La tuberculosis es una enfermedad muy prevalente en el Perú y los casos de tuberculosis multidrogorresistente (MDR) están en aumento. La capreomicina es un antibiótico péptido cíclico utilizado anteriormente en el esquema de segunda línea de tratamiento para tuberculosis MDR. El mecanismo molecular de acción conocido de este fármaco es la inhibición de la fase de elongación de proteínas. En esta investigación utilizamos el microorganismo E. coli, por ser un gold standard para estudios mecanísticos de antibióticos y un espectofotómetro , llamado Stopped-flow, para evidenciar los cambios conformaciones del factor de iniciación 3 fluorescente (IF3DL). Se observó que la unión de capreomicina a la subunidad menor 30S del ribosoma promueve el acercamiento de los dominios de IF3DL, el cual fue evidenciado como una disminución de fluorescencia. Esta reacción fue dependiente de concentración, encontrándose una mayor disminución de la fluorescencia en función del aumento de capreomicina. Cuando se añadió el factor de iniciación 1 (IF1) al complejo 30S-IF3DL, la unión de capreomicina también resultó en un acercamiento de los dominios de IF3DL, pero ligeramente menor que la que ocurre en ausencia de IF1. Los parámetros cinéticos entre los complejos 30S – IF3DL en ausencia o presencia de IF1 con capreomicina indican que el acercamiento de los dominios de IF3DL es independiente de IF1. En conclusión, capreomicina induce un acercamiento de los dominios de IF3, lo que podría afectar su función. / Tuberculosis is a prevalent disease in Peru and cases of multridrugresistant tuberculosis (MDR – TB) are increasing. Capreomycin is a ciclic peptide antibiotic, that was used before in the second line treatment of multidrugresistant tuberculosis. The known molecular mecanism of action is the inhibition of the elongation phase of protein synthesis. In this study, we used the microorganism E. coli, because it is a gold standard to study antibiotic mechanism of action and a spectrophotometer, called stopped-flow, to show conformational changes of the initiation factor 3 (IF3). It was shown that binding of capreomycin to the small subunit 30S brings IF3 domains into proximity, which seems like a decrease of fluorescence. This effect was found to be concentration dependent, finding a greater fluorescence decrease when the concentration of capreomycin was higher. When initiation factor 1 (IF1) was added to the 30S – IF3DL complex with capreomycin, a further decrease of inter domain distance was observed; yet, slightly less than in absence of IF1. The kinetic analysis of capreomycin binding in the presence or absence of IF1 shows that IF3DL inter domain distance reduction is IF1 – independent. In conclusion, capreomycin induces a reduction of the inter domain distance of IF3, which is expected to perturb its main fidelity function. / Tesis
| Identifer | oai:union.ndltd.org:PERUUPC/oai:repositorioacademico.upc.edu.pe:10757/659665 |
| Date | 10 February 2022 |
| Creators | Candusso - Carbone, Alessandra |
| Contributors | Sanchez-Castro, Ana, Milón Mayer, Pohl Luis |
| Publisher | Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC), PE |
| Source Sets | Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC) |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | info:eu-repo/semantics/bachelorThesis |
| Format | application/pdf, application/epub, application/msword |
| Source | Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC), Repositorio Académico - UPC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess, Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ |
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