Orientador: Luiz Augusto Magalhães / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T01:07:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zanotti-Magalhaes_ElianaMaria_D.pdf: 6279599 bytes, checksum: 9f66fc2424f5dffcad1bdd5afb8cd0ac (MD5) Previous issue date: 1987 / Resumo: O experimento teve por objetivo verificar a relação entre a susceptibilidade do molusco à infecção por S. mansoni e a patogenicidade desenvolvida pelo parasita no hospedeiro definitivo. Foram selecionadas para o carácter susceptibilidade progenies de B. glabrata e B. tenagophila obtidas por auto fecundação dos moluscos que, após a exposição aos miracídios, respectivamente, das linhagens BH e SJ do trematódeo, apresentaram eliminação de cercárias. Desse modo foram obtidas cinco gerações de B. glabrata (parental, Fl' F2' F3 e F4) e seis gerações de B. tenagophila (parental, Fl' F2' F3' F4 e F5). Camundongos Swiss, albinos, foram expostos a 100 cercárias originadas das respectivas gerações de moluscos, constituindo-se dois grupos de animais: camundongos infectados com a linhagem BH e camundongos infectados com a linhagem SJ. Um terceiro grupo de camundongos não infectados serviu para controle. Os roedores sobreviventes, foram sacrificados após a 8ª semana de infecção. No decorrer do experimento foram anotados os seguintes dados: 1) Taxa de infecção dos moluscos. 2) Taxa de mortalidade dos camundongos. 3) Peso corporal dos roedores ao fim da 8ª semana infecção. 4) Pesos do fígado e do baço 5) Número de cercárias penetrantes. 6) Número de esquistossomos recolhidos do sistema dos camundongos. 7) Número de ovos eliminados pelas fezes na 8ª semana de infecção. 8) Número de reações granulomatosas no fígado, baço, pâncreas, intestino e pulmões. 9) Tamanho das reações granulomatosas no fígado, pâncreas, intestino e pulmões. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-25. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:10Z : No. of bitstreams: 1 000860821.pdf: 2915690 bytes, checksum: 1ff5640161c93a6edf44ddc1558a8eeb (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Candida albicans é um fungo oportunista capaz de causar infecções superficiais e até sistêmicas. A maioria das infecções é mediada pela formação de biofilme que confere resistência aos agentes antifúngicos e ao sistema imune, porém os mecanismos de desenvolvimento do biofilme e patogenicidade ainda não foram completamente elucidados. No presente estudo foram selecionados 9 genes de C. albicans com função desconhecida, dentre 34 cepas mutantes que apresentaram fenótipo alterado para formação de biofilme. Os biofilmes foram formados em placas de 96 poços ou discos de poliestireno e avaliados em diferentes tempos de desenvolvimento. A seguir foram construídas 4 cepas complementadas que foram avaliadas quanto à susceptibilidade a agentes estressantes, crescimento sob limitação de nutrientes e testes de filamentação. A arquitetura dos biofilmes foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os biofilmes também foram avaliados quanto à quantidade de β-1,3-glucana e quitina. Para os modelos de infecção, células epiteliais bucais (TR-146) foram utilizadas para análise de aderência, invasão e dano. A patogenicidade das cepas foi avaliada em ovos embrionados de galinha durante 7 dias, após a inoculação das cepas. Células planctônicas e biofilmes foram submetidos a testes antifúngicos com os agentes fluconazol, anfotericina B e caspofungina. A reação em cadeia da polimerase quantitativa foi realizada para verificar a expressão dos genes MRV8 e NDT80 em células fúngicas em interação com células epiteliais e MRV8, MRV1 e MRV6 em células crescidas em biofilme. Os resultados foram analisados por teste t de Student, ANOVA, Tukey e testes de Log-rank (Mantel-Cox) (p < 0,05). Foram construídas 4 cepas complementadas para os genes selecionados ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847 e MRV8. A função de ORF19.823 ainda permanece desconhecida, pois nãofoi observado fenótipo msignificativo para a cepa.... / Candida albicans is an opportunistic fungi capable of causing superficial and systemic infections. Most of infections are mediated by biofilm formation which confers resistance to antifungal agents and immune system, but the mechanisms of biofilm development and pathogenicity were not thoroughly elucidated yet. In the presente study, 9 unknown function genes of C. albicans were selected among 34 mutant strains that presented altered phenotype for biofilm formation. The biofilms were formed on 96-well microtitle plates or on polystyrene disks and evaluated in different time intervals. Next, 4 complemented strains were constructed and evaluated for susceptibility to stressor agents, growth under nutrient limitation and filamentation tests. The biofilm architecture was analyzed by scanning electron microscopy (SEM). The biofilms were also assessed as the quantity of β-1,3-glucan and chitin. For the infection models, buccal epithelial cells (TR-146) were used for adherence, invasion and damage assays. The pathogenicity of the strains was evaluated in embrionated chicken eggs for 7 days, after inoculation of the strains. Planktonic cells and biofilms were submitted to antifungal tests with fluconazole, amphotericin B, and caspofungin. Quantitative polymerase chain reaction was performed to verify the expression of MRV8 and NDT80 genes in fungal cells in interaction with epithelial cells and MRV8, MRV1, and MRV6 genes in cells grown in biofilm. The results were submitted to the Student t test, ANOVA, Tukey's test, and Log-rank test (Mantel-Cox) (p < 0.05). Four complemented strains were constructed for the selected genes ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847, and MRV8. The function of the ORF19.823 is still unknown, because the mutant strain did not show any significative phenotype for the tests performed. The mutant strain for the ORF19.7170 caused less damage on epithelial cells, but the result was not significant and the gene was dispensable... / FAPESP: 2011/21346-7

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-06-26T01:15:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 317535.pdf: 1046958 bytes, checksum: 34e073ccf86d5cb176a18d9209d5d173 (MD5) / Introdução: O melasma é uma doença de pele caracterizada pelo aparecimento de manchas escuras na face e áreas expostas ao sol e que provocam grande impacto na qualidade de vida. Existem vários fatores envolvidos na sua patogênese, porém os mecanismos que levam ao seu aparecimento ainda não estão totalmente esclarecidos. Objetivos: Estudar a resposta inflamatória por meio da avaliação da celularidade, presença de edema e de apoptose de queratinócitos nas lesões de melasma, avaliar a presença ou não de telangiectasias, elastose solar e pigmento epidérmico nas lesões de melasma, avaliar a participação do óxido nítrico (NO) nas lesões de melasma, avaliar o impacto na qualidade de vida do melasma utilizando-se o questionário MelasQol já validado para a língua Portuguesa. Métodos: O estudo foi do tipo observacional transversal com componente analítico. A amostra foi definida como de conveniência. Foram selecionados 51 pacientes com diagnóstico clínico de melasma no ambulatório de Dermatologia do Hospital Universitário Professor Polydoro Ernani de São Thiago da Universidade Federal de Santa Catarina (HU-UFSC) entre Janeiro de 2011 e Dezembro de 2011. O trabalho envolveu a coleta de dados clínicos e a aplicação do questionário MelasQol em todos os pacientes selecionados e da realização de biópsias de 31 pacientes portadores de melasma. No protocolo foram realizadas 4 biópsias com punch 2 mm, sendo duas amostras obtidas da área de melasma e duas da pele normal adjacente com distância mínima de 1cm entre elas. O primeiro fragmento de cada área foi encaminhado para análise histológica e o segundo para dosagem do óxido nítrico. O óxido nítrico foi quantificado pela formação de seus metabólicos nitrito (NO2-) e nitrato (NO3-), utilizando a reação de Griess. Resultados: A idade média foi de 38,43 ± 6,75 anos, todos os pacientes eram do sexo feminino, e os fototipos mais comuns foram III (49,02%) e IV (33,33%). A idade média no início da doença e a duração da doença foram de 29,18 ± 7,05 e 9,25 ± 6,18 anos. Na avaliação histológica apresentaram diferença estatística a presença de elastose solar (P=0,001) e aumento da pigmentação melânica na epiderme (P < 0,001) quando comparadas as amostras da lesão de melasma e as de pele normal. A dosagem de nitrito/nitrato que são metabólitos do NO na pele lesional e perilesional, não mostrou diferença estatística entre os grupos estudados. A análise do MelasQol mostrou que 94,11% dos pacientes sentem-se incomodados com a aparência de sua pele, 64,71% sentem frustração ou constrangimento pela condição de sua pele, 52,94% sentem-se depressivos e 78,43% têm a sensação de não serem atraentes. Entretanto, para 68,63% dos pacientes, o melasma não afeta as relações com outras pessoas, 86,27% dos pacientes não sentem dificuldade em demonstrar afeto, 66,67% não se sentem menos produtivos e para 74,51% o melasma não afeta seu senso de liberdade. Conclusão: Nosso estudo demonstrou que no melasma ocorre aumento de elastose e aumento da pigmentação na epiderme. O melasma está implicado também no impacto na qualidade de vida, e nosso estudo demonstrou que o domínio da qualidade de vida mais afetado pelo melasma foi o bem estar emocional e que houve pouco impacto no domínio das relações sociais.<br> / Abstract : Introduction: Melasma is a skin disease characterized by the presence of dark spots on the face and sun-exposed areas. There are several factors involved in its pathogenesis, but the mechanisms that lead to their appearance are not yet fully understood. Objectives: To study the inflammatory response through the evaluation of cellularity, edema and apoptosis of keratinocytes in the lesions of melasma, assess the presence or absence of telangiectasias, elastosis and epidermal pigment in melasma lesions, assess the involvement of nitric oxide in melasma lesions, assess the impact on quality of life through an already validated to Portuguese language questionnaire (MelasQol). Methods: This is an observational cross-sectional study with analytical component. The sample was defined as convenience. We selected 51 patients with clinical diagnosis from Hospital Universitário Professor Polydoro Ernani de São Thiago da Universidade Federal de Santa Catarina (HU-UFSC) between January 2011 and December 2011. This study involved the collection of clinical data and the questionnaire MelasQol in all selected patients and biopsies from 31 patients with melasma. In the protocol four biopsies were performed with 2-mm punch, two samples from melasma area and two from adjacent normal skin with minimum distance of 1cm between them. The first fragment area of each was submitted for histological analysis and the second for dosage of nitric oxide. The nitric oxide formation was quantitated by their metabolic nitrite (NO2-) and nitrate (NO3-) using the Griess reaction. Results: The mean age was 38.43 ± 6.75 years, all patients were female, and the most common skin types were III (49.02%) and IV (33.33%). The mean age at disease onset and disease duration were 29.18 ± 7.05, 09.25 ± 6.18 years. Histological evaluation showed statistically significance on the presence of solar elastosis (P = 0.001) and increased melanin pigmentation of the epidermis (P <0.001) when compared the samples of melasma lesion and normal skin. The dosage of nitrite / nitrate metabolites in lesional and perilesional skin showed no statistical difference between groups. The MelasQol analysis showed that 94.11% of patients feel uncomfortable with the appearance of their skin, 64.71% feel frustration or embarrassment the condition of their skin, 52.94% felt depressed and 78.43% have the feeling of not being attractive. However, for 68.63% of patients, melasma does not affect relations with other people, 86.27% of patients feel no difficulty in showing affection, 66.67% do not feel less productive and 74.51% did not affect their sense of freedom. Conclusion: Our study demonstrated that in melasma there is an increase in the solar elastosis and it is associated with an increased pigmentation in the epidermis. Melasma is also implicated in the impact on quality of life, and our study showed that the domain of quality of life that was most affected by melasma was emotional wellbeing, and that there was little impact in the domain of social relations.

Orientador: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Adolfo José da Mota / Banca: Ricardo Sérgio Couto de Almeida / Banca: Renata Falchete do Prado / Banca: Samira Esteves Afonso Camargo / Resumo: Candida albicans é um fungo oportunista capaz de causar infecções superficiais e até sistêmicas. A maioria das infecções é mediada pela formação de biofilme que confere resistência aos agentes antifúngicos e ao sistema imune, porém os mecanismos de desenvolvimento do biofilme e patogenicidade ainda não foram completamente elucidados. No presente estudo foram selecionados 9 genes de C. albicans com função desconhecida, dentre 34 cepas mutantes que apresentaram fenótipo alterado para formação de biofilme. Os biofilmes foram formados em placas de 96 poços ou discos de poliestireno e avaliados em diferentes tempos de desenvolvimento. A seguir foram construídas 4 cepas complementadas que foram avaliadas quanto à susceptibilidade a agentes estressantes, crescimento sob limitação de nutrientes e testes de filamentação. A arquitetura dos biofilmes foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os biofilmes também foram avaliados quanto à quantidade de β-1,3-glucana e quitina. Para os modelos de infecção, células epiteliais bucais (TR-146) foram utilizadas para análise de aderência, invasão e dano. A patogenicidade das cepas foi avaliada em ovos embrionados de galinha durante 7 dias, após a inoculação das cepas. Células planctônicas e biofilmes foram submetidos a testes antifúngicos com os agentes fluconazol, anfotericina B e caspofungina. A reação em cadeia da polimerase quantitativa foi realizada para verificar a expressão dos genes MRV8 e NDT80 em células fúngicas em interação com células epiteliais e MRV8, MRV1 e MRV6 em células crescidas em biofilme. Os resultados foram analisados por teste t de Student, ANOVA, Tukey e testes de Log-rank (Mantel-Cox) (p < 0,05). Foram construídas 4 cepas complementadas para os genes selecionados ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847 e MRV8. A função de ORF19.823 ainda permanece desconhecida, pois nãofoi observado fenótipo msignificativo para a cepa.... / Abstract: Candida albicans is an opportunistic fungi capable of causing superficial and systemic infections. Most of infections are mediated by biofilm formation which confers resistance to antifungal agents and immune system, but the mechanisms of biofilm development and pathogenicity were not thoroughly elucidated yet. In the presente study, 9 unknown function genes of C. albicans were selected among 34 mutant strains that presented altered phenotype for biofilm formation. The biofilms were formed on 96-well microtitle plates or on polystyrene disks and evaluated in different time intervals. Next, 4 complemented strains were constructed and evaluated for susceptibility to stressor agents, growth under nutrient limitation and filamentation tests. The biofilm architecture was analyzed by scanning electron microscopy (SEM). The biofilms were also assessed as the quantity of β-1,3-glucan and chitin. For the infection models, buccal epithelial cells (TR-146) were used for adherence, invasion and damage assays. The pathogenicity of the strains was evaluated in embrionated chicken eggs for 7 days, after inoculation of the strains. Planktonic cells and biofilms were submitted to antifungal tests with fluconazole, amphotericin B, and caspofungin. Quantitative polymerase chain reaction was performed to verify the expression of MRV8 and NDT80 genes in fungal cells in interaction with epithelial cells and MRV8, MRV1, and MRV6 genes in cells grown in biofilm. The results were submitted to the Student t test, ANOVA, Tukey's test, and Log-rank test (Mantel-Cox) (p < 0.05). Four complemented strains were constructed for the selected genes ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847, and MRV8. The function of the ORF19.823 is still unknown, because the mutant strain did not show any significative phenotype for the tests performed. The mutant strain for the ORF19.7170 caused less damage on epithelial cells, but the result was not significant and the gene was dispensable... / Doutor

Orientador: Josias Rodrigues / Resumo: Retocolite Ulcerativa (RU) é um tipo de patologia que acomete o cólon intestinal, se apresentando na forma de lesões superficiais de gravidade variável. Não possui causa definida, mas sabe-se que é influenciada por fatores genéticos e ambientais, na qual, esse último, inclui um desequilíbrio na composição de espécies da microbiota intestinal. Escherichia coli (E. coli), uma das bactérias que se encontra aumentada nesses pacientes, tem sido foco de estudos de caracterização, com o objetivo de esclarecer sua participação na etiologia ou complicação dos sintomas da doença. Esse trabalho adotou essa abordagem para a caracterização de uma coleção de E. coli isoladas de portadores de RU atendidos no Hospital das Clínicas da Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho (HC/UNESP) de Botucatu, com base em sua capacidade de produção de biofilme, sorotipagem e filotipagem. Juntamente a esses testes, foi realizada uma revisão bibliográfica sobre a possível relação da E. coli com a RU. O objeto de estudo dos testes foi uma coleção de E. coli composta por 68 isolados bacterianos de 34 portadores de RU e 44 de 22 indivíduos controle (CO). A tipagem bacteriana teve como foco genes que identificam os sorogrupos O25 e O83 e determinação de filogrupos da coleção de referência de E. coli (EcoR – A, B1, B2 e D). Os resultados obtidos foram: 1) predomínio de E. coli dos filogrupos B2 e A nos grupos CO (54,5% x 26,5%, p=0,01) e de portadores de RU (32,4% x 9,1%, p=0,04) respectivamente, ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Ulcerative colitis (UC) is a type of pathology that affects the intestinal colon, presenting as superficial lesions of different severity. It has no defined cause, but it is known to be influenced by genetic and environmental factors, which includes an imbalance in the composition of species of the intestinal microbiota. Escherichia coli (E. coli), one of the bacteria that is increased in these patients, has been the focus of characterization studies, to clarify its participation in the etiology or complication of the disease’s symptoms. Following a line of research already consolidated in our laboratory, this work adopted this approach for the characterization of a collection of E. coli isolated from UC patients treated at the HC / UNESP of Botucatu, based on its biofilm production capacity, serotyping and filotyping. Also, a literature review was performed on the possible relationship between E. coli and UC. The study’s object of these tests was a collection of E. coli composed of 68 bacterial isolates from 34 UC carriers and 44 from 22 control individuals (CO). Bacterial typing focused on genes that identify the O25 and O83 serogroups and determination of phylogroups from the E. coli reference collection (EcoR - A, B1, B2 and D). The results obtained were: 1) Predominance of E. coli of the phylogenetic groups B2 and A in the CO groups (54.5% x 26.5%, p = 0.01) and in the UC group (32.4% x 9, 1, p = 0.04), respectively. 2) In the UC group, 8.8% and 11.8% of the individuals ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GloriaRGM_ TESE.pdf: 1372694 bytes, checksum: 5d2a22de8c374313099583a70edbaca6 (MD5) Previous issue date: 2013-05-10 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Leishmaniose visceral (LV) ? uma doen?a, potencialmente, fatal cujo agente etiol?gico nas Am?ricas ? a esp?cie Leishmania infantum. No Brasil, a LV era uma doen?a predominantemente rural at? os anos 80, quando epidemias passaram a ocorrer nas grandes cidades, devido ? migra??o da popula??o para periferia dos centros urbanos, especialmente, na regi?o nordeste. A infec??o por leishmania pode evoluir com um amplo espectro cl?nico que ? dependente da resposta imune desenvolvida pelo hospedeiro. Notadamente, 80% a 90% da infec??o humana ? subcl?nica ou assintom?tica, mas os fatores que determinam a evolu??o para doen?a n?o s?o completamente esclarecidos. O controle da infec??o por leishmania ? dependente da imunidade celular mediada por IFN-&#61543;. Est? demonstrado que a leishmania suprime a resposta microbicida do macr?fago. Estudos pr?vios sugerem que o perfil gen?tico do hospedeiro contribui para a evolu??o cl?nica ap?s a infec??o. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da Interleucina 10 na patog?nese da LV e avaliar a express?o de genes envolvidos na resposta imune, frente ? infec??o por L. infantum. Foram avaliados pessoas com LV, com infec??o assintom?tica por leishmania e doadores de sangue oriundos da ?rea end?mica para LV. Os fen?tipos foram determinados por avalia??o cl?nica, determina??o de presen?a de anticorpo antileishmania (Ac) e resposta celular (DTH). A an?lise da express?o g?nica foi realizada com amostras de RNA isoladas de pessoas na fase aguda da doen?a e tr?s meses ap?s o tratamento, utilizando c?lulas mononucleadas do sangue perif?rico, ap?s estimula??o com ant?geno sol?vel de leishmania (SLA). A m?dia IL-10 s?rico nos diferentes grupos foi: LV 91,73pg/mL ? 63,62 (n=229), DTH-AC+ 20,15pg/mL ? 25,67 (n=40), DTH+AC- 11,32pg/mL ? 10 (n=72), DTH+AC+ 9,88pg/mL ? 5,59 (n=32), DTHAC- 3,01pg/mL ? 6,59 (n=145), (p<0,01). Nas pessoas assintom?ticas, com cultura de sangue positiva para leishmania e anticorpos antileishmania positiva, a m?dia de IL-10 foi 2,18pg/mL (n=60). As pessoas com LV na fase inicial do tratamento apresentaram n?veis mais elevados de IL-10, quando comparados com os demais fen?tipos (P< 0,0001). Pessoas com o fen?tipo DTH-AC+, apresentaram n?veis de IL-10 maiores que os demais grupos com infec??o assintom?tica ou potencialmente expostos a Leishmania (DTH+AC-, DTH+AC+ e DTH-AC-). A m?dia de IL-10 entre homens e mulheres com LV foi de 103,77pg/mL ? 3,89 e 64,06pg/mL ? 4,78 mostrando uma diferen?a significativa (p<0,0001). No grupo de doadores n?o houve diferen?a significativa entre o sexo masculino 1,64pg/mL ? 6,48 e feminino 0,89pg/mL ? 11,33. Contudo os n?veis de IL-10 foram significativamente superiores na LV (p<0,0001) apontando o papel relevante desta citocina na patog?nese da doen?a. Foram identificados 362 genes com express?o diferencial entre a fase sintom?tica e p?s-recupera??o. Entre os genes expressos na fase aguda foram identificados genes relacionados ao metabolismo lip?dico, APOC1 (p<0,055 fold change -1,68), ao ciclo da ur?ia ARG1 (p<0,05 fold change -2,89) e um gene envolvido no processo biossint?tico da glicina DHFR (p<0,01 fold change -2,15). Genes codificadores de prote?nas relacionadas ? infec??o aguda, como, quimiocinas CXCL5 (p 0,032 fold change 1,92), CXCL10 (p<0,051 fold change 2,63), CCL22 (p 0,046 fold change 2,00) foram super expressos ap?s a recupera??o (tr?s meses ap?s tratamento). A compara??o da express?o g?nica evidenciou, entre outros dados, supress?o de genes de quimiocinas (CXCL5 e CXCL10), indu??o dos genes da bioss?ntese de lip?deos (APOC1) e da Arginase1. Os dados indicam vias, at? ent?o n?o relatadas, possivelmente envolvidas na patog?nese da infec??o por Leishmania infantum. A an?lise de microchips de DNA ? uma importante ferramenta para estudar a express?o g?nica global; ao mesmo tempo a IL-10 ? um marcador de doen?as e sua inibi??o ou via relacionada pode ser um potencial alvo terap?utico