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Contribuição à quimiotaxonomia de Anacardiaceae : estudo fitoquímico e das atividades antifúngicas e antitumorais de Astronium fraxinifolium Schott ocorrente no cerrado

Moura, Camila Miranda 01 August 2014 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-11-18T18:04:29Z No. of bitstreams: 1 2014_CamilaMirandaMoura.pdf: 3899556 bytes, checksum: 84a9fb39e5724c74288152f91a7500df (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2014-11-19T10:06:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_CamilaMirandaMoura.pdf: 3899556 bytes, checksum: 84a9fb39e5724c74288152f91a7500df (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-19T10:06:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_CamilaMirandaMoura.pdf: 3899556 bytes, checksum: 84a9fb39e5724c74288152f91a7500df (MD5) / As infecções fúngicas são agravos persistentes à saúde pública. O atual quadro das micoses revela o aumento de sua incidência mundial e o surgimento de espécies com resistência intrínseca a antifúngicos disponíveis. Diante disso, a comunidade científica tem se empenhado na busca de alternativas terapêuticas. Os produtos naturais têm sido intensamente investigados quanto à atividade biológica. No Brasil, o bioma Cerrado se destaca pela rica diversidade química, sendo fonte promissora para o isolamento de metabólitos secundários ativos. Assim, este trabalho avaliou a atividade de extratos e substâncias da espécie do Cerrado, Astronium fraxinifolium Schott (Anacardiaceae), em leveduras, dermatófitos e células tumorais. Em uma triagem de atividade de extratos dos órgãos de A. fraxinifolium em diferentes polaridades, o extrato acetato de etila da casca da raiz foi o mais ativo, apresentando amplo espectro de ação em todos os fungos testados com valores de CIM de 0,24 a 125 ?g/mL. A partir desse extrato foram isolados dois triterpenos do tipo cicloartano: 3-?-cicloartenol (1) e 3-?-cicloeucalenol (2). Com interesse em contribuir para a quimiotaxonomia de Anacardiaceae, o extrato acetato de etila das folhas também foi submetido ao fracionamento cromatográfico devido ao seu perfil químico e ao interesse na fitoquímica da espécie. Desse extrato foram identificados uma cetona esteroidal - tremulona (3) - e dois triterpenos pentacíclicos - ?-amirina (4) e lupeol (5). Os compostos 1 e 2 apresentaram efeito citotóxico em células leucêmicas da linhagem HL-60 com valores de CI50 de 10,8 ?g/mL e 9,2 ?g/mL, respectivamente. __________________________________________________________________________ ABSTRACT / Fungal infections are persistent public health issues. The current picture of mycoses reveals an increase in their global incidence and an arise of species with intrinsic resistance to available antifungal agents. Seeing that, the scientific community has been searching for therapeutic alternatives. The natural products have been thoroughly investigated for their biological activity. In Brazil, the Cerrado biome stands out for its rich chemical diversity, being a promising source for the isolation of active secondary metabolites. Therefore, the present work evaluated the activity of extracts and substances from the Cerrado’s species, Astronium fraxinifolium Schott (Anacardiaceae), in yeasts, dermatophytes and tumoral cells. In a triage of activity from A. fraxinifolium organs’ extracts in different polarities, the ethyl acetate extract from the root’s bark was the most active, presenting broad-spectrum action in all the fungi tested with MIC values from 0.24 to 125 μg/ml. From this extract two cycloartane-type triterpenes were isolated: 3-β-cycloartenol (1) and 3-β-cycloeucalenol (2). In order to contribute to the chemotaxonomy of Anacardiaceae, the ethyl acetate extract from the leaves was also submitted to chromatographic fractionation due to its chemical profile and to the interest in the species’ phytochemistry. From this extract were identified a steroidal ketone – tremulone (3) – and two pentacyclic triterpenes – β-amyrin (4) and lupeol (5). The compounds 1 and 2 showed cytotoxic effect on leukemic cells line HL-60 with IC50 values of 10.8 μg/ml and 9.2 μg/ml, respectively.
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Desenvolvimento de uma formulação tópica contendo fluconazol nanoencapsulado para o tratamento de candidíase vulvovaginal / Development of a topical formulation with cationic nanoparticles encapsulating fluconazole for improving the topical treatment of vulvovaginal candidiasis

Reis, Thaiene Avila 26 February 2014 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2014. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-04-28T15:21:49Z No. of bitstreams: 1 2014_ThaieneAvilaReis.pdf: 2252354 bytes, checksum: 92742506ffd4802424354fabceb96f52 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-04-28T16:12:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_ThaieneAvilaReis.pdf: 2252354 bytes, checksum: 92742506ffd4802424354fabceb96f52 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-28T16:12:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_ThaieneAvilaReis.pdf: 2252354 bytes, checksum: 92742506ffd4802424354fabceb96f52 (MD5) / A candidíase vulvovaginal (CVV) é uma infecção causada por fungos da espécie Candida sp. Os tratamentos são comumente realizados através da administração oral, sendo o fluconazol (FLU) o mais utilizado. Notadamente, a via de administração tópica é mais vantajosa que a oral, por reduzir os efeitos adversos sistêmicos. No entanto, as formulações convencionais proporcionam a absorção incompleta ou em baixas concentrações do fármaco, comprometendo o sucesso deste tipo de terapia. Este trabalho teve como objetivo desenvolver e caracterizar uma formulação contendo nanopartículas de quitosana (NP-QS) encapsulando o FLU (NP-FLU) e avaliar a capacidade dessa formulação em aderir-se à mucosa e sustentar a liberação do fármaco para esse tecido. Métodos analíticos para doseamento do FLU em solução ou extraído da mucosa utilizando Cromatografia Líquida de Alta Eficiência foram validados. A solubilidade do FLU em meio aquoso foi determinada como sendo igual a 5,8 mg/mL em temperatura ambiente. As NP-QS e NP-FLU foram obtidas utilizando a técnica de geleificação ionotrópica e caracterizadas pelo tamanho, índice de polidispersividade (IPD), potencial zeta e morfologia. As NP-QS apresentaram forma esférica, tamanho de 271,72 ± 59,46 nm, IPD de 0,345 ± 0,060 e potencial zeta igual a +46,16 ± 6,72 mV. As NP-FLU encapsularam 40% do fármaco e não diferiram significativamente (p < 0,05) das NP-QS quanto aos parâmetros de caracterização. As NP-FLU apresentaram estabilidade física durante 90 dias. A incubação das NP-FLU com NP de mucina e posterior análise de tamanho de partículas indicou que as NP-QS apresentam propriedades mucoadesivas. Os estudos de liberação e permeação in vitro, utilizando membrana de acetato e mucosa bucal de suínos, respectivamente, foram realizados em células de Franz comparando-se quatro formulações: uma solução de FLU (SOL-FLU), as NP-FLU, gel contendo FLU (G-FLU) e gel contendo as NP-FLU (G-NP-FLU). As formulações contendo as NP sustentaram pelo menos 2 vezes a liberação do FLU em comparação à SOL-FLU. Não foi possível quantificar o FLU que permeou a mucosa durante as 2 h de experimento a partir de nenhuma das formulações avaliadas. No entanto, o FLU penetrou a mucosa a partir da formulação NP-FLU em quantidade 1,5 vezes menor se comparado à SOL-FLU. Não houve diferença significativa (p<0,05) nas quantidades recuperadas da mucosa a partir das NP-FLU e G-NP-FLU, indicando que as NP conseguem sustentar melhor a liberação de FLU para a mucosa do que o gel somente. A formulação desenvolvida contendo NP-FLU, portanto, mostrou-se capaz de (i) permanecer por mais tempo em contato com a mucosa e (ii) promover a liberação sustentada do FLU para a mucosa, mostrando-se como uma alternativa eficiente para o tratamento tópico da CVV. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Vulvovaginal candidiasis (VVC) is an infection attributed to an overgrowth of Candida species, mainly C. albicans. The treatments are often carried out by the oral administration, like fluconazole (FLU). It is known that topical treatment is more advantageous than oral, because it reduces systemic side effects. However, conventional formulations provide incomplete or low concentrations of drug into the mucous, reducing the success of this kind of therapy. The purpose of this work was to develop and characterize a hydrophilic formulation containing chitosan nanoparticles (CS-NP) loading FLU (FLU-NP) and evaluate its ability to adhere to mucous and sustain drug delivery to this tissue. Analytical HPLC methods were properly validated for determination and recovery of FLU from mucous FLU solubility was determined as being 5.8 mg/mL at room temperature. CS-NP and FLU-NP were prepared by the ionotropic gelation technique and characterized according to their size, polydispersity index (PDI), zeta potential and morphology. CS-NP presented spherical shape, 271.72 ± 59.46 nm of size, PDI equal to 0.345 ± 0.060, zeta potential of +46.16 ± 6.72 mV and were physically stable for 90 days. FLU-NP were very similar to CS-NP, with encapsulation efficiency of 40%. FLU-NP incubation with mucine NP following by particle size determination indicated they possess mucoadhesive properties. Release and permeation studies were carried out in vitro in diffusion Franz cells using celulose acetate membrane and porcine mucous respectively, from four different formulations: a FLU solution (FLU-SOL), FLU-NP, a FLU gel (FLU-G) and a gel containing the FLU-NP (G-FLU-NP). All the tested formulations sustained at least 2-fold FLU release in comparison to the FLU-SOL. FLU did not permeate the mucous membrane in detectable amounts during the 2 h of experiments from any evaluated formulations. However, FLU penetrated the mucous membrane in amount 1.5-fold less from the FLU-NP formulation if compared with FLU-SOL. There was no significant quantities recovered from the mucous membrane from FLU-NP and G-FLU-NP, indicating that the NP are able to sustain FLU delivery to the mucous membrane, better than the formulation FLU-G. In conclusion, the developed formulation containing NP was capable of (i) remaining for longer periods in contact to the mucous membrane and (ii) performing a sustained delivery of FLU to the mucous membrane, indicating to be efficient for the treatment of VVC.
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Estratégias para o conhecimento da coccidioidomicose : uma doença emergente no Nordeste brasileiro / Strategies for the knowledge of coccidioidomicose - an emergent illness in the Brazilian Northeast

Cordeiro, Rossana de Aguiar January 2006 (has links)
CORDEIRO, Rossana de Aguiar. Estratégias para o conhecimento da coccidioidomicose : uma doença emergente no nordeste brasileiro. 2006. 109 f. Tese (Doutorado) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina. Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Fortaleza, 2006 / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-10-06T15:52:40Z No. of bitstreams: 1 2006_tese_racordeiro.pdf: 1752948 bytes, checksum: b5e5aa361d6e54b745c5d53d311964db (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2011-10-07T16:39:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_tese_racordeiro.pdf: 1752948 bytes, checksum: b5e5aa361d6e54b745c5d53d311964db (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-07T16:39:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_tese_racordeiro.pdf: 1752948 bytes, checksum: b5e5aa361d6e54b745c5d53d311964db (MD5) Previous issue date: 2006 / Coccidiodomycosis is a systemic infection caused by the dimorphic fungi species Coccidioides immitis and C. posadasii. The disease affects both humans and animals, and is considered endemic in the semiarid areas of Ceará State (Northeast Brazil), where it is caused by C. posadasii. The aims of this study were to analyse the phenotypical characteristics of C. posadasii and to develop culture independent methods for improving of the laboratorial diagnosis of coccidioidomycosis. The phenotypical study was conducted with 10 strains (7 from clinical and 3 from ambiental sources) by macro and micromorphology analyses; in vitro growth under different conditions of salinity, temperature and pH; nutritional analysis and antimicrobial susceptibility tests. In addition, methods of antigens extraction and amplification of C. posadasii DNA directly in sputum were also tested. The mycological analysis showed three morphological variations of C. posadasii strains cultivated in potato agar, Sabouraud agar and YEG agar. Regarding to micromorphology, it was observed that arthroconidia counts were related to colony aging and texture. Growth rates of C. posadasii strains were inhibited by high salt concentrations, temperatures above 40° C, but were not affected by the range of pH. Nutritional analyses showed that several compounds, including the oxidized ions, nitrite and nitrate, were efficiently metabolized by C. posadasii strains as carbon and/ or nitrogen sources. The antifungal susceptibility analysis showed that all of the strains of C. posadasii were sensitive to amphotericin B, caspofungin and the azoles ketoconazole, itraconazole, fluconazole, and voriconazole. With the exception of pyrazinamide, all of the tested drugs interfered with the in vitro growth of C. posadasii. Combined antituberculosis drugs also inhibit fungal growth in vitro. Experimental protocols produced a stable and immunoreactive antigen, suitable in presumptive serologic tests for the diagnosis of coccidioidomycosis. Molecular identification of C. posadasii was achieved by PCR amplification of the specific pra gene directly from filamentous cultures and sputum with fungal parasitic structures. The data obtained by phenotypical analyses may be useful in future studies for biological distinction of C. immitis and C. posadasii species. The results of this study provided approaches for a better understanding of coccidioidomycosis in Brazil / A coccidioidomicose é uma infecção sistêmica causada pelos fungos dimórficos Coccidioides immitis e C. posadasii. A doença acomete o homem e uma grande variedade de animais, sendo endêmica no Estado do Ceará, onde é causada pela espécie C. posadasii. O presente estudo buscou analisar as características fenotípicas de C. posadasii e desenvolver métodos independentes de cultivo para o diagnóstico laboratorial da coccidioidomicose. O estudo fenotípico de 10 cepas (7 isolados clínicos e 3 isolados ambientais) foi conduzido por análises macro e micromorfológica, análise da cinética de crescimento frente a estresse salino, térmico e de pH; testes de assimilação de fontes de carbono e nitrogênio e determinação do perfil de sensibilidade frente a antimicrobianos. Adicionalmente, foram avaliados métodos de extração de antígenos de cepas locais de C. posadasii e amplificação de seqüências genéticas exclusivas do fungo em escarro. Foram observadas três variações morfológicas das cepas de C. posadasii cultivadas em ágar batata, ágar Sabouraud dextrose a 2% e ágar YEG. Com relação a micromorfologia, foi detectado que a quantificação de artroconídios estava relacionada à idade e a morfologia das colônias. A avaliação da cinética de crescimento das cepas, in vitro, revelou que as cepas de C. posadasii são inibidas por elevada concentração salina e temperaturas acima de 40 C, mas não sofrem influência quanto à variação de pH do meio. A análise nutricional demonstrou que vários compostos, inclusive os íons oxidados nitrito e nitrato, podem ser utilizados como fontes de carbono e/ou nitrogênio. Todas as cepas de C. posadasii foram sensíveis às drogas antifúngicas anfotericina B, caspofungina e aos derivados azólicos cetononazol, itraconazol, fluconazol e voriconazol. Foi observado que, a exceção da pirazinamida, todos as demais drogas antituberculose alteraram o crescimento das cepas de C. posadasii in vitro. Combinações formadas pelos quimioterápicos antituberculose também mostraram efeito inibitório sobre o crescimento das cepas. Os protocolos experimentais culminaram com uma preparação antigênica estável e imunoreativa, adequada para utilização em testes sorológicos presuntivos para diagnóstico da coccidioidomicose. A identificação molecular de C. posadasii foi realizada, com sucesso, a partir da amplificação da seqüência do gene pra diretamente de culturas filamentosas e escarro contendo estruturas parasitárias do fungo. Acredita-se que as características fenotípicas descritas para as cepas de C. posadasii poderão auxiliar estudos futuros que objetivem a individualização biológica das espécies C. immitis e C. posadasii. Os resultados desse estudo contribuíram para o estabelecimento de estratégias para o maior conhecimento da coccidioidomicose no Brasil
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Detecção de resistência as Equinocandinas de Isolados Clínicos de Candida parapsilosis stricto sensu, Candida orthopsilosis e Candida metapsilosis através de Espectrometria de massas

ROBERTO, Ana Emília de Medeiros 01 March 2016 (has links)
ROBERTO, Ana Emília de Medeiros, também é conhecida em citações bibliográficas por: MEDEIROS, A. E. R. / Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-11T20:48:52Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Emília de Medeiros Roberto.pdf: 2427887 bytes, checksum: 98fa3502db60df7b1feef1a3e2887aa1 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-13T22:51:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Emília de Medeiros Roberto.pdf: 2427887 bytes, checksum: 98fa3502db60df7b1feef1a3e2887aa1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:51:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Emília de Medeiros Roberto.pdf: 2427887 bytes, checksum: 98fa3502db60df7b1feef1a3e2887aa1 (MD5) Previous issue date: 2016-03-01 / CAPES / Observa-se um contínuo aumento na resistência de espécies de Candida aos antifúngicos disponíveis. Faz-se necessário que o diagnóstico seja oportuno e verossímil, associado à indicação terapêutica que é corretamente direcionada a partir de testes de sensibilidade antifúngica in vitro. A utilização da espectrometria de massas através da técnica de Matrix Assisted Laser Desorption/Ionisation Time-Of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) que reduz o tempo de diagnóstico em comparação com métodos de rotina já é uma realidade, contudo estudos apontam a capacidade dessa metodologia em identificar cepas resistentes pela detecção de mudanças mínimas no perfil proteíco da cepa após exposição ao fármaco. Assim, objetivou-se diagnosticar, em pacientes internados em UTI, isolados clínicos do complexo Candida parapsilosis lato sensu (Candida parapsilosis stricto sensu, Candida orthopsilosis e Candida metapsilosis) através da técnica proteômica Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) e correlacionar sua sensibilidade/resistência às equinocandinas com mudanças no espectro protéico. Trata-se de uma pesquisa experimental analítica com abordagem qualitativa. Amostras sanguíneas venosas foram coletadas entre agosto de 2014 e julho de 2015, a partir de pacientes internados em UTI, foram observadas ao exame direto e colhidas em frascos de hemocultura. As leveduras isoladas foram identificadas por MALDI-TOF MS e testes de sensibilidade antifúngica foram realizados através do CLSI frente a anidulafungina, caspofungina e micafungina. A detecção na resistência através da mudança mínima do plano espectral protéico obtida no MALDI-TOF MS, foi possível após o cruzamento de cada concentração do espectro com uma das duas concentrações extremas, máxima ou nula, onde formou-se uma matriz a partir do Índice de Correlação do Composto (ICC) utilizado para gerar mapas de calor. Foram diagnosticados 44 casos de candidemia, sendo 26 por Candida parapsilosis, dez C. albicans, dois casos por C. metapsilosis, dois C. orthopsilosis, dois por C. tropicalis, um C. haemulonii e um Candida sp. Vinte e oito (93,2%) isolados do complexo Candida parapsilosis foram sensíveis as equinocandinas de acordo com CLSI e 24 (79,9%) foram sensíveis de acordo com MALDI-TOF. A Concentração Inibitória Mínima e a Mudança Mínima no Perfil Protéico obtidos através do CLSI e MALDI-TOF, apresentaram concordância de 91,6%, 96,6% e 98,3% para anidulafungina, caspofungina e micafungina, respectivamente, frente os isolados de Candida parapsilosis. MALDI-TOF MS é capaz de determinar o breakpoint de uma levedura clínica após 15 horas de exposição ao antifúngico e permite predizer a melhor escolha antifúngica para pacientes críticos com candidemia. / Recently, there is an increase in resistance of Candida species to antifungal drugs available. It is necessary that the diagnosis is timely and credible associated with therapeutic indication that is directed from in vitro antifungal susceptibility testing. The use of mass spectrometry through the technique of Matrix Assisted Laser Desorption / Ionisation Time-Of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS), which reduces the time of diagnosis as compared to routine methods is already a reality, however pointed studies this methodology can identify resistant strains by detecting minimal changes in protein profile of strain after exposure. Thus, the objective was to diagnose in ICU patients, clinical isolates of complex Candida parapsilosis lato sensu (Candida parapsilosis stricto sensu, Candida orthopsilosis and Candida metapsilosis) through proteomic technique Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) and correlate their sensitivity/resistance to echinocandins with changes in the protein spectrum. It is an analytical experimental research with qualitative approach. Venous blood samples were collected between August 2014 and July 2015, from ICU patients were observed in the direct examination and harvested in blood culture bottles. The yeasts were identified by MALDI-TOF MS and sensitivity tests were performed using CLSI antifungal and MALDI-TOF MS, compared to anidulafungin, caspofungin and micafungin. After crossing every spectrum concentration with one of the two extreme concentrations, maximum or zero, formed the matrix of Compound Correlation Index (ICC) used to generate heat maps. 44 cases of candidemia were diagnosed, 26 by Candida parapsilosis ten C. albicans, two cases of C. metapsilosis two C. orthopsilosis two by C. tropicalis, a C. haemulonii and one case of Candida sp. Twenty-eight (93.2%) isolates of Candida parapsilosis complex echinocandins according to CLSI and 24 were sensitive (79.9%) were sensitive according to MALDI-TOF. The Minimum Inhibitory Concentration and Minimum Change in Protein Profile obtained by CLSI and MALDI-TOF showed concordance of 91.6%, 96.6% and 98.3% for anidulafungin, caspofungin and micafungin, respectively, compared isolates Candida parapsilosis. MALDI-TOF MS is able to determine the breakpoint of a clinical yeast after 15 hours of exposure to antifungal and allows predicting the best antifungal choice for critically ill patients with candidemia
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Estudo químico e busca de substâncias bioativas de Garcinia brasiliensis

Arwa, Phanuel Saroni [UNESP] 22 February 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-22Bitstream added on 2014-06-13T21:07:18Z : No. of bitstreams: 1 arwa_ps_dr_araiq_parcial.pdf: 140184 bytes, checksum: f2d411778c9b9af9eb7533d4fc96e1e8 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-06-25T13:01:05Z: arwa_ps_dr_araiq_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-25T13:03:24Z : No. of bitstreams: 1 000718879_20160222.pdf: 127126 bytes, checksum: 8a2ae7d96951ff36a34f967d8659d0d8 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-02-22T11:12:48Z: 000718879_20160222.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-22T11:13:42Z : No. of bitstreams: 1 000718879.pdf: 2745649 bytes, checksum: a0fd20904df0ddfc1ca542753185938c (MD5) / A investigação fitoquímica de espécies vegetais contribui para a conservação e uso sustentável da diversidade vegetal no Estado de São Paulo através de estudos sobre diversidade química e busca de drogas potenciais, que incluem as atividades de bioprospecção e fiazem parte da estratégia de exploração racional de nossa biodiversidade. A planta selecionada para este estudo, Garcinia brasiliensis (família Clusiaceae), apresentou perfil químico com expressiva ocorrência de benzofenonas, conhecidas por seu potencial antimalárico, antioxidante, antibacteriano e antinflamatório. Os objetivos deste trabalho incluíram o estudo químico/biológico dos caules e folhas de Garcinia brasiliensis, com o isolamento e determinação estrutural de metabólitos secundários e avaliação de sua bioatividade. Apesar das plantas medicinais serem raramente utilizadas como antioxidantes na medicina popular, suas propriedades terapêuticas podem ser devidas a sua capacidade de sequestrar radicais livres de oxigênio, envolvidos em diversas patologias decorrentes do estresse oxidativo em sistemas biológicos. A ação antioxidante tem sido também apontada como forte indicativo de ação quimiopreventiva, associada à indução de enzimas destoxificantes do organismo como a quinona redutase, que pode evitar eventos iniciais da geração de tumores. O estudo fitoquímico dos extratos de folhas e galhos de G. brasiliensis resultou no isolamento ou identificação de diversas substâncias polifenólicas a partir de frações polares: os biflavonoides amentoflavona, podocarpusflavona, fukugetina, além de procianidina e seus trímeros e da benzofenona garcinol através do uso de técnicas cromatográficas e espetrométricas como CLAE-DAD, CLAE-EM, UV, IV e RMN. Os extratos de baixa polaridade foram analisados por CG-EM... / The phytochemical investigation of plant species contributes to conservation and sustainable use of São Paulo biodiversity. This project has addressed the phytochemical investigation of stems and leaves of Garcinia brasiliensis, with isolation, structural determination of secondary metabolites as well as evaluation of bioactivity. G. brasiliensis is a member of the Clusiaceae family with interesting secondary metabolites such as benzophenones which have potent antimalarial, antioxidant, antitumoral, antibacterial, antiinflamatory and chemoprevention capacity. Whereas medicinal plants are not used as antioxidants in popular medicine their therapeutic properties are derived from capacity to scavenge free radicals involved in oxidative stress. The antioxidant activity is indicative of chemoprevention associated with toxic enzymes such as quinone reductase that is associated with inhibition of tumor development. The phytochemical study of extracts from leaves and stems of G. brasiliensis led to the isolation or identification of several polyphenols from polar fractions: biflavonoids amenthoflavone, podocarpusflavone, fukugetin, in addition to procyanidin and its trimers and the benzophenone garcinol through chromatographic and spectrometric techniques as HPLC-DAD, HPLC MS, UV, IR and NMR. Low polarity extracts were analyzed by GC-FID and evidenced the presence of triterpenes and steroids, including stigmasterol,  -amirinone,  -amirin, taraxerol and lupeol, as major compounds. Metabolite target analysis was carried out using thin layer chromatographic tests with  -carotene and anisaldehyde as revealing agents aiming the detection of antioxidant compounds, in addition to inhibitory activity against T. cruzi, human and plant pathogenic fungi, malaria, acetylcholinesterase, and HIV protease. Best results were obtained for... (Complete abstract click electronic access below)
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Estudo de genes de Candida albicans com função desconhecida quanto à formação de biofilme, características biológicas e interação patógeno- hospedeiro

Costa, Anna Carolina Borges Pereira da [UNESP] 25 May 2015 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2016-04-01T17:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-25. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:10Z : No. of bitstreams: 1 000860821.pdf: 2915690 bytes, checksum: 1ff5640161c93a6edf44ddc1558a8eeb (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Candida albicans é um fungo oportunista capaz de causar infecções superficiais e até sistêmicas. A maioria das infecções é mediada pela formação de biofilme que confere resistência aos agentes antifúngicos e ao sistema imune, porém os mecanismos de desenvolvimento do biofilme e patogenicidade ainda não foram completamente elucidados. No presente estudo foram selecionados 9 genes de C. albicans com função desconhecida, dentre 34 cepas mutantes que apresentaram fenótipo alterado para formação de biofilme. Os biofilmes foram formados em placas de 96 poços ou discos de poliestireno e avaliados em diferentes tempos de desenvolvimento. A seguir foram construídas 4 cepas complementadas que foram avaliadas quanto à susceptibilidade a agentes estressantes, crescimento sob limitação de nutrientes e testes de filamentação. A arquitetura dos biofilmes foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os biofilmes também foram avaliados quanto à quantidade de β-1,3-glucana e quitina. Para os modelos de infecção, células epiteliais bucais (TR-146) foram utilizadas para análise de aderência, invasão e dano. A patogenicidade das cepas foi avaliada em ovos embrionados de galinha durante 7 dias, após a inoculação das cepas. Células planctônicas e biofilmes foram submetidos a testes antifúngicos com os agentes fluconazol, anfotericina B e caspofungina. A reação em cadeia da polimerase quantitativa foi realizada para verificar a expressão dos genes MRV8 e NDT80 em células fúngicas em interação com células epiteliais e MRV8, MRV1 e MRV6 em células crescidas em biofilme. Os resultados foram analisados por teste t de Student, ANOVA, Tukey e testes de Log-rank (Mantel-Cox) (p < 0,05). Foram construídas 4 cepas complementadas para os genes selecionados ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847 e MRV8. A função de ORF19.823 ainda permanece desconhecida, pois nãofoi observado fenótipo msignificativo para a cepa.... / Candida albicans is an opportunistic fungi capable of causing superficial and systemic infections. Most of infections are mediated by biofilm formation which confers resistance to antifungal agents and immune system, but the mechanisms of biofilm development and pathogenicity were not thoroughly elucidated yet. In the presente study, 9 unknown function genes of C. albicans were selected among 34 mutant strains that presented altered phenotype for biofilm formation. The biofilms were formed on 96-well microtitle plates or on polystyrene disks and evaluated in different time intervals. Next, 4 complemented strains were constructed and evaluated for susceptibility to stressor agents, growth under nutrient limitation and filamentation tests. The biofilm architecture was analyzed by scanning electron microscopy (SEM). The biofilms were also assessed as the quantity of β-1,3-glucan and chitin. For the infection models, buccal epithelial cells (TR-146) were used for adherence, invasion and damage assays. The pathogenicity of the strains was evaluated in embrionated chicken eggs for 7 days, after inoculation of the strains. Planktonic cells and biofilms were submitted to antifungal tests with fluconazole, amphotericin B, and caspofungin. Quantitative polymerase chain reaction was performed to verify the expression of MRV8 and NDT80 genes in fungal cells in interaction with epithelial cells and MRV8, MRV1, and MRV6 genes in cells grown in biofilm. The results were submitted to the Student t test, ANOVA, Tukey's test, and Log-rank test (Mantel-Cox) (p < 0.05). Four complemented strains were constructed for the selected genes ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847, and MRV8. The function of the ORF19.823 is still unknown, because the mutant strain did not show any significative phenotype for the tests performed. The mutant strain for the ORF19.7170 caused less damage on epithelial cells, but the result was not significant and the gene was dispensable... / FAPESP: 2011/21346-7
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Estudo químico e busca de substâncias bioativas de Garcinia brasiliensis /

Arwa, Phanuel Saroni. January 2013 (has links)
Orientador: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Ana Helena Januário / Banca: Patrícia Sartorelli / Banca: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Alberto José Cavalheiro / Resumo: A investigação fitoquímica de espécies vegetais contribui para a conservação e uso sustentável da diversidade vegetal no Estado de São Paulo através de estudos sobre diversidade química e busca de drogas potenciais, que incluem as atividades de bioprospecção e fiazem parte da estratégia de exploração racional de nossa biodiversidade. A planta selecionada para este estudo, Garcinia brasiliensis (família Clusiaceae), apresentou perfil químico com expressiva ocorrência de benzofenonas, conhecidas por seu potencial antimalárico, antioxidante, antibacteriano e antinflamatório. Os objetivos deste trabalho incluíram o estudo químico/biológico dos caules e folhas de Garcinia brasiliensis, com o isolamento e determinação estrutural de metabólitos secundários e avaliação de sua bioatividade. Apesar das plantas medicinais serem raramente utilizadas como antioxidantes na medicina popular, suas propriedades terapêuticas podem ser devidas a sua capacidade de sequestrar radicais livres de oxigênio, envolvidos em diversas patologias decorrentes do estresse oxidativo em sistemas biológicos. A ação antioxidante tem sido também apontada como forte indicativo de ação quimiopreventiva, associada à indução de enzimas destoxificantes do organismo como a quinona redutase, que pode evitar eventos iniciais da geração de tumores. O estudo fitoquímico dos extratos de folhas e galhos de G. brasiliensis resultou no isolamento ou identificação de diversas substâncias polifenólicas a partir de frações polares: os biflavonoides amentoflavona, podocarpusflavona, fukugetina, além de procianidina e seus trímeros e da benzofenona garcinol através do uso de técnicas cromatográficas e espetrométricas como CLAE-DAD, CLAE-EM, UV, IV e RMN. Os extratos de baixa polaridade foram analisados por CG-EM... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The phytochemical investigation of plant species contributes to conservation and sustainable use of São Paulo biodiversity. This project has addressed the phytochemical investigation of stems and leaves of Garcinia brasiliensis, with isolation, structural determination of secondary metabolites as well as evaluation of bioactivity. G. brasiliensis is a member of the Clusiaceae family with interesting secondary metabolites such as benzophenones which have potent antimalarial, antioxidant, antitumoral, antibacterial, antiinflamatory and chemoprevention capacity. Whereas medicinal plants are not used as antioxidants in popular medicine their therapeutic properties are derived from capacity to scavenge free radicals involved in oxidative stress. The antioxidant activity is indicative of chemoprevention associated with toxic enzymes such as quinone reductase that is associated with inhibition of tumor development. The phytochemical study of extracts from leaves and stems of G. brasiliensis led to the isolation or identification of several polyphenols from polar fractions: biflavonoids amenthoflavone, podocarpusflavone, fukugetin, in addition to procyanidin and its trimers and the benzophenone garcinol through chromatographic and spectrometric techniques as HPLC-DAD, HPLC MS, UV, IR and NMR. Low polarity extracts were analyzed by GC-FID and evidenced the presence of triterpenes and steroids, including stigmasterol,  -amirinone,  -amirin, taraxerol and lupeol, as major compounds. Metabolite target analysis was carried out using thin layer chromatographic tests with  -carotene and anisaldehyde as revealing agents aiming the detection of antioxidant compounds, in addition to inhibitory activity against T. cruzi, human and plant pathogenic fungi, malaria, acetylcholinesterase, and HIV protease. Best results were obtained for... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Efeito de drogas moduladoras da estrutura da cromatina sobre a interação entre Macrófagos Murinos e Paracoccidioides brasiliensis

Oliveira, Luana de Castro 21 December 2012 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-03-04T12:17:39Z No. of bitstreams: 1 2012_LuanaCastroOliveira.pdf: 2841384 bytes, checksum: 0632b4b2ba99fc494aa9ce5971604fd2 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2013-03-06T14:00:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_LuanaCastroOliveira.pdf: 2841384 bytes, checksum: 0632b4b2ba99fc494aa9ce5971604fd2 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-06T14:00:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_LuanaCastroOliveira.pdf: 2841384 bytes, checksum: 0632b4b2ba99fc494aa9ce5971604fd2 (MD5) / O fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), micose sistêmica humana mais comum na América Latina. O local de contato inicial entre o fungo P. brasiliensis e o hospedeiro é o epitélio respiratório. A resistência do hospedeiro à PCM está associada à ativação de células fagocíticas ao longo da infecção. Os antifúngicos atualmente utilizados no combate à PCM apresentam desvantagens como a alta incidência de efeitos colaterais e o aumento de casos de resistência. A epigenética refere-se a modificações nos padrões de expressão gênica herdáveis ao longo de sucessivas divisões celulares ou de sucessivas gerações de um indivíduo, e que não envolvem mudanças na sequência de nucleotídeos do DNA. As principais marcas epigenéticas envolvem a metilação de citosinas em ilhas CpG no DNA e as modificações pós-traducionais de histonas. Drogas como a 5-aza-2’-deoxi-citidina (5-AZA, inibidor de DNA metiltransferases), tricostatina A (TSA) e butirato de sódio (BS, inibidores de histona desacetilases) vêm sendo empregadas para modular estados epigenéticos. Em fungos patogênicos como C. albicans e C. neoformans, a administração de moduladores epigenéticos levou a uma diminuição no crescimento e viabilidade das leveduras. No presente estudo, avaliamos os efeitos biológicos de 5-AZA, TSA e BS sobre leveduras de P. brasiliensis e sobre uma linhagem de macrófagos murinos. As mais altas concentrações de drogas que não interferiram no crescimento celular foram definidas como BS 1 mM, TSA 20 nM e 5-AZA 1 µM, para macrófagos J774, e BS 10 mM, TSA 1,5 µM e 5-AZA 2 µM para leveduras de P. brasiliensis. 5-AZA provocou um aumento do índice de internalização das leveduras pelas células J774 com 2h e 6h de infecção, enquanto BS provocou aumento em 2h e TSA não afetou esse índice. A análise do acúmulo de mensageiros de genes relacionados à resposta imune revelou uma diminuição dos níveis de transcritos de MyD88 em macrófagos tratados com BS, ao passo que 5-AZA elevou os níveis de transcritos desse adaptador. O acúmulo de transcritos NF-κB diminuiu quando os macrófagos foram infectados e tratados com 5-AZA e BS, enquanto TSA não teve efeito. O mensageiro de TNF-α, em macrófagos infectados tratados com 5-AZA, também teve aumento significativo de acúmulo, o que não aconteceu no tratamento com TSA ou BS. Os níveis do transcrito de IL-6 foram afetados apenas pela administração de TSA, que elevou o acúmulo dos mensageiros dessa interleucina. Nas culturas infectadas e tratadas com TSA observou-se uma diminuição do nível de TNF-α secretado, enquanto o tratamento com BS provocou um aumento dessa citocina no sobrenadante. Nossos dados indicam que alterações epigenéticas possam participar da regulação da resposta de fagócitos quando em contato com células fúngicas, e que mais de uma via de sinalização pode estar relacionada a essa resposta. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis is the etiologic agent of Paracoccidioidomycosis (PCM), the most prevalent deep mycosis in Latin America. The first contact between the fungus and the host is the respiratory epithelium. The host resistance to PCM is related to the activation of phagocytic cells during the course of the infection. The antifungals used against PCM show many disadvantages, as high incidence of side effects and increasing fungal resistance. The term epigenetic refers to modifications in the genetic expression patterns, heritable through cell divisions or individuals generations, which do not implicate in changes in the sequence of nucleotides of the DNA. The main epigenetic marks are the cytosine methylation in DNA CpG islands and histones post-translational modifications. Drugs such as 5-aza-2’-deoxy-cytidine (5-AZA, methyltransferase inhibitor), trichostatin A (TSA) and sodium butyrate (SB, histone desacetylase inhibitors) have been used to modulate epigenetic states. In pathogenic fungi such as C. albicans and C. neoformans, the use of epigenetic modulators led to a lower growth rate and yeasts viability. In the present work we evaluated the biological effects of 5-AZA, TSA and SB on P. brasiliensis yeast cells and on a lineage of murine macrophages. The highest drug concentrations that did not affect cell growth were SB 1 mM, TSA 20 nM and 5-AZA 1 µM, to the macrophages, and SB 10 mM, TSA 1,5 µM and 5-AZA 2 µM, to P. brasiliensis yeast cells. 5-AZA induced a higher internalization yeasts index by the macrophages within 2h and 4h of infection, while SB had the same effect with 2h of infection and TSA did not affect this index. The transcripts accumulation analysis of genes related to the immune response showed a down modulation of the MyD88 transcript levels in macrophages treated with SB, whilst 5-AZA up regulated the transcript levels of this gene. The NF-κB transcript level was lower when macrophages were infected and treated with 5-AZA and SB, while TSA did not show any effect. TNF-α transcripts accumulation was also upregulated in macrophages infected and treated with 5-AZA, what was not observed with TSA or SB. IL-6 transcripts level was only affected by the TSA administration, which upregulated it. In cultures infected and treated with TSA, there was a lower level of secreted TNF-α, while SB had the opposite effect, increasing this cytokine in the supernatant. Our data indicate that epigenetic modifications can participate in the regulation of the phagocytes response to fungal cells and that alternative signaling pathway can be related to this answer.
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Análise funcional do gene ERG6 em Cryptococcus neoformans

Oliveira, Fabiana Freire Mendes de 06 August 2013 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-09-13T15:57:01Z No. of bitstreams: 1 2013_FabianafreireMendesOliveira.pdf: 3550004 bytes, checksum: 479e0f87b52423d1bb6907da07bbdbdc (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2013-10-03T11:53:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_FabianafreireMendesOliveira.pdf: 3550004 bytes, checksum: 479e0f87b52423d1bb6907da07bbdbdc (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-03T11:53:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_FabianafreireMendesOliveira.pdf: 3550004 bytes, checksum: 479e0f87b52423d1bb6907da07bbdbdc (MD5) / O advento de pacientes portadores do HIV e de pacientes imunocomprometidos provocou um aumento na incidência de micoses fúngicas, como a criptococcose. Existem várias classes de antifúngicos disponíveis comercialmente para o tratamento dessas infecções que são utilizadas de acordo com a patologia e o patógeno. No entanto, são relatados casos de resistência a essas drogas e existe uma grande preocupação em relação aos efeitos adversos que elas podem causar nos pacientes. Nesse contexto, o desenvolvimento de novas drogas antifúngicas poderia ser uma solução para a problemática atual das drogas disponíveis e isso requer o estudo de novos alvos moleculares. O gene ERG6 codifica a enzima esterol C-24 metiltransferase que atua na conversão de zimosterol em fecosterol. Constitui uma etapa que ocorre em fungos para a biossíntese do ergosterol, mas não ocorre nos hospedeiros animais, que possuem enzimas específicas para a conversão do zimosterol até colesterol. No presente trabalho, a função do gene ERG6 foi investigada e caracterizada no fungo Cryptococcus neoformans demonstrando que a ausência desse gene gera diversas alterações fenotípicas, tais como sensibilidade ao estresse osmótico, ao estresse oxidativo e maior susceptibilidade a diferentes drogas antifúngicas. Além disso, foi ainda observado que a capacidade de crescer em meios contento diferentes estressores de parede se mostra alterada. Em relação aos fatores de virulência conhecidos para C. neoformans, o fungo foi incapaz de crescer a temperatura de 37°C, porém não teve sua produção de cápsula ou melanina afetadas. No entanto, em testes para observação da sua capacidade de virulência in vitro utilizando macrófagos e in vivo com lagartas da espécie Galleria mellonella mostraram uma redução na virulência em mutantes de ERG6. Por fim a análise dos esteróis de membrana mostrou que ocorre uma alteração em toda a composição de esteróis da membrana celular. Dessa forma, por ser uma enzima encontrada principalmente em fungos, a Erg6 pode ser um alvo molecular potencial para drogas antifúngicas. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The advent of HIV patients and immunocompromised patients caused an increase in the incidence of fungal mycoses, such as cryptococcosis. There are several antifungal agents commercially available for the treatment of such infections that are chosen based on the disease and the pathogen. However, cases of resistance are reported to these drugs and there is great concern about the adverse effects that they can cause on patients. In this context, the development of new antifungal drugs could be a solution to the current problem of the available drugs and it requires the study of potential molecular targets. The gene ERG6 encodes the sterol C-24 methyltransferase, an enzyme that acts on the conversion zimosterol in fecosterol. This is a step that occurs in fungi in the ergosterol biosynthesis, but does not occur in the animal hosts which have specific enzymes for the conversion of zymosterol to cholesterol. In this study, gene function of ERG6 was investigated and characterized in the Cryptococcus neoformans demonstrating the absence of this gene generates several phenotypic changes, such as sensitivity to osmotic stress, oxidative stress and increased susceptibility to different antifungal drugs. Furthermore, it was also observed that the ability to grow on media with different cell wall stressors was also altered. It was observed that the lack of ERG6 greatly affects the permeabillity of the membrane resulting in osmotic and oxidative stress sensitivity and changing antifungal drugs susceptibility. Furthermore, it was also observed that the ability to grow in medium with cell wall stressor was altered. About the virulence factor, C. neoformans was unable to grow at 37°C, but it had not affected the production of melanin or capsule. However, virulence tests in vitro with macrophages and in vivo with Galleria mellonella caterpillars showed a decrease in the virulence of ERG6 mutants. Finally, the membrane sterols analysis demonstrated a change in the membrane sterol composition. Thus, being an enzyme found especially fungi, the Erg6 may be a potential molecular target for antifungal drugs.
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Produção de biofilme em isolados de Candida spp do Hospital das Clínicas de Botucatu, UNESP

Nascimento, Ariane Cristina Mendes de Oliveira Bruder [UNESP] 16 August 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-16Bitstream added on 2014-08-13T18:01:10Z : No. of bitstreams: 1 000736352_20150816.pdf: 622518 bytes, checksum: 9cd0a00890850158d786a74933e00102 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-17T11:07:08Z: 000736352_20150816.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-17T11:07:54Z : No. of bitstreams: 1 000736352.pdf: 2845178 bytes, checksum: cd1b9d03cabd50c9aedba9d2463f1aa2 (MD5) / Nas últimas décadas, a epidemiologia das infecções por Candida spp. e o perfil de susceptibilidade a drogas vêm sofrendo importantes alterações. A emergência dessas espécies, como agente de infecções invasivas, tem se destacado principalmente entre pacientes imunocomprometidos. O principal objetivo desse estudo foi avaliar a epidemiologia das infecções por Candida spp. no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP, e auxiliar no suprimento de dados para o melhor controle da infecção hospitalar. Os objetivos específicos incluíram a comparação entre as metodologias tradicional, automatizada e molecular de identificação em nível de espécie atualmente disponíveis nesta instituição, avaliar o perfil de susceptibilidade aos antifúngicos, bem como a produção de biofilme por estes isolados e caracterizar, utilizando ferramentas de biologia molecular, genes envolvidos na produção de biofilme de C. albicans e C. parapsilosis e o emprego dos introns do grupo I para genotipagem de C. albicans. Um total de 196 isolados de Candida spp. provenientes de hemocultura de pacientes foram avaliados. As espécies mais frequentes foram C. albicans (39,3 44,4%) e C. parapsilosis (33,2-42,3%). Foi observada boa correlação (>80%) entre os métodos de identificação avaliados – fenotípico tradicional, automatizado e molecular; e a caracterização dos introns do grupo I detectou predominância de C. albicans genótipo A (74%). O método tradicional é o mais simples e de baixo- custo, e o método automatizado mais rápido na liberação do resultado, quando comparados às técnicas moleculares, as quais apresentam maior poder discriminatório. Sugere-se a utilização do meio cromogênico, em paralelo ao método de identificação selecionado, para auxiliar na interpretação dos resultados, principalmente nas espécies mais frequentes. O método empregado em laboratórios de rotina deve ser considerado quando ... / Over the last decade, there have been important changes in the epidemiology of Candida infections and antifungal agents used to treat these infections. In recent years, Candida species have emerged as important causes of invasive infections mainly among immunocompromised patients. The principal aim of this study was to evaluate the epidemiology of infectious Candida species isolated in our hospital and accordingly supply data for hospital infection control The other aims were to compare the traditional, automated and molecular methods used to identify Candida isolates to the species level current available in the Clinical Hospital of the Boucatu Medical School, UNESP, to evaluate the drug susceptibility as well as to biofilm production by this yeasts and to characterize, by molecular tools, several genes involved in biofilm production of C. albicans and C. parapsilosis and the use of group I introns to genotype the species C. albicans. A total of 196 Candida strains that were isolated from blood specimens of hospitalized patients were included in the study. The most common Candida species identified were C. albicans (39,3-44,4%) and C. parapsilosis (33,2-42,3%). According to the insertion of group I introns, the genotype A of C. albicans were the most frequent (74%). The evaluation of traditional phenotypic methods, the automated and some molecular revealed good agreement (>80%) and since both phenotypic methods were simple and cost effective and automated were few time-consuming when compared to molecular techniques, they should be considered in the routine lab identification of Candida species. The chromogenic media must be employed to avoid misinterpretations, independently of the method used. Antifungal susceptibility testing was performed by the reference microdilution method (CLSI) and all strains showed good susceptible against the drugs evaluated (fluconazole, voriconazole, anidulafungin and ...

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