Os benzodiazepínicos (BZD) são uma das classes de medicamentos mais consumidas mundialmente e sua utilização deve ser norteada pela administração das menores doses terapêuticas e pelo menor período de tempo possível devido aos riscos de dependência e abuso. Diante disso se faz necessário o acompanhamento farmacoterapêutico de pacientes para mensurar as concentrações plasmáticas dos fármacos e observar a sua efetividade e sua segurança. Para isso foi utilizado uma técnica de polímero de impressão molecular restrito a ligação com macromoléculas (RAM-MIP-BSA). O RAM-MIP-BSA, é um polímero sintetizado pelos métodos tradicionais e posteriormente revestido com uma camada hidrofílica que elimina as macromoléculas das amostras tornando o preparo de amostra mais simples e sendo aplicado diretamente na extração em fase sólida. Este estudo teve como objetivo a síntese de um RAM-MIP-BSA para uma classe farmacêutica (benzodiazepínicos) para fins de monitorização terapêutica. O diazepam foi utilizado como molécula modelo na síntese do polímero que foi acondicionado em cartucho para extração em fase sólida, sendo esta extração SPE-RAM-MIP-BSA a única etapa de preparo de amostra. O eluato da SPE foi levado à secura e ressuspendido para injeção em sistema cromatográfico com fase móvel de tampão fosfato 0,01 M pH 3,0 e acetonitrila (65:35, v/v); fluxo de 1 mL/min; detecção em UV a 220 nm; coluna C8; volume de injeção de 200 μL e tempo de análise cromatográfica de 20 minutos. O método foi validado segundo normas vigentes da ANVISA, demonstrando ser preciso, exato e estável e linear na faixa de 10 a 800 ng/mL. O RAM-MIP-BSA eliminou 100% das proteínas do plasma, sendo o processo de extração rápido, e pequena utilização de solventes orgânicos. Dos 18 voluntários incluídos no estudo em uso de BZD, 66,6% apresentaram níveis muito acima do intervalo terapêutico para cada fármaco. Este dado, que pode contribuir eventos adversos ou tóxicos, pode ser causado por interações entre medicamentos, desde que os pacientes estão em politerapia ou por alterações fisiológicas ocasionadas pelo envelhecimento, uma vez que 62% dos pacientes incluídos apresentam idade acima de 60 anos. / The Benzodiazepines (BZD) are a drugs class of most used worldwide and their use should be guided by administration of smaller doses and for the shortest period of time because due to dependence and abuse situations. Therefore, it is necessary pharmacokinetic and pharmacodynamic patients monitoring in order to determine plasma concentration of drugs and observe its effectiveness and safety. For this purpose a technique of molecular imprinting polymer restricted binding to macromolecules (RAM-MIP-BSA) was used. The RAM-MIP-BSA is a polymer synthesized by traditional methods and subsequently coated with a hydrophilic layer that eliminates the macromolecules of samples by making sample preparation simple in solid phase extraction. This study aims to synthesis of a RAM-MIP-BSA to a pharmaceutical class (benzodiazepines) for therapeutic drug monitoring. Diazepam was used as a model molecule in polymer synthesis; after synthesis, the polymer was packed into a cartridge for solid phase extraction, and extraction single step sample preparation. The eluate from SPE was evaporated to the dryness and resuspended for injection into the chromatographic system with mobile phase of 0.01 M phosphate buffer pH 3.0 and acetonitrile (65:35, v / v), flow rate 1 mL/min, UV detection at 220 nm; C8 column , injection volume of 200 μL and chromatographic analysis time of 20 minutes. The method was validated according to the current standards of ANVISA, proving to be precise, accurate and stable and linear in the range 10-800 ng / mL. The RAM-MIP-BSA eliminated 100% of the plasma proteins, with the rapid extraction process, and little use of organic solvents. The 18 subjects included in the study on the use of BZD, 66.6% presented levels above the therapeutic range for each drug. This data, which may contribute toxic or adverse events may be caused by drug interactions, since patients are on polytherapy or physiological changes caused by aging, since 62% of patients have included age over 60 years..

Submitted by Emanoel Martins Filho (emanoelfilho@ufba.br) on 2016-09-12T20:43:37Z No. of bitstreams: 1 Ana_Rosa _Otero.pdf: 933122 bytes, checksum: 172dcee08d4bf2f715ad6aa990a20e73 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso (pbarroso@ufba.br) on 2016-09-13T20:35:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Ana_Rosa _Otero.pdf: 933122 bytes, checksum: 172dcee08d4bf2f715ad6aa990a20e73 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-13T20:35:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana_Rosa _Otero.pdf: 933122 bytes, checksum: 172dcee08d4bf2f715ad6aa990a20e73 (MD5) / Objetivou-se avaliar os efeitos cardiorrespiratórios e sobre a qualidade da recuperação anestésica, decorrentes da infusão contínua de dexmedetomidina, associada ou não ao midazolam em cadelas submetidas à ovariosalpingohisterectomia. Foram utilizadas 20 cadelas adultas hígidas, distribuídas em dois grupos denominados grupo dexmedetomidina (GD) e grupo dexmedetomidina-midazolam (GDM). Procedeu-se a pré-medicação com atropina (0,044 mg/kg) e, após 15 minutos, administrou-se propofol IV, em dose suficiente para intubação orotraqueal, mantendo-se a anestesia com isofluorano. O grupo GD recebeu dexmedetomidina em bolus (2 μg/kg), seguido de infusão contínua (2 μg/kg/h). O grupo GDM recebeu o mesmo tratamento acrescido do midazolam nas doses de 0,2 mg/kg e 0,2 mg/kg/h, respectivamente. As cadelas foram submetidas à ovariosalpingohisterectomia, registrando-se as variáveis cardiorrespiratórias imediatamente antes da aplicação da dexmedetomidina ou de dexmedetomidina e midazolam (M0) e imediatamente após, em intervalos de 10 minutos durante 40 minutos (M1 a M4). Foram avaliados os tempos e a qualidade da recuperação anestésica. No GD houve aumento inicial das PAS, PAD e PAM e redução da FC. A associação dexmedetomidina-midazolam resultou em maior estabilidade hemodinâmica. Ambos os protocolos são considerados seguros e proporcionam adequada recuperação anestésica. / The aim of this study was to evaluate the cardiorespiratory effects and quality of anesthetic recovery due to the continuous infusion of dexmedetomidine associated or not with midazolam in bitches submitted to ovariosalpingohisterectomy. Twenty healthy adult bitches were used and distributed on two groups named dexmedetomidine group (GD) and dexmedetomidine-midazolam group (GDM). All animals received atropine (0.044 mg/kg) and, after 15 minutes, propofol IV was infused in a dose sufficient to orotracheal intubation and anesthesia was maintained with isofluorane. GD group received bolus administration of dexmedetomidine (2 μg/kg) followed by continuous infusion (2 μg/kg/h). GDM group received the same treatment plus midazolam in a dose of 0.2 mg/kg and 0.2 mg/kg/h respectively. The bitches were submitted to ovariosalpingohisterectomy and cardiorespiratory data were registered immediately before dexmedetomidine or dexmedetomidine and midazolam administration (M0) and immediately after, every ten minutes, for 40 minutes (M1 to M4). Times and quality of anesthetic recovery were evaluated. There were an initial increase of systolic, median and diastolic blood pressure and decrease of heart rate in GD group. The association dexmedetomidine-midazolam resulted on improved hemodynamic stability. Both protocols are considered secure and provide adequate anesthetic recovery.

GOMES, B. V. O consumo de benzodiazepínicos e antidepressivos por mulheres na Estratégia Saúde da família. 2015. 107 f. Dissertação (Mestrado em Saúde da Família) - Campus Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2015. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-27T11:49:15Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_bvgomes.pdf: 1180378 bytes, checksum: a5946455217b59e5da7379d641d94576 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-10-05T15:03:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_bvgomes.pdf: 1180378 bytes, checksum: a5946455217b59e5da7379d641d94576 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-05T15:03:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_bvgomes.pdf: 1180378 bytes, checksum: a5946455217b59e5da7379d641d94576 (MD5) Previous issue date: 2015 / On many occasions, in the face of the suffering and frustrations that life can offer, the most plausible way out seems to be resorting to the use of some kind of psychotropic drug; this led us to question the context of life for users of medications containing benzodiazepine and antidepressive agents. In this study we proposed to analyze the consumption characteristics of medications containing benzodiazepine and/or antidepressive agents by women in the Family Health Strategy from the municipality of Sobral-Ceará. Seventy-five women participated in this study. This study was completed using the mixed-methods technique at 5 Primary Health Care Centers (PHCC), in the municipality of Sobral and the target public consisted of women - users of medications containing benzodiazepine and/or antidepressive agents for a period greater than 12 consecutive months and accepting participation in this study through signing the Informed Consent Form (ICF). Information was collected by means of a form and a semi-structured interview script, from January to March 2014. Quantitative data were analyzed using descriptive statistics and qualitative data by means of axial coding. The results present the following profile for the women: white/fair skinned (57.3%), married (52.0%), in civil union for over 30 years (36.0%), and literate (76.0%), with family income of one minimal wage or less (74.6%). Concerning the length of use, 66% of the women interviewed had taken medications containing benzodiazepine and/or antidepressive agents for more than 5 years, the longest being 36 years; the main prescriber is the physician at the PHCC. The triggering factors for the consumption of medications containing benzodiazepine and psychotropic drugs were divided into three categories: losses and deaths; relationship problems; health problems. Our findings signaled that the onset of consumption is intimately related to marital and family problems, and the monitoring of these women requires a holistic approach for the medication not to be used as a support, quite often being inadequate for a problem of non-physiological origin. Our study will contribute to the reflection of the users themselves on their relationship with the medication, and for the health team to rethink the care to these women, seeking non-pharmacological strategies to provide the assistance that these women need. / Muitas vezes diante do sofrimento e das frustrações oferecidas pela vida, a saída mais plausível parece ser recorrer ao uso de algum tipo de psicotrópico, isto nos levou a questionar qual o contexto de vida das usuárias de benzodiazepínicos e antidepressivos. Propomo-nos neste estudo a analisar as características do consumo de benzodiazepínicos e/ou antidepressivos por mulheres na Estratégia Saúde da Família do município de Sobral-Ceará. Participaram da pesquisa 75 mulheres. Utilizamos como abordagem a técnica de métodos mistos, tivemos como cenário de pesquisa 05 UBS no município de Sobral e como público alvo mulheres usuárias de benzodiazepínicos e/ou antidepressivos por período superior a 12 meses ininterruptos e que aceitaram participar da pesquisa assinando o TCLE. As informações foram coletadas através de formulário e roteiro de entrevista semiestruturada, nos meses de janeiro a março de 2014. Os dados quantitativos foram analisados utilizando a estatística descritiva e os dados qualitativos através da codificação axial. Os resultados demonstram o seguinte perfil: mulher branca (57,3%), casada (52%), tempo de união acima de 30 anos (36,0%), com 4 filhos ou mais (36%), alfabetizada (76%) e com renda familiar de um salário mínimo ou menos (74,6%). Quanto ao tempo de uso, 66% das mulheres entrevistadas fazem uso de benzodiazepínicos e/ou antidepressivos há mais de 5 anos, sendo o maior tempo 36 anos, o principal prescritor é o médico da UBS. Os fatores desencadeadores do consumo de benzodiazepínicos e psicotrópicos foram divididos em três categorias: perdas e mortes; problemas de relacionamento; problemas de saúde. Nossos achados sinalizaram que o início do consumo está intimamente relacionado com problemas conjugais e familiares e que o acompanhamento dessas mulheres precisa de um olhar holístico para que o medicamento não seja um suporte, muitas vezes inadequado para um problema de ordem não fisiológica. Nosso estudo contribuirá para uma reflexão das própias usuárias sobre o seu relacionamento com a medicação e para a equipe de saúde repensar o cuidado a essa mulher, buscando estratégias não farmacológicas para prestar a assistência à qual essa mulher necessita.

O objetivo do presente estudo foi determinar a prevalência do uso de benzodiazepínicos (BZDs) em mulheres de uma unidade da Estratégia de Saúde da Família (ESF). Analisou-se também as possíveis associações do uso de BZD com fatores sociodemográficos, acometimento de doenças crônicas e uso de outros psicotrópicos. O recorte de gênero justifica-se pelas evidências científicas de maior uso destes fármacos por mulheres. O lócus da atenção básica foi escolhido a partir da observação sobre a carência de estudos, especialmente brasileiros, neste setting. Trata-se de um estudo quantitativo, de corte transversal e caráter correlacional e descritivo. Os dados foram coletados nos prontuários, fichas cadastrais e arquivo de receitas da farmácia responsável pela região. Foram realizadas análises através de estatística descritiva, análises bivariadas e regressão logística considerando como variável desfecho o uso de BZDs. A prevalência encontrada no presente estudo foi de 7,4% (n=1094), abaixo das descritas em estudos similares. Entende-se que o foco mais preventivo das ESFs possam contribuir para estes achados ou que a qualidade dos registros tenha interferido nestes resultados. As usuárias de BZDs estudadas estavam em sua maioria na faixa de idade de 56 a 74 anos (48,4%), estudaram somente até o primeiro grau completo (65,6%), autorreferiram pelo menos uma doença crônica (82,2%) e quase metade usava, concomitantemente, pelo menos um outro psicotrópico (48,4%). Houve associação significativa entre usar BZDs e ter baixa escolaridade (p=0,005), apresentar doenças autorreferidas (p=0,000) e consumir outros psicotrópicos (p=0,000). A associação entre idades mais elevadas e uso de BZDs (p=0,005) também foi significativa. As análises apontaram ainda que as mulheres que usavam outros psicotrópicos apresentaram cinco vezes mais chances de usar BZDs do que as que não usavam. As mulheres com doença autorreferida apresentaram quase cinco vezes mais chances de usarem BZDs do que as que não referiram doenças. Conclui-se que o grupo que deve ser priorizado em relação ao consumo destas substâncias é o de mulheres de meia idade ou mais, com pouca escolaridade e doença crônica. Recomenda-se que as equipes se atentem para as necessidades psicossociais das pessoas com transtorno mental, discutam e empreendam esforços para implementar ações para inserção e reinserção social e de ampliação das redes de apoio que possam ser estratégicas no auxílio à contenção dos sintomas e melhoria da qualidade de vida dessas pessoas, na tentativa de evitar o uso de mais psicotrópicos e/ou de serviços de maior complexidade / The aim of the present study was identifying the prevalence of Benzodiazepine (BZD) by women in a Family health care program (FHPs). It was also analyzed the possible associations of the use of BZD with sociodemographic factors, affection of chronic diseases and use of other psychotropic drugs. The choice of gender was justified by scientific literature pointing women to be the major BZD users. The choice of basic health care was done because of the lack in studies in those settings in Brazil. It is a quantitative study of cross section and of correlational descriptive type. Data were collected on the charts and registration sheets and recipes from responsible pharmacy for the geographical region. Analyses were performed using descriptive statistics and logistic regression, considering as the outcome variable the use of BZDs. The prevalence found in this study was 7.4% (n = 1094) and was below than others the found in similar studies. It is understood that the most preventive focus of the FHPs may contribute to these findings or the quality of the records have interfered in these results. Users of BZDs studied were in majority in the age range from 56 to 74 years (48.4%), studied only up to the first degree (65.6%), self- mentioned at least one disease (82.2%) and almost half used at least one other psychotropic drug (48.4%) at the same time. There was a significant association between using BZDs and have low educational level (p = 0.005), present self- mentioned diseases (p = 0.000) and the use of other psychotropic drugs (p = 0.000). The association between higher ages and use of BZDs (p = 0.005) was also significant. Analyzes also showed that women who used other psychotropic drugs were five times more likely to use BZDs than those who did not. Women with self- reported disease were almost five times more likely to use BZDs than women who did not report diseases. We concluded that the groups that should receive more attention in relation to the consumption of these substances are those of middle-aged women or older with low schooling, and with chronic disease. It is recommended that the health teams pay attention to the psychosocial needs of persons with mental disorder, discuss and take efforts to implement actions for insertion and social reintegration as well as the expansion of networks of support that can be a strategic aid to the containment of symptoms and improving of the quality of life of these people, in an attempt to avoid the use of more psychotropic drugs and/or of the services of greater complexity

Benzodiazepínicos (BDZ) são fármacos ansiolíticos que se caracterizam por atuar em receptores GABAa presentes no sistema nervoso central. Além dos receptores centrais os BDZ também possuem afinidade por sítios ligantes periféricos presentes em vários tecidos, dentre eles nas glândulas adrenais e em células polimorfonucleares. O presente experimento analisou os efeitos de BDZ sobre a atividade de neutrófilos e sobre os níveis séricos de corticosterona de ratos. Especificamente, o burst e a fagocitose de neutrófilos foram estudados após o tratamento ex vivo e in vitro com diazepam, RO 5-4864, clonazepam e/ou PK 11195. Os efeitos do diazepam sobre a atividade de neutrófilos também foram avaliados após o uso prolongado deste fármaco. Finalmente, os efeitos in vitro dos BDZ foram estudados após a incubação com um bloqueador do canal de cálcio (Ca2+) o L-verapamil. Os resultados mostraram que (1) o tratamento agudo ex vivo com diazepam (10 mg/kg) produziu um aumento do burst oxidativo e da fagocitose induzida por PMA, LPS e Staphylococcus aureus; (2) o tratamento prolongado (21 dias) com diazepam (10 mg/kg) produziu um aumento do burst oxidativo induzido pelos mesmos estímulos e reduziu a fagocitose dos neutrófilos (porcentagem e intensidade); (3) o tratamento agudo ex vivo com diazepam, mas não o prolongado, aumentou os níveis séricos de corticosterona; (4) os efeitos da adição in vitro de diazepam (100 nM) foram na mesma direção daqueles observados após o tratamento agudo; (5) o RO 5-4864 (100 nM) induziu in vitro efeitos similares aos obtidos ex vivo (10 mg/kg) e in vitro (100 nM) com diazepam; (6) o tratamento ex vivo com clonazepam (10 mg/kg) diminuiu o burst oxidativo de neutrófilos induzido por PMA, LPS e Staphylococcus aureus enquanto que o tratamento com este fármaco na dose de 1 mg/kg aumentou o burst oxidativo destas células frente a todos os estímulos; (7) o tratamento ex vivo (1 e 10 mg/kg) e in vitro (100 nM) com clonazepam não alterou a fagocitose de neutrófilos; (8) os efeitos da adição in vitro de clonazepam sobre a atividade de neutrófilos vão na mesma direção daqueles observados após o tratamento ex vivo na dose de 1 mg/kg; (9) o clonazepam (1 e 10 mg/kg) aumentou os níveis séricos de corticosterona; (10) a adição in vitro do PK 11195 (100 nM) per se ou associado com diazepam (100 nM) ou RO 5-4864 (100 nM) aumentou o burst oxidativo e diminuiu a fagocitose realizada pelos neutrófilos; (11) a adição in vitro do PK 11195 (100 nM) associado com o clonazepam (100 nM) diminuiu o burst oxidativo induzido por PMA e diminuiu a fagocitose realizada por estas células; finalmente, (12) a pré incubação por 2 minutos com L-verapamil (100 nM) bloqueou todos os efeitos do diazepam sobre a atividade de neutrófilos estimulada por PMA, LPS e Staphylococcus aureus e reverteu os efeitos do RO 5-4864 no burst oxidativo induzido por PMA. Esses resultados sugeriram que os efeitos dos BDZ não estão relacionados com a ativação de PBR nas células da glândula adrenal e também que eles não estão relacionados a um aumento dos níveis séricos de corticosterona. Indicaram que os BDZ tenham produzido mudanças na concentração do Ca2+ intracelular dos neutrófilos através da ativação de PBR seguida de um aumento da permeabilidade da membrana plasmática ao Ca2+ através da abertura de canais sensíveis ao L-verapamil, permitindo a entrada do Ca2+. Os diferentes efeitos dos BDZ sobre o burst oxidativo e a fagocitose de neutrófilos foram atribuídos a ações específicas deste fármaco em subtipos de PBR presentes nos neutrófilos e nas membranas mitocondriais. Finalmente, os resultados sugeriram o desenvolvimento de tolerância aos efeitos do diazepam sobre os níveis séricos de corticosterona mas não sobre a atividade de neutrófilos. / Benzodiazepines (BDZ) exert their anxiolytic effects via specific binding sites coupled to neuronal GABAa receptors. They also affect a second, pharmacologically different type of receptor, which has been found in many sites such as blood polimorphonuclear cells and adrenals. The present experiment was designed to analyze the effects of BDZ on neutrophil activity and corticosterone serum levels in rats. Specifically, neutrophil oxidative burst and phagocytosis were studied after ex vivo and in vitro treatments with diazepam, Ro 5-4864, clonazepam and/or PK 11195. Diazepam effects on neutrophil activity were also taken after long-term treatment. Finally, in vitro effects of BDZ were studied after incubation with L-verapamil, a Ca2+ channel blocking agent. Results showed that (1) acute and ex vivo diazepam (10.0 mg/kg) treatment induced an increment on PMA, LPS and Staphylococcus aureus induced oxidative burst and phagocytosis (2) long-term (21 days, 10 mg/kg/day) diazepam treatment increased the oxidative burst induced by the same stimuli and reduced both intensity of phagocytosis and the percentage of neutrophil performing phagocytosis; (3) acute and ex vivo diazepam treatment, but not long-term diazepam treatment increased corticosterone serum levels; (4) the effects induced by in vitro addition of diazepam (100 nM) were in the same direction of those observed after acute treatment; (5) Ro 5-4864 (100 nM) induced similar effects to those of diazepam after ex vivo (10.0 mg/kg) and in vitro (100 nM) treatments; (6) ex vivo (10.0 mg/kg) clonazepam treatment decreased the neutrophil oxidative burst induced by PMA and S. aureus after a 1.0 mg/kg dose and decreased these parameters after a higher (10 mg/kg) dose; (7) ex vivo (1.0 and 10.0 mg/kg) and in vitro (100 nM) clonazepam treatments did not change neutrophil phagocytosis; (8) in vitro clonazepam (100 nM) induced effects on neutrophil activity that were in the same direction of those observed after the 1.0 mg/kg dose (9) clonazepam (1.0 and 10.0 mg/kg) increased corticosterone serum levels; (10) in vitro PK 11195 (100 nM) per se or associated with diazepam (100 nM) or Ro 5-4864 (100 nM) increased PMA, LPS and S. aureus induced neutrophil oxidative burst and decreased cell phagocytosis; (11) in vitro PK 11195 (100 nM) together with clonazepam (100 nM) decreased PMA-induced oxidative burst and decreased S. aureus phagocytosis; finally, (12) in vitro L-verapamil (100 nM) incubation for 2 minutes prevented all effects induced by diazepam on PMA, LPS and S. aureus -induced neutrophil activity and reverted the effects induced by Ro 5-4864 (100 nM) on PMA-induced oxidative burst. These results suggest that BDZ effects on neutrophil activity were not related to PBR activation within the adrenal gland cells, leading to increments on corticosterone serum levels. They suggest instead that BDZ induced [Ca2+]i changes in neutrophils through PBR activation followed by an increase in plasma membrane permeability due to L-verapamil sensitive Ca2+ channels and subsequent extracelular Ca2+ entry. The differences of BDZ effects on neutrophil oxidative burst and phagocytosis were attributed to specific actions on different PBR subtypes present on neutrophil and mitochondrial membranes. Finally, results suggest the development of tolerance to diazepam effects on corticosterone serum levels but not on neutrophil activity.

No contexto analítico forense, questões relacionadas à estabilidade química dos compostos a serem avaliados podem acarretar desvios analíticos consideráveis, o que pode gerar conclusões equivocadas a respeito da composição da amostra. Dessa forma, diante das estratégias para conservação da composição química em amostras biológicas atualmente disponíveis, buscou-se, com o presente trabalho, avaliar a aplicabilidade da técnica de DBS (Dried Blood Spot) para o contexto forense, uma vez que vem sendo sugerido que esta técnica promove maior estabilidade química e, ainda, não interfere na composição da amostra, dentre outras vantagens. Assim, no presente estudo foi avaliada a estabilidade da cocaína, éster metilecgonina, benzoilecgonina, clonazepam, diazepam e alprazolam em amostras de sangue total post mortem aplicadas ou não em DBS, para que se pudesse comparar os resultados obtidos, e, então, verificar a viabilidade do acondicionamento das amostras em cada uma dessas matrizes. Concomitantemente, foi avaliado o impacto da temperatura sobre a estabilidade química dessas substâncias nas diferentes matrizes. Para alcançar o objetivo final, foram desenvolvidas e validadas metodologias analíticas por LC/MS-MS, segundo parâmetros sugeridos em guias de validação internacionais. Posteriormente, foram incubadas amostras contendo concentrações conhecidas das substâncias de interesse em DBS e em sangue total, as quais foram acondicionadas em diversas temperaturas e analisadas em diferentes intervalos de tempo. Os dados obtidos para estudo de estabilidade da cocaína e metabólitos sugerem que, apesar das amostras de sangue total acondicionadas em freezer não apresentarem redução na concentração acima de 20%, de maneira geral, amostras de DBS promoveram maior estabilidade química aos compostos monitorados. O estudo sugere, ainda, que a temperatura apresenta grande impacto sobre a estabilidade desses compostos, em consonância com outros estudos publicados na literatura. Já os dados de estudo de estabilidade obtidos para os benzodiazepínicos selecionados apresentaram maior uniformidade que os dados obtidos para cocaína e metabólitos. Assim, para todas as condições avaliadas, ou seja, para as duas diferentes matrizes e para as diferentes temperaturas, foi observado que os compostos, de maneira geral, não apresentaram queda na concentração acima de 20% durante o período de estudo. A análise estatística indica não haver, em termos gerais, diferença significativa entre as diferentes formas de acondicionamento. Por fim, o estudo realizado mostra a compatibilidade da técnica de DBS com aplicações forenses, e, em alguns casos, sugere qualidade técnica superior em relação àanálise em sangue total, já que é capaz de manter a estabilidade de compostos considerados instáveis em meio aquoso. / In the forensic context, instability of chemical compounds may result in considerable analytical errors that could lead to inaccurate conclusions regarding the composition of the sample. Thus, given the available chemical composition conservation strategies for biological samples, this work aims to assess the applicability of the DBS (Dried Blood Spot) technique to the forensic context, considering that this approach improves the chemical stability, and does not interfere with the composition of the sample. Therefore, this study investigated the chemical stability of cocaine, methylecgonine ester, benzoylecgonine, diazepam and alprazolam in post mortem whole blood samples. The DBS method was used for the processing of part of the samples, in order to compare results, and then evaluate the storage conditions on the viability of each blood matrix (whole blood in relation to DBS). Concurrently, the effects of temperature on the stability of those chemical substances were also evaluated. Analytical methodologies based on LC/MS-MS were developed and validated, according to parameters suggested by international guidelines. Afterward, samples containing known concentrations of the analytes were incubated in two distinct matrices (DBS and whole blood) at several temperatures, and were analyzed at different time intervals. Although whole blood samples stored in freezer do not present concentration decay above 20 per cent, results suggest that DBS samples promoted greater chemical stability of the compounds of interest. Furthermore, temperature appears to affect greatly the stability of those analytes, consonant with previous studies. Regarding the stability study data obtained for the selected benzodiazepines, they presented greater uniformity than the data obtained for cocaine and metabolites. Therefore, considering all the described conditions, i.e., the two distinct matrices and the different temperatures, the compounds of interest did not present a decrease in concentration above 20 per cent during the study period. The statistical analysis indicate that there is no significant differences between the deployed storage methods. Thus, further studies, with a greater number of samples, are recommended in order to corroborate the statistical findings for the benzodiazepine compounds presented in this study. This study shows the compatibility of the DBS technique with forensic applications, and, in some cases, suggests its superior technical quality in relation to the whole blood analysis, since it preserves the chemical stability of compounds.

Os calmantes benzodiazepínicos são intensamente consumidos no mundo e no Brasil, principalmente por mulheres com idade igual ou superior a 60 anos. O consumo de calmantes envolve fatores sociais, econômicos e culturais, fazendo com que a maneira de utilização seja adaptada à realidade de determinados grupos sociais. Objetivando analisar essas questões, fizemos uso, através de abordagem qualitativa, de entrevistas semi-estruturadas com dezoito mulheres idosas, pertencentes a classes populares e consumidoras desses medicamentos há mais de um ano. Assim, observamos que o modo de consumo dos calmantes é construído socialmente e essa construção é formada através do tempo de uso, da aproximação com os serviços de saúde, da classe social à qual pertencem seus consumidores, da definição social do papel da mulher na sociedade (no sentido de gênero) e do envelhecimento de seus usuários, acompanhado de experiências e conhecimentos sobre os medicamentos. As mulheres entrevistadas mostraram ter autonomia e conhecimento sobre o uso dos calmantes, sentindo-se capazes de utilizar, indicar, emprestar, ou não, esses medicamentos, de acordo com suas concepções. Pudemos, portanto, observar e analisar as interações entre os diversos fatores – socioeconômicos e culturais, gênero e envelhecimento – envolvidos nesse processo de utilização de calmantes. / Benzodiazepine tranquillizers are widely consumed throughout Brazil and the world in general, mainly by women sixty or older. This consumption involves social, economic and cultural factors, with use influenced by reality of determined social groups. Aiming to analyze these questions, through qualitative approach, semi-structured interviews were administered to eighteen elderly women belonging to popular classes, who had been using these medicines for one year or more. We observed that consumption patterns of tranquilizer use are constructed socially and this construction is dependant upon the length of time of use, access to health services, their social class, social definition about the gender in society and the aging process. The construction is also influenced by experiences and knowledge about medicines. The interviewees showed that they possessed autonomy and knowledge about tranquillizer use, feeling able to use, to recommend, to lend, or not, these medicines, in accordance with their conceptions. Therefore we are able to observe and analyze the interactions between several factors – socio-economic and cultural, gender, and aging – involved in the process of tranquillizer use.

Os benzodiazepínicos são amplamente utilizados devido às suas propriedades ansiolíticas e sedativas mediadas pelo complexo GABAA no Sistema Nervoso Central. Porém, posteriormente foi demonstrado que os mesmos também atuam no Receptor Periférico para Benzodiazepínico (PBR), conhecido atualmente como Proteína Translocadora (TSPO), expresso tanto em células normais como também em células tumorais. O presente trabalho avaliou os efeitos in vivo da administração de diazepam sobre o crescimento do tumor ascítico de Ehrlich em camundongos e o envolvimento da TSPO mediando este efeito. Mais especificamente, estudamos o crescimento tumoral, fases do ciclo e morte celular, assim como a produção de Espécies Reativas de Oxigênio (EROs) e a expressão de TSPO nas células tumorais, após o tratamento com diazepam, Ro5-4864 ou clonazepam (3,0 mg/kg, via oral, por 7 dias). Quantificou-se também os níveis de diazepam no plasma e no fluido ascítico dos camundongos portadores do tumor. Finalmente, o sequenciamento parcial de Tspo das células do tumor de Ehrlich e a presença de receptores de estrógeno foram avaliadas. Os resultados mostraram que o tratamento in vivo com diazepam aumentou: (1) o crescimento do tumor ascítico de Ehrlich e a porcentagem de células em fase G2-M, (2) a porcentagem de células positivas para anexina e PI, (3) a produção de EROs. No mesmo sentido, o tratamento in vivo com Ro5-4864: (4) Aumentou o crescimento do tumor ascítico de Ehrlich e a porcentagem de células em fase S, (5) Não modificou a porcentagem de morte celular, (6) Aumentou a produção de EROs. Por outro lado, o tratamento in vivo com clonazepam não modificou: (7) quer o crescimento do tumor quer o ciclo celular, (8) a porcentagem de morte celular, (9) a produção de EROs. Além disso, o tratamento in vivo com diazepam não interferiu com a expressão de TSPO (western blot e citometria de fluxo) ou com os valores de Kd e Bmax de PK11195 (binding) presentes nas células do tumor de Ehrlich; entretanto, detectou-se a presença de polímeros, de alta porcentagem de células positivas para TSPO e uma alta afinidade de PK11195 por TSPO. Este mesmo tratamento resultou em níveis quantificáveis de diazepam no plasma e no fluido ascítico de animais portadores do tumor de Ehrlich. Finalmente, o sequenciamento parcial da Tspo presente nas células tumorais revelou 3 mutações nos nucleotídeos, sendo 1 delas silenciosa. Desta forma, estes resultados sugerem que as ações in vivo do diazepam sobre o crescimento do tumor ascítico de Ehrlich ocorram de maneira dependente e direta na TSPO existente em células do tumor de Ehrlich. Essas ações parecem envolver um aumento da produção de EROs e não modificam a expressão de TSPO. Finalmente o padrão farmacológico e bioquímico de expressão de TSPO nas células do tumor de Ehrlich pode indicar um papel dos mesmos na patogênese do câncer. / Benzodiazepines are widely used due to their anxiolitic and sedative properties, acting on specific site coupled to GABAA complex in the Central Nervous System. However, benzodiazepines have been shown to have high affinity for Peripheral Benzodiazepine Receptor site (PBR), now renamed as Translocator Protein (TSPO), expressed in normal cells, and being up-regulated on cancer cells. The present study evaluated the diazepam in vivo effects on Ehrlich ascitic tumor growth in mice and also the TSPO role in mediating this effect. Specifically we evaluated the tumor growth, cell cycle and cell death, and also the Reactive Oxygen Species (ROS) production and TSPO expression on tumor cells after diazepam, Ro5-4864 or clonazepam treatments (3.0 mg/kg, per oral, during 7 days). Furthermore, diazepam levels on plasma and on ascitic fluid taken from Ehrlich ascitic tumor bearing mice were quantified. Finally, the parcial Tspo sequencing on Ehrlich cells and Estrogen Receptor detection was evaluated. Results showed that diazepam in vivo treatment increased: (1) Ehrlich tumor growth and percentage of cells on G2-M phase, (2) percentage of positive cells for both annexin and PI, (3) ROS production. In the same way, Ro5-4864 in vivo treatment: (4) increased Ehrlich tumor growth and percentage of cells on S phase, (5) did not change the percentage of cell death, (6) increased ROS production. On the other hand, clonazepam in vivo treatment did not modify: (7) both Ehrlich tumor growth and cell cycle, (8) the percentage of cell death, and, (9) ROS production. Moreover, the in vivo diazepam treatment did not interfere with TSPO expression (western blot and flow cytometry) or Kd and Bmax values for PK11195 (binding) detected on Ehrlich tumor cells; however, the presence of TSPO polymers, a high percentage of TSPO positive cells and a high PK11195 afinity were found on these cells. This same treatment resulted on diazepam levels that were quantified on plasma and ascitic fluid from Ehrlich tumor bearing mice. Finally, Tspo partial nucleotide sequencing reaveled three point mutations, one of them is silent. Taken together, these data suggest that diazepam in vivo effects on Ehrlich tumor growth are TSPO-dependent. These actions may involve an increase on ROS production and seems not to be related to modifications on TSPO expression on tumor cells. Finally, TSPO pharmacological and biochemical properties on Ehrlich tumor cells are similar to those described in other tumor cells and may indicate a possible role for this protein on cancer pathogenesis.

Além dos receptores no sistema nervoso central (SNC), acoplados a receptores GABAA (CBR - central benzodiazepine receptor), outros sítios periféricos de ligação para os benzodiazepínicos (BDZ) foram descritos e denominados de \"periféricos\" (PBR peripheral benzodiazepine receptor) ou TSPO - Translocator protein. Sua função como modulador do sistema imune tem sido proposta, com a participação, pelo menos em parte, de glicocorticóides endógenos (GE). No entanto, os mecanismos da modulação dos TSPO sobre o processo inflamatório e a relação destes receptores com os GE ainda não estão totalmente estabelecidos. Desta forma, este trabalho visou investigar os efeitos de dois ligantes sintéticos de TSPO, um benzodiazepínico, Ro5-4864, e uma isoquinolona carboxamida, PK 11195, e suas relações com os GE, sobre os eventos da migração leucocitária. Para tanto, ratos Wistar machos foram tratados in vivo com RU 38486 (antagonista de receptor de GE) ou com veículo e, adicionalmente, os ligantes de TSPO, Ro5-4864 e/ou PK 11195, foram aplicados topicamente sobre a microcirculação do mesentério dos animais para avaliação do comportamento rolling e aderência de leucócitos, por microscopia intravital, em condições basais ou após estimulação pelo peptídeo formil-metionil-leucilfenilalanina (fMLP). Leucócitos periféricos foram coletados e tratados in vitro com os ligantes de TSPO para avaliação da expressão de moléculas de adesão, quimiotaxia e influxo de cálcio em condições basais ou após estimulação pelo fMLP. Ainda, culturas primárias de células endoteliais da microcirculação de ratos foram tratadas in vitro com os ligantes de TSPO para avaliação da expressão de moléculas de adesão em condições basais ou após estimulação pelo lipopolisacarídeo de E.coli (LPS). Os resultados obtidos mostraram que: 1) o ligante de TSPO, Ro5-4864, alterou a ação do fMLP, uma vez que inibiu a diminuição do rolling, o aumento de células aderentes, a clivagem de L-selectina, o aumento de expressão de PECAM-1 (platelet endothelial cell adhesion molecule), a quimiotaxia e o influxo de cálcio em neutrófilos; não afetou a expressão de PECAM-1 e ICAM-1 (intracellular cell adhesion molecule) induzida pelo LPS em células endoteliais; 2) o PK 11195 aumentou o influxo de cálcio e a quimiotaxia de neutrófilos induzido pelo fMLP; 3) a co-administração dos ligantes de TSPO, Ro5-4864 e PK 11195, reverteu os efeitos do Ro5-4864 sobre a expressão de L-selectina e PECAM-1, o influxo de cálcio e a quimiotaxia de neutrófilos. A possível inter-relação dos TSPO e GE foi verificada uma vez que o Ro5-4864 inibiu o aumento do número de leucócitos rolling e aderidos à parede vascular in vivo causado pelo tratamento com RU 38486; inibiu o aumento da expressão de L-selectina em neutrófilos e de β2-integrina presente em linfócitos e de PECAM-1 em neutrófilos. Ainda, foi verificado que neutrófilos possuem expressões de TSPO maiores que linfócitos e células endoteliais e que esta expressão é aumentada em neutrófilos pela ação do fMLP. Em conjunto, os resultados obtidos neste trabalho sugerem que os ligantes de TSPO modulam diferentemente as funções de adesão e mobilidade de leucócitos e de adesão da célula endotelial e que uma relação alostérica de agonismo/antagonismo entre estes pode ser sugerida. Adicionalmente, os resultados mostram uma possível relação entre os TSPO e os receptores de citoplasmáticos de GE no controle da interação leucócito-endotélio. / Besides central benzodiazepine receptor (CBR) found on central nervous system (CNS) coupled to GABAA, another binding site for benzodiazepines was described and named peripheral benzodiazepine receptor (PBR) or Translocator protein (TSPO). The mainly function described to this TSPO is steroidogenesis. Additionally, its function as an immune modulator has been proposed with the involvement, at least in part, of endogenous glucocorticoids (EG). However, mechanisms of TSPO modulation on inflammatory process and the relation between the receptor and EG has not been totally established. This study aimed investigates effects of two synthetic TSPO ligands, a benzodiazepine, Ro5-4864, and an isoquinoline carboxamide, PK 11195, and their relation with EG on leukocyte migration. For this purpose, male Wistar rats were in vivo treated with RU 38486 (EG antagonist receptor) or vehicle and, in addition, TSPO ligands, Ro5-4864 and/or PK 11195, were topically applied on animal mesentery microcirculation to evaluate leukocyte rolling and adhesion, by intravital microscopy, under basal conditions or after stimulation by N-formyl-methionine-leucine-phenylalanine (fMLP). In addition, peripheral leukocytes were collected and in vitro treated with TSPO ligands to evaluate adhesion molecules expression, chemotaxis and calcium influx. Endothelial cells obtained from cremaster muscle were in vitro treated with TSPO ligands to evaluate adhesion molecules expression under basal conditions or after stimulation by lipopolysaccharide from E.coli (LPS). Our results showed that: 1) TSPO ligand, Ro5-4864, altered the fMLP action since TSPO ligand inhibited the decrease of rolling, the increase of adherent cells, L-selectin cleavage, the increase of PECAM-1 expression, neutrophil chemotaxis and calcium influx; did not affect expression of PECAM-1 and ICAM-1 induced by LPS on endothelial cells; 2) PK 11195 increased fMLP-induced neutrophil calcium influx and chemotaxis; 3) co-administration of TSPO ligands, Ro5-4864 and PK 11195, reverted Ro5-4864 effects on L-selectin and PECAM-1 expression, neutrophil and calcium influx, as well as PECAM-1 and ICAM-1 expression on endothelial cells; 3) a possible inter-relation between TSPO and EG was observed since Ro5-4864 inhibited the increase of in vivo leukocyte rolling and adhesion induced by RU 38486 in vivo treatment; it inhibited the increase of neutrophil L-selectin, lymphocyte β2-integrin and leukocyte PECAM-1 expressions; 4) It was showed that neutrophil have more TSPO than lymphocytes and endothelial cells, and this expression is increased by fMLP stimulation. Taken together, our results suggest that TSPO ligands differently modulate leukocyte adhesion and motility functions and endothelial cells adhesion, and further, they suggest an allosteric agonist/antagonist relation. Additionally, they showed a relation between TSPO and EG cytoplasmic receptor on the control of leukocyte-endothelial interaction.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T18:48:57Z : No. of bitstreams: 1 hatschbach_e_me_botfmvz.pdf: 309067 bytes, checksum: 65f60947f2e929e489c630eafea55c04 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Empregou-se a dexmedetomidina em associação com a quetamina e midazolam, ou diazepam, observando-se assim os efeitos das benzodiazepinas em cães. Esta técnica anestésica foi aplicada em 30 cães hígidos com pesos e idades variáveis, machos ou fêmeas, distribuídos em três grupos (GI, GII, GIII). O GI recebeu um pré-tratamento com atropina, na dose de 0,04 mg/kg SC, e após 15 minutos, a dexmedetomidina a 3 æg/kg IV, em dose única durante 2 minutos, seguida de dose de manutenção pela dexmedetomidina 3 æg/kg, associada à quetamina na dose de 2 mg/kg, ambas na mesma seringa completando-se o volume em 20ml de solução fisiológica para infusão contínua, no período de uma hora de aplicação. O GII recebeu o mesmo tratamento de GI, entretanto, adicionou-se à dexmedetomidina o midazolam na dose de 0,2mg/kg durante os dois minutos iniciais e outra dose, de 0,2 mg/kg com a dose de manutenção da dexmedetomidina e quetamina obedecendo volume e período de G I. Em GIII obedeceu-se o mesmo tratamento de GII substituindo-se o midazolam pelo diazepam na dose de 0,5mg/kg na dose de indução e mais 0,5mg/kg junto com a dose de manutenção. Avaliou-se o efeito das benzodiazepinas para se evitarem as contraturas causadas pela quetamina sobrepondo-se à dexmedetomidina. Observaram-se as alterações paramétricas respiratórias, oxicapnométricas, índice bispectral e período de recuperação. Conclui-se diante dos resultados obtidos que: ao se aplicar a dexmedetomidina anteriormente à quetamina, não ocorrem contraturas apesar da leve redução do índice bispectral. Já a associação com benzodiazepínicos mostrou-se mais eficiente, demonstrando ser o midazolam mais eficiente na sedação e miorrelaxamento quando comparado ao diazepam... / Dexmedetomidine in combination with ketamine and midazolam, or diazepam was used, observing the effects of the benzodiazepines in dogs. The anesthetic technique was applied in 30 healthy dogs, males or females with varied weight, divided into three groups (GI, GII and GIII). The first group (GI) received a pretreatment with atropine at 0,044 mg/kg, and 15 minutes later, dexmedetomidine at 3 æg/kg intravenous, during two minutes, for induction. For maintenance was applied the same dose of dexmedetomidine (3 æg/kg) in combination with ketamine, all diluted in 20 ml of distilled water, during one-hour infusion. Group II (GII) received the same treatment as GI, however, midazolam was administered at 0.2 mg/kg in combination with dexmedetomidine, and another dose of 0.2 mg/kg, in combination with dexmedetomidine and ketamine in one-hour infusion. Group III (GIII) received the same treatment as GII, but diazepam was used instead of midazolam, 0.5 mg/kg for induction and 0.5 mg/kg for maintenance. It was evaluated the benzodiazepines effects to prevent the cataleptic effects (contraction) caused by ketamine, even with dexmedetomidine, the respiratory and oxycapnometric parameters, bispectral index and recovery period. From the results it could be conclude that dexmedetomidine administered before ketamine does not cause muscle contractions even with less reduction in bispectral index. Benzodiazepines association with ketamine showed more reliable effects, with synergic interaction, with good sedation and muscle relaxation, being midazolam better when compared to diazepam...