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Mecanismo antiinflamatório do peptídeo mimético da Apolipoproteína E (COG 133) na recuperação da mucosite intestinal induzida por 5-Fluoruracil em camundongos Swiss / echanism of anti-inflammatory peptide mimetic of Apolipoprotein E (COG 133) in the recovery of intestinal mucositis induced by 5-fluorouracil in mice

Ripardo, Orleâncio Gomes January 2010 (has links)
AZEVEDO, Orleâncio Gomes Ripardo de. Mecanismo antiinflamatório do peptídeo mimético da Apolipoproteína E (COG 133) na recuperação da mucosite intestinal induzida por 5-Fluoruracil em camundongos Swiss. 2010. 107 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-05-08T12:13:08Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_ogripardo.pdf: 2802059 bytes, checksum: 7c2b46f8a53bc8712f027539cfe1b33c (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-05-08T16:53:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_ogripardo.pdf: 2802059 bytes, checksum: 7c2b46f8a53bc8712f027539cfe1b33c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-08T16:53:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_ogripardo.pdf: 2802059 bytes, checksum: 7c2b46f8a53bc8712f027539cfe1b33c (MD5) Previous issue date: 2010 / O câncer é uma doença grave que atinge milhares de pessoas no mundo, possuindo altos índices de morbidade e mortalidade. Atualmente existem diversos alvos terapêuticos no tratamento do câncer, um deles reside no fato de inibir a replicação do DNA impossibilitando a célula tumoral de se duplicar como é o caso do 5-fluoruracil (5-FU).O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito antiinflamatório do peptídeo mimético da ApoE (COG 133) em camundongos Swiss desafiados pela mucosite intestinal induzida pelo 5-FU. Utilizamos camundongos Swiss machos com peso de 30g, sendo desafiados com injeção (dose única) intraperitoneal de 5-FU (450 mg/kg).Alguns animais foram tratados com diferentes doses (0,3, 1,0 e 3,0 µM) do peptídeo mimético da apolipoproteína E (ApoE) COG133 por via intra-peritoneal, após o desafio com 5-FU. Animais tratados com PBS foram usados como controles. Os camundongos foram sacrificados com solução de deslocamento cervical 3 dias após o desafio com 5-FU.Algumas amostras de intestino foram congeladas imediatamente em nitrogênio líquido e em seguida armazenadas em freezer a -80ºC para biologia molecular. Outras amostras foram fixadas em formaldeído para processamento histológico.Monitoramos o peso corporal dos animais e fizemos leucometria a partir de coleta retrorbital de sangue para avaliação do efeito citotóxico mielosupressor do 5-FU nos grupos experimentais.Avaliamosos parâmetros morfométricos de altura de vilo e profundidade de cripta em segmentos do duodeno. Para a detecção de proteínas de interesse, utilizamos o Western blot com a utilização dos seguintes anticorpos IL-1β, TNF-α e iNOS. Para o RT-PCR, avaliamos os seguintes primers IL-1β, TNF-α e iNOS. No ensaio de citocinas por ELISA, utilizamos os seguintes anticorpos IL-1β, IL-10, TNF-α. Nas análises morfométricas de duodeno, encontramos uma grande redução na altura de vilos e profundidade de criptas nosanimais tratados com 5-FU, que foi reduzida com com a utilização do peptídeo COG133 na dose 3,0 µM (p<0,001).Nas análises histopatológicas, observamos um intensoinfiltrado inflamatório nos animais do grupo que foi injetadocomo 5-FU, que foi parcialmente revertido pela administração do peptídeo COG133.Os dados de ELISA evidenciaram um aumento da quantidade de citocinas pró-inflamatórias IL-1β (p<0,05), TNF-α (p<0,05) e uma redução da citocina antiinflamatória IL-10 (p<0,05), quando comparados ao controle salina, em duodenos de animais que foram injetados com 5-FU. A administração do peptídeo COG 133 reduziu os níveis de IL-1β de maneira estatisticamente significante (p<0,05 1μM; p<0,001 3μM), TNF-α (p<0,001 na dose de 1,0 μM); p<0,001 na dose de 3μM) e para IL-10 (p<0,001 na dose de 3μM).Dados de Western blot evidenciam que o peptídeo na dose de 3μM reduziu de maneira estatisticamente significante a expressão de citocinas como IL-1β (p<0,001), TNF-α (p<0,05) e do mediador inflamatório iNOS (p<0,05) no duodeno. Pelo protocolo de RT-PCR,encontramos uma elevação na expressão do transcrito para TNF-α e iNOS nos animais injetados com 5-FU, o que foi parcialmente diminuído pela administração do peptídeo na dose de 3μM para TNF-α (p<0,05) e iNOS (p<0,05)pelo ANOVA.A partir dos nossos achados, podemos concluir que o peptídeo mimético da ApoE (COG 133) possui uma ação anti-inflamatória, especialmente no segmento duodeno, visto que reduz a expressão de citocinas pró-inflamatórias de animais desafiados, dessa forma sugerindo sua utilização em humanos com mucosite intestinal sob quimio/radioterapia.
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Investigação das propriedades citotóxicas e imunológicas de complexos de paládio(II) in vitro utilizando o modelo experimental de Ehrlich /

Rocha, Michelle Corrêa da. January 2007 (has links)
Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Denise Fecchio / Banca: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Resumo: O câncer destaca-se pela alta incidência e mortalidade. O tratamento do câncer compreende cada vez mais a quimioterapia combinada, ou seja, substâncias antitumorais agindo conjuntamente com as células do sistema imune, potencializando-as ou apenas mantendo-as viáveis para exercerem sua função. Dentre os tipos celulares que constituem o sistema imunológico, os macrófagos são apontados como os principais elementos do organismo de combate aos tumores. Os macrófagos ativados agem liberando produtos tais como radicais de oxigênio (H2O2) e nitrogênio (NO), interleucina-1ß (IL-1ß) e fator de necrose tumoral (TNF-a), que são prejudiciais às células tumorais dependendo da concentração, além de sua ação indireta através da secreção de interferon-gama (IFN-.). Complexos de paládio(II) são investigados há décadas, destacando-se por sua potencialidade como agente antitumoral. Neste trabalho avaliou-se a ação dos compostos [Pd(dmba)(X)(dppp)] (X= SCN, NCO, N3 ou Cl) sobre as células tumorais de Ehrlich e macrófagos in vitro, utilizando como padrão a cis-platina (cis-Pt). Para tanto, foram realizados ensaios para determinação do índice de citotoxicidade mediano, o IC50, para cada composto pelos períodos de 24 e 48h e com base em tais concentrações investigadas para os macrófagos verificou-se a produção e/ou inibição de NO e H2O2, além das citocinas TNF-a, IFN-. e IL-1 bem como a atividade citotóxica/citolítica. Os compostos demonstraram ser agentes promissores por seus efeitos sobre as células tumorais e imunes, muitas vezes de forma igual ou superior à cis-Pt, droga de uso corrente na quimioterapia do câncer. / Abstract: The cancer is a disease with high incidence and mortality. The cancer treatment involves the combinated chemotherapy wich one involves antitumour substances acting along with the immune cells, stimulating or only keeping them able to act in the immune response. Between the cell types that belong to the immunological system, the macrophages are considered the main elements of the body that can act against tumours. The activated macrophages act releasing substances like oxygen (H2O2) and nitrogen (NO) radicals, interleukin-1 (IL-1) and tumour necrosis factor alpha (TNF-á), wich are not beneficial to the tumour cells in some concentrations, besides its indirect action towards interferon-gama (IFN-ã) release. Palladium(II) complexes are employed in many studies to verify its antitumour properties. For example we can describe the four following compounds: [Pd(dmba)(X)(dppp)], X= SCN, NCO, N3 or Cl. This work had as goal the evaluation of the action of such compounds towards Ehrlich tumour cells, macrophages and lymphocytes in vitro, employing cis-platin (cis-Pt) as standard. The following parameters were evaluated: the cytotoxic index (IC50) of each compound after 24 and 48h incubation for Ehrlich tumour cells, macrophages and lymphocytes; the immunological behaviour of the compounds in the concentrations previously determined such as NO and H2O2 production or inhibition, besides the cytokines TNF-á, IFN-ã and IL-1 as well as the cytotoxic/cytolitic activity. The compounds presented a good behaviour, based on their efects towads tumour and immune cells, many times like or even better than cis-Pt, standard drug in cancer chemotherapy. / Mestre
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Atividade imunomoduladora de Lactobacillus rhamnosus em macrófagos de camundongos estimulados com Lipopolisacarídeo, Ácido Lipoteicóico e manana /

Oliveira, Felipe Eduardo de. January 2013 (has links)
Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Co-orientador: Mariella Vieira Pereira Leão / Banca: Antônio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Célia Regina Gonçalves e Silva / Resumo: Os probióticos são capazes de equilibrar a microbiota residente e modular a resposta imune aos diferentes estímulos microbianos, entretanto, seus efeitos imunomoduladores ainda não estão claramente elucidados. O presente estudo avaliou o efeito imunomodulador de Lactobacillus rhamnosus ou seus produtos sobre macrófagos (RAW 264.7) ativados por lipopolissacarídeo (LPS), ácido lipoteicóico (LTA) ou manana, pela análise da produção de citocinas pró e anti-inflamatórias (TNF-α, IL-1 β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12). Foi utilizada a cepa padrão de L. rhamnosus ATCC 7469, semeada em Ágar Man-Rogosa-Shape (MRS) e cultivada a 37ºC/5% CO2 por 24 h. Foram empregadas três diferentes preparações de probióticos: 1) L. rhamnosus vivo (LV) na concentração de 2,5 x 107 células/mL; 2) L. rhamnosus morto (LM) obtido por autoclavagem da preparação anterior a 121°C/15 min; 3) Sobrenadante da suspensão de L. rhamnosus (SL), resultante da centrifugação da suspensão LM a 8300 xg/10min. Foram utilizados macrófagos de camundongos (RAW 264.7), cultivados em meio DMEM completo (suplementado com 10% de soro fetal bovino) foram distribuídos em microplacas de poliestireno na concentração de 5 x 105 células viáveis/poço/mL de meio DMEM completo. Após 24 h de incubação (37°C/5% CO2) para adesão celular, as placas foram lavadas com PBS estéril e apirogênico e as células foram estimuladas com LPS de Escherichia coli, LTA de Streptococcus faecalis ou manana de Saccharomyces cerevisiae na concentração de 1 μg/mL, na presença ou ausência das diferentes preparações dos probióticos por 2,5h. Em seguida as placas foram lavadas com PBS, tiveram seu meio trocado e foram incubadas por 16h (37°C/5% CO2). Os sobrenadantes das culturas foram coletados para a detecção e quantificação das citocinas (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10 e IL-12) pelo método imunoenzimático ELISA. Os .... / Abstract: Probiotics are able to balance the resident microbiota and modulate the immune response to different microbial stimuli, however its immunomodulatory effects are not clearly understood. This study intends to evaluate the immunomodulatory effect of Lactobacillus rhamnosus or its products on macrophages (RAW 264.7) activated by lipopolysaccharide (LPS), lipoteicoic acid (LTA) or mannan through the analysis of the production of pro and anti-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1 β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12). It was used the standard strain of L. rhamnosus ATCC 7469, seeded on Agar Man-Rogosa-Shape (MRS) and grown at 37°C/5% CO2 for 24 h. Three different preparations of probiotics were prepared: 1) L. rhamnosus solution at a concentration of 5 x 107 cells/mL; 2) Heat-killed L. rhamnosus, obtained by autoclaving previous preparation at 121°C/15 min, 3) Supernatant of L. rhamnosus suspension, obtained through centrifugation of the suspension with heat-killed probiotic at 8300 xg/10 min. Mouse macrophages (RAW 264.7) grown in complete DMEM medium (supplemented with 10% fetal bovine serum) were distributed in polystyrene microplates at a concentration of 1 x 106 viable cells/well/ml complete DMEM medium. After 24 h incubation (37°C/5% CO2) for cell adhesion, plates were washed with sterile-apirogenic physiologic saline and cells were stimulated with Escherichia coli LPS, Enterococcus faecalis LTA or Saccharomyces cerevisiae mannan at a concentration of 1 μg/mL, in the presence or absence of the different preparations of probiotics at the same time for 2,5 h. Then the plates were washed, had its medium traded and were incubated for 16 h (37°C/5% CO2). Culture supernatants were 14 collected for the detection and quantification of cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10 and IL-12) by ELISA immunoenzymatic method. The results were statistically analyzed by ANOVA and Tukey tests (p≤0,05). With ... / Mestre
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Caracterização da ação modulatória de citocinas inflamatórias pelo óleo de Melaleuca alternifolia e seus componentes (terpinen-4ol e alfa-terpineol) em macrófagos humanos ativados lipopolissacarídeos de Porphyromonas gingivalis e Escherichia coli /

Nogueira, Marianne Nicole Marques. January 2013 (has links)
Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Coorientador: Carlos Rossa Junior / Banca: Flavia Sammartino Mariano Rodrigues / Banca: Juliana Rico Pires / Banca: Raquel Mantuaneli Scarel Caminaga / Banca: Joni Augusto Cirelli / Resumo: O óleo de Melaleuca alternifolia (TTO) tem propriedades antimicrobianas e somado a isso, sugere-se que apresente características anti-inflamatórias. Este estudo investigou o potencial do TTO e seus componentes (terpinen-4-ol e alfa-terpineol) em modular citocinas e os mecanismos intracelulares participantes desta ação. Células monocíticas (U937) foram diferenciados em macrófagos com 40ng/mL de 12-miristato 13-acetato de forbol. A citotoxicidade dos óleos foi determinada com o ensaio de redução de Metil-tetrazolium (MTT). A habilidade em modular a produção das citocinas após o estímulo com LPS de Porphyromonas gingivalis (agonista de TLR2) e Escherichia coli (agonista de TLR4), foi estabelecida por meio de ensaios ELISA. Os efeitos dos compostos testados, na ativação de vias de sinalização intracelular, foram avaliados por western blot. As concentrações selecionadas pelo MTT foram: 0,015% e 0,004% para o TTO, 0,059% e 0,0073% para o terpinen-4-ol e 0,0064% e 0,0007% para alfa-terpineol. A influência do TTO na produção de citocinas foi mais marcante após estímulo de TLR4, com diminuição de IL-1β, IL-6 e IL-10. O terpinen-4-ol reduziu a produção de INF-γ, IL-1β, IL-6, IL-4, IL-10 e IL-17 após ativação tanto TLR4 quanto TLR2. O alfa-terpienol atua após ativação de TLR2 e 4 inibindo a produção de IL-1β, IL-6 e IL-10. Nenhuma das vias analisadas (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) sofreram interferência dos óleos. O TTO tem ação 8 modulatória inibindo produção de citocinas inflamatórias e o terpinen-4-ol é o seu maior componente ativo, entretanto este mecanismo não ocorre via inibição de NF-kB, ERK e p38 MAP-Kinase / Abstract: The oil of Melaleuca alternifolia (TTO) has antimicrobial properties, coupled with this, it is suggested that it also has antiinflammatory characteristics. This study investigated the potential of TTO and its components (terpinen-4-ol and alpha-terpineol) and cytokines in modulating the intracellular mechanisms that participate in this action. Monocytic cells (U937) were differentiated into macrophages with 40ng/mL 12-myristate 13-acetate phorbol. The olil cytotoxicity was determined with the reduction assay Methyl-tetrazolium (MTT). The ability to modulate cytokine production after stimulation with LPS of Porphyromonasgingivalis (TLR2 agonist) and Escherichia coli (TLR4 agonist), was established by ELISA assays. The effects of the tested compounds, the activation of intracellular signaling pathways were evaluated by western blot. The concentrations selected by the MTT were 0.015% and 0.004% for the TTO, 0.059% and 0.0073% to terpinen-4-ol and 0.0064% and 0.0007% for alpha-terpineol. The influence of TTO in cytokine production was more marked after TLR4 stimulation, with decreased IL-1β, IL-6 and IL-10. The terpinen-4-ol reduced the production of INF-γ, IL-1β, IL-6, IL-4, IL-10 and IL-17 activation after both TLR4 as TLR2. The alpha-terpienol acts upon activation of TLR2 and four inhibiting the production of IL-1β, IL-6 and IL-10. None of the analyzed pathways (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) suffered interference oils. The TTO has modulatory action by 10 inhibiting the production of inflammatory cytokines and terpinen-4-ol is your greatest asset component however, this mechanism does not occur via inhibition of NF-kB, ERK and p38 MAP-kinase / Doutor
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Caracterização de uma fosforribohidrolase do tipo lonely guy de Azospirillum brasilense, com uma possível ação na biossíntese de citocininas

Rodrigues, Isabela Cavalcante January 2017 (has links)
Orientador : Prof. Dr. Marcelo Müller dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 28/09/2017 / Inclui referências : f. 67-73 / Resumo: O gene "LONELY GUY" (LOG) de Arabidopsis thaliana codifica uma das enzimas associadas à biossíntese de citocininas. As citocininas são fito-hormônios reguladores do crescimento e desenvolvimentos de plantas. Por meio de ferramentas de bioinformática foram encontrados dois genes homólogos a LOG de Arabidopsis thaliana no genoma de Azospirillum brasilense FP2. A. brasilense é uma bactéria associativa de plantas, fixadora de nitrogênio e promotora de crescimento vegetal. A produção de fito-hormônios, entre eles as citocininas, está ligada a capacidade de promover o crescimento vegetal através da inoculação com bactérias. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi caracterizar as proteínas Log1 e Log2 de A. brasilense. Os genes log1 e log2 foram amplificados através de reação em cadeia da polimerase (PCR). Os produtos de PCR foram clonados no plasmídeo pBlueScript II KS, sequenciados para confirmar a integridade da sequência de bases e subclonados nos plasmídeos pET28a e pET29a para expressão em E. coli BL21(DE3). As enzimas superexpressas com cauda de histidinas N-terminal ou C-terminal foram purificadas por cromatografia de afinidade a Ni2+. Os ensaios de atividade enzimática revelaram que ambas as enzimas possuem atividade fosforribohidrolase, ou seja, clivam a ligação N-glicosídica entre a adenina e a fosforribose quando o AMP foi utilizado como substrato. Outros ensaios revelaram que a presença de fosfato ligado a posição 5' da ribose foi importante para a atividade das enzimas Log1 e Log2, já que não foi detectada atividade contra adenosina. A descoberta de enzimas homólogas as LOGs anteriormente descritas em plantas, tais como A. thaliana, contribuirá para o desenvolvimento de linhagens de bactérias que produzam quantidades elevadas de citocininas. Especificamente no caso de A. brasilense tal característica poderia ser utilizada para gerar estirpes mais eficientes no processo de promoção do crescimento vegetal. Palavra-chave: Citocininas, Azospirillum brasilense, fosforribohidrolases. / Abstract: The LONELY GUY gene (LOG) of Arabidopsis thaliana codes one of the enzymes associated with cytokinin biosynthesis. Cytokinins are phytohormones that regulate growth and development of plants. Azospirillum brasilense FP2 has two genes homologous to LOG of A. thaliana as revealed by genome searching through computational analysis with amino acid sequences of LOGs previously described. A. brasilense is a plant associate bacterium, nitrogen-fixing and plant growth promoter. The production of phytohormones, among them cytokinins, is linked to the ability to promote plant growth through inoculation with bacteria. Thus, the objective of this work was to characterise the A. brasilense Log1 and Log2 enzymes. The log1 and log2 genes were amplified by polymerase chain reaction (PCR). The PCR products were cloned into the plasmid pBlueScript II KS, sequenced to confirm their integrities and subcloned into plasmids pET28a and pET29a for expression in E. coli BL21 (DE3). The enzymes were over-expressed with an N-terminal or C-terminal six histidines-tag and were purified by Ni2+ affinity chromatography. Enzyme activity assays revealed that both enzymes have phosphoribohydrolase activity since they cleave the N-glycosidic bond between adenine and phosphoribose when AMP was used as the substrate. Other assays showed that the presence of a phosphate group bound to the 5'-carbon of ribose was essential for the activity of Log1 and Log2 enzymes since they did not cleave adenosine. The discovery of homologous enzymes to the LOGs previously described in plants, such as A. thaliana, will contribute to the development of lineages of bacteria that produce high amounts of cytokinins. Specifically, in the case of A. brasilense, this characteristic could be used to generate more efficient strains in the process of promoting plant growth. Keywords: Cytokinin, Azospirillum brasilense, phytohormones
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Avaliação dos efeitos da imersão diária em água termomineral de Caldas da Imperatriz-SC na inflamação periférica em camundongos

Madeira, Fernanda January 2016 (has links)
Objective: This study aimed to evaluate the effects of daily immersion in thermomineral water from Caldas da Imperatriz-SC in a preclinical model of inflammatory pain. Methods: After approval of the protocol by the Ethics Committee on Animal Use UNISUL - CEUA / UNISUL (Protocol 13.0064.08.IV), male Swiss mice (25 to 35g) received an intraplantar injection of complete Freund's adjuvant (CFA). Twenty-four hours after the injection we initiated the immersion treatments with thermomineral water (ATM for ―água termomineral‖ in portuguese). 3, 10 or 30 minute treatments were performed six days a week for three weeks. Mechanical hyperalgesia and edema were evaluated. Additionally, at the end of first week after injection the concentrations of pro- and anti-inflammatory cytokines in the paw and spinal cord were determined. Results: Daily ATM immersion reduced the mechanical hyperalgesia in a dose dependent effect (corresponding to immersion time); Daily treatment with immersion in ATM induced a summed effect, which can be evidenced by the extension of the anti-hyperalgesic response in the time-course evaluations; daily immersion in ATM restored sensory response even after the end of the treatment; daily immersion in ATM did not affect paw edema. Furthermore, our findings indicate that immersion treatment reduced hyperalgesia through a reduction of pro-inflammatory cytokines and concomitant increase of antiinflammatory cytokine concentration in animal’s paws; in association with a decrease of pro-inflammatory cytokines spinal cord concentration. Conclusion: This study provides evidence that BT (balneotherapy) carried out with ATM from Santo Amaro da Imperatriz, SC reduces inflammatory mechanical hyperalgesia, but does not decrease edema in an animal model of persistent peripheral inflammatory pain. / Submitted by Tatyane Barbosa Philippi (tatyane.barbosa@unisul.br) on 2017-10-23T18:54:42Z No. of bitstreams: 2 Dissertação FERNANDA MADEIRA.pdf: 1080681 bytes, checksum: 6cb202ad90aa08750a638e01466812d9 (MD5) Fernanda_Madeira.pdf: 747592 bytes, checksum: 5fd2fc38d3265d29c5caa0511dbea9b2 (MD5) / Approved for entry into archive by Fabiane dos Santos (fabiane.santos3@unisul.br) on 2017-10-23T19:27:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação FERNANDA MADEIRA.pdf: 1080681 bytes, checksum: 6cb202ad90aa08750a638e01466812d9 (MD5) Fernanda_Madeira.pdf: 747592 bytes, checksum: 5fd2fc38d3265d29c5caa0511dbea9b2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-23T19:27:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação FERNANDA MADEIRA.pdf: 1080681 bytes, checksum: 6cb202ad90aa08750a638e01466812d9 (MD5) Fernanda_Madeira.pdf: 747592 bytes, checksum: 5fd2fc38d3265d29c5caa0511dbea9b2 (MD5) Previous issue date: 2016-07 / Objetivo: O presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da imersão diária em água termomineral de Caldas da Imperatriz-SC em um modelo pré-clínico de dor inflamatória. Métodos: Após aprovação do protocolo pela Comissão de Ética no Uso de Animais da UNISUL – CEUA/UNISUL sob o protocolo nº 16.009.4.01.IV, camundongos Swiss machos (25 a 35g) receberam uma injeção intraplantar do adjuvante completo de Freund (CFA). Vinte quatro horas após a injeção iniciou-se os tratamentos com imersão em água termomineral (ATM) por 3, 10 ou 30 minutos, sendo realizados seis dias por semana durante três semanas. A hiperalgesia mecânica e o edema foram analisados. Por fim, as concentrações de citocinas pró- e anti-inflamatórias foram determinadas na pata e na medula espinal no final da primeira semana após a injeção. Resultados: a imersão diária em ATM por diferentes tempos reduziu a hiperalgesia mecânica na pata dos animais, sendo este efeito dependente do tempo de imersão; O tratamento diário por imersão diária em ATM induziu efeito somatório, evidenciado pelo prolongamento da resposta antihiperalgésica nas avaliações dos decursos temporais; A imersão diária em ATM restabeleceu a resposta sensorial dos animais mesmo após o final dos tratamentos; A imersão diária em ATM não alterou o edema na pata dos animais com inflamação; Além disso, os resultados encontrados aqui apontam que os tratamentos por imersão em ATM reduziram a hiperalgesia por reduzir as concentrações de citocinas pró-inflamatórias e aumentar as concentrações de citocinas anti-inflamatórias na pata dos animais com inflamação e; também por reduzir as concentrações de citocinas pró-inflamatórias na medula espinal dos camundongos com inflamação periférica. Conclusão: o presente estudo apresenta evidências de que a BT realizada com ATM de Santo Amaro da Imperatriz-SC reduz a hiperalgesia mecânica inflamatória, mas não alterou o edema, em um modelo animal de dor inflamatória periférica persistente.
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Investigação comparativa de dados clínicos e microbiológicos entre indivíduos geneticamente suscetíveis e não suscetíveis à periodontite

Finoti, Livia Sertori [UNESP] 02 March 2012 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-02Bitstream added on 2014-06-13T19:57:17Z : No. of bitstreams: 1 finoti_ls_me_arafo.pdf: 807524 bytes, checksum: 5006bb12d9dfd8b018947dc9bf5f9a44 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-10-27T11:27:32Z: finoti_ls_me_arafo.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-10-27T11:28:04Z : No. of bitstreams: 1 000699432_20161215.pdf: 108734 bytes, checksum: bb249231be9783ec2b2e8a69bab2d4d9 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-12-16T09:54:38Z: 000699432_20161215.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-12-16T09:55:19Z : No. of bitstreams: 1 000699432.pdf: 1829489 bytes, checksum: 1673fe1964d933a8139de0e818870022 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Doença Periodontal (DP) é uma doença infecciosa de caráter multifatorial causada por microrganismos periodontopatogênicos e influenciada por fatores como: suscetibilidade genética do hospedeiro, reação do sistema imune, hábito de fumar e doenças sistêmicas. Estudos recentes realizados por nosso grupo verificaram indivíduos com predisposição genética à periodontite crônica, mesmo após ajustes para idade, gênero, cor da pele e hábito de fumar. Tal predisposição genética foi determinada pela presença de um haplótipo formado por polimorfismos no gene IL8. O objetivo do presente estudo é comparar a microbiota subgengival de sítios afetados ou não pela DP, antes e após 45 dias do tratamento periodontal não-cirúrgico em indivíduos geneticamente suscetíveis e não suscetíveis à periodontite crônica. Dessa forma, será possível saber se, entre indivíduos geneticamente suscetíveis e não suscetíveis à DP, ocorrem diferenças qualitativa e/ou quantitativa de microrganismos periodontopatogênicos. Também se pretende avaliar se indivíduos geneticamente suscetíveis e não suscetíveis à DP respondem diferentemente ao tratamento periodontal não-cirúrgico, por meio da análise de parâmetros clínicos e microbiológicos. Foram selecionados 65 indivíduos divididos quanto à presença ou não do referido haplótipo ATC/TTC no gene IL8, de forma que os indivíduos “suscetíveis” e “não suscetíveis” à DP foram subdivididos quanto à presença ou ausência de periodontite crônica. Os pacientes selecionados foram submetidos a novo exame clínico periodontal e coleta de placa subgengival antes e 45 dias após tratamento periodontal. Três microrganismos periodontopatogênicos Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia... / Periodontal disease (PD) is a multifactorial disease caused by periodontopathogenic microorganisms and influenced by factors such as genetic susceptibility, reaction of the immune system, smoking and the occurrence of systemic diseases. Recent studies carried out by this group have observed individuals with a genetic predisposition to periodontitis even after adjusting for covariates such as age, gender, skin color and smoking. Such genetic predisposition was determined by the haplotype presence formed by IL8 gene polymorphisms. The purpose of this study is to compare the subgingival microbiota of sites with and without PD, before and after 45 days of non-surgical periodontal treatment in individuals who are genetically susceptible and non susceptible to PD. In this way, it will be possible to know if there are qualitative/quantitative differences of periodontopathogenic microorganisms between individuals who are genetically susceptible and non susceptible to PD, and if between these groups, there is differential influence on non-surgical periodontal treatment on the clinical and microbiological parameters. Sixty-five individuals were selected and divided regarding the presence or not of that ATC/TTC haplotype in the IL8 gene. The susceptible and the non susceptible individuals were subdivided about the presence or absence of PD. In each group there are patients with and without periodontitis. The selected patients were submitted to a new periodontal exam and had their gingival fluid collected before and after 45 days of periodontal treatment. The periodontopathogenic microorganism Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, and Treponema denticola have been quantified by absolute quantification by the use of Real Time PCR (qPCR). The microbiological data... (Complete abstract click electronic access below)
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Caracterização da ação modulatória de citocinas inflamatórias pelo óleo de Melaleuca alternifolia e seus componentes (terpinen-4ol e alfa-terpineol) em macrófagos humanos ativados lipopolissacarídeos de Porphyromonas gingivalis e Escherichia coli

Nogueira, Marianne Nicole Marques [UNESP] 28 March 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-28Bitstream added on 2014-06-13T19:23:27Z : No. of bitstreams: 1 nogueira_mnm_dr_arafo.pdf: 1578323 bytes, checksum: 6ef77905acf94bb01ba70858855a37c0 (MD5) / O óleo de Melaleuca alternifolia (TTO) tem propriedades antimicrobianas e somado a isso, sugere-se que apresente características anti-inflamatórias. Este estudo investigou o potencial do TTO e seus componentes (terpinen-4-ol e alfa-terpineol) em modular citocinas e os mecanismos intracelulares participantes desta ação. Células monocíticas (U937) foram diferenciados em macrófagos com 40ng/mL de 12-miristato 13-acetato de forbol. A citotoxicidade dos óleos foi determinada com o ensaio de redução de Metil-tetrazolium (MTT). A habilidade em modular a produção das citocinas após o estímulo com LPS de Porphyromonas gingivalis (agonista de TLR2) e Escherichia coli (agonista de TLR4), foi estabelecida por meio de ensaios ELISA. Os efeitos dos compostos testados, na ativação de vias de sinalização intracelular, foram avaliados por western blot. As concentrações selecionadas pelo MTT foram: 0,015% e 0,004% para o TTO, 0,059% e 0,0073% para o terpinen-4-ol e 0,0064% e 0,0007% para alfa-terpineol. A influência do TTO na produção de citocinas foi mais marcante após estímulo de TLR4, com diminuição de IL-1β, IL-6 e IL-10. O terpinen-4-ol reduziu a produção de INF-γ, IL-1β, IL-6, IL-4, IL-10 e IL-17 após ativação tanto TLR4 quanto TLR2. O alfa-terpienol atua após ativação de TLR2 e 4 inibindo a produção de IL-1β, IL-6 e IL-10. Nenhuma das vias analisadas (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) sofreram interferência dos óleos. O TTO tem ação 8 modulatória inibindo produção de citocinas inflamatórias e o terpinen-4-ol é o seu maior componente ativo, entretanto este mecanismo não ocorre via inibição de NF-kB, ERK e p38 MAP-Kinase / The oil of Melaleuca alternifolia (TTO) has antimicrobial properties, coupled with this, it is suggested that it also has antiinflammatory characteristics. This study investigated the potential of TTO and its components (terpinen-4-ol and alpha-terpineol) and cytokines in modulating the intracellular mechanisms that participate in this action. Monocytic cells (U937) were differentiated into macrophages with 40ng/mL 12-myristate 13-acetate phorbol. The olil cytotoxicity was determined with the reduction assay Methyl-tetrazolium (MTT). The ability to modulate cytokine production after stimulation with LPS of Porphyromonasgingivalis (TLR2 agonist) and Escherichia coli (TLR4 agonist), was established by ELISA assays. The effects of the tested compounds, the activation of intracellular signaling pathways were evaluated by western blot. The concentrations selected by the MTT were 0.015% and 0.004% for the TTO, 0.059% and 0.0073% to terpinen-4-ol and 0.0064% and 0.0007% for alpha-terpineol. The influence of TTO in cytokine production was more marked after TLR4 stimulation, with decreased IL-1β, IL-6 and IL-10. The terpinen-4-ol reduced the production of INF-γ, IL-1β, IL-6, IL-4, IL-10 and IL-17 activation after both TLR4 as TLR2. The alpha-terpienol acts upon activation of TLR2 and four inhibiting the production of IL-1β, IL-6 and IL-10. None of the analyzed pathways (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) suffered interference oils. The TTO has modulatory action by 10 inhibiting the production of inflammatory cytokines and terpinen-4-ol is your greatest asset component however, this mechanism does not occur via inhibition of NF-kB, ERK and p38 MAP-kinase
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Atividade imunomoduladora de Lactobacillus rhamnosus em macrófagos de camundongos estimulados com Lipopolisacarídeo, Ácido Lipoteicóico e manana

Oliveira, Felipe Eduardo de [UNESP] 18 December 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-08-13T14:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-18Bitstream added on 2014-08-13T17:59:40Z : No. of bitstreams: 1 000776180.pdf: 1926203 bytes, checksum: 60db49d6033717478f4a4a7a4f1c63aa (MD5) / Os probióticos são capazes de equilibrar a microbiota residente e modular a resposta imune aos diferentes estímulos microbianos, entretanto, seus efeitos imunomoduladores ainda não estão claramente elucidados. O presente estudo avaliou o efeito imunomodulador de Lactobacillus rhamnosus ou seus produtos sobre macrófagos (RAW 264.7) ativados por lipopolissacarídeo (LPS), ácido lipoteicóico (LTA) ou manana, pela análise da produção de citocinas pró e anti-inflamatórias (TNF-α, IL-1 β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12). Foi utilizada a cepa padrão de L. rhamnosus ATCC 7469, semeada em Ágar Man-Rogosa-Shape (MRS) e cultivada a 37ºC/5% CO2 por 24 h. Foram empregadas três diferentes preparações de probióticos: 1) L. rhamnosus vivo (LV) na concentração de 2,5 x 107 células/mL; 2) L. rhamnosus morto (LM) obtido por autoclavagem da preparação anterior a 121°C/15 min; 3) Sobrenadante da suspensão de L. rhamnosus (SL), resultante da centrifugação da suspensão LM a 8300 xg/10min. Foram utilizados macrófagos de camundongos (RAW 264.7), cultivados em meio DMEM completo (suplementado com 10% de soro fetal bovino) foram distribuídos em microplacas de poliestireno na concentração de 5 x 105 células viáveis/poço/mL de meio DMEM completo. Após 24 h de incubação (37°C/5% CO2) para adesão celular, as placas foram lavadas com PBS estéril e apirogênico e as células foram estimuladas com LPS de Escherichia coli, LTA de Streptococcus faecalis ou manana de Saccharomyces cerevisiae na concentração de 1 μg/mL, na presença ou ausência das diferentes preparações dos probióticos por 2,5h. Em seguida as placas foram lavadas com PBS, tiveram seu meio trocado e foram incubadas por 16h (37°C/5% CO2). Os sobrenadantes das culturas foram coletados para a detecção e quantificação das citocinas (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10 e IL-12) pelo método imunoenzimático ELISA. Os .... / Probiotics are able to balance the resident microbiota and modulate the immune response to different microbial stimuli, however its immunomodulatory effects are not clearly understood. This study intends to evaluate the immunomodulatory effect of Lactobacillus rhamnosus or its products on macrophages (RAW 264.7) activated by lipopolysaccharide (LPS), lipoteicoic acid (LTA) or mannan through the analysis of the production of pro and anti-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1 β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12). It was used the standard strain of L. rhamnosus ATCC 7469, seeded on Agar Man-Rogosa-Shape (MRS) and grown at 37°C/5% CO2 for 24 h. Three different preparations of probiotics were prepared: 1) L. rhamnosus solution at a concentration of 5 x 107 cells/mL; 2) Heat-killed L. rhamnosus, obtained by autoclaving previous preparation at 121°C/15 min, 3) Supernatant of L. rhamnosus suspension, obtained through centrifugation of the suspension with heat-killed probiotic at 8300 xg/10 min. Mouse macrophages (RAW 264.7) grown in complete DMEM medium (supplemented with 10% fetal bovine serum) were distributed in polystyrene microplates at a concentration of 1 x 106 viable cells/well/ml complete DMEM medium. After 24 h incubation (37°C/5% CO2) for cell adhesion, plates were washed with sterile-apirogenic physiologic saline and cells were stimulated with Escherichia coli LPS, Enterococcus faecalis LTA or Saccharomyces cerevisiae mannan at a concentration of 1 μg/mL, in the presence or absence of the different preparations of probiotics at the same time for 2,5 h. Then the plates were washed, had its medium traded and were incubated for 16 h (37°C/5% CO2). Culture supernatants were 14 collected for the detection and quantification of cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10 and IL-12) by ELISA immunoenzymatic method. The results were statistically analyzed by ANOVA and Tukey tests (p≤0,05). With ...
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Investigação comparativa de dados clínicos e microbiológicos entre indivíduos geneticamente suscetíveis e não suscetíveis à periodontite.

Finoti, Livia Sertori. January 2012 (has links)
Orientador: Raquel Mantuanelli Scarel Caminaga / Banca: Márcia Pinto Alves Mayer / Banca: Joni Augusto Cirelli / Resumo: A Doença Periodontal (DP) é uma doença infecciosa de caráter multifatorial causada por microrganismos periodontopatogênicos e influenciada por fatores como: suscetibilidade genética do hospedeiro, reação do sistema imune, hábito de fumar e doenças sistêmicas. Estudos recentes realizados por nosso grupo verificaram indivíduos com predisposição genética à periodontite crônica, mesmo após ajustes para idade, gênero, cor da pele e hábito de fumar. Tal predisposição genética foi determinada pela presença de um haplótipo formado por polimorfismos no gene IL8. O objetivo do presente estudo é comparar a microbiota subgengival de sítios afetados ou não pela DP, antes e após 45 dias do tratamento periodontal não-cirúrgico em indivíduos geneticamente suscetíveis e não suscetíveis à periodontite crônica. Dessa forma, será possível saber se, entre indivíduos geneticamente suscetíveis e não suscetíveis à DP, ocorrem diferenças qualitativa e/ou quantitativa de microrganismos periodontopatogênicos. Também se pretende avaliar se indivíduos geneticamente suscetíveis e não suscetíveis à DP respondem diferentemente ao tratamento periodontal não-cirúrgico, por meio da análise de parâmetros clínicos e microbiológicos. Foram selecionados 65 indivíduos divididos quanto à presença ou não do referido haplótipo ATC/TTC no gene IL8, de forma que os indivíduos "suscetíveis" e "não suscetíveis" à DP foram subdivididos quanto à presença ou ausência de periodontite crônica. Os pacientes selecionados foram submetidos a novo exame clínico periodontal e coleta de placa subgengival antes e 45 dias após tratamento periodontal. Três microrganismos periodontopatogênicos Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Periodontal disease (PD) is a multifactorial disease caused by periodontopathogenic microorganisms and influenced by factors such as genetic susceptibility, reaction of the immune system, smoking and the occurrence of systemic diseases. Recent studies carried out by this group have observed individuals with a genetic predisposition to periodontitis even after adjusting for covariates such as age, gender, skin color and smoking. Such genetic predisposition was determined by the haplotype presence formed by IL8 gene polymorphisms. The purpose of this study is to compare the subgingival microbiota of sites with and without PD, before and after 45 days of non-surgical periodontal treatment in individuals who are genetically susceptible and non susceptible to PD. In this way, it will be possible to know if there are qualitative/quantitative differences of periodontopathogenic microorganisms between individuals who are genetically susceptible and non susceptible to PD, and if between these groups, there is differential influence on non-surgical periodontal treatment on the clinical and microbiological parameters. Sixty-five individuals were selected and divided regarding the presence or not of that ATC/TTC haplotype in the IL8 gene. The "susceptible" and the "non susceptible" individuals were subdivided about the presence or absence of PD. In each group there are patients with and without periodontitis. The selected patients were submitted to a new periodontal exam and had their gingival fluid collected before and after 45 days of periodontal treatment. The periodontopathogenic microorganism Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, and Treponema denticola have been quantified by absolute quantification by the use of Real Time PCR (qPCR). The microbiological data... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

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