No description available.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-29Bitstream added on 2014-06-13T20:31:50Z : No. of bitstreams: 1 rabello_ap_me_arafo.pdf: 345037 bytes, checksum: 048ea696db2e5f0883575464c9e0b244 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente estudo avaliou o efeito da fototerapia com o laser de baixa intensidade (LBI) infra-vermelho próximo (InGaAsP: LASERTable; λ780 ± 3 ɳm, 25 mW) em linhagem celular de macrófagos de camundongos (RAW 264.7) expostos à diferentes cimentos endodônticos. Os grupos foram divididos de acordo com o material obturador e a presença ou não de irradiação, além dos grupos controle, sendo: G1: controle negativo - somente células, G2: células + laser, G3: controle positivo – LPS, G4: LPS + laser, G5: Endofill, G6: Endofill + laser, G7: AH Plus, G8: AH Plus + laser, G9: Sealapex e G10: Sealapex + laser. A viabilidade celular foi determinada por meio do teste de MTT e a produção de óxido nítrico (NO) pelo método de Griess. A irradiação com LBI influenciou significativamente a viabilidade de macrófagos expostos aos três materiais obturadores (p<0,001), sendo que o G8 foi o que resultou em maior número de células viáveis (p<0,001). Não houve interferência do LBI sobre a produção de óxido nítrico em nenhum dos grupos estudados. Concluiu-se que todos os cimentos endodônticos permitiram índices significativamente maiores de viabilidade celular quando da aplicação do LBI; o cimento AH Plus apresentou aumento significativamente maior de viabilidade dos macrófagos em relação aos demais cimentos quando da aplicação 18 do LBI , seguido do Sealapex e Endofill; o LBI não interferiu de forma significativa na produção de NO por parte dos macrófagos expostos a nenhum dos cimentos endodônticos estudados / The present study evaluated the effect of phototherapy with low intensity laser (LLLT) near infrared (InGaAsP: LASERTable; λ780 ± 3 ɳm, 25 mW) in cell line mouse macrophages (RAW 264.7) exposed to different sealers. All the groups were divided according to the filling material with presence or absence of irradiation: G1: negative control - only cells, G2: laser + cells, G3: positive control - LPS, G4: LPS + laser , G5: Endofill, G6: Endofill + laser, G7: AH Plus, G8: AH Plus + laser, G9, G10 and Sealapex: Sealapex + laser. Cell viability was determined using the MTT assay and production of nitric oxide (NO) by the Griess method. The irradiation with LLLT significantly affect the viability of macrophages exposed to three filling materials (p <0.001), and the G8 was resulted in a greater number of viable cells (p <0.001). There was no interference from the LBI on nitric oxide production in any groups. It was concluded that all the sealers was significantly higher levels of cell viability when applying the LBI, and the AH Plus showed significantly greater viability of the macrophages relative to the other cements when applying the LBI, and followed by Sealapex Endofill; the LBI didn't interfere significantly in the production of NO by macrophages exposed to any sealers studied

Orientador: Glaci Ribeiro da Silva / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T13:54:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_IvaniAparecidade_D.pdf: 9611057 bytes, checksum: e64f053a3b3e7af073c8beca9d70fe7f (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Este trabalho descreve a participação de macrófagos sobre o influxo de neutrófilos, induzido pelas enterotoxinas estafilocócicas A (SEA) e B (SEB) em cavidades peritoneais de camundongos. Nossos resultados demonstraram que estas toxinas induzem influxo de neutrófilos, dose e tempo-dependente, para a cavidade peritoneal de camundongos. Este fenômeno foi quantitativamente menor, quando estas SEs foram injetadas em uma cavidade artificial, desprovida de células residentes, tal como a bolsa de ar subcutânea. A migração de neutrófilos, induzi da por estas toxinas, foi potencializada em cavidades peritoneais com o número basal de macrófagos aumentado pelo prétratamento com Tg, e, reduzida em cavidades com número de macrófagos diminuído, através da lavagem prévia com salina estéril, confirmando a hipótese de que a habilidade destas toxinas em induzir migração de neutrófilos in vivo está correlacionada com o número de macrófagos. O influxo de neutrófilos induzido por estas SEs, na cavidade peritoneal, foi reduzido em animais pré-tratados com os seguintes inibidores e antagonistas farmacológicos: dexametasona; inibidor de lipoxigenase (BW A4C); antagonista de PAF (BN52021); antagonista H2 de histamina (cimetidina); depletor de neuropeptídeos de fibras C sensoriais (capsaicina), mas não foi reduzido com o uso de um inibidor da ciclooxigenase (indometacina). Estes dados sugerem que os mediadores inflamatórios envolvidos na infiltração de neutrófilos produzida por estas SEs incluem metabólitos da LO, PAF, histamina e neuropeptídeos de fibras C sensoriais. Os sobrenadantes resultantes da incubação in vitro de macrófagos peritoneais de camundongos com SEA (SM-SEA) ou com SEB (SM-SEB), induzem migração de neutrófilos in vivo. A liberação das substâncias quimiotáticas para neutrófilos nestes sobrenadantes depende de pH e temperatura próximos ao fisiológico e da presença de cálcio, magnésio e da glicose no meio de incubação, sugerindo que estas substâncias são secretadas por um processo ativo. A ciclohexemida, um inibidor de síntese proteíca, inibe a liberação destas substâncias quimiotáticas para neutrófilos. Além disto, a atividade quimiotática do SM-SEA ou do SM-SEB é reduzida após o aquecimento a 100°C. Estes resultados sugerem que as substâncias quimiotáticas para neutrófilos, descritas neste trabalho, são proteínas termolábeis. A liberação destas proteínas, foi dose e tempo-dependente e foi inibida pelo pré-tratamento dos macrófagos com dexametasona mas não com indometacina ou com BW755C. A proteína presente no SM-SEA possui peso molecular maior que 100.000, enquanto que a proteína presente no SM-SEB possui peso molecular entre 1.000-3.000. A migração de neutrófilos induzida pelo SM-SEB envolve mediadores tais como metabólitos da LO, PAF e histamina, enquanto que estes mediadores não participam da resposta migratória induzida pelo SM-SEA sugerindo que estas proteínas possuem características distintas e induzem acúmulo de neutrófilos por mecanismos distintos. Em ambos os casos, a migração de neutrófilos foi reduzida em animais prétratados com capsaicina ou com SR140333 (antagonista seletivo de receptores de taquicininas NK1), mas não em animais pré-tratados com SR48968 (antagonista seletivo de receptores de taquicininas NK2), sugerindo que estas proteínas induzem migração via liberação de substância P. Nossos resultados contribuem para o melhor esclarecimento do mecanismo de ação das SEs e sugerem que produtos de macrófagos modulam o influxo neutrófilos induzido por estas toxinas / Abstract: In this study, the role role of macrophages in the neutrophil migration induced by staphylococcal enterotoxins A (SEA) and B (SEB) into the mouse peritoneal cavity was investigated. SEA and SEB induced dose- and timedependent neutrophil migration into the mouse peritoneal cavity. This migration was potentiated when the macrophage population was increased by pre-treating the mice with thioglycolate, and was reduced when the peritoneal cavities were washed with sterile saline. These results indicated that the neutrophil recruitment induced by these toxins was dependent on the number of resident macrophages. Dexamethasone inhibited the neutrophil migration induced by SEA and SEB. A similar response was observed with the P AF receptor antagonist (BN52021), the histamine H2 receptor (cimetidine), the lipoxygenase inhibitor (BW A4C) and a sensory C-fiber neuropeptide depletor (capsaicin). In contrast, indomethacin had no effect on the neutrophil chemotaxis. Thus, lipoxygenase metabolites, P AF, histamine and neuropeptides from sensory neurons play an important role in the neutrophil migration induced by SEA and SEB. When stimulated with SEA or SEB in vitro, mouse peritoneal macrophages secreted thermolabile proteins which induced neutrophil migration into the peritoneal cavities of naive mice. The release of these proteins was dose- and time-dependent and was inhibited by dexamethasone but not by indomethacin or BW755C The molecular mass of the neutrophil chemotactic protein secreted by SEB-stimulated macrophages was 1-3 kDa while that of the protein secreted by SEA was > 100 kDa. The neutrophil migration induced by supematants from SEB-stimulated macrophages involved inflammatory mediators such as lipoxygenase metabolites, P AF and histamine. In contrast, these same mediators had no role in the neutrophil migration induced by supematants from SEA-stimulated macrophages, suggesting that the neutrophil chemotactic proteins described above, induce neutrophil accumulation by different mechanisms. Capsaicin and neurokinin1 (NKl) receptor antagonist SR140333 reduced the neutrophil recruitment induced by supematants from macrophage monolayers stimulated with SEA or SEB. In contrast, the neurokinin2 (NK2) receptor antagonist SR48968 had no effect on the neutrophil migratory response of the supematants. These results suggest that the neutrophil migration induced by these chemotactic proteins may involve the release of neuropeptides such as SP from sensory neurons. lu conc1usion, macrophage products may play an important role in the neurogenic inflammation .induced by SEA and SEB by releasing specific chemotactic proteins / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-24T04:14:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 251607.pdf: 339179 bytes, checksum: 59e0954a7b148d39823c91c6ac36365d (MD5)

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T06:05:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 289217.pdf: 3465355 bytes, checksum: b98a68822c4c226608b389493784c205 (MD5) / A aterosclerose é uma doença inflamatória crônica caracterizada pelo acúmulo de lipídios e elementos celulares nas artérias de calibre médio e grande porte, sendo que a modificação oxidativa da lipoproteína de baixa densidade (LDL) desempenha um papel importante na patogênese dessa condição. Os compostos orgânicos de selênio estão recebendo grande atenção da comunidade científica devido as suas propriedades benéficas destes compostos em patologias associadas ao estresse oxidativo. Neste contexto, nosso objetivo foi avaliar as propriedades toxicológicas e antiaterogênicas de compostos orgânicos de selênio em modelos experimentais in vivo e in vitro. Inicialmente, avaliamos os efeitos da administração aguda do disseleneto de difenila (PhSe)2 sobre parâmetros toxicológicos em coelhos. O tratamento de coelhos com 5 µmol/kg/dia não induziu toxicidade, no entanto, quando os animais foram tratados com 50 µmol/kg, sinais leves de toxicidade foram observados, e o tratamento com maior dose utilizada (500 µmol/kg) causou mortalidade em 85% dos animais, indicando intensa toxicidade. Assim estes resultados indicam que os efeitos toxicológicos da exposição aguda ao (PhSe)2 em coelhos é dependente da dose. Considerando o envolvimento da LDL oxidada (LDLox) na patogênese da aterosclerose, investigamos o efeito protetor do (PhSe)2 sobre danos citotóxicos induzidos pela exposição de macrófagos murinos J774 à LDLox. O pré-tratamento com (PhSe)2 reduziu os efeitos citotóxicos desencadeados pela LDLox incluindo a geração de ROS, distúrbio da homeostase do .NO, ativação de metaloproteinases de matriz, formação de células espumosas e disfunção mitocondrial em macrófagos in vitro. Além disso, os efeitos da sinalização redox do (PhSe)2 apresentados neste estudo, foram acompanhados por uma regulação da atividade de ligação do NF-.B. Considerando o efeito promissor de compostos orgânicos de selênio como moléculas antiaterogênicas, na última parte deste estudo, avaliamos o efeito de diaril disselenetos substituídos, p-metoxi-difenil disseleneto (DM) e p-cloro-difenil disseleneto (DC), na oxidação da LDL induzida por Cu2+. Ambos os compostos causaram inibição dose-dependente na oxidação de soro humano e de LDL isolada. A parte proteica da LDL humana isolada também foi protegida contra a oxidação induzida por Cu2+. Além disso, o DM e DC eficientemente diminuíram a formação de células espumosas induzidas por LDLox em macrófagos J774. O potencial efeito antiaterogênico destes compostos foi relacionado à sua atividade mimética a GPx e sua propriedade de atuar como substrato para TrxR mamífera, duas importantes vias envolvidas na decomposição de peróxidos. Tomados em conjunto, os resultados deste trabalho sugerem um novo papel para os compostos orgânicos de selênio como potenciais agentes antiateroscleróticos.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-28Bitstream added on 2014-06-13T19:23:27Z : No. of bitstreams: 1 nogueira_mnm_dr_arafo.pdf: 1578323 bytes, checksum: 6ef77905acf94bb01ba70858855a37c0 (MD5) / O óleo de Melaleuca alternifolia (TTO) tem propriedades antimicrobianas e somado a isso, sugere-se que apresente características anti-inflamatórias. Este estudo investigou o potencial do TTO e seus componentes (terpinen-4-ol e alfa-terpineol) em modular citocinas e os mecanismos intracelulares participantes desta ação. Células monocíticas (U937) foram diferenciados em macrófagos com 40ng/mL de 12-miristato 13-acetato de forbol. A citotoxicidade dos óleos foi determinada com o ensaio de redução de Metil-tetrazolium (MTT). A habilidade em modular a produção das citocinas após o estímulo com LPS de Porphyromonas gingivalis (agonista de TLR2) e Escherichia coli (agonista de TLR4), foi estabelecida por meio de ensaios ELISA. Os efeitos dos compostos testados, na ativação de vias de sinalização intracelular, foram avaliados por western blot. As concentrações selecionadas pelo MTT foram: 0,015% e 0,004% para o TTO, 0,059% e 0,0073% para o terpinen-4-ol e 0,0064% e 0,0007% para alfa-terpineol. A influência do TTO na produção de citocinas foi mais marcante após estímulo de TLR4, com diminuição de IL-1β, IL-6 e IL-10. O terpinen-4-ol reduziu a produção de INF-γ, IL-1β, IL-6, IL-4, IL-10 e IL-17 após ativação tanto TLR4 quanto TLR2. O alfa-terpienol atua após ativação de TLR2 e 4 inibindo a produção de IL-1β, IL-6 e IL-10. Nenhuma das vias analisadas (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) sofreram interferência dos óleos. O TTO tem ação 8 modulatória inibindo produção de citocinas inflamatórias e o terpinen-4-ol é o seu maior componente ativo, entretanto este mecanismo não ocorre via inibição de NF-kB, ERK e p38 MAP-Kinase / The oil of Melaleuca alternifolia (TTO) has antimicrobial properties, coupled with this, it is suggested that it also has antiinflammatory characteristics. This study investigated the potential of TTO and its components (terpinen-4-ol and alpha-terpineol) and cytokines in modulating the intracellular mechanisms that participate in this action. Monocytic cells (U937) were differentiated into macrophages with 40ng/mL 12-myristate 13-acetate phorbol. The olil cytotoxicity was determined with the reduction assay Methyl-tetrazolium (MTT). The ability to modulate cytokine production after stimulation with LPS of Porphyromonasgingivalis (TLR2 agonist) and Escherichia coli (TLR4 agonist), was established by ELISA assays. The effects of the tested compounds, the activation of intracellular signaling pathways were evaluated by western blot. The concentrations selected by the MTT were 0.015% and 0.004% for the TTO, 0.059% and 0.0073% to terpinen-4-ol and 0.0064% and 0.0007% for alpha-terpineol. The influence of TTO in cytokine production was more marked after TLR4 stimulation, with decreased IL-1β, IL-6 and IL-10. The terpinen-4-ol reduced the production of INF-γ, IL-1β, IL-6, IL-4, IL-10 and IL-17 activation after both TLR4 as TLR2. The alpha-terpienol acts upon activation of TLR2 and four inhibiting the production of IL-1β, IL-6 and IL-10. None of the analyzed pathways (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) suffered interference oils. The TTO has modulatory action by 10 inhibiting the production of inflammatory cytokines and terpinen-4-ol is your greatest asset component however, this mechanism does not occur via inhibition of NF-kB, ERK and p38 MAP-kinase

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-18Bitstream added on 2014-08-13T17:59:40Z : No. of bitstreams: 1 000776180.pdf: 1926203 bytes, checksum: 60db49d6033717478f4a4a7a4f1c63aa (MD5) / Os probióticos são capazes de equilibrar a microbiota residente e modular a resposta imune aos diferentes estímulos microbianos, entretanto, seus efeitos imunomoduladores ainda não estão claramente elucidados. O presente estudo avaliou o efeito imunomodulador de Lactobacillus rhamnosus ou seus produtos sobre macrófagos (RAW 264.7) ativados por lipopolissacarídeo (LPS), ácido lipoteicóico (LTA) ou manana, pela análise da produção de citocinas pró e anti-inflamatórias (TNF-α, IL-1 β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12). Foi utilizada a cepa padrão de L. rhamnosus ATCC 7469, semeada em Ágar Man-Rogosa-Shape (MRS) e cultivada a 37ºC/5% CO2 por 24 h. Foram empregadas três diferentes preparações de probióticos: 1) L. rhamnosus vivo (LV) na concentração de 2,5 x 107 células/mL; 2) L. rhamnosus morto (LM) obtido por autoclavagem da preparação anterior a 121°C/15 min; 3) Sobrenadante da suspensão de L. rhamnosus (SL), resultante da centrifugação da suspensão LM a 8300 xg/10min. Foram utilizados macrófagos de camundongos (RAW 264.7), cultivados em meio DMEM completo (suplementado com 10% de soro fetal bovino) foram distribuídos em microplacas de poliestireno na concentração de 5 x 105 células viáveis/poço/mL de meio DMEM completo. Após 24 h de incubação (37°C/5% CO2) para adesão celular, as placas foram lavadas com PBS estéril e apirogênico e as células foram estimuladas com LPS de Escherichia coli, LTA de Streptococcus faecalis ou manana de Saccharomyces cerevisiae na concentração de 1 μg/mL, na presença ou ausência das diferentes preparações dos probióticos por 2,5h. Em seguida as placas foram lavadas com PBS, tiveram seu meio trocado e foram incubadas por 16h (37°C/5% CO2). Os sobrenadantes das culturas foram coletados para a detecção e quantificação das citocinas (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10 e IL-12) pelo método imunoenzimático ELISA. Os .... / Probiotics are able to balance the resident microbiota and modulate the immune response to different microbial stimuli, however its immunomodulatory effects are not clearly understood. This study intends to evaluate the immunomodulatory effect of Lactobacillus rhamnosus or its products on macrophages (RAW 264.7) activated by lipopolysaccharide (LPS), lipoteicoic acid (LTA) or mannan through the analysis of the production of pro and anti-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1 β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12). It was used the standard strain of L. rhamnosus ATCC 7469, seeded on Agar Man-Rogosa-Shape (MRS) and grown at 37°C/5% CO2 for 24 h. Three different preparations of probiotics were prepared: 1) L. rhamnosus solution at a concentration of 5 x 107 cells/mL; 2) Heat-killed L. rhamnosus, obtained by autoclaving previous preparation at 121°C/15 min, 3) Supernatant of L. rhamnosus suspension, obtained through centrifugation of the suspension with heat-killed probiotic at 8300 xg/10 min. Mouse macrophages (RAW 264.7) grown in complete DMEM medium (supplemented with 10% fetal bovine serum) were distributed in polystyrene microplates at a concentration of 1 x 106 viable cells/well/ml complete DMEM medium. After 24 h incubation (37°C/5% CO2) for cell adhesion, plates were washed with sterile-apirogenic physiologic saline and cells were stimulated with Escherichia coli LPS, Enterococcus faecalis LTA or Saccharomyces cerevisiae mannan at a concentration of 1 μg/mL, in the presence or absence of the different preparations of probiotics at the same time for 2,5 h. Then the plates were washed, had its medium traded and were incubated for 16 h (37°C/5% CO2). Culture supernatants were 14 collected for the detection and quantification of cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10 and IL-12) by ELISA immunoenzymatic method. The results were statistically analyzed by ANOVA and Tukey tests (p≤0,05). With ...

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:49:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo123_1.pdf: 9082048 bytes, checksum: df73be80cc40f533d6cf694221691a0e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / O objetivo do presente trabalho foi inicialmente extrair e purificar o polissacarídeo fucana proveniente do Sargassum cymosum e utilizá-lo como agente de direcionamento de nanopartículas para macrófagos. A caracterização do material extraído e purificado foi efetuada utilizando análise elementar, espectroscopia de infravermelho (IV), ressonância magnética nuclear de hidrogênio (RMN H1) e análise térmica e a determinação da massa molecular foi efetuada por cromatografia de permeação em gel. Em seguida, o material obtido foi utilizado na preparação das novas nanopartículas de Poli(cianoacrilato de isobutila) revestidas de fucana (FC-PIBCA-NP). As nanopartículas foram obtidas através da polimerização por emulsão aniônica (AEP) e polimerização por radicais redox (RREP) utilizando mistura de dextrana e fucana em diferentes proporções. As nanopartículas foram caracterizadas através do tamanho, potencial zeta, morfologia e estabilidade a longo prazo. Nanopartículas estáveis foram obtidas com até 100% de fucana pelo método AEP. Por outro lado, suspensões estáveis de nanopartículas foram obtidas com no máximo 25% de fucana por RREP. As suspensões obtidas com porcentagem mais elevadas de fucana não permaneceram estáveis. O potencial zeta das nanopartículas diminuiu com o aumento da quantidade de fucana, alcançando o valor de 44 mV para as nanopartículas preparadas por AEP com 100% de fucana. Estes resultados indicam que a fucana permanece localizada na superfície das nanopartículas. A análise morfológica por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia eletrônica de transmissão (MET) mostrou nanopartículas com forma esférica. A estrutura interna das nanopartículas do tipo núcleo-coroa foi mostrada claramente por análise MET o que está de acordo com os resultados do potencial zeta que sugerem a localização do polissacarídeo na superfície das nanopartículas. As interações das nanopartículas com a linhagem celular de macrófagos J774 e com fibroblastos NIH-3T3 foram investigadas pela avaliação da citotoxicidade e pela observação da captura celular por microscopia confocal de fluorescência. As nanopartículas preparadas pelo método AEP mostraram uma maior citotoxicidade em macrófagos. Por exemplo, as nanopartículas obtidas pelo método AEP contendo 25% de fucana mostraram-se 3 vezes mais citotóxicas em macrófagos J774 comparadas às nanopartículas RREP (IC50 = 4 ± 2&#956;g/mL e IC50 11 ± 3&#956;g/mL, respectivamente). As observações efetuadas por microscopia confocal de fluorescência para avaliar a captura e a distribuição das nanopartículas nas células não permitiram explicar o aumento da citotoxicidade das nanopartículas obtidas pelo método AEP nos macrófagos. Todos os tipos de nanopartículas foram encontradas nos dois tipos de células, demonstrando que elas podem ser capturadas independentemente pelos macrófagos e fibroblastos. As diferenças na aparência da fluorescência no interior das células, i.e., pontual ou difusa, sugerem que as nanopartículas penetraram nas células por mecanismos distintos. No entanto, nenhuma correlação pode ser estabelecida entre o tipo de nanopartículas (AEP ou RREP) e o teor de fucana. As nanopartículas foram administradas em ratos por via oral com objetivo de investigar se elas poderiam ser direcionadas para os macrófagos do tecido linfóide intestinal. As propriedades bioadesivas e localização no tecido intestinal das nanopartículas fluorescentes foram investigadas por microscopia de fluorescência. Somente as nanopartículas revestidas com fucana obtidas pelo método RREP apresentaram uma redução na bioadesão comparada aos outros tipos de nanopartículas. A análise por microscopia de fluorescência revelou que as nanopartículas foram principalmente encontradas associadas ao muco residual. Apenas uma pequena quantidade de nanopartículas pôde ser visualizada na superfície das células epiteliais, do lado da luz intestinal onde estão localizadas as vilosidades e as placas de Peyer. Esses resultados sugerem a retenção das nanopartículas no muco e que uma pequena quantidade de nanopartículas chega à superfície do epitélio para ser eventualmente capturada pelos macrófagos. Embora o presente trabalho tenha permitido realizar a extração da fucana e a preparação de nanopartículas de PIBCA revestidas com fucana, não foi capaz, no entanto, de demonstrar que as novas nanopartículas podem ser utilizadas para aumentar a especificidade e direcionamento para macrófagos. Experimentos complementares serão, portanto, necessários para melhor compreender a origem da citotoxicidade das nanopartículas obtidas pelo método AEP em macrófagos J774. Além do mais, para o direcionamento das nanopartículas para macrófagos presentes em mucosas, as propriedades bioadesivas precisam ser ajustadas com vistas a reduzir a retenção pelo muco e de permitir um maior alcance na quantidade de nanopartículas a atingir a superfície das células epiteliais

Orientador: Selma Giorgio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-29T02:26:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barao_SandraCristina_M.pdf: 8260414 bytes, checksum: 7031af0c856aceaf69b2b015a15b8ea6 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A capacidade imunoestimulatória dos ribonucleosídeos sintéticos com substituições nas posições 7 e/ou 8 foi comprovada em experimentos in vitro e tratamentos experimentais. Diante da evidência de que os parasitas do gênero Leishmania infectam macrófagos, possuindo um complexo mecanismo de escape e, não raro, os tratamentos convencionais são ineficientes, o objetivo deste trabalho foi testar a possibilidade da utilização do ribonucleosídeo 8-Bromo-Guanosina (8BrGuo) no tratamento da leishmaniose utilizando o modelo murino. Testes in vitro comprovaram que este composto ativa macrófagos murinos infectados com formas amastigotas de Leishmania (L.) amazonensis, diminuindo a infecção em cerca de 70%. Também foram realizados experimentos in vitro com o objetivo de avaliar o mecanismo de ação deste composto na ativação de macrófagos e destruição dos parasitas. Foi analisada a produção de nitrito, um subproduto do óxido nítrico, composto com capacidade oxidativa e tóxica a microrganismos. Para os testes in vivo, com camundongos de linhagem isogênica CBA/J, utilizamos diferentes vias de inoculação e apresentação de 8BrGuo, sendo que o processo mais eficiente e menos agressivo foi o intraperitoneal e a melhor resposta foi em solução utilizando Tween 80® como adjuvante. Paralelamente, investigamos as dosagens de 8BrGuo, sendo que algumas mostraram resultados estatisticamente significativos relacionados à diminuição da infecção. Observamos que o composto mostrou toxicidade nas doses mais elevadas. Mas análises histológicas mostraram que o composto 8BrGuo não provocou alterações teciduais hepáticas e renais 24 horas após o tratamento, nem após 60 dias. Testes bioquímicos de enzimas sangüíneas (transaminase glutâmico pirúvica e transaminase glutâmico oxaloacética), creatinina e hemograma completo mostraram-se normais quando comparados a animais controles. Podemos afirmar, inicialmente, que existe a possibilidade de tratamento da leishmaniose com a 8BrGuo. Contudo ainda há necessidade de maiores avaliações deste composto quanto aos comportamentos farmacocinéticos e farmacodinâmico / Abstract: Immunostimulatory ability of nucleosides substituted in either C8 or C8 and N7 positions has been tested in experimental in vitro treatments. Species belonging to the Leishmania genus parasitize macrophages displaying complex immune mechanism of escape, and treatments of leishmaniasis is often inefficients. The aim of this project was to test the 8BromoGuanosine (8BrGuo) in the treatment of cutaneous leishmaniasis in a murine model. The first tests confirmed that 8BrGuo ativated murine macrophages infected with Leishmania (L.) amazonensis amastigotes in vitro leading to 70% of infection reduction. In order to study the action mechanism of 8BrGuo in the parasite destruction inside the macrophages, another in vitro experiments were carried out, such as the production of nitrite, a subproduct of niric oxide, a powerful oxidative and toxic compound for microrganisms. These results encourage us to continue the investigations with 8BrGuo and isogenic mice CBA/J were for in vivo tests. Different administration routes of 8BrGuo were evaluated and the intraperitoneal route showed to be the most efficient and less agressive to the animals tested. Treatment with 8BrGuo and Tween® as na adjuvant led to statistically significant decrease of L. (L.) amazonensis lesions. Although the drug presented animal toxicity at high doses, at concentrations of 8BrGuo used in the present work it was not observed tissue damages in liverand kidney from treated CBNJ mice. Our results suggest that 8BrGuo induced a therapeutic effect during the leishmaniasis infection in murine model. Future studies concerning time assimilition, half time, elimination, and degradation of 8BrGuo will provide additional clues for the function and potential use of this compound as a therapeutic agent against leishmaniasis / Mestrado / Mestre em Parasitologia

Orientador: Selma Giorgio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T22:39:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_WagnerWelberArraisda_M.pdf: 3615109 bytes, checksum: 4ad56b306a1d94d293f6c223070386d6 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: As infecções, em geral, provocam mudanças na pressão parcial de oxigênio tornando o microambiente tecidual hipóxico (oxigenação diminuída). O fluxo sangüíneo alterado, a isquemia e a proliferação de células e microrganismos infectantes são alguns dos fatores responsáveis pela hipóxia associada às infecções. Os macrófagos se adaptam a ambientes hipóxicos, alterando o metabolismo, a produção de linfocinas pró-inflamatórias e as atividades exo, endo e fagocíticas. A lesão causada pelo parasita Leishmania amazonensis tem as características que levam a hipóxia tecidual, como a presença de um grande número de amastigotas em divisão, a migração de células inflamatórias, as infecções secundárias com bactérias aeróbicas e anaeróbicas e as mudanças no fluxo sangüíneo tecidual. Assim, analisamos neste trabalho o papel da hipóxia no modelo in vitro da infecção com L. amazonensis e investigamos os possíveis mecanismos de reversão deste ambiente na evolução da lesão na leishmaniose murina, utilizando a terapia com oxigênio hiperbárico. A cultura de macrófagos J774 incubada com amastigotas em ambiente hipóxico (5% de O2) apresentou diminuição da porcentagem de células infectadas quando comparada ao controle normóxico, mas manteve o mesmo percentual de infecção ao ser ativada com gIFN e LPS e não apresentou na produção de nitrito. O tratamento com oxigênio hiperbárico em formas promastigotas e amastigotas inibiu o crescimento e a diferenciação celular. Camundongos BALB/c tratados com oxigênio hiperbárico (1h/dia, 2,5 ATA e 100% de 02) mostraram uma significativa diminuição do tamanho da lesão. Houve diminuição do processo edematoso e conseqüente melhora do fluxo sangüíneo local, mas ocasionou um precoce comprometimento sistêmico com diminuição da sobrevida dos camundongos tratados. Concluímos que a hipóxia é um importante estimulador/ativador de macrófagos e que a restrição de O2 resulta em uma produção deficiente de nitrito, mas não impede que as células restrinjam a infecção com L. amazonensis. Os mecanismos pelos quais os macrófagos matam os amastigotas não são ainda conhecidos, mas podemos sugerir uma ação independente de NO, como, por exemplo, o aumento da atividade lisossomal. Sugerimos também que a HBO favoreceu a metástase, apesar da significativa melhora no fluxo sangüíneo da área lesionada, propiciando futuros estudos sobre o efeito adjuvante do oxigênio hiperbárico com drogas anti-parasitárias no modelo murino da leishmaniose e de outros parasitas / Abstract: Infections can cause the formation of hypoxic areas (low PO2). The altered blood flow, isquemia, cell proliferation and the presence of microorganisms causes hypoxia in injured tissues. Macrophages adapt to the presence of hypoxia and alter their metabolism, pro-inflammatory lymphokines production and phagocytosis activity. Lesions induced by Leishmania amazonensis are characterized by a large number of amastigotes, inflammatory cells migration, secondary infection with anaerobic and aerobic bacteria and altered tissue blood flow which can cause chronic areas of hypoxia. We have analyzed the effect of hypoxia on L. amazonensis in vitro and in vivo models and also studied the effect of hyperbaric therapy on murine leishmaniasis. The murine 1774 macrophages cultures infected with L. amazonensis amastigotes under hypoxic conditions (5% Oz) showed a decrease in the number of infected cells compared with cell cultures infected in normoxia (21% O2). However macrophage cultures activated with gamma-interferon and bacterial lipopolisaccharides showed the same percentage of infected cells compared with non stimulated macrophages in hypoxia and, no significant nitrite production. Hyperbaric treatment inhibited the growth and differentiation of L. amazonensis promastigotes and amastigotes. In addition BALB/c mice infected with L. amazonensis and treated with hyperbaric therapy (1 hour/day, 2.5 ATA, 100% O2) showed a significant decrease of lesions size. We also observed a decreased of the edematous process, an improvement of local blood flow, and early metastasis. Taken together our results provided evidences that hypoxia is an important stimulator/activator factor for L. amazonensis killing macrophages and also that hyperbaric therapy can be tested as an adjuvant therapy with anti-leishmanial drugs / Mestrado / Mestre em Parasitologia