PEREIRA, Venúcia Bruna Magalhães. Novo modelo de mucosite intestinal induzida pela associação de irinotecano e 5-fluorouracil em camundongos C57BL/6. 2013. 104 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-06-03T12:05:25Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_vbmpereira.pdf: 1296853 bytes, checksum: fb6f3d6d5502e4fe20e6d7c9da63d767 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-06-03T12:06:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_vbmpereira.pdf: 1296853 bytes, checksum: fb6f3d6d5502e4fe20e6d7c9da63d767 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-03T12:06:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_vbmpereira.pdf: 1296853 bytes, checksum: fb6f3d6d5502e4fe20e6d7c9da63d767 (MD5) Previous issue date: 2013 / Introduction: Intestinal mucositis is a common side effect of anticancer regimens for first-line treatment of colorectal cancer. Among such drugs are irinotecan and 5-FU used in combination. Many studies have been conducted on the pathogenesis of MI. However, further investigations are necessary, because the course of MI may vary according to the drug regimen and employees. Then aimed to develop a new experimental model of MI induced by the combination of IRI and 5-FU in mice. Methods and Results: C57BL/6 mice (20-25g, n=6) were injected with saline (100µL, i.p), IRI (30 or 45 mg/kg, i.p), 5-FU (25, 37.5 or 50 mg/kg, i.p) or IRI+5-FU for 4 days. On day 7, diarrhea, weight loss, and blood leukocyte count were registered. Following animal euthanasia, ileum samples were collected for histopathological analysis, myeloperoxidase activity (MPO, neutrophil/mg protein), TNF-α and IL-6 levels (pg/mg tissue). Kaplan-Mayer log rank test, Kruskal Wallis/Dunn’s or ANOVA/Bonferroni’s test was used for statistical analysis. p<0.05 was accepted. The best dose combination able to induce IM with no important mortality on day 7 was 5-FU (37.5 mg/kg) +IRI (45 mg/kg) (0% mortality), which was then used for subsequent studies. IRI+5-FU induced (p<0.001) diarrhea (2[0-3]), weight loss (86.7±3.9g), and leukopenia (7.3± 2.3 x103) versus saline group (0[0-1]; 101.1±0.6; 215.5± 54.1, respectively) or each drug given alone (5-FU: diarrhea (0[0-1]), weight loss [92.6±2.7], and leukopenia [30.4± 13.4]; IRI: diarrhea (0[0-1]), weight loss [94.8±2.1], and leukopenia [49.2± 5.5]). In addition, IRI+5-FU induced inflammatory cells infiltration, and loss of villi and crypt architecture (4[3-4]), increased in MPO activity (14641±1598 neutrophil/mgproteín), TNF-a (3.2±0.9 pg/mg tissue), IL-6 (1.4±0.5 pg/mg tissue) tissue levels versus saline-injected group (0[0-1], 5747±1155; 0.7±0.2; 0.3±0.1) or the drugs injected alone (5-FU: Intestinal damage (2.5[2-3]), MPO [3788±1212], TNF-α [0.7±0.2], IL-6 [0.2±2.3]; IRI: Intestinal damage (1[0-2]), MPO [3580±1613], TNF-α [0.4±0,2], IL-6 [0.07±0.05]) (p<0.05). Conclusion: We developed a new experimental model of IM induced by the combination of IRI+5-FU in mice, which opens perspective for a more appropriate knowledge concerning the pathogenesis of IM. / Introdução: Mucosite intestinal é um efeito adverso comum dos regimes anticâncer de primeira linha para o tratamento do câncer colorretal. Dentre esses fármacos estão o irinotecano e 5-FU utilizados em associação. Muitos estudos têm sido realizados sobre a patogênese da MI. No entanto, novas investigações são necessarias, pois o curso da MI pode variar de acordo com o fármaco e regime empregados. Objetivou-se então desenvolver um novo modelo experimental de MI induzida pela combinação de IRI e 5-FU em camundogos. Métodos e Resultados: camundongos C57BL/6 (20-25g, n=6) foram injetados com salina (100µL, i.p), IRI (30 ou 45 mg/kg, i.p), 5-FU (25, 37,5 ou 50 mg/kg, i.p) ou IRI+5-FU em doses combinadas por 4 dias. No 7º dia, diarreia, perda de peso e contagem de leucócitos foram registradas. Após a eutanásia dos animais, amostras do íleo foram coletadas para análise histopatológica, atividade de mieloperoxidase (neutrófilo/mg proteína), níveis de TNF-α e IL-6 (pg/mg tecido). Teste Kaplan-Mayer log rank, Kruskal Wallis/Dunn’s ou teste ANOVA/Bonferroni foram usados para analise estatistica. p<0,05 foi aceito como significativo. A melhor combinação de dose para induzir a MI sem mortalidade importante no 7º dia foi 5-FU (37,5 mg/kg) + IRI (45 mg/kg) (0% mortalidade), que foi então usada para estudos subsequentes. IRI+5-FU induziu (p<0,001) diarreia (2[0-3]), perda de peso (86,7±3,9g), e leucopenia (7,3± 2,3x103) versus grupo salina (0[0-1]; 101,1±0,6; 215,5± 54,1, respectivamente) ou cada droga dada sozinha (5-FU: diarreia (0[0-1]), perda de peso [92,6±2,7], e leucopenia [30,4± 13,4]; IRI: diarreia (0[0-1]), perda de peso [94,8±2,1], e leucopenia [49,2± 5,5]). Adicionalmente, IRI+5-FU induziu infiltrado de células inflamatórias, perda de vilos e arquitetura das criptas (4[4-4]), aumento na atividade de MPO (14641±1598 neutrófilo/mgproteína), TNF-a (3,2±0,9 pg/mg de tecido), IL-6 (1,4±0,5 pg/mg de tecido) níveis teciduais versus grupo injetado com salina (0[0-1], 5747±1155; 0,7±0,2; 0,3±0,1) ou com fármacos injetados isoladamente (5-FU: dano intestinal (2.5[2-3]), MPO [3788±1212], TNF-α [0,7±0,2], IL-6 [0,2±2,3]; IRI: dano intestinal (1[0-2]), MPO [3580±1613], TNF-α [0,4±0,2], IL-6 [0,07±0,05]) (p<0,05). Conclusão: Desenvolvemos um novo modelo experimental de MI induzida pela combinação de IRI+5-FU em camundongos, que abre perspectiva para um maior conhecimento sobre a patogênese da MI.

MELO, Anielle Torres de. Efeitos da imunomodulação em animais sobreviventes de Sepse grave sobre as alterações inflamatórias observadas na mucosite intestinal induzida por irinotecano. 2014. 88 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-12-08T13:08:34Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_atmelo.pdf: 2860966 bytes, checksum: 5873d56732d62c0532a9851a7e1be667 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-12-08T13:08:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_atmelo.pdf: 2860966 bytes, checksum: 5873d56732d62c0532a9851a7e1be667 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-08T13:08:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_atmelo.pdf: 2860966 bytes, checksum: 5873d56732d62c0532a9851a7e1be667 (MD5) Previous issue date: 2014 / Nowadays the colorectal cancer (CRC) is one of the most common malignant tumors. Irinotecan have been used in the treatment of CRC and metastatic CRC. However, the treatment protocols are associated with the development of intestinal mucositis (IM), reaction that affects the therapy. The IM and severe diarrhea are common side effects that may reach 15-25% of the patients undergoing chemotherapy and the clinical management of these effects is still partly ineffective. The study of the mechanisms and mediators involved in immune response in post-sepsis has provided evidences that in this condition seems to be an inhibition of inflammatory events including neutrophil migration. Thus, the post-sepsis could influence the course of MI induced by IRI. The aim of this study is to evaluate the effects of immunomodulation in the development of inflammatory changes of IM induced by Irinotecan in severe sepsis surviving animals. C57BL / 6 male mice, 20-25g, were divided into 4 groups (n = 5-8) were subjected to the model of cecal ligation and puncture (CLP) and treated with ertapenem 20mg/kg i.p. 6 h after CLP and 12/12h for three days to induce approximately 50% of survival. Animals underwent surgery but not to puncture the cecum (SHAM) received saline (NaCl, 5 mL / kg, ip). Fifteen days after CLP, the surviving animals and animals of the SHAM group received saline (NaCl, 5 ml / kg, ip) for 4 days or Irinotecan (75mg/kg, ip). The body mass (g) was measured every day. On the 5th or 7th day, total leukocyte count (x103/μL) and diarrhea (scores) were evaluated. After the death, the jejunum and the ileum were collected for determination of myeloperoxidase (MPO), IL-1β and IL-10 (pg / ml) and histopathological analysis. ANOVA / Kruskal Wallis test or Bonferroni / Dunn were used as statistical tests. P <0.05 was accepted. CEPA 84/2014 protocol. Post-septic animal by CLP treated with Irinotecan decreased scores of diarrhea and MPO activity in the 5th and 7th day (diarrhea 5D: [0 (0-0)]; 7D: [0 (0-2) / MPO jejunum and ileum 5D: 2.96 ± 1.08, 2.35 ± 0.76 and 7D: 0.42 ± 0.14, 0.92 ± 0.19, respectively) compared against the SHAM animals treated with Irinotecan (diarrhea 5D: [1(0-1)]; 7D: [2.5 (1-3)] / MPO jejunum and ileum 5D: 8.15 ± 1.48, 7.96 ± 0.96; 7D: 2.51 ± 0.67, 2.87 ± 0.65, respectively). Furthermore, post-septic mice treated with Irinotecan decreased histopathological damage in the 5th and 7th day (5D jejunum and ileum: [1(1-3)] and [1(0-1)], and 7D in the ileum: [2 (1-3)] for Irinotecan (jejunum and ileum 5D: [4 (2-4)] and [4 (1-4)] / 7D: ileum [4 (3-4)]) and increased levels of IL-10 (jejunum and ileum 5D: 55.80 ± 3.42; 34.45 ± 1.87; 7D: Ileum: 133.00 ± 20.25) compared against the SHAM + IRI (5D in jejunum and ileum: 34.45 ± 1.87; 6.91 ± 3.05; 7D ileum:. 63.67 ± 9.08). However, IRI + CLP animals had no change of IRI-induced leukopenia. C57BL/6 post-septic animals had reduced intestinal mucosal injury and neutrophil infiltration in IM induced by Irinotecan, this effect can be consequential, among others, of the increase in IL-10. / O câncer colorretal (CCR) é um dos mais comuns tumores malignos atualmente. Regimes à base de irinotecano (IRI) têm sido utilizados no tratamento do CCR e do CCR metastático. Contudo, tais regimes estão associados ao surgimento de mucosite intestinal (MI), muitas vezes limitante do tratamento. A MI e a diarréia grave são efeitos colaterais frequentes que podem atingir de 15-25% dos pacientes em quimioterapia. No entanto, o manejo clínico destes efeitos secundários ainda é parcialmente ineficaz. O estudo dos mecanismos e mediadores envolvidos na resposta imune no estado de pós sepse vem evidenciando que nesta condição parece haver uma inibição de eventos inflamatórios entre os quais a migração de neutrófilos. Dessa forma, o estado de pós-sepse poderia interferir no curso da MI induzida por IRI. Pretende-se avaliar os efeitos da imunomodulação em animais sobreviventes de sepse grave no desenvolvimento das alterações inflamatórias da MI induzida pelo IRI. Camundongos C57BL/6 machos, 20-25g, foram divididos em 4 grupos (n=5-8), submetidos ao modelo de ligação e perfuração do ceco (CLP) e tratados com ertapenem 20mg/Kg i.p. 6h depois da CLP e de 12/12h por três dias, para induzir aproximadamente 50% de sobrevida. Animais submetidos à cirurgia mas não à perfuração do ceco (SHAM) receberam solução salina (Sal, 5 mL/Kg, i.p.). Quinze dias após CLP, os animais sobreviventes e animais do grupo SHAM receberam solução salina (Sal, 5 ml/Kg, i.p.) durante 4 dias ou IRI (75mg/kg, i.p.). A massa corpórea (g) foi mensurada diariamente. No 5° ou 7 º dia, foi avaliada a contagem total de leucócitos (x103/µL) e a diarreia (escores). Após a morte, o jejuno e o íleo foram recolhidos para a dosagem da mieloperoxidase (MPO), IL-1β e IL-10 (pg/mL) e análise histopatológica, ANOVA/Bonferroni ou Kruskal Wallis/Dunn foram usados como testes estatísticos. P <0,05 foi aceito. Protocolo CEPA 84̸ 2014. Animais pós-sépticos por CLP tratados com IRI apresentaram redução dos escores de diarreia e atividade da MPO no 5° e 7° dia (diarreia 5D: [0(0-0)]; 7D: [0(0-2) / MPO do jejuno e íleo, 5D: 2,96±1,01; 2,35±0,76 e 7D:0,42±0,14; 0,92±0,19, respectivamente) quando comparados com os animais SHAM tratados com IRI (diarreia 5D: 1[0-1]; 7D:[2,5(1-3)] /MPO do jejuno e íleo, 5D: 8,16±1,48; 7,96±0,96; 7D: 2,51±0,67; 2,87±0,65, respectivamente). Além disso, animais pós-sépticos tratados com IRI apresentaram redução nos danos histopatológicos no 5º e 7º dia (5D no jejuno e íleo: [1(1–3)] e [1(0-1)]; e 7D no íleo: [2(1-3)] em relação a IRI (5D no jejuno e íleo: [4(2-4)] e [4(1-4)] / 7D: íleo [4(3-4)]) e aumento dos níveis da citocina IL-10 (5D no jejuno e íleo: 55,80± 3,42; 34,45±1,87; 7D: Íleo: 133,00±20,25) em comparação com SHAM + IRI (5D no jejuno e íleo: 34,45±1,87; 6,91± 3,05; 7D no íleo: 63,67± 9,08). No entanto, animais CLP + IRI não tiveram alteração da leucopenia induzida por IRI. Animais C57BL/6 pós-sépticos apresentaram redução da lesão da mucosa intestinal e infiltração de neutrófilos na MI induzida por IRI. Tal efeito pode ser consequente, entre outros, ao aumento de IL-10.

AZEVEDO, Orleâncio Gomes Ripardo de. Mecanismo antiinflamatório do peptídeo mimético da Apolipoproteína E (COG 133) na recuperação da mucosite intestinal induzida por 5-Fluoruracil em camundongos Swiss. 2010. 107 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-05-08T12:13:08Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_ogripardo.pdf: 2802059 bytes, checksum: 7c2b46f8a53bc8712f027539cfe1b33c (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-05-08T16:53:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_ogripardo.pdf: 2802059 bytes, checksum: 7c2b46f8a53bc8712f027539cfe1b33c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-08T16:53:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_ogripardo.pdf: 2802059 bytes, checksum: 7c2b46f8a53bc8712f027539cfe1b33c (MD5) Previous issue date: 2010 / O câncer é uma doença grave que atinge milhares de pessoas no mundo, possuindo altos índices de morbidade e mortalidade. Atualmente existem diversos alvos terapêuticos no tratamento do câncer, um deles reside no fato de inibir a replicação do DNA impossibilitando a célula tumoral de se duplicar como é o caso do 5-fluoruracil (5-FU).O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito antiinflamatório do peptídeo mimético da ApoE (COG 133) em camundongos Swiss desafiados pela mucosite intestinal induzida pelo 5-FU. Utilizamos camundongos Swiss machos com peso de 30g, sendo desafiados com injeção (dose única) intraperitoneal de 5-FU (450 mg/kg).Alguns animais foram tratados com diferentes doses (0,3, 1,0 e 3,0 µM) do peptídeo mimético da apolipoproteína E (ApoE) COG133 por via intra-peritoneal, após o desafio com 5-FU. Animais tratados com PBS foram usados como controles. Os camundongos foram sacrificados com solução de deslocamento cervical 3 dias após o desafio com 5-FU.Algumas amostras de intestino foram congeladas imediatamente em nitrogênio líquido e em seguida armazenadas em freezer a -80ºC para biologia molecular. Outras amostras foram fixadas em formaldeído para processamento histológico.Monitoramos o peso corporal dos animais e fizemos leucometria a partir de coleta retrorbital de sangue para avaliação do efeito citotóxico mielosupressor do 5-FU nos grupos experimentais.Avaliamosos parâmetros morfométricos de altura de vilo e profundidade de cripta em segmentos do duodeno. Para a detecção de proteínas de interesse, utilizamos o Western blot com a utilização dos seguintes anticorpos IL-1β, TNF-α e iNOS. Para o RT-PCR, avaliamos os seguintes primers IL-1β, TNF-α e iNOS. No ensaio de citocinas por ELISA, utilizamos os seguintes anticorpos IL-1β, IL-10, TNF-α. Nas análises morfométricas de duodeno, encontramos uma grande redução na altura de vilos e profundidade de criptas nosanimais tratados com 5-FU, que foi reduzida com com a utilização do peptídeo COG133 na dose 3,0 µM (p<0,001).Nas análises histopatológicas, observamos um intensoinfiltrado inflamatório nos animais do grupo que foi injetadocomo 5-FU, que foi parcialmente revertido pela administração do peptídeo COG133.Os dados de ELISA evidenciaram um aumento da quantidade de citocinas pró-inflamatórias IL-1β (p<0,05), TNF-α (p<0,05) e uma redução da citocina antiinflamatória IL-10 (p<0,05), quando comparados ao controle salina, em duodenos de animais que foram injetados com 5-FU. A administração do peptídeo COG 133 reduziu os níveis de IL-1β de maneira estatisticamente significante (p<0,05 1μM; p<0,001 3μM), TNF-α (p<0,001 na dose de 1,0 μM); p<0,001 na dose de 3μM) e para IL-10 (p<0,001 na dose de 3μM).Dados de Western blot evidenciam que o peptídeo na dose de 3μM reduziu de maneira estatisticamente significante a expressão de citocinas como IL-1β (p<0,001), TNF-α (p<0,05) e do mediador inflamatório iNOS (p<0,05) no duodeno. Pelo protocolo de RT-PCR,encontramos uma elevação na expressão do transcrito para TNF-α e iNOS nos animais injetados com 5-FU, o que foi parcialmente diminuído pela administração do peptídeo na dose de 3μM para TNF-α (p<0,05) e iNOS (p<0,05)pelo ANOVA.A partir dos nossos achados, podemos concluir que o peptídeo mimético da ApoE (COG 133) possui uma ação anti-inflamatória, especialmente no segmento duodeno, visto que reduz a expressão de citocinas pró-inflamatórias de animais desafiados, dessa forma sugerindo sua utilização em humanos com mucosite intestinal sob quimio/radioterapia.

LIMA, Vilma de. Evidências da participação de TNF-× e COX-2 nas mucosites oral e intestinal induzidos por 5-fluorouracil e metotrexato em animais. 2004. 212 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2004. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-10-18T12:38:40Z No. of bitstreams: 1 2004_tese_vlima.pdf: 1553610 bytes, checksum: a31b2181820a5c0e44eb7c75a9bfd2e8 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2012-10-22T12:11:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2004_tese_vlima.pdf: 1553610 bytes, checksum: a31b2181820a5c0e44eb7c75a9bfd2e8 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-22T12:11:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2004_tese_vlima.pdf: 1553610 bytes, checksum: a31b2181820a5c0e44eb7c75a9bfd2e8 (MD5) Previous issue date: 2004 / A mucosite é caracterizada por úlceras e sintomas orais e intestinais causados por drogas citotóxicas, onde prostaglandinas (PG) e citocinas podem exercer efeitos pró-inflamatórios. O objetivo desse estudo foi verificar os efeitos do celecoxib (CLX) e indometacina (IND), inibidores da síntese de PG, e de pentoxifilina (PTX) e talidomida (TLD), inibidores da síntese de citocinas, em mucosites induzidas por antineoplásicos. Injetou-se 5-fluorouracil (FU 60 e 40 mg/kg-ip) em hamsters Golden machos, para a mucosite oral (MO); e metotrexato (MTX 2,5 mg/kg-sc) em ratos Wistar e em camundongos C57 machos, para a mucosite intestinal (MI). Grupos de hamsters com MO foram tratados sc com CLX (7,5, 15 ou 30 mg/kg), IND (0,25, 0,5 ou 1 mg/kg), PTX (5, 15 ou 45 mg/kg) ou TLD (10, 30 ou 90 mg/kg) diariamente durante 10 d e avaliados os seguintes parâmetros: análises macroscópica e histopatológica, atividade da mieloperoxidase (MPO), leucograma e variação de massa corpórea. O FU causou pico das ulcerações e abscessos no 10º dia (P<0,05), sendo confirmado pela análise histológica e atividade da MPO. Observou-se leucocitose, às custas de neutrófilos, e perda acentuada de massa corpórea. CLX (7,5 e 15 mg/kg), mas não IND, reduziu as úlceras e abscessos (66,6%), a leucocitose e a perda de peso. No entanto, CLX 30 mg/kg apresentou perda de eficácia antiinflamatória, causando aumento da mucosite oral. PTX (45 mg/kg) e TLD (90 mg/kg) reduziram a intensidade dos achados (66,6%), diminuindo as ulcerações e abscessos no 10º dia. Apenas PTX reduziu a leucositose induzida pela mucosite oral induzida. Na mucosite intestinal, ratos foram tratados ip com CLX (7,5, 15 ou 30 mg/kg), PTX (15, 30 ou 60 mg/kg) ou TLD (10, 30 ou 90 mg/kg) durante 5 dias, e avaliados pela análise morfométrica, permeabilidade intestinal via teste da lactulose e manitol, imunohistoquímica para detecção de TNF-α, leucograma e variações de massa corpórea, de ingestões de líquidos e alimentos dos animais. O MTX causou encurtamento dos vilos, aumento da profundidade das criptas, e perda da integridade do epitélio, com conseqüente redução da área absortiva intestinal, principalmente no duodeno, seguido pelo jejuno e em menor grau, no íleo. Observou-se leucopenia no 5º dia, além de redução de massa corpórea e das ingestões de líquidos e alimentos. CLX (30 mg/kg) preveniu a redução da área absortiva duodenal em 37%, além de diminuir a leucopenia. Não reduziu, porém, a perda de peso, nem alterou as ingestões de líquidos ou alimentos. PTX (15 mg/kg) foi capaz de inibir a redução da relação vilos/criptas em 38% no duodeno, com diminuição da solução de continuidade do epitélio, do infiltrado inflamatório e conseqüente proteção da área absortiva. Apesar de não ter prevenido a leucopenia ou as baixas ingestões de líquidos e alimentos, PTX foi capaz de reduzir a perda de massa corpórea significantemente. TLD (30 e 90 mg/kg) reduziu em 37% e 29%, respectivamente, a relação vilos/criptas duodenais induzida por MTX. TLD (90 mg/kg) causou redução significativa da marcação de TNF-α tanto ao nível de epitélio como na lâmina própria, quando comparado a mucosite não tratada. Entretanto, TLD não reduziu a leucopenia vista no 5º dia, nem preveniu a redução de massa corpórea e ingestões de líquidos ou alimentos. Camundongos C57BL/6 knockout para receptor R1 de TNF-α (TNF-R1-/-) apresentam relação vilos/criptas reduzida em relação a animais normais. Estes foram submetidos a MI por MTX e mostraram menores alterações ao nível de jejuno e íleo. Assim, os resultados demonstraram que os modelos animais de mucosites oral e intestinal reproduziram importantes aspectos dessa patologia em humanos. PTX e TLD e em menor grau, CLX, reduziram a inflamação nas mucosas induzidas por antineoplásicos, sugerindo-se que o TNF-α possa ser um mediador importante nas mucosites, enquanto que as prostaglandinas possuam uma função dependente de sua concentração.

NOBRE, L. M. S. Abatacept agrava a mucosite intestinal induzida por irinotecano em camundongos. 2017. 79 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-02-14T14:16:56Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_lmsnobre.pdf: 2030932 bytes, checksum: 823a4466841316e175f18c4c870d7644 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-02-14T14:17:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_lmsnobre.pdf: 2030932 bytes, checksum: 823a4466841316e175f18c4c870d7644 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-14T14:17:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_lmsnobre.pdf: 2030932 bytes, checksum: 823a4466841316e175f18c4c870d7644 (MD5) Previous issue date: 2017-01-31 / Intestinal mucositis (MI) is a very recurrent side effect in patients undergoing treatment with irinotecan, a drug used in first-line treatment regimens for the treatment of colorectal cancer. In the last decades many aspects related to the pathogenesis of MI have been elucidated, however, little is known about the lymphocyte cell profile and their role in its development. The objective of this work is, therefore, to investigate the role of lymphocytes in the pathogenesis of MI through immunosuppression with abatacept. Male swab mice, 20-25g, were divided into groups (n = 8) and treated for 4 days with saline (5 mL / kg, ip), irinotecan (75 or 45 mg / kg, ip), abatacept / Kg, ip 1h before irinotecan on the first day) or only abatacept (10 mg / kg, ip on the first day). The animals were evaluated daily for weight, diarrhea score and survival. Euthanasia occurred on day 5 on the first protocol and on day 7 on the second. Blood was collected for the total leukocyte count and after euthanasia, ileum samples were extracted for myeloperoxidase assay, histopathological analysis, and KC dosing in the ileum of the animals. Statistical analysis was used ANOVA / Bonferroni, Kruskal-Wallis / Dunn's or Log-rank (Mantel-Cox) tests, with p <0.05 accepted as significant. Results Abatacept reduced (p <0.05) the survival of the animals in the first protocol, making day 5 the ideal for euthanasia. Irinotecan caused significant weight loss (p <0.05) in relation to the saline group, however abatacept did not aggravate the loss. Pre-treatment with abatacept anticipated the appearance of moderate-grade diarrhea on the fourth day. Abatacept induced a reduction in villi / crypt ratio, villi height and crypt depth significantly in relation to the irinotecan alone (p <0.05) group, in addition to increasing the neutrophil infiltrate in the animals' ileum. Irinotecan increased the level of KC in the ileus of the animals in relation to the saline group, however abatacept did not significantly modify the level of this cytokine. In the second protocol, the subdose of irinotecan did not cause intense intestinal damage, but the treatment with abatacept proved its deleterious effect inducing the onset of diarrhea on the sixth day (p <0.05) in relation to the saline group, besides aggravating the Intestinal architecture. Abatacept increased neutrophil infiltration in the gut of irinotecan treated animals compared to the group injected with this drug alone (p <0.05), which was associated with elevated KC levels in the intestines of these animals. Irinotecan promoted myelotoxicity at all doses, but abatacept did not aggravate this toxicity. Abatacept alone caused no change in any of the evaluated parameters. Conclusion Abatacept aggravated intestinal mucositis induced by irinotecan in mice. / Mucosite intestinal (MI) é um efeito colateral bastante recorrente em pacientes submetidos ao tratamento com irinotecano, fármaco utilizado em esquemas terapêuticos de primeira linha no tratamento do câncer colorretal. Nas últimas décadas muitos aspectos relativos à patogênese da MI têm sido elucidados, entretanto, pouco se sabe sobre o perfil de células linfocitárias e o papel destas no seu desenvolvimento. O objetivo deste trabalho é, portanto, investigar o papel de linfócitos na patogênese da MI através da imunossupressão com abatacept. Metodologia Camundongos swiss machos, 20-25g, foram divididos em grupos (n=8) e tratados durante 4 dias com salina (5 mL/kg, i.p.), irinotecano (75 ou 45 mg/kg, i.p.), abatacept (10 mg/kg, i.p. 1h antes do irinotecano no primeiro dia) ou somente abatacept (10 mg/kg, i.p. no primeiro dia). Os animais foram avaliados diariamente quanto ao peso, escore de diarreia e sobrevida. A eutanásia ocorreu no dia 5 no primeiro protocolo e no dia 7 no segundo. Coletou-se sangue para a contagem total de leucócitos e após a eutanásia amostras de íleo foram extraídas para realização de ensaio de mieloperoxidase, análise histopatológica e dosagem de KC no íleo dos animais. Para análise estatística foram utilizados os testes ANOVA/Bonferroni, Kruskal-Wallis/Dunn’s ou Log-rank (Mantel-Cox), com p<0,05 aceito como significativo. Resultados Abatacept reduziu (p<0,05) a sobrevida dos animais no primeiro protocolo, fazendo do dia 5 o ideal para eutanásia. Irinotecano causou perda ponderal significativa (p<0,05) em relação ao grupo salina, entretanto abatacept não agravou a perda. O pré-tratamento com abatacept antecipou o aparecimento de diarreia de grau moderado para o quarto dia. Abatacept induziu redução na razão vilo/cripta, altura dos vilos e profundidade das criptas de forma significativa em relação ao grupo tratado somente com irinotecano (p<0,05), além de aumentar o infiltrado de neutrófilos no íleo dos animais. Irinotecano aumentou o nível de KC no íleo dos animais em relação ao grupo salina, entretanto abatacept não modificou o nível desta citocina de forma significativa. No segundo protocolo, a subdose de irinotecano não provocou dano intestinal intenso, porém o tratamento com abatacept comprovou seu efeito deletério induzindo o aparecimento de diarréia no sexto dia (p<0,05) em relação ao grupo salina, além de agravar o dano à arquitetura intestinal. Abatacept elevou a infiltração de neutrófilos no intestino dos animais tratados com irinotecano, em comparação ao grupo injetado apenas com esse fármaco (p<0,05), o que foi associado com os níveis elevados de KC no intestino desses animais. Irinotecano promoveu mielotoxicidade em todas as doses, porém abatacept não agravou essa toxicidade. Abatacept isoladamente não causou alteração em nenhum parâmetro avaliado. Conclusão Abatacept agravou a mucosite intestinal induzida por irinotecano em camundongos.

AQUINO, C. C. Estudo das populações de linfócitos T, NK e NKT na lâmina própria no pico da inflamação da mucosite intestinal induzida por 5-fluorouracil em camundongos C57BL6/J. 2016. 92 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-11-21T17:15:15Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_ccaquino.pdf: 1920706 bytes, checksum: 0107a62831da85415f0463aa2e27e7a3 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-11-21T17:15:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_ccaquino.pdf: 1920706 bytes, checksum: 0107a62831da85415f0463aa2e27e7a3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-21T17:15:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_ccaquino.pdf: 1920706 bytes, checksum: 0107a62831da85415f0463aa2e27e7a3 (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / Cancer is a disease that originates through genomic alterations that occur by defects in the systematic process of cell injury and repair. 5-fluorouracil (5-FU) is one of the most used anti-neoplastic drugs in the cancer treatment, exerting multiple effects on abnormal cell growth. 5-FU treatment affects rapidly proliferating tissues, causing mucositis, anorexia, nausea, vomiting and diarrhea. Natural Killer (NK) cells of the innate immunity, T cells of the acquired immunity, and Natural Killer T cells (NKT), which can play immunomodulatory activities, are present mainly in the intestinal mucosa. The aim of this study was to identify and characterize the populations of NK, T lymphocytes, and NKT cells in the lamina propria of C57BL6J mice challenged by 5-FU-induced intestinal mucositis. We have used male mice weighing 19 to 25g, challenged by intraperitoneal injection of 5FU (n=6) or saline (n=6) (150mg/kg, single dose) and euthanized after 72h. The small intestine segments were harvested for histological processing and morphometric analyses and for the myeloperoxidase activity assay. The extraction of the lamina propria lymphocytes from the overall small intestine was also conducted for flow cytometry analyses. Blood was drawn from the retroorbital plexus for leucocyte counting. Mice were weighed daily prior to 5-FU administration until the day of euthanasia. The 5-FU challenge (150 mg/kg, single dose, i.p.) led to weight loss, reduction of leucocyte counts at the time of villi and reason villus/crypt and increased crypt depth in all small intestinal segments. The flow cytometry data have shown that 5-FU-treated group had a reduction in the frequency of NK cells (CD16+) and CD3+ CD4+ cells. In the same group, an increased frequency of NKT cells (CD16+) and CD3+ CD8+ cells was found. Altogether our findings suggest that 5-FU-induced intestinal mucositis affects the frequency of different T and NK cells populations in the lamina propria. More in-depth studies are warranted to unfold the mechanisms that led to these changes, taking into account the immunoinflammatory effects of 5-FU. / O câncer é uma doença que se origina através de alterações genômicas que ocorrem por defeito no processo sistemático de lesão celular e reparo. O 5-fluorouracil (5-FU) é um dos anti-neoplásicos mais utilizados no tratamento do câncer, exercendo múltiplos efeitos sobre o crescimento celular anormal. O tratamento com 5-FU afeta principalmente tecidos de proliferação rápida, causando mucosite, anorexia, náuseas, vômitos e diarreia. As células Natural Killer (NK), da imunidade inata, as células T, da imunidade adquirida, e as células T Natural Killer (NKT), que podem desempenhar ações imunomodulatórias e estão presentes principalmente na mucosa do intestino. O objetivo deste trabalho foi identificar e caracterizar as populações de linfócitos NK, T e NKT na lâmina própria de camundongos com mucosite intestinal induzida por 5-FU. Utilizamos camundongos machos com 19 a 25g, desafiados com injeção intraperitoneal de 5-FU (n=6) ou salina (n=6) (150mg/kg, dose única), sendo eutanasiados após 72h. Segmentos do intestino delgado foram coletados para processamento histológico e análise morfométrica e para ensaio da atividade da mieloperoxidase. Foi realizada também a extração de linfócitos da lâmina própria do intestino delgado dos animais para análise por citometria de fluxo e coletado sangue do plexo retroorbital para leucometria. Os animais foram pesados diariamente, antes da administração do 5-FU até o dia da eutanásia. O desafio com o 5-FU (150 mg/kg, dose única, via i.p) levou a perda de peso nos animais, redução da contagem de leucócitos, da altura dos vilos e da razão vilo/cripta em todos os segmentos do intestino delgado e aumentou a profundidade das criptas. Os dados da citometria de fluxo evidenciaram que os animais do grupo 5-FU tiveram uma redução da frequência de células NK (CD16+) e de células CD3+CD4+. Nesse mesmo grupo houve um aumento da frequência de células NKT (CD16+) e de células CD3+CD8+. A partir dos nossos achados, concluímos que a mucosite intestinal induzida pelo 5-FU afeta a frequência das diferentes populações de células T e NK na lâmina própria. São necessários estudos mais aprofundados sobre os mecanismos que levaram a essas alterações, levando em conta os efeitos imunoinflamatórios do 5-FU.

ARAÚJO, Celina Viana De. Efeitos da alanil-glutamina na mucosite intestinal induzida pelo 5-fluorouracil em camundongos deficientes da apolipoproteína-E. 2014. 85 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-17T11:58:18Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_cvaraújo.pdf: 1984661 bytes, checksum: edb23df4351ef6d82b7fcf4b77c61ccb (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-17T11:58:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_cvaraújo.pdf: 1984661 bytes, checksum: edb23df4351ef6d82b7fcf4b77c61ccb (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-17T11:58:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_cvaraújo.pdf: 1984661 bytes, checksum: edb23df4351ef6d82b7fcf4b77c61ccb (MD5) Previous issue date: 2014 / A mucosite intestinal é uma reação inflamatória e/ou ulcerativa do revestimento gastrointestinal, podendo ocorrer pelo efeito citotóxico direto dos agentes de quimioterapia e radioterapia antineoplásicas. O 5-fluorouracil (5-FU) é um antineoplásico que está clinicamente indicado no tratamento de diversos tipos de câncer. A glutamina (Gln) é o aminoácido mais comumente encontrado no organismo, sendo benéfica na recuperação da mucosite oral e intestinal. A suplementação com derivados mais estáveis da Gln, tal como alanil-glutanina (Ala-Gln), representa um meio de fornecimento de Gln para o organismo. Um estudo recente do nosso grupo mostrou que animais deficientes da apolipoproteína E tinham agravamento da mucosite intestinal induzida pelo 5-FU. Este trabalho teve como objetivo investigar os efeitos da Ala-Gln no tratamento da mucosite intestinal induzida por 5-FU em camundongos C57BL6J APOE nocautes (ApoE-/-) e selvagens. Utilizamos camundongos com pesos entre 20-25 g, de ambos os sexos, sendo desafiados com injeção intraperitoneal de 5-FU (450 mg/kg), dose única, e controles receberam PBS. Os animais foram tratados com doses de Ala-Gln (100 mM) ou PBS por gavagem (0,5 mL) três dias antes da administração do 5-FU e durante cinco dias consecutivos, sendo sacrificados com solução de eutanásia no sexto dia. Amostras de íleo foram armazenadas em freezer (-80 ºC) para uso em protocolos de biologia molecular. Amostras também foram fixadas em formaldeído para processamento histológico. O peso corporal dos animais foi monitorado diariamente e o efeito citotóxico mielosupressor do 5-FU avaliado pela técnica de leucometria. Também foram considerados parâmetros morfométricos de altura de vilos e profundidade das criptas, índice mitótico e apoptótico, bem como os seus escores para necrose. O Western blot foi usado para a detecção da expressão de vilina e TNF-α intestinais; ELISA para o estudo de citocinas e PCR em tempo real (qPCR) para detecção e quantificação de IGF-1e Bcl-2 intestinais. Os animais selvagens e APOE nocautes, mesmo àqueles tratados com Ala-Gln, apresentaram perda de peso corporal quando desafiados com 5-FU, não havendo diferença entre os grupos. Porém, estes diferiram estatisticamente, apenas, quando comparados aos controles PBS (p<0,001). Verificamos uma leucopenia significativa nos animais selvagens e nocautes desafiados pelo 5-FU em comparação ao grupo PBS (p<0,001), não sendo este efeito revertido ou melhorado com a administração de Ala-Gln. Nas análises morfométricas do íleo, encontramos uma redução na altura de vilos (p<0,001), um aumento da profundidade das criptas (p<0,001 e p<0,01) e uma redução da razão vilo/cripta (p<0,0001) nos animais selvagens e nocautes desafiados pelo 5-FU em comparativo aos respectivos controles PBS. O tratamento com Ala-Gln melhorou a razão vilo/cripta (p<0,0001) e a profundidade das criptas (p<0,001 e p<0,0001) nos animais selvagens e nocautes em relação aos respectivos animais desafiados pelo 5-FU. A altura de vilos foi melhorada (p<0,01) apenas nos animais APOE nocautes tratados com Ala-Gln em relação aos respectivos animais desafiados pelo 5-FU. O desafio pelo 5-FU não aumentou o índice mitótico nas criptas dos animais selvagens e APOE nocautes em relação os controles PBS e os tratados com Ala-Gln. Houve um aumento de células em apoptose nos animais selvagens e nocautes desafiados pelo 5-FU e tratados com Ala-Gln (p<0,01 e p<0,05) em relação aos seus controles PBS. Houve um aumento significativo nos escores para criptas necróticas (p<0,028) em animais selvagens e APOE nocautes desafiados pelo 5-FU em relação aos respectivos controles não desafiados. Apenas os camundongos selvagens tratados com Ala-Gln tiveram uma redução significativa (p<0,04) nos seus escores em comparação com os animais não tratados injetados com 5-FU. Não houve diferença estatística nos níveis da citocina IL-1β detectadas por ELISA no íleo nos animais selvagens desafiados pelo 5-FU comparados aos controles PBS e Ala-Gln. Contudo, houve um aumento significativo nos níveis dessa citocina nos animais APOE nocautes desafiados pelo 5-FU e tratados com Ala-Gln. Não houve diferença na expressão de vilina e TNF-α no íleo nos grupos estudados. Transcritos de RNAm de IGF-1 e Bcl-2 no íleo foram encontrados diminuídos nos animais APOE nocautes em comparação aos animais selvagens. Nossos resultados sugerem que a deficiência de APOE tem um papel fundamental durante a mucosite intestinal induzida pelo 5-FU seguido pelo tratamento com Al.

MONTEIRO, Manuel Carlos Serra Azul. Restabelecimento da barreira morfo-funcional intestinal através da suplementação com glutamina, alanil-glutamina e peptídeos em camundongos com mucosite intestinal induzida por 5-fluorouracil. 2006. 107 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2006. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-05-02T12:28:02Z No. of bitstreams: 1 2006_dis_mcsamonteiro.pdf: 793260 bytes, checksum: 2619610844f0c15dda2d19b1dd0f747c (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-05-03T15:56:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_dis_mcsamonteiro.pdf: 793260 bytes, checksum: 2619610844f0c15dda2d19b1dd0f747c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-03T15:56:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_dis_mcsamonteiro.pdf: 793260 bytes, checksum: 2619610844f0c15dda2d19b1dd0f747c (MD5) Previous issue date: 2006 / Pathological disturbances and antineoplasic drugs like 5-Fluorouracyl (5-FU) cause consequences of diarrheal diseases. Intestinal barrier must be preserved to absortive functions. Antiproliferative action of 5-FU results of apoptosis upon DNA lesion. In order to investigate the intestinal mucositis 5-FU-induced and the efficacy of glutamine (Gln), alanyl-glutamine (Ala-Gln), hyprol 4107 (HYP), hyfoama 77 (HYFO) supplementation, on this clinical condition, we used intestinal perfusion approach in mice (n=344) and rabbits (n=72). To evaluate Gln, Ala-Gln, Hyprol 4107 and Hyfoama 77, we used morphometric, metabolic techniques and intestinal permeability test (lactulose/mannitol, L/M). Intestinal mucositis induced by 5-FU in mice was validate by diarrhea occurence and impaired nutritional status (-1,88 ± 0,537 g) establishments, after 3 thd day of 5-FU treatment. Morphometric analysis of duodenum and jejunum, demonstrated a flattening villous (251±6,07 µm) and hyperplasic crypts (128,3±4,98 µm), as well as a increase in apoptosis (13,5±1,89/crypt). L/M rate was greater in 5-FU group than control group (0,27±0,05). Gln, Ala-Gln and peptides improved weight gain and a food intake in mucositis model. Nutrients supplementation reduces morphologic alteration and the increased apoptosis (0,25±0.05). No changes were observed at intestinal mitosis profile, upon 3 thd day of 5-FU treatment. This supplementation improved transcellular and paracellular routs by establishment of intestinal permeability (0.35 to 0.73) in mucositis. Our results suggest that the improvement of intestinal barrier function was induced by an increase energy substrate to enterocyte, inhibition of apoptosis in crypts. So we suggest that gln and peptides supplementation could prevent the malnutrition, reduce diarrheal diseases and ameliorate intestinal barrier function. / Alterações patológicas nos teciduais podem ser ocasionadas por doenças e antimetabólitos como o 5-Fluorouracil (5-FU), acometendo o sistema digestório. Para que o processo absortivo ocorra normalmente, a barreira epitelial do intestino deve estar íntegra e com taxa de renovação celular adequada. A ação antiproliferativa do 5-FU resulta, principalmente, de apoptose, consequente à lesão do DNA. Propomos neste estudo que glutamina (Gln), alanil-glutamina (Ala-Gln), Hyprol 4107 e Hyfoama 77 possam agir como fatores tróficos para o epitélio intestinal. A depleção do pool de Gln conduz à atrofia de vilos no intestino delgado, a qual parece estar associada a uma interrupção na barreira intestinal. Objetivamos investigar a mucosite intestinal induzida por 5-FU, e a eficácia da suplementação com glutamina (Gln), alanil-glutamina (Ala-Gln), Hyprol 4107 (HYP) e hyfoama (HYFO) nesta condição clínica. Foram utilizadas as avaliações morfométricas, metabólicas e a de permeabilidade intestinal [(teste lactulose/manitol (L/M)] em camundongos (n=180)). A mucosite intestinal foi induzida por 5-FU (100 mg/kg/24h s.c., durante 3 dias) validada em camundongos, observando-se diarréia e prejuízo no estado nutricional (-1,88± ±0,537 g) estabelecido após o 3o dia de tratamento. A análise morfométrica demonstrou achatamento de vilos (251±6,07 µm) e hiperplasia de criptas (128,3±4,98 µm) intestinais com aumento do número de apoptoses (13,5±1,89/cripta), no duodeno e no jejuno. A taxa L/M no grupo 5-FU foi maior que no controle (0,27±0,05). A suplementação de Gln, Ala-Gln e peptídeos melhoraram o ganho ponderal e a ingestão de ração, as alterações morfológicas e a apoptose (2,25±0,63), no modelo de mucosite intestinal. Nenhuma alteração foi observada no padrão de mitoses nas criptas intestinais. A suplementação nutricional reduziu na mucosite, a elevação das taxas de L/M [de 0,86 para 0,45 (Gln)] nas vias paracelular e transcelular. Nossos resultados sugerem que, o restabelecimento da barreira morfofuncional, induzido pela suplementação, foi obtido através do fornecimento de substrato energético para o enterócito, inibição de apoptose. Então sugerimos que o uso de suplementos ricos em Gln e peptídeos pode prevenir a desnutrição e reduzir as doenças diarréicas melhorando a morfo fisiologia da barreira intestinal.

SOARES, Pedro Marcos Gomes. Mucosite intestinal experimental induzida por 5-fluorouracil : papel de IL-1ß, IL-4 e PAF e avaliação das alterações da motilidade digestiva. 2008. 142 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-09-06T12:15:24Z No. of bitstreams: 1 2008_tese_pmgsoares.pdf: 14518787 bytes, checksum: 6a4dbe6ae7c642ebca0081619b1b39a2 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-09-06T12:25:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_tese_pmgsoares.pdf: 14518787 bytes, checksum: 6a4dbe6ae7c642ebca0081619b1b39a2 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-06T12:25:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_tese_pmgsoares.pdf: 14518787 bytes, checksum: 6a4dbe6ae7c642ebca0081619b1b39a2 (MD5) Previous issue date: 2008 / Avaliar os mediadores inflamatórios e as alterações motoras gastrintestinais no curso da mucosite intestinal experimental induzida por 5-FU. Métodos: Para avaliar as citocinas utilizamos camundongos balb-c ou c57/black (25-30g), tratados com IL-1Ra (100mg/Kg, i.p., diariamente) ou deficientes para IL-4 (IL-4 -/-) ou para IL-18 (IL-18 -/-). A fim de estudar a participação de PAF e 5-LO, utilizamos o BN52021 (20mg/Kg, s.c., diariamente) ou camundongos deficientes para o receptor de PAF (PAF -/-) ou para 5-LO (5-LO -/-). Para avaliar a participação de NO, animais receberam aminoguanidina (50mg/Kg, i.p., diariamente), a fim de estudar o papel da morte celular: utilizaram-se animais deficientes para FAS (FAS -/-). Todos os camundongos receberam 5-FU (450mg/Kg, i.p., dose única) ou salina. Após 3 dias, os animais foram sacrificados e amostras do duodeno, do jejuno e do íleo foram obtidas para avaliação morfométrica, da atividade de MPO e para dosagem de citocinas. Para estudar as alterações motoras gastrintestinais, ratos Wistar (250-350g) receberam 5-FU (150mg/Kg, i.p., dose única). Após 1, 3, 5, 15 ou 30 dias, foram sacrificados e o duodeno, o jejuno e o íleo foram obtidos para avaliação morfométrica, para medida da atividade de MPO e para dosagem de GSH. Outro grupo de ratos recebeu salina glicosada + tecnécio (v.o). Após 3 ou 15 dias, o estômago e segmentos do intestino (P1-P5) foram obtidos para avaliar esvaziamento gástrico (cintilografia). A resposta mecânica foi obtida utilizando-se um transdutor de força isométrico acoplado a um sistema de aquisição de dados. Carbacol (10-10-10-4M) foi aplicado sobre músculo liso do estômago ou do duodeno de ratos tratados ou não com 5-FU. Resultados: Em Camundongos balb-c e c57/black, 5-FU induziu diminuição na razão vilo/cripta no duodeno, jejuno e íleo, importante infiltrado neutrofílico e um aumento nas concentrações de TNF- α , IL-1 β , IL-6, KC. O tratamento com IL-1Ra (100mg/kg) reverteu à diminuição da razão vilo/cripta no duodeno, jejuno e íleo, à infiltração de neutrófilos e o aumento de TNF-α IL-1β, KC induzida por 5-FU. IL-4 -/- tiveram uma menor redução da razão vilo/cripta no duodeno, jejuno e íleo em comparação aos animais selvagens tratados com 5-FU, bem como apresentaram menor infiltrado neutrofílico e diminuição de TNF-α, IL-1β, IL-6 e KC no duodeno. PAF -/- não tiveram alterações da razão vilo/cripta no duodeno, aumento na concentração de IL-1β e KC com o tratamento com 5-FU. O tratamento com BN 52021 (20mg/kg) reverteu à diminuição da razão vilo/cripta no duodeno de animais c57/black tratados. O tratamento com aminoguanidina (50mg/kg), bem como IL-18 -/-, 5-LO -/- e FAS -/- não apresentaram diferenças significativas quando comparados com os camundongos selvagens em relação a mucosite por 5-FU. Em relação aos ratos, 5-FU (150mg/kg) induziu importante perda de peso, diminuição da razão vilo/cripta, infiltrado neutrofílico e redução dos níveis de GSH no duodeno, jejuno e íleo no 3° dia. No 15° dia após o tratamento com 5-FU as alterações encontradas foram restabelecidas. Encontrou-se significativo retarde no esvaziamento gástrico e no trânsito gastrintestinal em ratos tratados com 5-FU no 3° e 15° dias. Por fim, houve uma hipercontratilidade no músculo liso do fundo gástrico e duodenal de ratos no 3° e 15° dia pós tratamento com 5-FU. Conclusão: 5-Fluorouracil induz mucosite intestinal em camundongos com a participação de IL-1β, IL-4, PAF, também, induz mucosite intestinal em ratos associada a dismotilidade gastrintestinal que persiste com a resolução da inflamação.

TEIXEIRA, Maraiza Alves. Papel de receptores CXCR2 na mucusite intestinal induzida por irinotecano. 2015. 94 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-22T13:35:18Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_mateixeira.pdf: 2275440 bytes, checksum: 14899bf8302a4a676758288d6cf00415 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-22T14:24:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_mateixeira.pdf: 2275440 bytes, checksum: 14899bf8302a4a676758288d6cf00415 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T14:24:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_mateixeira.pdf: 2275440 bytes, checksum: 14899bf8302a4a676758288d6cf00415 (MD5) Previous issue date: 2015 / Introduction: Irinotecan is an anticancer agent used in first and second line treatment protocols for colorectal cancer. However, a major side effect associated with irinotecan, intestinal mucositis, has negatively impacted on patient’s quality of life and limiting the therapeutic outcome. The literature reports the involvement of several inflammatory mediators in the pathogenesis of intestinal mucositis, including IL-1, IL-18, IL-33, nitric oxide and several others, whose pharmacological inhibition prevents neutrophil infiltration and leads to mucositis improvement. However, the role of chemokine receptors that are important to neutrophil recruitment, such as CXCR2, in intestinal mucositis is unknown. Aims: To study the role of CXCR2 receptors in the pathogenesis of irinotecan-induced intestinal mucositis. Methods: Male C57BL/6 mice (n = 6) were divided into groups and injected with either saline (5ml / kg, ip) or irinotecan (75, 90, 105 or 120 mg/kg ip) for 4 days. The dose of 120 mg/kg reproduced the inflammatory condition of mucositis, so it was used in association with SB225002, a CXCR2 antagonist. Body mass variation, diarrhea scores and leukocyte count were recorded. Following euthanasia, intestinal samples were collected for histopathological analysis, mieloperoxidase activity (MPO), IL-1β, KC and IFN-γ levels. In addition, the length of the small intestine was measured so was the weight of its solid contents. Bacteremia was further carried out. Additionally, we measured the expression of CXCR2 and CCR2 receptors on neutrophils surface. We also performed the in vitro chemotaxis assay, using neutrophils isolated from bone marrow of mice treated with IRI or IRI + SB225002 (Study approval number: 58/14). Results: IRI produced a significant (P <0.05) weight loss and leukopenia in all doses tested. However, only the doses of 105 and 120 mg/kg reduced (P<0.05) the villus/crypt ratio and increased (P<0.05) neutrophil infiltration (MPO assay). None of the doses promoted diarrhea. The dose of 120 mg/kg was the best in reproducing the typical histopathological damage seen during intestinal mucositis, thus this dose was chosen for further analysis. The treatment with SB225002 did not protect the animals from the weight loss, leukopenia, histopathological damage (measured by the villus/crypt ratio), reduction of the small intestine length or weight reduction of the small intestine content induced by IRI. There was no difference between IRI or IRI + SB225002 groups in regard to these parameters. In regard to neutrophil infiltration, SB225002 prevented the increase in MPO activity as early as 24 hours post 1st dose of IRI (P<0.05) vs IRI group, but failed to do so in late mucositis. In addition, IRI led to CXCR2 internalization followed by an increased expression of CCR2 receptor on neutrophils harvested from IRI-treated mice. Accordingly, in vitro neutrophil migration towards MIP-2, a CXCR2 ligand, was reduced. We also observed that mice injected with IRI or SB225002+IRI showed bacteremia when compared to the saline group. Conclusion: CXCR2 receptors only participate in the early phases of intestinal mucositis, likely due to the downregulation of these receptors, which are replaced by CCR2 on the surface of neutrophils. / Introdução: O irinotecano é um antineoplásico usado no tratamento de primeira e segunda linha do câncer colorretal. No entanto, um importante efeito colateral associado ao irinotecano, a mucosite intestinal, tem impactado negativamente na qualidade de vida dos pacientes e no sucesso terapêutico. Trabalhos anteriores demonstraram que na patogênese da mucosite intestinal há a participação de mediadores pró-inflamatórios, como IL-1, IL-18, IL-33, óxido nítrico dentre outros, cuja modulação leva à redução do infiltrado neutrofílico no intestino e melhora do dano tecidual. Entretanto, o papel de receptores de quimiocinas, como o CXCR2, importantes no recrutamento de neutrófilos, ainda não foram investigados no contexto da mucosite. Objetivos: Avaliar o papel de receptores CXCR2 na mucosite intestinal induzida pelo Irinotecano. Métodos: Camundongos C57BL/6 machos, 18-25g, foram divididos em grupos (n=6), administrados por 4 dias com salina (5mL/kg, i.p) ou com irinotecano (75, 90, 105 ou 120 mg/kg, i.p). A dose de 120 mg/kg foi a que melhor reproduziu o quadro inflamatório característico da mucosite, sendo então utilizada nos ensaios posteriores em associação ao SB225002, um antagonista de receptores CXCR2. Os animais foram analisados quanto ao peso corpóreo, escores de diarreia, contagem de leucócitos. Após a eutanásia, uma amostra de intestino foi coletada para análise histopatológica e morfométrica, dosagem de mieloperoxidase e níveis de IL-1β, IFN-γ e KC. Além disso, o comprimento do intestino delgado foi mensurado, bem como o peso do conteúdo sólido. Avaliou-se também a bacteremia. Adicionalmente, realizou-se a quantificação dos receptores CXCR2 e CCR2, além do ensaio de quimiotaxia in vitro de neutrófilos isolados de camundongos tratados com IRI ou com IRI+SB225002. (Protocolo CEPA 58/14). Resultados: O IRI em todas as doses avaliadas promoveu uma significativa (P<0,05) perda ponderal e leucopenia. Sendo que, apenas as doses de 105 e 120 mg/kg foram capazes de reduzir de forma significativa (P<0,05) a razão vilo/cripta e de aumentar (P<0,05) o infiltrado neutrofílico (ensaio de MPO). Nenhuma das doses avaliadas promoveu diarreia nos camundongos desse experimento. A dose de 120 mg/kg foi que a melhor reproduziu o dano histopatológico típico da mucosite intestinal, sendo a dose escolhida para as demais análises. O uso do antagonista dos receptores CXCR2, o SB225002, associado ao IRI não protegeu os animais da perda de peso, da leucopenia, do dano histopatológico (mensurado pela razão vilo/cripta), da redução do comprimento do intestino delgado nem da redução do peso do conteúdo do delgado. Todos esses parâmetros apresentaram-se de forma semelhante nos animais tratados apenas com IRI ou em associação IRI+SB225002. Quanto ao infiltrado neutrofílico, observamos que o uso do SB225002 no D2, 24h após a 1ª administração do IRI, foi capaz de reduzir a atividade da MPO (P<0,05). Tal redução não foi observada nos tempos subsequentes. Observou-se que o tratamento com irinotecano levou à internalização de CXCR2 e aumento da expressão do CCR2 nos neutrófilos de animais tratados com o antineoplásico. Houve, ainda, uma redução da migração de neutrófilos do quinto para o sétimo dia após a injeção do IRI. Corroborando com esse dado, houve redução da migração dos neutrófilos (isolados da medula óssea de camundongos tratados com irinotecano) ao MIP-2, um ligante de CXCR2. Observamos, ainda, que os camundongos injetados com IRI apresentaram bacteremia, quando comparados ao grupo salina. Conclusão: O receptor CXCR2 participa somente da fase precoce da mucosite intestinal, provavelmente devido a uma internalização deste receptor, o qual é substituído pelo CCR2 na superfície dos neutrófilos.