Resumo: Foi proposto avaliar diferentes vernizes experimentais, que apresentam em sua formulação monômeros hidrofílicos ou zwiteriônicos, como método para modificar a superfície de resina acrílica para base de prótese, com o objetivo de prevenir a adesão de C. albicans. Foram confeccionados corpos-de-prova com características superficiais que simulavam a parte polida das próteses (superfície lisa) e com características superficiais que simulavam a parte interna das próteses (superfície rugosa) utilizando-se uma resina para base de prótese específica para micro-ondas (Vipi Wave). Matrizes metálicas com 10 cavidades (13,8 mm de diâmetro e 2 mm de altura) foram incluídas em mufla, entre 2 placas de vidro, para simular a superfície lisa, ou em contato com gesso para obter amostras que simulassem a superfície rugosa da prótese. Todos os corpos-de-prova foram submetidos à mensuração da rugosidade utilizando-se um rugosímetro (Mitutoyo SJ 400) com cutoff de 2,5 mm. A rugosidade superficial foi determinada (Ra-µm) pela média de três mensurações realizadas em cada amostra. Após a leitura da rugosidade, os corpos-de-prova foram divididos em grupo controle (n=72; 36 lisos e 36 rugosos), não recebendo nenhum tratamento superficial, e 12 grupos experimentais (n=72; 36 lisos e 36 rugosos) que receberam uma camada do verniz experimental sendo polimerizado em forno EDG. Os vernizes experimentais apresentaram em sua composição o monômero metil metacrilato (MMA), dois agentes de ligação cruzada (TEGDMA e Bis-GMA) e o foto iniciador MBP (4- metil benzofenona). Além desses componentes, os vernizes identificados pelos códigos P, E e T apresentaram monômeros hidrofílicos em 3 concentrações (25, 30 e 35%). O verniz identificado pelo código M apresentou um monômero zwiteriônico (MZ), nas mesmas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present study was to evaluate the use of different experimental varnishes containing zwitterion or hydrophilic monomers as a manner to modify the surface characteristics of a denture base resin and prevent the adhesion of C. albicans. For such purpose, specimens with surface characteristics that simulated the polished side of the dentures and the inner side of the dentures were fabricated using a microwave-polymerized denture base acrylic resin (Vipi Wave). Hollow metallic matrices with 10 cavities (13.8 mm diameter x 2 mm high) were flasked either between two glass plates, in order to produce specimens with smooth surfaces that simulated the polished side of the dentures, or in direct contact with the stone, in order to obtain specimens with rough surfaces that simulated the inner side of the dentures. All specimens were subjected to surface roughness readings in a roughness meter (Mitutoyo SJ 400) with cutoff length of 2.5 mm. Surface roughness (Ra, µm) was determined as the average of three random measurements made on each specimen. After the roughness readings, the specimens were randomly assigned to one control group (n=72; 36 smooth and 36 rough specimens), in which the specimens received no surface treatment, and 12 experimental groups (n=72; 36 smooth and 36 rough specimens) in which the specimens were coated with one of the experimental varnishes followed by polymerization in an EDG oven. The 12 experimental varnishes presented in their composition the monomer methyl methacrylate (MMA), two crosslinking agents (TEGDMA and Bis-GMA) and a photoinitiator agent (4-methyl benzophenone . MPB). In addition to these components, the experimental varnishes labeled as P, E and T presented hydrophilic monomers at three concentrations (25, 30 and 35%). The experimental varnish labeled as M presented a zwitterion... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Ana Lucia Machado / Coorientador: Carlos Eduardo Vergani / Banca: Ana Cláudia Pavarina / Banca: Marco Antonio Compagnoni / Banca: Dalva Cruz Laganá / Banca: Cláudia Helena Lovato da Silva / Doutor

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Aguinaldo Silva Garcez Segundo / Banca: Luciane Dias de Oliveira / Resumo: O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito antimicrobiano da terapia fotodinâmica (TFD) em biofilmes formados por C. albicans (GI), S. aureus (GII) e S. mutans (GIII), isolados e em associações (GIV-VII). Os biofilmes foram formados em discos de resina acrílica esterilizados imersos em caldo de infusão cérebro coração com 5% de sacarose, inoculados com a suspensão microbiana e incubados por 5 dias. Após o período de incubação, os discos foram lavados com solução fisiológica esterilizada para remover as células não-aderidas. Foram avaliados os efeitos do fotossensibilizador azul de metileno (AM) na concentração de 0,1 mg/mL por 5 min e laser AsGaAl (660 nm) por 98 s, isolados e em conjunto. Os biofilmes foram desprendidos em solução fisiológica em agitador ultrasônico. Foram realizadas diluições e alíquotas semeadas em ágar seletivos e incubadas por 48 h. Os números de UFC/mL em Log10 foram analisados estatisticamente (ANOVA, teste de Tukey, p< 0.05). Também foi realizada a microscopia eletrônica de varredura (MEV) nos discos com biofilmes dos grupos controle e TFD. Foram observadas reduções significativas na viabilidade de todos os biofilmes expostos ao AM e laser. As reduções (log10) foram maiores em biofilmes isolados, com: 40.22% para C. albicans (GI), 55.91% para S. aureus (GII) e 47.35% para S. mutans (GIII). Nos biofilmes mistos as reduções (log10) foram: 35.08% para C. albicans e 43.9% para S. aureus (GIV); 31.54% para C. albicans e 38.7% para S. mutans (GV); 40.12% para S. aureus e 37.14% para S. mutans (GVI); 19.56% para C. albicans, 28.41% para S. aureus e 24.94% para S. mutans (GVII). As imagens de MEV demonstraram uma fotossensibilização letal predominantemente nas camadas superiores dos biofilmes. Conclui-se que a TFD pode ser uma abordagem útil no controle de biofilmes bucais. / Abstract: The purpose of this study was to evaluate the antimicrobial effect of photodynamic therapy (PDT) in biofilms formed by C. albicans (GI), S. aureus (GII) and S. mutans (GIII), alone and in associations (GIVGVII). The biofilms were grown in acrylic resin discs immersed in sterile brain heart infusion broth (BHI) containing 5% sucrose, inoculated with microbial suspension and incubated for 5 days. On the fifth day, the discs were washed in sterile saline solution in order to remove loosely bound material. The effects of the methylene blue (MB) photosensitizers at a concentration of 0,1 mg/mL for 5 min and AsGaAl laser (660 nm) for 98 s, alone and conjugated were evaluated. The dics were placed into tubes with sterile saline solution and sonicated for 30 s in order to disperse the biofilms. Ten-fold serial dilutions were carried out and aliquots plated in selective agar which were then incubated for 48 h. Then the numbers CFU/mL (log10) were counted and analyzed statistically (ANOVA, Tukey's test, p< 0,05) Scanning electron microscopy (SEM) on discs with PDT and control biofilms groups were performed. Significant decreases in the viability of all microorganisms were observed when biofilms were exposed to both MB and laser. Reductions (log10) in single-species biofilms were greater than associated biofilms with: 40.22% for C. albicans (GI), 55.91% for S. aureus (GII) and 47.35% for S. mutans (GIII). In associated biofilms the reductions (Log10) were: 35.08% for C. albicans and 43.9% for S. aureus (GIV); 31.54% for C. albicans and 38.7% for S. mutans (GV); 40.12% for S. aureus and 37.14% for S. mutans (GVI); 19.56% for C. albicans, 28.41% for S. aureus and 24.94% for S. mutans (GVII). Scanning electron microscopy micrographs suggested that lethal photosensitization occurred predominantly in the outermost layers of the biofilms. It was concluded that PDT using MB photosensitizer and laser may be a useful approach in the control of oral biofilms. / Mestre

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Martha Simões Ribeiro / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da terapia fotodinâmica sobre a patogenicidade de C. albicans e C. dubliniensis na candidose bucal em ratos. Foram utilizados 96 ratos (Rattus norvegicus, Albinus, Wistar), sendo que 80 animais foram submetidos à indução de candidose experimental no dorso da língua por C. albicans ou C. dubliniensis e 16 ratos não foram infectados por Candida. Após 5 dias da indução da candidose, foram realizados diferentes tratamentos: laser e azul de metileno como fotossensibilizador (Grupo L+F+), apenas laser (Grupo L+F-), apenas fotossensibilizador (Grupo L-F+) e grupo sem laser e fotossensibilizador (Grupo L-F-). Após 1 dia, amostras do dorso da língua foram coletadas e semeadas em ágar Sabouraud para contagem de UFC/mL recuperadas da cavidade bucal. Os animais foram submetidos à eutanásia para análise microscópica do dorso da língua. Foi avaliada também a capacidade de produção de fosfolipase e proteinase por C. albicans e C. dubliniensis. Os resultados demonstraram que a quantidade de C. albicans recuperadas da cavidade bucal dos ratos foram semelhantes entre os quatro grupos estudados. C. dubliniensis não foi recuperarada da cavidade bucal dos ratos estudados. Na análise microscópica do dorso da língua, observou-se a presença de várias lesões teciduais induzidas por C. albicans, sendo que no grupo L+F+ essas lesões foram menores em relação aos demais grupos estudados. C. dubliniensis exibiu lesões teciduais discretas sem diferença estatística entre os grupos. Em relação aos fatores de patogenicidade de C. albicans, o grupo L+F+ produziu menor quantidade de fosfolipase e proteinase em relação aos demais grupos. C. dubliniensis produziu menor quantidade de fosfolipase em relação à C. albicans, sem diferença entre os 4 grupos estudados. Entretanto, C. dubliniensis não foi capaz de produzir proteinase... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective was to evaluate the effects of photodynamic therapy on the pathogenicity of C. albicans and C. dubliniensis in oral rats candidosis. Were evaluated 96 rats, while 80 were subjected to candidosis experimental induction on the tongue dorsum by C. albicans or C. dubliniensis and 16 rats were not infected. After 5 days of induction candidosis, different treatments were performed: laser and methylene blue as photosensitizers (Group L+F+), laser only (Group L+F-), only photosensitizers (Group L-F+) and without laser neither photosensitizers group (Group L-F). After 1 day, samples of the tongue dorsum were collected and sown on Sabouraud agar for counts of UFC/mL recovered from the oral cavity. The animals were submitted to euthanasia for microscopic analysis. It also evaluated the production capacity of a proteinase and phospholipase C. albicans and C. dubliniensis. The results showed that the amount of C. albicans recovered from rats oral cavity were similar among the four groups. To recover C. dubliniensis of the oral cavity from studied rats was not possible. In microscopic examination of tongue dorsum, was seen the presence of multiple tissue lesions induced by C. albicans, whereas in group L+ F+ these lesions were smaller than in other groups. C. dubliniensis showed slight tissue lesions with no statistic difference between groups. Regarding the factors of pathogenicity of C. albicans, the group L+F+ produced smaller amounts of phospholipase and proteinase compared to other groups. C. dubliniensis produced fewer quantitiy of phospholipase related to C. albicans, without difference between the 4 (four) groups studied. However, C. dubliniensis was not able to produce proteinase. It was concluded that the development of experimental candidosis by C. dubliniensis was less than that induced by C. albicans. Photodynamic therapy was effective on treatment... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ana Claudia Pavarina / Banca: Eunice Teresinha Giampaolo / Banca: Cristina Kurachi / Resumo: Este trabalho teve por objetivo avaliar a efetividade da terapia fotodinâmica (PDT) mediada pelo fotossensibilizador (FS) Photodithazine® (PDZ), associado à luz do tipo LED (660nm). Para tanto, foram utilizados 55 camundongos com aproximadamente 6 semanas de vida, os quais foram submetidos a indução de candidose no dorso da língua. Inicialmente os animais foram imunossuprimidos e no dia seguinte se realizou a inoculação de C. albicans na língua dos mesmos por meio de swabs embebidos na suspensão (107 Ufc/mL). Para a realização da terapia fotodinâmica o FS foi avaliado nas concentrações de 75, 100, 125 e 150mg/L. Tais grupos experimentais foram denominados de (P+L+ 75mg/L, P+L+ 100mg/L, P+L+ 125mg/L, P+L+ 150mg/L) associados a uma dose de luz de 37,5 J/cm2. Para a verificação apenas do efeito da PDZ, a mesma foi aplicada na língua dos animais, sem iluminação (grupos denominados de P+L- 75mg/L, P+L- 100mg/L, P+L- 125mg/L, P+L- 150mg/L). O efeito da luz foi avaliado por meio da iluminação das línguas com dose de luz de 37,5J/cm2, (grupo denominado de P-L+ 37,5J/cm2). Um grupo recebeu apenas inoculação por Candida (grupo P-L-, controle positivo), outro grupo não recebeu nenhum tratamento e nem inoculação fúngica (grupo CN - controle negativo). Após os experimentos realizou-se a recuperação de C. albicans das línguas dos animais por meio de swabs que foram esfregados sobre as mesmas durante 1 minuto. Esses swabs foram embebidos em tubos de ensaio com 1mL de solução salina, e diluições seriadas foram realizadas e colocadas em placas de petri com SDA. Após 48 horas de incubação a 37º C as células fúngicas foram quantificadas e o número de Ufc/mL foi determinado e analisado pelo teste ANOVA (P<.05). Os camundongos foram sacrificados e tiveram as línguas removidas cirurgicamente para realização da análise histológica. Os resultados demonstraram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this investigation was to evaluate the effectiveness of photodynamic therapy (PDT) mediated by photossensitizer Photodithazine® (PDZ) associated with LED light (660nm) for the photoinactivation of C. albicans in a murine model of oral candidosis. Fifty-five 6-week-old female Swiss mice were immunossuppressed and in the next day small cotton pads were soaked in a C. albicans cell suspension (107CFU/mL) and swabbed in the oral cavity of mice. PDT was performed and the PS was applicated topically on the dorsum of the tongue of mice at concentrations 75, 100, 125 and 150mg/L (P+L+75, P+L+100, P+L+125 and P+L+150mg/L) associated with LED at a fluence of 37,5J/cm2. The effect of PS only was tested by application of PDZ for the same period of pre-irradiation time and irradiation at the same concentration as that for the P+L+ group, without the LED illumination (P+L-75, P+L-100, P+L-125 and P+L-150mg/L). To verify the effect of the light only, the group was exposed to the same LED dose mentioned previously (P-L+ 37,5J/cm2), 1 group). The positive control did not receive any PS or light (P-L-). The negative control group (CN) of animals was evaluated and mice did not receive any treatment. After treatment the dorsum of the tongue was swabbed for 1 minute with a cotton pad to recover C. albicans cells and the microbiological evaluation was performed. The yeast colony counts were quantified and the number of CFU/mL was determined and analyzed by ANOVA test (P<.05). Animals were killed 24 hours after treatment and the tongue of all mice were surgically removed for histological analysis. The results of this investigation demonstrated that PDT was effective in reducing C. albicans recovered from the tongue of mice at concentrations 100, 125 and 150mg/L of PS when compared with the animals from the positive control group (P-L-) (P<0.05). There was no difference between these concentrations... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Marcia Carneiro Valera / Banca: Celso Luiz Caldeira / Banca: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes / Banca: Claudio Antonio Talge Carvalho / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Resumo: A proposta deste trabalho foi avaliar a efetividade dos extratos glicólicos de própolis e de gengibre, hidróxido de cálcio, clorexidina gel e associações como medicação intracanal (MIC) sobre Candida albicans, Enterococcus faecalis, Escherichia coli e endotoxinas em canais radiculares. Foram utilizadas 96 raízes de dentes unirradiculados que tiveram seus canais contaminados com suspensões dos microrganismos por 28 dias. Após a coleta de confirmação, os canais foram instrumentados com solução salina e divididas de acordo com a medicação intracanal utilizada: hidróxido de cálcio [Ca(OH)2] + solução salina; clorexidina gel 2% (CLX); Ca(OH)2 + CLX; própolis (PRO); PRO + Ca(OH)2; gengibre (GENG); GENG + Ca(OH)2; solução salina. Foram realizadas as seguintes coletas do conteúdo do canal radicular: coleta de confirmação (após 28 dias de contaminação), 1a coleta (imediatamente após a instrumentação), 2ª coleta (imediatamente após 14 dias da ação da MIC), 3ª coleta (7 dias após remoção da MIC). Para todas as coletas foram avaliadas: a) atividade antimicrobiana; b) quantificação de endotoxinas pelo teste cromogênico do lisado de amebócitos de Limulus. Os resultados foram submetidos aos testes estatísticos Kruskal-Wallis e Dunn (5%). Verificou-se que todas as MIC foram capazes de eliminar os microrganismos dos canais radiculares, entretanto, o Ca(OH)2 não foi capaz de eliminar completamente C. albicans e E. faecalis. Verificou-se que as MIC contendo Ca(OH)2 foram capazes de diminuir significativamente as endotoxinas dos canais radiculares, sendo semelhantes entre si e diferentes do grupo salina. As medicações CLX, PRO, GENG e salina foram semelhantes entre si. Conclui-se que todas as MIC foram capazes de eliminar os microrganismos do canal radicular e reduzir a quantidade de endotoxinas dos canais radiculares, entretanto, as MIC à base de hidróxido... (Resumo completo clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The purpose of this study was to evaluate the effectiveness of glycolic propolis and ginger extracts, calcium hydroxide, chlorhexidine gel and associations as intracanal medication (ICM) on Candida albicans, Enterococcus faecalis, Escherichia coli and endotoxins in root canals. Ninety-six roots of single-rooted teeth were contaminated with suspensions of the microorganisms for 28 days. After the confirmation collection, the canals were instrumented with saline and divided according to the intracanal medication used: calcium hydroxide [Ca(OH)2] + saline; 2% chlorhexidine gel (CLX); Ca(OH)2 + CLX; propolis (PRO); PRO + Ca(OH)2; ginger (GENG); GENG + Ca(OH)2; saline. Samples of the root canal content were performed in the following periods: confirmation collection (after 28 days of contamination), 1st collection (immediately after instrumentation), 2nd collection (immediately after 14 days of the action of ICM), 3rd collection (7 days after removal of the ICM). All samples were analyzed according to the following parameters: a) antimicrobial activity, b) quantification of endotoxins by the chromogenic Limulus amoebocyte lysate assay. The results were statistically analyzed by the Kruskal-Wallis and Dunn tests (5%). It was verified that all ICM were able to eliminate the microorganisms from the root canals; however, the Ca(OH)2 was not able to completely eliminate C. albicans and E. faecalis. It was verified that ICM containing Ca(OH)2 were able to significantly decrease endotoxins from the root canals, being similar to each other and to the saline group. The medications CLX, PRO, GENG and saline were similar to each other. It was concluded that all ICM were able to eliminate the microorganisms from the root canal and reduce the amount of endotoxins from the root canals. However, the ICM containing calcium hydroxide were more effective in neutralizing endotoxins / Doutor

Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Célia Regina Gonçalves e Silva / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Resumo: A técnica da espectroscopia infravermelha por transformada de Fourier (FT-IR) vem sendo largamente empregada como uma abordagem rápida e simples para a identificação de microrganismos, incluindo a do gênero Candida. A proposta deste estudo foi avaliar o emprego da microespectroscopia FT-IR na identificação e discriminação de 5 cepas clínicas de Candida albicans e 3 de Candida glabrata, as quais foram identificadas previamente por meio de métodos convencionais, e mais duas cepas ATCC de cada espécie. As amostras foram analisadas em triplicata, a partir de culturas independentes, por meio de filmes finos obtidos da suspensão em solução salina estéril a 0,85% da biomassa da colônia que ficou incubada por 24 horas em placas com ágar Saboraud Dextrose. Dez espectros com 32 varreduras foram obtidos na forma de ponto em 10 regiões selecionadas aleatoriamente nas amostras. A média foi obtida dos dez espectros de cada amostra para a análise estatística multivariada, dada pela análise de cluster. Além disso os espectros foram transformados em primeira derivada e três janelas espectrais foram determinadas (900-1250 cm-1, 1300-1600 cm-1, 2800-3000 cm-1). A representação dos resultados foi dada pela construção de um dendograma. Nesse, foi possível separar em dois grupos distintos as duas espécies de Candida estudadas. Dessa forma, pode-se concluir que a microespectroscopia FT-IR foi capaz de identificar e discriminar cepas clínicas de Candida albicans e de Candida glabrata, sendo um método promissor para identificação de leveduras / Abstract: The technique of infrared spectroscopy Fourier transform (FT-IR) has been widely used as a new approach for rapid identification and simple micro-organisms, including the genus Candida. The purpose of this study was to evaluate the use of FT-IR microspectroscopy for the identification and discrimination of 5 clinical strains of Candida albicans and Candida glabrata 3, which were previously identified by conventional methods, and two-standard strains of each species. The samples were analyzed in triplicate from independent cultures by means of thin films obtained from a suspension in sterile saline and 0.85% of the biomass of the colony that was incubated for 24 hours in Sabouraud dextrose agar plates. Ten spectra with 32 scans were obtained in 10 randomly selected regions in the samples.The average of ten spectra was obtained from each sample for the multivariate analysis, given by cluster analysis. In addition, three windows were determined spectral (900-1250 cm-1, 1300-1600 cm-1, 2800-3000 cm-1) and the spectra were transformed into first derivative. The representation of the results was given by the construction of a dendrogram. In this, we separated into two groups of two Candida species studied. Thus, one can conclude that the FT-IR microspectroscopy was able to identify and distinguish clinical isolates of Candida albicans and Candida glabrata is an important method for identification of yeasts / Mestre

Orientador: Ana Cláudia Pavarina / Banca: Carlos Eduardo Vergani / Banca: Iguatemy Lourenço Brunetti / Banca: Helena de Freitas Oliveira Paranhos / Banca: Marcelo Fabiano Gomes Boriollo / Resumo: A irradiação com microondas tem sido recomendada para a desinfecção de próteses odontológicas de resinas acrílicas devido ao seu poder inibitório sobre os microrganismos. Entretanto, as alterações celulares provocadas pela irradiação e que levam à inativação dos microrganismos presentes nas próteses não estão esclarecidas. O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos das microondas sobre células de Candida albicans, por meio de parâmetros de contagem celular e de liberação de substâncias intracelulares. Foram obtidas culturas de C. albicans de 24 horas em Tryptic Soy Broth (TSB) a partir de cepas padrão (ATCC 10231). As células foram centrifugadas, lavadas e ressuspensas em 400 mL de água destilada gelada na concentração de 108 cél/mL. Essa suspensão foi dividida em experimental e controle. A suspensão experimental (200 mL) foi colocada em um béquer de 500 mL contendo uma prótese total acrílica estéril e irradiada por microondas durante 6 min a 650 W. A suspensão controle não foi submetida à irradiação. Para ambas as suspensões, foram realizadas diluições seriadas para contagem celular em câmara de Neubauer, utilizando a entrada do corante azul de Metileno, como indicativo de alteração de permeabilidade de membrana. Alíquotas diluídas também foram semeadas em Agar Sabouraud Dextrose (ASD). Alíquotas não diluídas foram analisadas quanto à densidade óptica (DO) a 550 nm. Para a quantificação de substâncias liberadas, as células foram eliminadas das suspensões por centrifugação e filtragem e a solução resultante foi liofilizada. O conteúdo liofilizado foi ressuspenso em 5 mL de água destilada e analisado pelos seguintes métodos: Microprote e Sensiprote, para quantificação de proteínas; potenciometria, para quantificação de Na+ e K+; Liquiform, ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Microwaves have been used in the disinfection of acrylic resin dentures as a result of its inhibitory effect on microorganisms. However, much controversy exists concerning the lethal effects of microwave radiation on microorganisms. Evaluating the presence of significant differences on cell counts and substances released between irradiated and non-irradiated Candida albicans cell suspensions was the aim of this study. A stock C. albicans strain (ATCC 10231) was cultured in 600 mL of Tryptic Soy Broth (TSB) at 37ºC on a rotating shaker. The cells were centrifuged, water-washed and resuspended in distilled cold water to a final concentration of 108 cell/mL. The cell suspensions were equally divided in a 200 mL experimental suspension, which was placed in a 500 mL beaker with an acrylic resin denture inside and irradiated for 6 min at 650 W. The control suspension (200 mL) was not submitted to irradiation. Aliquots of both suspensions were serially diluted and counting in a Neubauer chamber using the uptake of Methylene blue dye as indicative of alterations in membrane cell permeability. Serially diluted aliquots were spread on Agar Sabouraud dextrose (ASD) plates for viability assay. Non-diluted aliquots were spectrophotometrically measured at 550 nm. To quantify the intracellular released substances, the cells were separated from the suspensions by centrifugation followed by filtering, and the resulting solution was freeze-dried. This liophylized was resuspended in 5 mL of cold water and submitted to optical density (OD) analyses of protein contents by the Microprote and Sensiprote systems; potenciometry analysis of Na+ and K+ contents; Ca++ contents analysis by Liquiform; and nucleic acids contents analysis by OD measurements at 260 nm...(Complete abstract, click electronic access below) / Doutor

Orientador: Ana Luicia Machado / Banca: Carlos Eduardo Vergani / Banca: Valtencir Zucolotto / Resumo: Apesar do uso de drogas antifúngicas no tratamento da estomatite protética, freqüentemente a infecção é persistente e a resistência microbiana tem sido observada nos biofilmes de Candida albicans. Dessa forma, existe a necessidade de se desenvolver outros agentes antimicrobianos tais como as nanopartículas de prata (AgNPs). Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de uma solução preparada de AgNPs sobre C. albicans em suspensão. Além disso, os efeitos da incorporação de diferentes concentrações da solução de AgNPs em uma resina acrílica para base de prótese e o armazenamento por períodos de até 180 dias no ângulo de contato, adesão e formação de biofilme foram avaliados. A solução de AgNPs foi sintetizada por meio de redução química utilizando borohidreto de sódio (NaBH4) como agente redutor e polivinil álcool (PVA) como estabilizante, e foi caracterizada utilizando espectroscopia UV-visível (UV-vis), espectrometria de infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) e espalhamento de luz dinâmico (DLS). A susceptibilidade antimicrobiana da solução de AgNPs de diferentes concentrações (de 1000 a 20 ppm) foi avaliada em C. albicans suspensão (ATCC 90028). A solução de AgNPs foi também misturada com o pó da resina para produzir resinas acrílicas com AgNPs incorporadas nas concentrações finais de 1000, 750, 500, 250 e 30 ppm. Resina sem AgNPs foi utilizada como controle. Amostras em forma de discos (13 × 2 mm) de cada concentração (n=72) foram preparadas e armazenadas em PBS estéril por 0, 7, 90 e 180 dias (n=18). Após esses períodos, os ângulos de contato foram mensurados em um goniômetro. A seguir, 9 amostras de cada concentração foram utilizadas para o teste de aderência de C. albicans (90 minutos de incubação), e 9 para o teste de formação de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Despite the use of antifungal drugs to treat denture stomatitis, infection is often persistent and antifungal resistance has been observed in C. albicans biofilms. Therefore, there is a need to develop alternative antimicrobial agents such as silver nanoparticles (AgNPs). Thus, the objective of this study was to evaluate the effect of a prepared AgNPs aqueous solution against C. albicans suspension. Additionally, the effects of incorporation of different concentrations of the AgNPs solution into a denture base acrylic resin and storage for up to 180 days on the contact angle, C. albicans adhesion and biofilm formation were evaluated. The AgNPs solution was synthesized by chemical reduction using sodium borohydride as reducing agent and polyvinyl alcohol as stabilizer, and was characterized by UV-visible spectroscopy, Fourier transform infrared spectroscopy and Dynamic Light Scattering. The antimicrobial susceptibility of AgNPs solution of different concentrations (from 1000 to 20 ppm) was performed against C. albicans suspension (ATCC 90028). The AgNPs solution was also mixed with the acrylic powder to produce silver-incorporated acrylic resins at the final concentrations of 1000, 750, 500, 250 and 30 ppm. Resin without AgNPs was used as control. Disk-shaped samples (13 × 2 mm) of each concentration (n=72) were prepared and stored in sterile PBS for 0, 7, 90 and 180 days (n=18). After the storage periods, the contact angles were measured in a goniometer. Then, 9 samples of each concentration... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Carlos Eduardo Vergani / Banca: Eunice Teresinha Giampaolo / Banca: Cláudia Helena Lovato da Silva / Resumo: A Candida albicans tem sido considerada o principal agente etiológico da estomatite protética, uma das infecções mais comumente observadas em pacientes usuários de próteses removíveis. A adesão de C. albicans à superfície das próteses é o primeiro passo para o desenvolvimento da estomatite protética. Assim, uma adequada higienização das próteses é essencial para prevenir a formação de biofilme microbiano sobre a superfície protética e, conseqüentemente, o início e propagação desta infecção. O objetivo deste estudo foi avaliar a efetividade da escovação com diferentes soluções (água destilada, dentifrício, digluconato de clorexidina a 2%, hipoclorito de sódio a 1% e Polident fresh cleanse®) na redução da viabilidade de um biofilme maduro de C. albicans, desenvolvido sobre uma resina termopolimerizável para base de prótese. Para isso, 90 corpos-de-prova circulares foram confeccionados, esterilizados e inoculados com uma suspensão de 107 células/mL de C. albicans. Para a formação do biofilme, todos os corpos-de-prova foram incubados por 48 h a 37 °C sob agitação. A seguir, os corpos-de-prova foram aleatoriamente divididos (n=9) e individualmente submetidos à escovação ou exposição por 90 s nas diferentes soluções avaliadas. Os espécimes imersos em água destilada pelo mesmo período de tempo foram utilizados como controle positivo. Para verificar a efetividade da escovação e dos agentes de limpeza, os corpos-de-prova foram submetidos à avaliação da atividade metabólica das células não removidas de C. albicans por meio do teste do XTT. Os resultados obtidos foram analisados estatisticamente pelos testes de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis (α=0.05). A escovação com todos os agentes de limpeza apresentou redução significativamente superior (p<0,0001) na viabilidade do biofilme quando comparada à exposição dos corpos-de-prova... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The adhesion of C. albicans to surfaces is the prerequisite for occurrence of denture stomatitis, a common disease diagnosed among denture wearers. Therefore, a strict routine of denture cleansing is essential to prevent biofilm formation on the acrylic denture surface and the onset of this infection. Thus, the aim of the current study was to investigate the effectiveness of combining toothbrushing and cleansing agents (dentifrice, 2% chlorhexidine gluconate, 1% sodium hypochlorite, and Polident fresh cleanse®) in inactivating C. albicans biofilm. Circular specimens (10 x 2 mm) of acrylic resin denture base material were made, sterilized, and individually inoculated with C. albicans (1x107 colony-forming units/mL). After incubation (37 °C/48 h), the specimens were divided into 10 experimental groups (n=9): 5 subjected to toothbrushing with different cleansing agents and 4 exposed to the cleansing agents without toothbrushing. Non-cleansed specimens were used as positive controls. The viability of cells was evaluated by XTT reduction method. Mann-Whitney and Kruskal-Wallis tests were used for comparative analysis between the two methods of cleansing and the cleansing agents, respectively (α=0.05). Toothbrushing with all agents was significantly more effective (p<0.0001) in reducing biofilm viability than exposure to the cleansing agents only. Exposure to all cleansing agents reduced significantly (p<0.0001) the biofilm viability, with 2% chlorhexidine gluconate being most effective (p<0.0001). Toothbrushing with 2% chlorhexidine gluconate and 1% sodium hypochlorite resulted in 100% inactivation of the biofilm. The use of cleansing agents as an adjunct to toothbrushing is an effective method to reduce C. albicans biofilm viability on denture base resins. / Mestre