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Caracterização de uma fosforribohidrolase do tipo lonely guy de Azospirillum brasilense, com uma possível ação na biossíntese de citocininas

Rodrigues, Isabela Cavalcante January 2017 (has links)
Orientador : Prof. Dr. Marcelo Müller dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 28/09/2017 / Inclui referências : f. 67-73 / Resumo: O gene "LONELY GUY" (LOG) de Arabidopsis thaliana codifica uma das enzimas associadas à biossíntese de citocininas. As citocininas são fito-hormônios reguladores do crescimento e desenvolvimentos de plantas. Por meio de ferramentas de bioinformática foram encontrados dois genes homólogos a LOG de Arabidopsis thaliana no genoma de Azospirillum brasilense FP2. A. brasilense é uma bactéria associativa de plantas, fixadora de nitrogênio e promotora de crescimento vegetal. A produção de fito-hormônios, entre eles as citocininas, está ligada a capacidade de promover o crescimento vegetal através da inoculação com bactérias. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi caracterizar as proteínas Log1 e Log2 de A. brasilense. Os genes log1 e log2 foram amplificados através de reação em cadeia da polimerase (PCR). Os produtos de PCR foram clonados no plasmídeo pBlueScript II KS, sequenciados para confirmar a integridade da sequência de bases e subclonados nos plasmídeos pET28a e pET29a para expressão em E. coli BL21(DE3). As enzimas superexpressas com cauda de histidinas N-terminal ou C-terminal foram purificadas por cromatografia de afinidade a Ni2+. Os ensaios de atividade enzimática revelaram que ambas as enzimas possuem atividade fosforribohidrolase, ou seja, clivam a ligação N-glicosídica entre a adenina e a fosforribose quando o AMP foi utilizado como substrato. Outros ensaios revelaram que a presença de fosfato ligado a posição 5' da ribose foi importante para a atividade das enzimas Log1 e Log2, já que não foi detectada atividade contra adenosina. A descoberta de enzimas homólogas as LOGs anteriormente descritas em plantas, tais como A. thaliana, contribuirá para o desenvolvimento de linhagens de bactérias que produzam quantidades elevadas de citocininas. Especificamente no caso de A. brasilense tal característica poderia ser utilizada para gerar estirpes mais eficientes no processo de promoção do crescimento vegetal. Palavra-chave: Citocininas, Azospirillum brasilense, fosforribohidrolases. / Abstract: The LONELY GUY gene (LOG) of Arabidopsis thaliana codes one of the enzymes associated with cytokinin biosynthesis. Cytokinins are phytohormones that regulate growth and development of plants. Azospirillum brasilense FP2 has two genes homologous to LOG of A. thaliana as revealed by genome searching through computational analysis with amino acid sequences of LOGs previously described. A. brasilense is a plant associate bacterium, nitrogen-fixing and plant growth promoter. The production of phytohormones, among them cytokinins, is linked to the ability to promote plant growth through inoculation with bacteria. Thus, the objective of this work was to characterise the A. brasilense Log1 and Log2 enzymes. The log1 and log2 genes were amplified by polymerase chain reaction (PCR). The PCR products were cloned into the plasmid pBlueScript II KS, sequenced to confirm their integrities and subcloned into plasmids pET28a and pET29a for expression in E. coli BL21 (DE3). The enzymes were over-expressed with an N-terminal or C-terminal six histidines-tag and were purified by Ni2+ affinity chromatography. Enzyme activity assays revealed that both enzymes have phosphoribohydrolase activity since they cleave the N-glycosidic bond between adenine and phosphoribose when AMP was used as the substrate. Other assays showed that the presence of a phosphate group bound to the 5'-carbon of ribose was essential for the activity of Log1 and Log2 enzymes since they did not cleave adenosine. The discovery of homologous enzymes to the LOGs previously described in plants, such as A. thaliana, will contribute to the development of lineages of bacteria that produce high amounts of cytokinins. Specifically, in the case of A. brasilense, this characteristic could be used to generate more efficient strains in the process of promoting plant growth. Keywords: Cytokinin, Azospirillum brasilense, phytohormones
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Identificação e clonagem de genes de celulases e hemicelulases de Azospirillum brasiliense

Scarduelli, Marcelo January 2014 (has links)
Orientadora : Profª Drª Emanuel Maltempi de Souza, Prof. Dr. Luciano Fernandes Huergo / Co-orientadores : Dr.Helisson Faoro / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 2014 / Inclui referências / Resumo: Celulases apresentam diversas utilidades industriais, desde uso em etapas de polimento de tecidos até produção de biocombustíveis, especialmente de bioetanol de 2ª geração. Na busca por novas celulases, a prospecção em bactérias colonizadoras de plantas pode levar a identificação de enzimas particulares. Este trabalho teve como objetivo identificar, expressar e caracterizar genes de possíveis celulases e hemicelulases presentes no genoma de Azospirillum brasilense, uma bactéria colonizadora de rizosfera de gramíneas. Genes codificando glicosil-hidrolases foram identificados por comparação de sequências. Os genes identificados foram posteriormente clonados e expressos em E. coli. Dos 10 genes codificando prováveis glicosil hidrolases, 4 foram clonados em vetor de expressão. Dois dos plasmídeos obtidos, contendo genes de uma celulase e uma hemicelulase, permitiram superexpressar as proteínas recombinantes em E.coli que foram purificadas com sucesso. Porém, as 4 enzimas não demonstraram atividade de degradação celulolítica ou hemicelulolítica. Com a finalidade de se identificar se realmente há enzimas com atividade de degradação de celulose ou xilana em A. brasilense, a bactéria foi cultivada em meios específicos contendo apenas celulose ou xilana como fonte de carbono. Evidência de crescimento foi observada apenas na presença de xilana, o que leva a crer que há maquinaria ativa capaz de degradar este polímero em A. brasilense estirpe FP2. Palavras-chave: celulases, xilanases, Azospirillum brasilense. / Abstract: Cellulases have many industrials uses, from polishing fabrics to biofuel production, especially second generation bioethanol. Searching for new cellulases, bioprospection in plant-root-colonizing bacteria could lead to discover novel enzymes. This study aimed to identify and characterize possible cellulolytic and hemicellulolytic enzymes in genome of Azospirillum brasilense. Sequence comparison was used for identification of glycosyl hydrolases (cellulases and xylanases) in the A. brasilense draft genome. Four out of 10 selected genes were cloned and overexpressed in E. coli. Of these four, a probable cellulase and a hemicellulase were purified successfully. However, the four enzymes had no degradation activity. In order to determine if A. brasilense is capable of degrading cellulose or xylan, the bacterium was grown in media containing either cellulose or xylan as sole carbon source. Only xylan sustained A. brasilense growth, suggesting the presence of active machinery capable for degrading this polymer in A. brasilense strain FP2. Key-words: cellulases, xylanases, Azospirillum brasilense.
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Regulação pós-traducional da nitrogenase por anaerobiose em Azospirillum brasilense

Rios, Nadhine de Assis January 2017 (has links)
Orientadora : Profª Drª Emanuel M. de Souza / Coorientador : Prof. Dr. Vivian Rotuno Moure / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 25/05/2017 / Inclui referências : f. 86-97 / Resumo: A fixação biológica de nitrogênio é catalisada pelo complexo enzimático nitrogenase. Este complexo contém duas metaloproteínas: as proteínas Fe e MoFe. Em Azospirillum brasilense, objeto deste estudo, a regulação pós-traducional envolve a modificação covalente de uma das subunidades da proteína Fe por ADP-ribosilação. Esta ADPribosilação inativa reversivelmente a proteína Fe e é catalisada pela dinitrogenase redutase ADP-ribosiltransferase (DraT) em resposta ao aumento de íons amônio ou depleção da energia celular. O grupo ADP-ribosil é removido pela dinitrogenase redutase glicohidrolase (DraG), promovendo reativação da proteína Fe e consequentemente, da nitrogenase. Em resposta ao aumento de íons amônio, as proteínas PII, assim como a proteína de membrana AmtB, estão envolvidas no sistema de regulação atuando principalmente por interação direta com proteínas alvo. No caso de A. brasilense, as proteínas PII são denominadas de GlnB e GlnZ e interagem com DraT e DraG, respectivamente, regulando suas atividades. Porém o mecanismo pelo qual estas enzimas são reguladas pelos níveis energéticos celulares não é totalmente conhecido. O objetivo deste trabalho foi contribuir para elucidação do mecanismo da regulação póstraducional da nitrogenase em condições de anaerobiose. Vários aspectos da regulação do metabolismo energético nesta bactéria foram estudados. Para avaliar o envolvimento de AmtB e GlnZ de A. brasilense na regulação da nitrogenase, foi realizado um ensaio de desligamento / religamento da nitrogenase por anaerobiose em mutantes nos respectivos genes. Os resultados mostraram que as proteínas GlnZ e AmtB não participam diretamente da regulação por ADP-ribosilação da nitrogenase. Análises de LC-MS dos níveis de ATP e ADP indicaram redução substancial quando a cultura foi exposta à anaerobiose. Além disso, a adição do desacoplador CCCP, que diminui o ATP intracelular, causou desligamento e ADP-ribosilação da nitrogenase. Portanto, razão ATP/ADP pode estar relacionada ao mecanismo de regulação da atividade da nitrogenase nessas condições. Análise das frações celulares mostrou que, diferentemente da regulação por íons amônio, as proteínas PII não vão para a membrana durante a ADP-ribosilação da nitrogenase. O mesmo ocorre com DraG que permanece no citoplasma. Os resultados sugerem a existência de diferentes vias para o controle da atividade da nitrogenase, que depende do estímulo ao qual as células são submetidas. Palavras-chave: Azospirillum brasilense, regulação pós-traducional, ADP-ribosilação da proteína Fe, sistema DraT/DraG, anaerobiose. / Abstract: The biological nitrogen fixation is catalyzed by a nitrogenase enzymatic complex. This complex contains two metalloproteins: the Fe and MoFe proteins and undergoes to post-translational modification. In Azospirillum brasilense, object of this study, this posttranslational regulation involves the covalent modification in one of the subunits of Fe protein by ADP-ribosylation. This ADP-ribosylation reversibly inactivates the Fe protein and is catalyzed by dinitrogenase reductase ADP-ribosyltransferase (DraT) in response to an increase of ammonium concentration or decrease of cellular energy. The ADP-ribosyl group is removed by dinitrogenase reductase glycohydrolase (DraG), promoting Fe protein and, consequently, nitrogenase re-activation. In response to increased ammonium ions, the PII proteins, as well as the NH3 - channel AmtB, are involved in the regulatory system acting primarily by direct interaction with the target proteins. In A. brasilense, the PII proteins are denominated GlnB and GlnZ and interact with DraT and DraG, respectively, regulating DraT and DraG activities. However, the mechanism by which these enzymes are regulated by cellular energy levels is not fully known. The goal of this study was to contribute to the elucidation of the mechanism of post-translational nitrogenase regulation under anaerobic conditions. Several aspects of energy metabolism regulation in this bacterium were studied. To evaluate the involvement of A. brasilense AmtB and GlnZ in the regulation system, switch-off / on assays of nitrogenase by anaerobiosis were performed. The results confirmed that GlnZ and AmtB proteins do not directly participate in ADP- ribosylation of nitrogenase. LC-MS analysis of ATP and ADP levels showed a marked reduction when the culture was exposed to anaerobic conditions. Furthermore, addition of CCCP, which decreases intracellular ATP, caused switch-off and ADP-ribosylation of nitrogenase. Therefore, the ATP / ADP ratio, lead nitrogenase switch-off. Analysis of the cellular fractions, showed that, unlike the regulation by ammonium ions, the PII proteins did not migrate to the membrane during nitrogenase switch-off, and DraG also remained in the cytoplasm. The results suggest distinct pathway for the control of nitrogenase activity depending on which stimulus the cells are submitted to. Key words: Azospirillum brasilense, post-translational regulation, ADP-ribosylation, DraT / DraG system, anaerobiosis.
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Análise da interação de Azospirillum brasilense FP2 com raízes de milho (Zea mays) por qPCR, microscopia eletrônica e proteômica

Faleiro, Alexandro Cézar January 2014 (has links)
Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T18:10:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 326781.pdf: 1818742 bytes, checksum: c9fcf683a62e94042b732ee609e236e5 (MD5) Previous issue date: 2014 / As rizobactérias promotoras de crescimento vegetal (RPCV) são um grupo de micro-organismos benéficos às plantas devido à sua capacidade de estimular o crescimento vegetal através de vários processos. Uma das mais importantes e estudadas RPCV é a Azospirillum brasilense, uma diazotrófica associada com importantes culturas tais como milho e trigo, a qual possui ampla distribuição geográfica e tem sido usada como organismo modelo para investigar a promoção do crescimento vegetal associativo. Vários mecanismos estão envolvidos na promoção do crescimento vegetal por A. brasilense, entre eles: capacidade de fixação biológica de nitrogênio e à produção de fitormônios, os quais levam à formação de raízes laterais e, consequentemente, à melhor adsorção de água e minerais e, à maior tolerância a estresses, promovendo efeitos positivos sobre os mecanismos de defesa. Neste trabalho foram avaliados parâmetros de crescimento de duas variedades de milho Dekalb 240 (DKB240) e Pioneer 30F53 (P30F53), crescimento bacteriano nas raízes e perfil de proteínas em uma variedade (P30F53) quando as plântulas foram crescidas in vitro. Realizou-se a detecção e quantificação por PCR em tempo real de A. brasilense em plântulas de duas variedades de milho. Os iniciadores foram desenhados e sua especificidade foi verificada usando DNA de 12 diferentes espécies de bactérias. Os resultados dos experimentos de qPCR apresentaram valores dentro da variação aceitável para qPCR, eficiência média de 95% e coeficiente de correlação de 0,98, indicando que o gene nifA é adequado para a análise quantitativa do genoma alvo bacteriano. O número de cópias de DNA bacteriano por grama de massa fresca de raiz aumentou de 3,3 x 106 (1 DAI) para 5,3 x 109 (10 DAI) quando raízes inoculadas de milho da variedade DKB240 foram analisadas e, da mesma maneira, variando de 6 x 106 (1 DAI) para 6,8 x 109 (10 DAI) na variedade P30F53 quando cultivadas in vitro. Os iniciadores desenvolvidos visando nifA serão úteis para monitorar Azospirillum brasilense FP2 em culturas no sistema solo-planta. Comparando-se plântulas da variedade P30F53, controle e inoculadas com A. brasilense FP2, foram encontradas diferenças significativas 7 dias após a inoculação (DAI) em 7 dos 8 parâmetros avaliados (massa fresca e tamanho da folha, massa fresca e tamanho da raiz principal, número de raízes laterais, massa fresca e número de raízes adventícias e massa fresca total das raízes). A observação de raízes através da microscopia eletrônica de varredura (MEV) mostrou que A. brasilense FP2 se liga à superfície radicular, tanto na região do ápice quanto do terço médio, e podem ser encontradas como células simples ou agregadas. A análise do perfil de proteínas, obtido através da técnica de eletroforese bidimensional (2DE), revelou 46 spots diferencialmente acumulados em raízes de milho da variedade Pioneer 30F53 inoculadas com A. brasilense FP2. Os spots foram analisados por espectrometria de massa e três proteínas apresentaram homologia com proteínas hipotéticas de milho e arroz.<br> / Abstract : The plant growth promoting bacteria (PGPB) are a group of microbes beneficial to plants due to its ability to stimulate plant growth by various processes. One of the most important and studied PGPB Azospirillum brasilense is a diazotrophic associated with major crops such as corn and wheat, which widely spread and has been used as a model organism to investigate the associative plant growth promotion. Several mechanisms are involved in the promotion of plant growth by A. brasilense, including: the ability of biological nitrogen fixation and production of phytohormones, which leads to the formation of lateral roots and thus the better absorption of water and minerals, greater tolerance to stress, have positive effects on the mechanisms of defense. In this work, the growth parameters of two varieties of corn Dekalb 240 (DKB240) and Pioneer 30F53 (P30F53), bacterial growth in roots and protein profile in a variety (P30F53) when seedlings were grown in vitro were evaluated. We carried out the detection and quantification by real time PCR A. brasilense seedlings in the two varieties of corn. Primers were designed and their specificity was verified using DNA from 12 different bacterial species. qPCR efficiency and correlation coefficient presented values within the acceptable range for qPCR, average efficiency of 95% and a correlation coefficient of 0.98, indicating that the nifA gene is suitable for the quantitative analysis of target bacterial genome. Bacterial DNA copy number per gram of fresh root increased from 3.3 x 106 (one DAI) to 5.3 x 109 (ten DAI) when inoculated maize roots of DKB 240 variety were analyzed and, in the same way, it ranged from 6 x 106 (one DAI) to 6.8 x 109 (ten DAI) in P30F53 variety when cultured in vitro. The primers developed targeting nifA gene will be useful for monitoring Azospirillum brasilense growth in crops. Comparing control seedlings (variety Pioneer 30F53) inoculated with A. brasilense FP2, significant differences were observed 7 days after inoculation (DAI) in 7 out to 8 evaluated parameters (fresh weight and leaf size, fresh weight and size of the main root, lateral root number, fresh weight and number of adventitious roots and total fresh weight of roots). The observation of roots by scanning electron microscopy (SEM) showed that A. brasilense FP2 binds to the root surface, both in the region of the apex and the middle third, and may be found as single cells or aggregated. Analysis of the protein profile obtained using the technique of two-dimensional electrophoresis (2DE) revealed 46 proteins differentially accumulated in roots of maize (variety Pioneer 30F53) inoculated with A. brasilense FP2. The spots were analyzed by mass spectrometry and three proteins presented homology with hypothetic proteins from corn and rice.
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Capacidade combinatária de linhagens e seleção de híbridos eficiente no uso de Azospirillum brasilense e nitrogênio em milho /

Buzinaro, Rodolfo. January 2017 (has links)
Orientador: Gustavo Vitti Môro / Banca: Maria Elisa Ayres Guidetti Zagatto Paterniani / Banca: Sandra Helena Unêda Trevisoli / Banca: Ivana Marino Bárbaro Torneli / Banca: Everlon Cid Rigobelo / Resumo: O nitrogênio é um dos elementos mais exigidos pela cultura do milho, pois está diretamente ligado à capacidade de produção agrícola desta espécie. Grande parte dos solos brasileiros agricultáveis possuem deficiência de nitrogênio ou este nutriente não está disponível em quantidades suficientes para suprir a necessidade da cultura, sendo necessário realizar aplicações suplementares de nitrogênio para se alcançar elevadas produtividades. As cultivares atuais de milho são altamente dependentes de adubação nitrogenada, pois foram desenvolvidas para ambientes otimizados, não sendo adaptadas para as condições de cultivo sob baixo nitrogênio. O uso de bactérias diazotróficas, as quais possuem a capacidade de fixar nitrogênio e disponibilizá-lo para as plantas, bem como a associação das plantas com essas bactérias, pode se tornar uma alternativa sustentável e economicamente viável para a produção de milho em sistemas agrícolas sob baixa utilização de nitrogênio. Com base no exposto, os objetivos deste trabalho foram identificar e caracterizar genótipos de milho eficientes no uso do nitrogênio e Azospirillum brasilense em ambientes contrastantes quanto a disponibilidade de nitrogênio no solo e selecionar parentais superiores de milho para eficiência no uso de Azospirillum brasilense. Foram utilizados como material genético 48 genótipos de milho obtidos em esquema de dialelo parcial, utilizando-se oito linhagens parentais pertencentes ao grupo heterótico I, e seis linhagens parentais p... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The nitrogen is one of the elements most required by maize crop because it is directly related to the agricultural production capacity of this species. Most brazilian soils have nitrogen deficiency or it is not available in sufficient quantities to meet the need of the crop, and it is necessary to make supplemental nitrogen applications to reach high yields. The current maize cultivars are highly dependent on nitrogen fertilization since they were developed for optimized environments and were not adapted to the conditions under low nitrogen cultivation. The use of diazotrophic bacteria, which have the ability to fix nitrogen and make it available to plants, as well as the association of plants with these bacteria, can become an ecologically sustainable and economically viable alternative for the production of corn in agricultural systems under low or non-use of nitrogen. Thus, the objectives of this study were to identify and characterize efficient maize genotypes in the use of nitrogen and Azospirillum brasilense in contrasting environments regarding nitrogen availability in the soil and to select higher parental maize for efficiency in the use of Azospirillum brasilense. Were used as genetic material 48 diallelic genotypes were obtained in a partial diallel scheme, using eight lines belonging to the heterotic group I, and six lines belonging to the heterotic group II, all from the Department of Genetics of ESALQ / USP. The experiments were conducted in three crops in a rand... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Eficiência da azospirillum brasilense na fixação de nitrogênio em milho

Repke, Rodrigo Alberto [UNESP] 20 February 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-20Bitstream added on 2014-06-13T19:27:25Z : No. of bitstreams: 1 repke_ra_me_botfca.pdf: 372100 bytes, checksum: 4623078fb547030ef25834dc12556967 (MD5) / O milho é um dos cereais mais cultivados no mundo, porém apresenta desafios quanto ao manejo correto da adubação. Sua elevada demanda por nitrogênio tem sido a principal responsável por excessivas doses de fertilizantes nitrogenados sintéticos aplicados na cultura. Como consequência, há aumento no custo de produção da lavoura e impactos negativos ao meio ambiente. Dessa forma, é necessário estudar métodos alternativos que promovam o desenvolvimento das plantas e garantam a produtividade, buscando aliar eficiência, viabilidade econômica e segurança ambiental. Bactérias diazotróficas podem fixar nitrogênio atmosférico e produzir substâncias promotoras do crescimento, podendo reduzir a utilização de fertilizantes nitrogenados na cultura do milho. Para testar essa hipótese, este trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência agronômica na cultura do milho, do uso de bactéria diazotrófica Azospirillum brasilense, inoculada via sementes em combinação com doses de nitrogênio. A pesquisa foi composta por um ensaio conduzido no campo experimental da Fazenda Lageado em Botucatu-SP, pertencente à Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” – Faculdade de Ciências Agronômicas, em delineamento experimental de blocos ao acaso, com quatro repetições, em esquema fatorial duplo. Tendo o fator 1, dois níveis: sem e com aplicação da solução da bactéria Azospirillum brasilense nas sementes e o fator 2, seis doses totais de nitrogênio: zero, 180, 155, 130, 105 e 80 kg ha-1. Foi utilizado o híbrido de milho transgênico 2B587 Hx, ciclo precoce, porte baixo, indicado para semeadura no verão. As avaliações morfológicas da planta e da espiga foram realizadas aos 20, 40, 60, 80 e 100 dias... / Corn is a cereal grown worldwide; however it presents challenges with regards to the proper fertilizer management. Its high demand for nitrogen has been primarily responsible for excessive doses of synthetic nitrogen fertilizer applied to the crop. As a result, it can be observed an increase in cost of crop production and negative impacts to the environment. Thus, it is necessary to study alternative methods that promote the plant growth and ensure productivity, improving efficiency, economic viability and environmental safety. Diazotrophic bacteria can fix atmospheric nitrogen and produce growth promoting substances which can reduce the use of nitrogen fertilizers in the corn cultivation. To test this hypothesis, this study had the objective to evaluate the agronomic efficiency in corn, using Diazotrophic Azospirillum brasilense inoculated via seeds in combination with nitrogen levels. The research consisted in a field trial, where the experimental design was a randomized block, with four replications in a double factorial. Factor 1: with and without the application of the solution of the bacterium Azospirillum brasilense in seeds, and factor 2: six total doses of nitrogen: zero, 180, 155, 130, 105 and 80 kg ha-1. The hybrid of the transgenic corn 2B587 Hx, early maturity, small size was used, suitable for planting in the summer. The morphological evaluations of plant and cob were evaluated at 20, 40, 60, 80 and 100 days after emergence (DAE). Grain yield was measured at 115 DAE. Inoculation of corn seeds with Azospirillum had no effect on growth and productivity of corn plants. The adoption of this practice did not replace the use of nitrogen... (Complete abstract click electronic access below)
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Interação de variedades de milho sob inoculação com Azospirillum brasilense em diferentes épocas de semeadura /

Caprio, Carlos Henrique. January 2017 (has links)
Orientador: Gustavo Vitti Môro / Banca: Rinaldo Cesar de Paula / Banca: Ivana Marino Bárbaro Torneli / Resumo: O milho é o cereal mais produzido no mundo, porém demanda altas doses de fertilizantes nitrogenados, elevando os custos de produção. Como alternativa, bactérias do gênero Azospirillum associadas às raízes tem potencial de disponibilizar nitrogênio às plantas e, assim, reduzir esses custos. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito da interação de variedades de milho com a bactéria Azospirillum brasilense inoculada via pulverização sobre o solo entre os estádios fenológicos V3 e V5, em duas épocas de semeadura, para diversos caracteres agronômicos. Os experimentos foram realizados no delineamento de blocos ao acaso, com cinco repetições, utilizando 12 variedades experimentais e duas comerciais em dois experimentos distintos: 1) sem adubação nitrogenada de cobertura e com inoculação em pulverização sobre o solo com Azospirillum brasilense. 2) com adubação nitrogenada em cobertura e sem inoculação com Azospirillum brasilense. Os dados foram submetidos a análise de variância, testes de médias de Tukey e t de Student. O experimento foi conduzido na safra 2015/16 e safrinha 2016, avaliando-se os caracteres produtividade de grãos, altura de planta, altura de espiga, prolificidade, índice de conteúdo de clorofila e NDVI (Índice de Vegetação por Diferença Normalizada) em quatros estádios fenológicos. Observou-se efeito da inoculação para prolificidade, altura de planta e produtividade na safra, índice de conteúdo de clorofila, altura de planta, NDVI (4) e produtiv... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Maize crop is the most produced cereal in the world, but it demands high doses of nitrogen fertilizers, increasing the production costs. Alternatively, bacteria of the Azospirillum genus associated with the roots have the potential of making nitrogen available to the plants and, thus, reducing these costs. Then, the aim of this research was to evaluate the interaction effect of maize varieties with Azospirillum brasilense inoculated by spraying on the ground between the growth stages V3 and V5, for different agronomic characteristics, in different seasons. The experiment was carried out in a randomized complete block design with five replications, using 12 experimental and two commercial varieties in two different treatments: 1) without nitrogen fertilization in cover and under spraying inoculation on the ground with Azospirillum brasilense; 2) under nitrogen fertilization in cover and without inoculation with Azospirillum brasilense. The data have submitted to analysis of variance, Tukey averages and Student t tests. The experiment was conducted in the 2015/16 and 2016/16 seasons, evaluating grain yield, plant height, ear height, prolificacy, chlorophyll content index and NDVI (Normalized Difference Vegetation Index) in four growthstages. The inoculation was effective for prolificacy, plant height and yield in the season, chlorophyll content index, plant height, NDVI (4) and yield in the late season. The genotypes differed for all traits at season and did not differentiate for prolificacy, NDVI (1), (2) and (3) at late season. Genotype vs. inoculation interaction occurred for prolificacy and NDVI (2) at late season. The inoculation by spraying on the soil with the bacterium Azospirillum brasilense between stages V3 and V5 favors the performance of the characters, as well as grain yield in both crops. The eff... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Interação de bactérias benéficas associativas (Herbaspirillum seropedicae e Azospirillum brasilense) com diferentes espécies de gramíneas (Zea mays, Brachypodium distachyon e Setaria viridis)

Amaral, Fernanda Plucani do January 2014 (has links)
Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:58:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 326987.pdf: 2902981 bytes, checksum: 8382373a82310d299344bd119b5caaa5 (MD5) Previous issue date: 2014 / O nitrogênio é um nutriente essencial no crescimento e desenvolvimento das plantas. A habilidade da planta em suprir a necessidade de nitrogênio necessária pode vir da fixação biológica de nitrogênio (FBN), através de interações com bactérias diazotróficas associativas. Azospirillum brasilense, que coloniza a rizosfera, e Herbaspirillum seropedicae, capaz de colonizar tecidos internos, são exemplos de bactérias benéficas que se associam com raízes de gramíneas de importância agrícola e econômica. O processo de interação planta-bactéria envolve diversos processos que ainda não estão totalmente elucidados. No presente trabalho foram avaliados parâmetros de crescimento e a regulação transcricional de 10 genes em plântulas de milho (Zea mays) inoculadas com H. seropedicae SmR1 1, 4, 7 e 10 dias após inoculação (DAI). Foi observado um aumento no número de raízes laterais das plantas com 7 e 10 DAI. Aumento significativo, foi observado na quantificação de transcritos dos genes Zmko1 e ZmrbohC em raízes das plantas inoculadas com H.seropedicae aos 4 DAI. Deste modo concluímos que Herbaspirillum seropedicae SmR1 presente nas raízes de milho pode alterar a expressão do gene Zmko1 que esta envolvido na biossíntese de giberelina bem como do gene ZmrbohC envolvido na resposta de burst oxidativo, no inicio da interação. Brachypodium distachyon tem sido proposto como sistema modelo de plantas C3, pois possui atributos atrativos como, por exemplo, baixa estatura, curto ciclo de vida e genoma sequenciado. A fim de selecionar um sistema modelo de gramíneas para estudos de interação planta-bactéria, foi realizada uma seleção utilizando 23 acessos de Brachypodium distachyon inoculados com Azospirillum brasilense e Herbaspirillum seropedicae crescidos em condições de baixo nitrogênio e/ou sem nitrogênio. Nos parâmetros de crescimento, 4 genótipos do tratamento sem nitrogênio e 3 genótipos tratados com baixo nitrogênio, responderam a pelo menos um dos parâmetros de crescimento avaliados em B. distachyon, A colonização externa e dos tecidos internos das raízes das plantas, foi visualizada utilizando cepas de bactérias marcadas. Deste modo pode-se concluir que as respostas aos parâmetros de crescimento em plantas de B. distachyon em associação com estas bactérias, são altamente variáveis quanto ao genótipo, no entanto B. distachyon é fortemente colonizada por A. brasilense e H. seropedicae. Investigamos as respostas fisiológicas e metabólicas relacionadas ao processo de interação planta-bactéria, além de medir o nitrogênio fixado e assimilado em plantas de S. viridis linhagem A10.1 crescidas sob baixo nitrogênio e comparadas a plantas com alta disponibilidade de nitrogênio. Utilizando radioisótopos de vida curta, num primeiro momento 11CO2, foi analisada a fixação, distribuição e alocação de CO2 em plantas inoculadas com A. brasilense e H. seropedicae crescidas com baixa disponibilidade de nitrogênio, bem como o perfil de açúcares e aminoácidos. Os resultados permitem concluir que plantas de S. viridis inoculadas com ambas as bactérias e baixa disponibilidade de nitrogênio demonstraram comportamento similar ao de plantas supridas com nitrogênio para os parâmetros analisados. Por fim, utilizando 13N2 observaram-se evidências de nitrogênio fixado em plantas de S. viridis inoculadas com A. brasilense e H. seropedicae crescidas em condições de baixo nitrogênio.<br> / Abstract : Nitrogen is an essential nutrient in plant growth. The ability of the plant to supply the required amount of nitrogen can come from biological nitrogen fixation (BNF), through interactions with diazotrophic bacteria. Azospirillum brasilense, which colonize the rhizosphere, and Herbaspirillum seropedicae, able to colonize the internal tissues, are examples of beneficial bacteria that associate with roots of grasses with agricultural and economic importance. The plant - bacterium interaction involves several processes that still unclear. In this work the growth parameters and transcriptional regulation of 10 genes were evaluated in maize seedlings (Zea mays) inoculated with H. seropedicae SmR1 at 1, 4, 7 and 10 days after inoculation (DAI). An increase was observed in lateral roots number of the plants with 7 and 10 DAI. Significant increase was observed in the transcripts level of Zmko1 and ZmrbohC genes in maize roots plant inoculated with H.seropedicae at 4 DAI. In conclusion, Herbaspirillum seropedicae SmR1 present in maize roots can influence the expression of Zmko1 gene that is involved in the gibberellins biosynthesis and also the expression of ZmrbohC gene involved in burst oxidative response at the beginning of the interaction. Brachypodium distachyon has been proposed as a model system of C3 plants. It has attractive features such as short stature, short life cycle and sequenced genome. In order to select a grass model for plant - bacterium interaction system, we screened 23 accessions of Brachypodium distachyon inoculated with Azospirillum brasilense and Herbaspirillum seropedicae. The plants were grown under no nitrogen or low nitrogen condition. In growth parameters, four genotypes under no nitrogen and three genotypes under low nitrogen condition, showed positive responses at least for one of the analyzed parameters. External and internal roots colonization tissues of plant were visualized using labeled bacteria strains. The growth parameters responses in B. distachyon plants associated with A. brasilense and H. seropedicae were highly variable to the different genotypes, however B. distachyon was strong colonized by A.brasilense and H. seropedicae. We also investigated the physiological and metabolic responses related to the plant - bacterium interaction process, and measure the fixed nitrogen and photoassimilates in plants of Setaria viridis genotype A10.1 grown under low nitrogen and compared to plants grown under high nitrogen availability. Using short-lived radioisotopes, as 11CO2, at first was analyzed CO2 fixation, distribution and allocation in plants inoculated with A.brasilense and H. seropedicae grown under low nitrogen condition. Furthermore, were analyzed the sugars profile and amino acids pools. The results indicate that plants of S. viridis inoculated with both bacteria grown under low nitrogen condition demonstrated similar behavior to the plants supplied with normal nitrogen. Finally, using 13N2 was demonstrated evidence of fixed nitrogen in S. viridis plants inoculated with A.brasilense and H. seropedicae grown under low nitrogen condition.
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Eficiência da azospirillum brasilense na fixação de nitrogênio em milho /

Repke, Rodrigo Alberto, 1988- January 2013 (has links)
Orientador: Silvio José Bicudo / Banca: Claudio Cavariani / Banca: Marcio Christian S. Domingues / Resumo: O milho é um dos cereais mais cultivados no mundo, porém apresenta desafios quanto ao manejo correto da adubação. Sua elevada demanda por nitrogênio tem sido a principal responsável por excessivas doses de fertilizantes nitrogenados sintéticos aplicados na cultura. Como consequência, há aumento no custo de produção da lavoura e impactos negativos ao meio ambiente. Dessa forma, é necessário estudar métodos alternativos que promovam o desenvolvimento das plantas e garantam a produtividade, buscando aliar eficiência, viabilidade econômica e segurança ambiental. Bactérias diazotróficas podem fixar nitrogênio atmosférico e produzir substâncias promotoras do crescimento, podendo reduzir a utilização de fertilizantes nitrogenados na cultura do milho. Para testar essa hipótese, este trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência agronômica na cultura do milho, do uso de bactéria diazotrófica Azospirillum brasilense, inoculada via sementes em combinação com doses de nitrogênio. A pesquisa foi composta por um ensaio conduzido no campo experimental da Fazenda Lageado em Botucatu-SP, pertencente à Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" - Faculdade de Ciências Agronômicas, em delineamento experimental de blocos ao acaso, com quatro repetições, em esquema fatorial duplo. Tendo o fator 1, dois níveis: sem e com aplicação da solução da bactéria Azospirillum brasilense nas sementes e o fator 2, seis doses totais de nitrogênio: zero, 180, 155, 130, 105 e 80 kg ha-1. Foi utilizado o híbrido de milho transgênico 2B587 Hx, ciclo precoce, porte baixo, indicado para semeadura no verão. As avaliações morfológicas da planta e da espiga foram realizadas aos 20, 40, 60, 80 e 100 dias... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Corn is a cereal grown worldwide; however it presents challenges with regards to the proper fertilizer management. Its high demand for nitrogen has been primarily responsible for excessive doses of synthetic nitrogen fertilizer applied to the crop. As a result, it can be observed an increase in cost of crop production and negative impacts to the environment. Thus, it is necessary to study alternative methods that promote the plant growth and ensure productivity, improving efficiency, economic viability and environmental safety. Diazotrophic bacteria can fix atmospheric nitrogen and produce growth promoting substances which can reduce the use of nitrogen fertilizers in the corn cultivation. To test this hypothesis, this study had the objective to evaluate the agronomic efficiency in corn, using Diazotrophic Azospirillum brasilense inoculated via seeds in combination with nitrogen levels. The research consisted in a field trial, where the experimental design was a randomized block, with four replications in a double factorial. Factor 1: with and without the application of the solution of the bacterium Azospirillum brasilense in seeds, and factor 2: six total doses of nitrogen: zero, 180, 155, 130, 105 and 80 kg ha-1. The hybrid of the transgenic corn 2B587 Hx, early maturity, small size was used, suitable for planting in the summer. The morphological evaluations of plant and cob were evaluated at 20, 40, 60, 80 and 100 days after emergence (DAE). Grain yield was measured at 115 DAE. Inoculation of corn seeds with Azospirillum had no effect on growth and productivity of corn plants. The adoption of this practice did not replace the use of nitrogen... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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CRESCIMENTO E DESENVOLVIMENTO DE PLANTAS DE MIRTILO, CULTIVAR CLÍMAX, INOCULADAS COM Azospirillum brasilense

Momoli, Lygia Werlang 01 August 2018 (has links)
Submitted by Angela Maria de Oliveira (amolivei@uepg.br) on 2018-11-22T18:23:30Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Lygia Werlang.pdf: 1588631 bytes, checksum: 6dd691286c38257fae4af70198871298 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-22T18:23:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Lygia Werlang.pdf: 1588631 bytes, checksum: 6dd691286c38257fae4af70198871298 (MD5) Previous issue date: 2018-08-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Também conhecida por blueberry, arándano ou uva-do-monte, o mirtilo se inclui no grupo de pequenas frutas. Muito apreciado pelo seu sabor exótico, valor comercial e suas alegações terapêuticas, sendo considerado como uma das frutas que fornece fonte de longevidade. Apesar da sua grande importância comercial em outros países, ainda é inespressiva no Brasil. O mirtileiro pode desenvolver associações com bactérias promotoras de crescimento vegetal. Essas associações estimulam a ampliação de sua zona radicular de absorção de nutrientes e, em troca, a planta fornece compostos fotoassimilados a esses microrganismos. Muitos estudos têm demonstrado que o Azospirillum brasilense estimula o desenvolvimento e a produtividade de várias espécies de plantas, muitas delas com grande relevância agronômica e ecológica. O presente trabalho teve como objetivo verificar a produção do mirtileiro e a qualidade físicoquímica dos frutos em função da inoculação com o Azospirillum brasilense (AZ) AbV5/AbV6 ativo e estéril, associado ou não com nitrogênio na região dos Campos Gerais no Paraná. Foram analisadas variáveis de crescimento como número de ramos vegetativos (RV), número de folhas (NF), área foliar (AF), número de frutos (NFRU), massa fresca (MF) e diâmetro dos frutos (DM), produtividade (PR), produção por planta (PP). Variáveis fisiológicas como taxa de fotossíntese (TF), condutância estomática (CE) e taxa de transpiração (TT). Analisou-se também as variáveis químicas dos frutos como: sólidos solúveis (SS), acidez titulável (AT), pH, teor de antocianinas (TA) e teor de polifenóis totais (PF). A inoculação com AZ favoreceu o crescimento de ramos vegetativos, aumentou o número de folhas e a área foliar das plantas inoculadas. A produção por planta e a produtividade das plantas inoculadas com o AZ foram superiores à produção da testemunha. T. AZ apresentou maior quantidade de frutos, com maior massa, porém com menor valor de sólidos solúveis. Condutância estomática no estádio de floração foi mais eficiente para AZ com nitrogênio, AZE com nitrogênio obteve melhores resultados na fotossíntese e eficiência do uso da água. As condições climáticas influenciaram a produção e a composição química dos frutos. Há necessidade de mais estudos sobre a interação do mirtileiro, Azospirillum brasilense e condições edafoclimáticas. / Also known as blueberry, cranberry or blueberry, blueberry is included in the small fruit group. Much appreciated for its exotic taste, commercial value and its therapeutic claims, being considered as one of the fruits that provides source of longevity. Despite its great commercial importance in other countries, it is still inexpressive in Brazil. The goldfish may develop associations with plant growth promoting bacteria. These associations stimulate the expansion of their root zone of nutrient absorption, and in return, the plant provides photoassimilated compounds to these microorganisms. Many studies have shown that Azospirillum brasilense stimulates the development and productivity of several plant species, many of them with great agronomic and ecological relevance. The present work had as objective to verify the production of the blue herring and the physical-chemical quality of the fruits as a function of the inoculation with active and sterile Azospirillum brasilense (AZ) AbV5 / AbV6, associated or not with nitrogen in the Campos Gerais region of Paraná. Growth variables such as number of vegetative branches (VN), number of leaves (NF), leaf area (FA), number of fruits (NFRU), fresh mass (DM) and fruit diameter ), production per plant (PP). Physiological variables such as photosynthesis rate (TF), stomatal conductance (EC) and transpiration rate (TT). Fruit chemical variables were analyzed as: soluble solids (SS), titratable acidity (AT), pH, anthocyanin content (AT) and total polyphenol content (PF). The inoculation with AZ favored the growth of vegetative branches, increased the number of leaves and the leaf area of the inoculated plants. The yield per plant and the productivity of the plants inoculated with AZ were higher than the production of the control. T. AZ presented higher amount of fruits, with higher mass, but with lower soluble solids value. Stomatal conductance at the flowering stage was more efficient for AZ with nitrogen, AZE with nitrogen obtained better results in photosynthesis and efficiency of water use. The climatic conditions influenced the production and the chemical composition of the fruits. There is a need for further studies on the interaction of the bluebird, Azospirillum brasilense and edaphoclimatic conditions.

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