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Enzimas que lisam a parede celular de leveduras : clonagem e sequenciamento do gene da [beta]-1,3-glucanase litica de Cellulomonas cartae 191

Soares, Giselle Alessandra Martins 10 August 2002 (has links)
Orientador: Helia Harumi Sato / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-02T07:40:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soares_GiselleAlessandraMartins_D.pdf: 21761311 bytes, checksum: b025fb09b15cc9f9ce31fb3d50e33aa6 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A linhagem 191, isolada previamente no laboratório de Bioquímica da FEA-UNICAMP e identificada como Cellulomonas cartae, é uma boa produtora da enzima 'beta' 1,3-glucanase envolvida na lise da parede celular de levedura. O objetivo deste trabalho foi o estudo da 'beta'-1,3-glucanase lítica produzida pela linhagem C. cartae 191; sua produção em meio de cultura, purificação e a clonagem molecular do gene que codifica essa enzima. A linhagem 191 foi crescida em meio contendo diferentes indutores e as condições de cultivo foram otimizadas através de planejamento experimental para o aumento da produção dessa enzima. A 'beta'-1,3-glucanase lítica foi purificada do sobrenadante do meio de cultura através de ultrafiltração (membrana de exclusão de 10 kDa), cromatografia de troca iônica em coluna de DEAE-Sepharose equilibrada em tampão acetato de sódio O,OIM, pH 5,5 e eletroforese em SDS-PAGE. A região N-terminal dessa proteína foi seqüenciada e o gene da 'beta'-1,3-glucanase foi isolado do genoma de C. cartae 191. O gene que codifica essa enzima foi seqüenciado e clonado em células de Escherichia coli DH5a ...Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: The strain Cellulomonas cartae 191, which was previously isolated by the Biochemistry laboratory at FEA-UNICAMP, shows a good 'beta' -1,3-glucanase production. The 'beta'-1,3-glucanase enzyme has an important role in yeast celllysis. The aim ofthis work was to study the lytic 'beta'-1,3-glucanase from C. cartae 191; its production, purification and molecular cloning of this gene. The strain 191 was grown on a medium containing different carbon sources and the 'beta'-1,3-glucanase production was studied by experimental design. The lytic enzyme was purified from the crude supematant by ultrafiltration (10 kDa cut off membrane), ion exchange chromatography with a DEAE-Sepharose column, equilibrated in 0.01 M sodium acetate buffer at pH 5.5 and SDS-PAGE electrophoresis. The N-terminal sequence ofthe lytic enzyme was obtained and the 'beta'-1,3-glucanase gene was isolated from C. cartae 191 genome and subsequently cloned in Escherichia coli DH5a cells ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos
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Avaliação da influência de solventes verdes sobre a ação de celulases /

Olekszyszen, Drielly Nayara, 1986-, Andreaus, Jürgen, 1965-, Universidade Regional de Blumenau. Programa de Pós-Graduação em Química. January 2014 (has links) (PDF)
Orientador: Jürgen Andreaus. / Dissertação (mestrado) - Universidade Regional Blumenau, Centro de Ciências Exatas e Naturais, Programa de Pós-Graduação em Química.
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Produção e caracterização de celulases produzidas por um isolado de Bacillus sp. / Production and characterization of cellulases produced by isolated from Bacillus sp

Marco, Evilin Giordana de January 2012 (has links)
Durante o processo de compostagem, a degradação de resíduos orgânicos é acompanhada e direcionada pela sucessão de populações microbianas que exibem uma ampla variedade de capacidades funcionais. Um total de 183 bactérias isoladas de uma leira de compostagem foram avaliadas quanto a capacidade de produção de celulases. Destas, após os primeiros ensaios, apenas um isolado foi selecionado para a realização dos testes de caracterização. Curvas de crescimento foram realizadas e em intervalos de 2 horas de crescimento foram avaliadoss a atividade enzimática, o pH, a contagem de células viáveis e endósporos. O isolado foi analisado quanto sua capacidade de produção de carboximetilcelulase em meio de cultivo acrescido de quatro diferentes substratos: carboximetilcelulose, celulose microcristlina, palha de trigo e casca de arroz. O meio de cultivo suplementado com carboximetilcelulose induziu a maior atividade enzimática após 6 horas de incubação (0,12 UEA mL-1min-1). A maior atividade CMCase foi observada a 60°C (0,14 UEA mL -1min-1) tanto para o extrato bruto quanto para a enzima parcialmente purificada, após 30 e 120 minutos de incubação, respectivamente. A melhor atividade do extrato bruto foi observada em pH 9,0. A exposição da enzima parcialmente purificada ao detergente Triton X-100 (1,0%) induziu uma maior hidrólise do substrato (0,2 UEA mL-1min-1). A análise por SDS-page permitiu observar a presença de uma única banda no gel, sugerindo uma celulase com massa molecular de 20 kDa. / During the composting process, degradation of organic waste is accomplished and driven by a succession of microbial populations exhibiting a broad range of functional capabilities. A total of 183 bacteria isolated from a composting process were evaluated for the capacity for hydrolyze cellulose. Out of that, after the first screening one isolate was selected for the further assays. Growth curves were done and every two hours sample was collected and enzyme activity, pH, viable cell count and endospores were determined. The isolate was evaluated for its ability to produce carboxymethyl cellulase in culture medium supplemented with four different substrates: carboxymethyl cellulose, microcrystalline cellulose, wheat straw and rice husk. The culture medium supplemented with carboxymethyl cellulose induced higher enzyme activity after 6 hours of incubation (0,12 UEA mL-1min-1). The highest CMCase activity was observed at 60°C (0,14 UEA mL -1 min-1) for both the crude and partially purified enzyme after 30 and 120 minutes of incubation, respectively. The best activity of the crude extract was observed at pH 9,0. The addition of detergent Triton X-100 (1,0%) to the purified enzyme, induced to a higher hydrolysis of the substrate (0,2 UEA mL-1min-1). Analysis by SDS-page allowed the observation of only one band in the gel suggesting one cellulase with a molecular mass of 20 kDa.
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Bioprospecção de micro-organismos para a utilização na síntese de bioetanol

Moro, Glaci Venturini January 2015 (has links)
As mudanças climáticas, aliadas às necessidades estratégicas de produção de energia, têm motivado uma corrida sem precedentes à produção de combustíveis alternativos, preferencialmente de fontes renováveis. Em vista disso, o presente trabalho visou avaliar a biodiversidade e realizar a bioprospecção de micro-organismos provenientes de diversos ambientes florestais brasileiros e selecionar micro-organismos capazes de produção de enzimas do complexo celulolítico e sua capacidade para a produção de bioetanol. Duzentos e trinta e sete micro-organismos silvestres foram utilizados para os testes de atividade enzimática, quatro linhagens de leveduras e 10 isolados de solo de alambique apresentaram notável índice enzimático de atividade (IAE) em meio sólido. Dentre os isolados pré-selecionados, as leveduras apresentaram menor atividade celulásica em meio líquido, enquanto que dos isolados de solo de alambique, destacaram-se TE13 e T8a, por apresentarem maior atividade hidrolítica em cultivo líquido, contendo carboximetilcelulose. O TE13 foi o único micro-organismo a apresentar atividade na degradação da celobiose. No entanto, nenhum micro-organismo testado apresentou atividade FPase. A identificação molecular desses micro-organismos revelou que o isolado TE13 é pertencente ao gênero Aspergillus, enquanto que T8a foi identificado como pertencente ao gênero Penicillium. No estudo para avaliar a capacidade de produção de xilanases, nenhum dos micro-organismos testados mostrou resultados satisfatórios. Setenta micro-organismos foram selecionados por sua capacidade de assimilação da xilose, porém, apenas três mostraram capacidade de produção de etanol em níveis moderados. / Climate changes and the growing demand for energy have motivated an unprecedent number of studies for the production of fuels, particularly those from biorenewable sources. The work described herein is focused in the evaluation of biodiversity and bioprospection of Brazilian microorganisms able to produce cellulolytic enzymes and for the production of bioethanol. Two hundred thirty seven wild microorganisms were used for enzymatic studies, and four yeasts and 10 alambique soil isolates have shown significant levels of enzymatic activity in solid medium. Among the pre-selected strains, yeasts have shown lower levels of cellulosic activity in liquid medium, while the TE13 and T8a alambique soil isolates have shown good hydrolytic activity in liquid medium containing carboxymethylcellulose. TE13 was the only microorganism to present cellobiase activity. However, none of the microorganisms tested have displayed FPase activity. Molecular characterization of the microorganisms revealed that TE13 belongs to Aspergillus sp., while T8a was identified as Penicillium sp. In the xylanase activity studies, we were not able to achieve significant results with any of the microorganisms evaluated. Seventy microorganisms were selected by their ability to assimilate xylose, however, only three of them were able to produce ethanol in moderate levels.
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Imobilização de celulase em nanopartículas magnéticas encapsuladas em poli (metacrilato de metila)

Lima, Janaina de Souza January 2016 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:36:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339938.pdf: 1921778 bytes, checksum: 7428b32f347e046cf5b959128d9d1bf7 (MD5) Previous issue date: 2016 / As celulases têm sido amplamente empregadas em diversos segmentos industriais. Apesar das inúmeras vantagens, a aplicação dessas enzimas ainda é limitada devido ao seu elevado custo. A principal alternativa estudada para contornar esse problema é a imobilização em suportes sólidos. As nanopartículas magnéticas têm se mostrado uma excelente alternativa, pois apresentam propriedades ideais para imobilização de enzimas. As nanopartículas são facilmente oxidadas e tendem a se aglomerar ao longo do tempo. Assim, é necessário que as mesmas sejam revestidas para evitar contato com o meio reacional. O presente trabalho teve como objetivo estudar a imobilização da celulase em nanopartículas magnéticas encapsuladas em poli(metacrilato de metila). A caracterização das nanopartículas foi realizada por meio de análises de morfologia, diâmetro médio, comportamento magnético e decomposição térmica. As nanopartículas magnéticas encapsuladas apresentaram comportamento superparamagnético e diâmetro médio de 150 nm. Para concentração de 5% (v/v) de glutaraldeído e 100 mg/mL de enzima, foi obtido 49% de eficiência de imobilização, o que corresponde a 0,180 U/mL. Comparando com a enzima na forma livre, a celulase imobilizada apresentou a mesma faixa de pH ótimo, comportamento semelhante para a estabilidade térmica e ampliação da faixa ótima de temperatura. A capacidade de reuso foi testada e 69% da atividade enzimática inicial foi mantida após oito ciclos de uso. Os resultados de aplicação na hidrólise de bagaço de cana e biopolimento de fios de algodão comprovaram o elevado potencial de aplicação da celulase imobilizada. A metodologia de imobilização desenvolvida nesse trabalho se mostrou promissora e importante para a consolidação da tecnologia.<br> / Abstract: Cellulases have been widely used in serious industrial process. Despite numerous advantages, the cellulase application is still limited due to its high cost. The main alternative studied to circumvent this problem is immobilization on solid supports. Magnetic nanoparticles have been shown excellent properties for enzymes immobilization. The nanoparticles are easily oxidized and tend to agglomerate in a long term. Thus, magnetic nanoparticles should be coated with materials that prevent their contact with the reaction medium. This study aimed to investigate the immobilization of cellulase on magnetic nanoparticles encapsulated in poly (methyl methacrylate). The characterization of these nanoparticles was performed by morphology, average diameter, magnetic behavior and thermal decomposition analysis. The magnetic nanoparticles encapsulated showed superparamagnetic behavior and average diameter of 150 nm. When 5% (v/v) of glutaraldehyde and 100 mg/mL of enzyme was applied, the immobilization efficiency reached 49%. This percentage corresponds to 0.18 U/mL. Compared to the free enzyme, immobilized cellulase showed the same range of optimum pH, similar behavior to the thermal stability and expansion of the optimal temperature range. The reuse capacity was tested and 69% of the initial enzyme activity was maintained after eight cycles of use. The application results in sugarcane bagasse hydrolysis and biopolishing of cotton yarn confirmed the high potential for application of immobilized cellulase. Immobilization methodology developed in this work was promising and important for the consolidation of this technology.
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Produção e caracterização de celulases produzidas por um isolado de Bacillus sp. / Production and characterization of cellulases produced by isolated from Bacillus sp

Marco, Evilin Giordana de January 2012 (has links)
Durante o processo de compostagem, a degradação de resíduos orgânicos é acompanhada e direcionada pela sucessão de populações microbianas que exibem uma ampla variedade de capacidades funcionais. Um total de 183 bactérias isoladas de uma leira de compostagem foram avaliadas quanto a capacidade de produção de celulases. Destas, após os primeiros ensaios, apenas um isolado foi selecionado para a realização dos testes de caracterização. Curvas de crescimento foram realizadas e em intervalos de 2 horas de crescimento foram avaliadoss a atividade enzimática, o pH, a contagem de células viáveis e endósporos. O isolado foi analisado quanto sua capacidade de produção de carboximetilcelulase em meio de cultivo acrescido de quatro diferentes substratos: carboximetilcelulose, celulose microcristlina, palha de trigo e casca de arroz. O meio de cultivo suplementado com carboximetilcelulose induziu a maior atividade enzimática após 6 horas de incubação (0,12 UEA mL-1min-1). A maior atividade CMCase foi observada a 60°C (0,14 UEA mL -1min-1) tanto para o extrato bruto quanto para a enzima parcialmente purificada, após 30 e 120 minutos de incubação, respectivamente. A melhor atividade do extrato bruto foi observada em pH 9,0. A exposição da enzima parcialmente purificada ao detergente Triton X-100 (1,0%) induziu uma maior hidrólise do substrato (0,2 UEA mL-1min-1). A análise por SDS-page permitiu observar a presença de uma única banda no gel, sugerindo uma celulase com massa molecular de 20 kDa. / During the composting process, degradation of organic waste is accomplished and driven by a succession of microbial populations exhibiting a broad range of functional capabilities. A total of 183 bacteria isolated from a composting process were evaluated for the capacity for hydrolyze cellulose. Out of that, after the first screening one isolate was selected for the further assays. Growth curves were done and every two hours sample was collected and enzyme activity, pH, viable cell count and endospores were determined. The isolate was evaluated for its ability to produce carboxymethyl cellulase in culture medium supplemented with four different substrates: carboxymethyl cellulose, microcrystalline cellulose, wheat straw and rice husk. The culture medium supplemented with carboxymethyl cellulose induced higher enzyme activity after 6 hours of incubation (0,12 UEA mL-1min-1). The highest CMCase activity was observed at 60°C (0,14 UEA mL -1 min-1) for both the crude and partially purified enzyme after 30 and 120 minutes of incubation, respectively. The best activity of the crude extract was observed at pH 9,0. The addition of detergent Triton X-100 (1,0%) to the purified enzyme, induced to a higher hydrolysis of the substrate (0,2 UEA mL-1min-1). Analysis by SDS-page allowed the observation of only one band in the gel suggesting one cellulase with a molecular mass of 20 kDa.
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Bioprospecção de micro-organismos para a utilização na síntese de bioetanol

Moro, Glaci Venturini January 2015 (has links)
As mudanças climáticas, aliadas às necessidades estratégicas de produção de energia, têm motivado uma corrida sem precedentes à produção de combustíveis alternativos, preferencialmente de fontes renováveis. Em vista disso, o presente trabalho visou avaliar a biodiversidade e realizar a bioprospecção de micro-organismos provenientes de diversos ambientes florestais brasileiros e selecionar micro-organismos capazes de produção de enzimas do complexo celulolítico e sua capacidade para a produção de bioetanol. Duzentos e trinta e sete micro-organismos silvestres foram utilizados para os testes de atividade enzimática, quatro linhagens de leveduras e 10 isolados de solo de alambique apresentaram notável índice enzimático de atividade (IAE) em meio sólido. Dentre os isolados pré-selecionados, as leveduras apresentaram menor atividade celulásica em meio líquido, enquanto que dos isolados de solo de alambique, destacaram-se TE13 e T8a, por apresentarem maior atividade hidrolítica em cultivo líquido, contendo carboximetilcelulose. O TE13 foi o único micro-organismo a apresentar atividade na degradação da celobiose. No entanto, nenhum micro-organismo testado apresentou atividade FPase. A identificação molecular desses micro-organismos revelou que o isolado TE13 é pertencente ao gênero Aspergillus, enquanto que T8a foi identificado como pertencente ao gênero Penicillium. No estudo para avaliar a capacidade de produção de xilanases, nenhum dos micro-organismos testados mostrou resultados satisfatórios. Setenta micro-organismos foram selecionados por sua capacidade de assimilação da xilose, porém, apenas três mostraram capacidade de produção de etanol em níveis moderados. / Climate changes and the growing demand for energy have motivated an unprecedent number of studies for the production of fuels, particularly those from biorenewable sources. The work described herein is focused in the evaluation of biodiversity and bioprospection of Brazilian microorganisms able to produce cellulolytic enzymes and for the production of bioethanol. Two hundred thirty seven wild microorganisms were used for enzymatic studies, and four yeasts and 10 alambique soil isolates have shown significant levels of enzymatic activity in solid medium. Among the pre-selected strains, yeasts have shown lower levels of cellulosic activity in liquid medium, while the TE13 and T8a alambique soil isolates have shown good hydrolytic activity in liquid medium containing carboxymethylcellulose. TE13 was the only microorganism to present cellobiase activity. However, none of the microorganisms tested have displayed FPase activity. Molecular characterization of the microorganisms revealed that TE13 belongs to Aspergillus sp., while T8a was identified as Penicillium sp. In the xylanase activity studies, we were not able to achieve significant results with any of the microorganisms evaluated. Seventy microorganisms were selected by their ability to assimilate xylose, however, only three of them were able to produce ethanol in moderate levels.
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Bioprospecção de micro-organismos para a utilização na síntese de bioetanol

Moro, Glaci Venturini January 2015 (has links)
As mudanças climáticas, aliadas às necessidades estratégicas de produção de energia, têm motivado uma corrida sem precedentes à produção de combustíveis alternativos, preferencialmente de fontes renováveis. Em vista disso, o presente trabalho visou avaliar a biodiversidade e realizar a bioprospecção de micro-organismos provenientes de diversos ambientes florestais brasileiros e selecionar micro-organismos capazes de produção de enzimas do complexo celulolítico e sua capacidade para a produção de bioetanol. Duzentos e trinta e sete micro-organismos silvestres foram utilizados para os testes de atividade enzimática, quatro linhagens de leveduras e 10 isolados de solo de alambique apresentaram notável índice enzimático de atividade (IAE) em meio sólido. Dentre os isolados pré-selecionados, as leveduras apresentaram menor atividade celulásica em meio líquido, enquanto que dos isolados de solo de alambique, destacaram-se TE13 e T8a, por apresentarem maior atividade hidrolítica em cultivo líquido, contendo carboximetilcelulose. O TE13 foi o único micro-organismo a apresentar atividade na degradação da celobiose. No entanto, nenhum micro-organismo testado apresentou atividade FPase. A identificação molecular desses micro-organismos revelou que o isolado TE13 é pertencente ao gênero Aspergillus, enquanto que T8a foi identificado como pertencente ao gênero Penicillium. No estudo para avaliar a capacidade de produção de xilanases, nenhum dos micro-organismos testados mostrou resultados satisfatórios. Setenta micro-organismos foram selecionados por sua capacidade de assimilação da xilose, porém, apenas três mostraram capacidade de produção de etanol em níveis moderados. / Climate changes and the growing demand for energy have motivated an unprecedent number of studies for the production of fuels, particularly those from biorenewable sources. The work described herein is focused in the evaluation of biodiversity and bioprospection of Brazilian microorganisms able to produce cellulolytic enzymes and for the production of bioethanol. Two hundred thirty seven wild microorganisms were used for enzymatic studies, and four yeasts and 10 alambique soil isolates have shown significant levels of enzymatic activity in solid medium. Among the pre-selected strains, yeasts have shown lower levels of cellulosic activity in liquid medium, while the TE13 and T8a alambique soil isolates have shown good hydrolytic activity in liquid medium containing carboxymethylcellulose. TE13 was the only microorganism to present cellobiase activity. However, none of the microorganisms tested have displayed FPase activity. Molecular characterization of the microorganisms revealed that TE13 belongs to Aspergillus sp., while T8a was identified as Penicillium sp. In the xylanase activity studies, we were not able to achieve significant results with any of the microorganisms evaluated. Seventy microorganisms were selected by their ability to assimilate xylose, however, only three of them were able to produce ethanol in moderate levels.
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Produção e caracterização de celulases produzidas por um isolado de Bacillus sp. / Production and characterization of cellulases produced by isolated from Bacillus sp

Marco, Evilin Giordana de January 2012 (has links)
Durante o processo de compostagem, a degradação de resíduos orgânicos é acompanhada e direcionada pela sucessão de populações microbianas que exibem uma ampla variedade de capacidades funcionais. Um total de 183 bactérias isoladas de uma leira de compostagem foram avaliadas quanto a capacidade de produção de celulases. Destas, após os primeiros ensaios, apenas um isolado foi selecionado para a realização dos testes de caracterização. Curvas de crescimento foram realizadas e em intervalos de 2 horas de crescimento foram avaliadoss a atividade enzimática, o pH, a contagem de células viáveis e endósporos. O isolado foi analisado quanto sua capacidade de produção de carboximetilcelulase em meio de cultivo acrescido de quatro diferentes substratos: carboximetilcelulose, celulose microcristlina, palha de trigo e casca de arroz. O meio de cultivo suplementado com carboximetilcelulose induziu a maior atividade enzimática após 6 horas de incubação (0,12 UEA mL-1min-1). A maior atividade CMCase foi observada a 60°C (0,14 UEA mL -1min-1) tanto para o extrato bruto quanto para a enzima parcialmente purificada, após 30 e 120 minutos de incubação, respectivamente. A melhor atividade do extrato bruto foi observada em pH 9,0. A exposição da enzima parcialmente purificada ao detergente Triton X-100 (1,0%) induziu uma maior hidrólise do substrato (0,2 UEA mL-1min-1). A análise por SDS-page permitiu observar a presença de uma única banda no gel, sugerindo uma celulase com massa molecular de 20 kDa. / During the composting process, degradation of organic waste is accomplished and driven by a succession of microbial populations exhibiting a broad range of functional capabilities. A total of 183 bacteria isolated from a composting process were evaluated for the capacity for hydrolyze cellulose. Out of that, after the first screening one isolate was selected for the further assays. Growth curves were done and every two hours sample was collected and enzyme activity, pH, viable cell count and endospores were determined. The isolate was evaluated for its ability to produce carboxymethyl cellulase in culture medium supplemented with four different substrates: carboxymethyl cellulose, microcrystalline cellulose, wheat straw and rice husk. The culture medium supplemented with carboxymethyl cellulose induced higher enzyme activity after 6 hours of incubation (0,12 UEA mL-1min-1). The highest CMCase activity was observed at 60°C (0,14 UEA mL -1 min-1) for both the crude and partially purified enzyme after 30 and 120 minutes of incubation, respectively. The best activity of the crude extract was observed at pH 9,0. The addition of detergent Triton X-100 (1,0%) to the purified enzyme, induced to a higher hydrolysis of the substrate (0,2 UEA mL-1min-1). Analysis by SDS-page allowed the observation of only one band in the gel suggesting one cellulase with a molecular mass of 20 kDa.
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Produção e caracterização de exoglucanases e endoglucanases de mucorales utilizando fermentação sólida

GALINDO, Hugo Marques 04 March 2016 (has links)
Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-16T22:15:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Hugo Marques Galindo.pdf: 653807 bytes, checksum: ae25da68525527ac9efaf13746cc334d (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-21T21:09:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Hugo Marques Galindo.pdf: 653807 bytes, checksum: ae25da68525527ac9efaf13746cc334d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-21T21:09:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Hugo Marques Galindo.pdf: 653807 bytes, checksum: ae25da68525527ac9efaf13746cc334d (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / CNPq / A conversão da celulose em açúcares fermentáveis é realizada por um complexo enzimático de celulases capaz de hidrolisar as frações de celulose a seus monômeros de glicose. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de produção de celulases (endoglucanases e exoglucanases) por fungos Mucorales isolados a partir de solo do Bioma Caatinga. Inicialmente, 13 isolados de fungos foram avaliados quanto à capacidade de produção de celulases (CMCase e FPase) utilizando farelo de palha de milho como substrato através de fermentação em estado sólido (FES), durante 96 horas de cultivo a 35ºC. Foi detectada atividade enzimática em todos os isolados, sendo Rhizopus microsporus SIS 04 o isolado que apresentou maior atividade para ambas as celulases testadas (CMCase: 1,375 U/mL; FPase: 0,105 U/mL). Este isolado foi cultivado nas condições de fermentação determinadas através de planejamento fatorial utilizando como variáveis independentes: temperatura e umidade. A atividade de CMCase em 72 horas de incubação aumentou de 1, 375 para 1, 477 U/mL na temperatura de 38°C e umidade de 100%; e a atividade de FPase, em 72 horas de incubação aumentou de 0, 105 para 0, 118 U/mL, na temperatura de 38°C e umidade de 50%, notando-se que a temperatura foi a variável mais significativa para a atividade dessas celulases. A caracterização das enzimas produzidas pelo isolado Rhizopus microsporus SIS 04 demonstrou que o extrato enzimático com atividade de CMCase apresentou pH ótimo de 6 e temperatura ótima de 60°C, tendo sua atividade residual acima de 80% nos valores de pH: 4, 5, 6 e 7, e temperatura de 60°C; para atividade de FPase apresentou pH ótimo de 6 e temperatura ótima de 50°C, tendo sua atividade residual acima de 80% nos valores de pH: 5 e 6, e temperatura de 50 e 60°C. Evidenciando assim melhores resultados de atividade enzimática em temperaturas elevadas e valores de pH de ácido a levemente alcalino. / The conversion of cellulose to fermentable sugars is performed by an enzyme complex of cellulases able to hydrolyze the cellulose fraction their glucose monomers. The aim of this study was to evaluate the potential for cellulases production (endoglucanases and exoglucanases) by Mucorales fungi isolated from soil of Caatinga. Initially, thirteen fungal isolates were evaluated for capacity of cellulase production (CMCase and FPase) using corn husk bran as substrate in solid state fermentation (SSF) for 96 h incubation at 35°C. It was detected enzymatic activity in all isolates, but Rhizopus microsporus Sis 04 was the isolate that showed the highest activity for both tested cellulases (CMCase: 1.375 U/mL; FPase: 0.105 U/mL). This isolate was selected for optimization of fermentation conditions through a factorial design using as independent variables temperature and humidity. The CMCase activity at 72 h of incubation increased from 1.375 to 1.477 U/ml at 38°C and humidity of 100%; as well as the activity of FPase at 72 h of incubation increased from 0.105 to 0.118 U/ml, at temperature of 38°C and humidity of 50%, showing that the temperature was the most significant variable for the activity of these cellulases, where culture conditions were optimized. The characterization of cellulases produced by R. microsporus Sis 04 demonstrated that the enzymatic extract with CMCase activity showed optimum pH of 6 and optimum temperature of 60°C, and its residual activity above 80% in pH 4, 5, 6 and 7 and temperature of 60°C. However, FPase activity showed optimum pH of 6 and optimum temperature of 50°C, and its residual activity above 80% in pH 5 and 6, and temperature of 50 and 60°C. Thus, it was demonstrated that best results in enzymatic activity were reached at high temperatures and pH values from acid to slightly alkaline.

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