma mamário em camundongos fêmeas. Na primeira parte do estudo foi utilizado o método de extração de lipídeos por Bligh-Dyer e realizadas comparações entre plasma de camundongo com tumor de Ehrlich induzido e plasma de camundongo controle, além da comparação entre plasma de camundongo com tumor de Ehrlich e fluido tumoral ascítico de Ehrlich. Através dos modelos obtidos foi observado que no modo negativo de ionização foram obtidos ácidos graxos significativamente diferentes entre os grupos, através do modelo de PLS-DA, dando ênfase ao perfil de ácidos graxos saturados, que mostraram-se em maior quantidade no plasma de Ehrlich. No modo positivo, alterações nos níveis de fosfatidilcolinas (PCs) foram obtidos, indicando a fosfocolina como potencial biomarcador para o câncer de mama, destacando-se as vias metabólicas mais afetadas: metabolismo do ácido linoléico e dos glicerofosfolipídeos. Já a comparação entre fluido tumoral e plasma de Ehrlich foi obtido, através dos dados no modo negativo de ionização e pelo modelo de PLS-DA, que informações lipídicas do tumor podem ser refletidas no plasma, em especial para o conteúdo de ácidos graxos, fosfotidilcolinas e fosfatidiletanolaminas (PEs). Uma segunda abordagem utilizada nessa tese foi a utilização da amostragem in vivo por microextração em fase sólida (SPME) para avaliação metabólica. Os principais parâmetros de SPME que podem afetar a eficiência da extração foram avaliados: tempo de extração e tempo de dessorção. Por meio de um planejamento experimental foram obtidos 10 min e 20 min, respectivamente, para cada variável. Após processamento dos dados foram obtidos 142 e 78 features no modo positivo e negativo, respectivamente. Através dos dados obtidos no modo negativo, e do modelo de PLS-DA construído foi possível avaliar possíveis biomarcadores responsáveis pela diferenciação do fluido tumoral e do fluido presente no camundongo controle, destacando ácidos graxos saturados, o ácido lisofosfatídico (LPA 18:0), fosfatidilinositol (PI 36:0) e derivados de colesterol. O presente estudo apresentou resultados que devem ser melhor explorados e correlacionados com dados a partir de amostras de humanos, podendo ser um indicador para o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos para câncer de mama. / Currently, the \"omics\" studies mainly in the field of metabolomics, have increasinly contributed to the discovery of new biomarkers and consequently increasing the efficiency of cancer therapy. Lipidomics is a new approach of the metabolomics that aims the comprehensive study of the lipids present in a given organism, emphasizing the metabolism of lipids and how they are associated to the progression of the disease. Mass spectrometry coupled to bionalytical tools has progressed rapidly in recent years, making it possible to analyze and to understand small molecules in the biological context in the development of cancer. Thus, to obtain a good lipid coverage, sample preparation, chromatographic parameters, and the data processing are important. In this work, the lipid profile of plasma samples from the Ehrlich animal model, a mammary adenocarcinoma in female mice, was evaluated. In the first part of the study the method of lipid extraction by Bligh-Dyer was used and comparisons were performed between mouse plasma with induced Ehrlich tumor and control mouse plasma. In addition, comparison between mouse plasma with Ehrlich tumor and Ehrlich ascitic tumor fluid was performed. Through multivariate models PLS-DA was observed that in the negative ionization mode fatty acids were significantly different between the groups, emphasizing the profile of saturated fatty acids in higher levels in the plasma of Ehrlich. In the positive mode of ionization changes in phosphatidylcholine (PCs) levels were obtained, indicating the phosphocholine group as potential biomarker for breast cancer, with metabolic pathways of the linoleic acid and glycerophospholipids metabolism the most affected. The comparison between tumor fluid and Ehrlich plasma was obtained through the negative mode dataset using the PLS-DA model, showing that the lipid information of tumor can be reflected in the plasma, especially for the fatty acid, phosphotidylcholine and phosphatidylethanolamine (PE). A second approach used in this thesis was the using of the in vivo sampling by solid phase microextraction (SPME). Times of extraction and desorption were the main parameters of SPME assessed using experimental design since they can affect the efficiency of extraction, where 10 and 20 min were the better times of extraction and desorption obtained, respectively. After processing the dataset, 142 and 78 features were obtained in the positive and negative modes of ionization, respectively. Through the data obtained in the negative mode, PLS-DA model was able to evaluate possible biomarkers responsible for the differentiation between tumor fluid and that fluid present in the control mouses, highlighting saturated fatty acids, lysophosphatidic acid (LPA 18:0), phosphatidylinositol (PI 36:0) and cholesterol derivatives. The present study showed results that should be better explored and correlated with data from human samples, and may be an indicator for the development of new therapeutic agents for breast cancer.

Os benzodiazepínicos são amplamente utilizados devido às suas propriedades ansiolíticas e sedativas mediadas pelo complexo GABAA no Sistema Nervoso Central. Porém, posteriormente foi demonstrado que os mesmos também atuam no Receptor Periférico para Benzodiazepínico (PBR), conhecido atualmente como Proteína Translocadora (TSPO), expresso tanto em células normais como também em células tumorais. O presente trabalho avaliou os efeitos in vivo da administração de diazepam sobre o crescimento do tumor ascítico de Ehrlich em camundongos e o envolvimento da TSPO mediando este efeito. Mais especificamente, estudamos o crescimento tumoral, fases do ciclo e morte celular, assim como a produção de Espécies Reativas de Oxigênio (EROs) e a expressão de TSPO nas células tumorais, após o tratamento com diazepam, Ro5-4864 ou clonazepam (3,0 mg/kg, via oral, por 7 dias). Quantificou-se também os níveis de diazepam no plasma e no fluido ascítico dos camundongos portadores do tumor. Finalmente, o sequenciamento parcial de Tspo das células do tumor de Ehrlich e a presença de receptores de estrógeno foram avaliadas. Os resultados mostraram que o tratamento in vivo com diazepam aumentou: (1) o crescimento do tumor ascítico de Ehrlich e a porcentagem de células em fase G2-M, (2) a porcentagem de células positivas para anexina e PI, (3) a produção de EROs. No mesmo sentido, o tratamento in vivo com Ro5-4864: (4) Aumentou o crescimento do tumor ascítico de Ehrlich e a porcentagem de células em fase S, (5) Não modificou a porcentagem de morte celular, (6) Aumentou a produção de EROs. Por outro lado, o tratamento in vivo com clonazepam não modificou: (7) quer o crescimento do tumor quer o ciclo celular, (8) a porcentagem de morte celular, (9) a produção de EROs. Além disso, o tratamento in vivo com diazepam não interferiu com a expressão de TSPO (western blot e citometria de fluxo) ou com os valores de Kd e Bmax de PK11195 (binding) presentes nas células do tumor de Ehrlich; entretanto, detectou-se a presença de polímeros, de alta porcentagem de células positivas para TSPO e uma alta afinidade de PK11195 por TSPO. Este mesmo tratamento resultou em níveis quantificáveis de diazepam no plasma e no fluido ascítico de animais portadores do tumor de Ehrlich. Finalmente, o sequenciamento parcial da Tspo presente nas células tumorais revelou 3 mutações nos nucleotídeos, sendo 1 delas silenciosa. Desta forma, estes resultados sugerem que as ações in vivo do diazepam sobre o crescimento do tumor ascítico de Ehrlich ocorram de maneira dependente e direta na TSPO existente em células do tumor de Ehrlich. Essas ações parecem envolver um aumento da produção de EROs e não modificam a expressão de TSPO. Finalmente o padrão farmacológico e bioquímico de expressão de TSPO nas células do tumor de Ehrlich pode indicar um papel dos mesmos na patogênese do câncer. / Benzodiazepines are widely used due to their anxiolitic and sedative properties, acting on specific site coupled to GABAA complex in the Central Nervous System. However, benzodiazepines have been shown to have high affinity for Peripheral Benzodiazepine Receptor site (PBR), now renamed as Translocator Protein (TSPO), expressed in normal cells, and being up-regulated on cancer cells. The present study evaluated the diazepam in vivo effects on Ehrlich ascitic tumor growth in mice and also the TSPO role in mediating this effect. Specifically we evaluated the tumor growth, cell cycle and cell death, and also the Reactive Oxygen Species (ROS) production and TSPO expression on tumor cells after diazepam, Ro5-4864 or clonazepam treatments (3.0 mg/kg, per oral, during 7 days). Furthermore, diazepam levels on plasma and on ascitic fluid taken from Ehrlich ascitic tumor bearing mice were quantified. Finally, the parcial Tspo sequencing on Ehrlich cells and Estrogen Receptor detection was evaluated. Results showed that diazepam in vivo treatment increased: (1) Ehrlich tumor growth and percentage of cells on G2-M phase, (2) percentage of positive cells for both annexin and PI, (3) ROS production. In the same way, Ro5-4864 in vivo treatment: (4) increased Ehrlich tumor growth and percentage of cells on S phase, (5) did not change the percentage of cell death, (6) increased ROS production. On the other hand, clonazepam in vivo treatment did not modify: (7) both Ehrlich tumor growth and cell cycle, (8) the percentage of cell death, and, (9) ROS production. Moreover, the in vivo diazepam treatment did not interfere with TSPO expression (western blot and flow cytometry) or Kd and Bmax values for PK11195 (binding) detected on Ehrlich tumor cells; however, the presence of TSPO polymers, a high percentage of TSPO positive cells and a high PK11195 afinity were found on these cells. This same treatment resulted on diazepam levels that were quantified on plasma and ascitic fluid from Ehrlich tumor bearing mice. Finally, Tspo partial nucleotide sequencing reaveled three point mutations, one of them is silent. Taken together, these data suggest that diazepam in vivo effects on Ehrlich tumor growth are TSPO-dependent. These actions may involve an increase on ROS production and seems not to be related to modifications on TSPO expression on tumor cells. Finally, TSPO pharmacological and biochemical properties on Ehrlich tumor cells are similar to those described in other tumor cells and may indicate a possible role for this protein on cancer pathogenesis.

A Ipomoea carnea é uma planta tóxica de distribuição nacional e encontrada também em outros países de clima tropical. Possui entre seus princípios ativos um alcalóide indolizidínico chamado suainsonina que, devido à sua ação sobre enzimas intracelulares (a &alpha;-manosidase ácida e a manosidase II do Complexo de Golgi), altera receptores de membrana e moléculas de adesão. Acredita-se que a suainsonina possa ter atividades imunomodulatória, mieloprotetora, antineoplásica e antimetastática. Devido ao potencial terapêutico sugerido pela literatura, nesse estudo avaliou-se os possíveis efeitos antineoplásico e mieloprotetor da suainsonina empregada isoladamente ou em associação com um antineoplásico clássico, a cisplatina. Além disso, procurou-se avaliar se a administração do resíduo aquoso final da Ipomoea carnea (RAF), isoladamente ou também associado à cisplatina, possui atividade anitineoplásica. Foram utilizados camundongos C57Bl/6, que foram inoculados por via intraperitoneal (ip.) com 2x107 células do tumor ascítico de Ehrlich. Os animais foram divididos nos grupos: BRANCO, CONTROLE e tratados com: cisplatina (CIS); cisplatina e suainsonina (CISSW); suainsonina (SW); cisplatina e RAF (CISRAF); e RAF (RAF). A suainsonina foi administrada por via ip. 2x ao dia (1mg/kg de peso vivo). A cisplatina foi administrada por via ip. em dias alternados (0,25mg/kg). A administração do RAF foi realizada por gavage, na dose de 3g de folhas secas/kg de I. carnea. Foi avaliada a sobrevida, o crescimento tumoral e a celularidade da medula óssea e do baço. Os resultados mostraram que apenas o grupo CISSW apresentou aumento significativo na sobrevida em relação ao grupo CONTROLE (Logrank test, p<0,05). Em relação ao crescimento tumoral, os grupos CIS e CISSW apresentaram diminuições significantes quanto comparados ao grupo CONTROLE; porém, o grupo CISSW apresentou melhores resultados (ANOVA com pós teste de Dunns, p<0,001) quando comparado ao grupo CONTROLE,enquanto os animais tratados com o RAF não apresentaram diferenças significantes. Dados sobre o ciclo celular (citometria de fluxo) revelaram que todos os animais tratados com a cisplatina (CIS, CISSW e CISRAF) apresentaram aumento significante no número de células tumorais em apoptose, porém o grupo CISSW apresentou melhores resultados, prejudicando de maneira mais eficiente o ciclo celular das células tumorais. As análises referentes à atividade mieloprotetora da suainsonina não apresentou dados relevantes. Estes dados em conjunto indicam efeito antineoplásico sinérgico da suainsonina quando administrada concomitantemente com a cisplatina. / Ipomoea carnea is a toxic plant widely distributed in Brazil and other tropical countries. Among its active principles I. carnea has the indolizidine alkaloid swainsonine, which inhibits intracellular enzymes (the lysosomal &alpha;-mannosidase and the Golgi mannosidase II) and alters membrane receptors and adhesion molecules. It is known that swainsonine presents the following activities: imunommodulatory, bone marrow protective, antineoplastic e antimetastatic. Due to the therapeutical potencial suggested by other authors, the present study was performed to evaluate the antineoplastic and bone marrow protective effects of swainsonine when used alone or in association with a classic chemotherapy agent like cisplatin. Moreover, the antineoplastic effect of the I. carnea aqueous fraction (AF), when administered alone or in association with cisplatin, was evaluated. For this, male C57Bl/6 mice were randomly assigned to seven groups: UNTREATED; CONTROL; CIS (treated with cisplatin); CIS-SW (treated with cisplatin and swainsonine); SW (treated with swainsonine); CIS-AF (treated with cisplatin and I. carnea aqueous fraction); and AF (treated only with I. carnea aqueous fraction). All animals except for those from the untreated group received an intraperitoneal (ip.) inoculation of 2x107 viable Ehrlich Ascites Carcinoma cells on day zero. Swainsonine was administered by the ip. route twice a day (1mg/kg of body weight), cisplatin was administered by the ip. route in alternate days (0.25mg/kg) and AF (3g of I. carnea dry leaves/kg) was administered by the oral route (gavage). Survival rate, tumor growth, bone marrow and spleen cellularity were evaluated. The only group that showed a significant increase on the survival rate when compared to CONTROL was CISSW (Logrank test, p<0.05). Considering tumor growth, both CIS e CISSW groups showed significant decreases in this parameter when compared to CONTROL. However, this decrease was better observed in the CISSW group (ANOVA followed by Dunns test, p<0,001), when compared to the CONTROL. Treatment with AF did not cause significant differences. The cell cycle results (flow citometry) revealed a significant increase in the number of apoptotic tumor cells in all animals treated with cisplatin (CIS, CISSW e CISRAF), although CISSW showed better results, altering the cycle of the tumor cells more efficiently. Swainsonine did not present any relevant protective activity on the bone marrow. These results suggest the existence of a synergism when swainsonine is administered in association with cisplatin.