Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Os PeptÃdeos NatriurÃticos (NPs) tÃm significativa participaÃÃo na regulaÃÃo na homeostasia cardiovascular, renal e endÃcrina, e tÃm sido descritos nos venenos de serpentes peÃonhentas. A Crotalus durissus cascavella, uma serpente terrÃcola caracterÃstica da caatinga do Nordeste do Brasil, possui em seu veneno total um NP (NPCdc), ao qual sÃo relatados efeitos vasculares e renais. O objetivo desse trabalho foi sintetizar em fase sÃlida o NPCdc e avaliar suas aÃÃes renais atravÃs da perfusÃo de rim isolado e em cultura de cÃlulas tubulares renais da linhagem MDCK e LLC-MK2. Rins de ratos Wistar machos, pesando entre 250-300 g, foram excisados cirurgicamente e perfundidos com soluÃÃo de Krebs-Henseleit modificada com 6% p/v de albumina bovina previamente dialisada. Foram investigados os efeitos do NPCdc em quatro concentraÃÃes (0,03 Âg/mL; 0,1 Âg/mL; 0,3 Âg/mL e 1 Âg/mL; n=6). As cÃlulas MDCK e LLC-MK2 foram cultivadas em meio de cultura RPMI 1640 suplementado com 10% v/v de Soro Bovino Fetal e entÃo avaliadas na presenÃa do NPCdc em diversas concentraÃÃes em um perÃodo de incubaÃÃo de 24 horas. ApÃs esse perÃodo, foram realizados ensaios de viabilidade celular. Os dados foram comparados estatisticamente considerando P<0,05. Houve aumento na pressÃo de perfusÃo (PP) em 0,03 Âg/mL e reduÃÃo em 1 Âg/mL. A resistÃncia vascular renal (RVR) apresentou aumento em 0,03 Âg/mL. O fluxo urinÃrio (FU) aumentou em 0,03 Âg/mL e diminuiu em 0,1 Âg/mL e 1 Âg/mL. O ritmo de filtraÃÃo glomerular (RFG) encontrou-se diminuÃdo nas quatro concentraÃÃes testadas. O clearance osmolar (COsm) apresentou-se aumentado em 0,03 μg/mL e reduzido em 0,1 μg/mL e 1 μg/mL. O percentual de transporte tubular total e proximal de sÃdio (%TNa+ e %TpNa+, respectivamente) e cloreto (%TCl- e %TpCl-, respectivamente) apresentaram reduÃÃes nas quatro concentraÃÃes testadas. JÃ o percentual de transporte tubular total e proximal de potÃssio (%TK+ e %TpK+, respectivamente) apresentaram-se reduzidos em 0,03 μg/mL e 0,3 μg/mL. A anÃlise histopatolÃgica mostrou a presenÃa de alteraÃÃes morfolÃgicas significativas, como degeneraÃÃo hidrÃpica concentraÃÃo-dependente em todas as concentraÃÃes, juntamente com discreta a moderada deposiÃÃo de material proteÃceo nos tÃbulos na concentraÃÃo de 0,03 μg/mL. Na cultura de cÃlulas MDCK e LLC-MK2, porÃm, o NPCdc nÃo foi capaz de diminuir a viabilidade celular. Esses resultados demonstram que o NPCdc modificou todos os parÃmetros avaliados na perfusÃo de rim isolado, alÃm de revelar alteraÃÃes de carÃter citotÃxico na anÃlise histopatolÃgica dos mesmos, todavia, nÃo as apresentando em culturas de cÃlulas tubulares renais. / Natriuretic Peptides (NPs) have significant interest in regulating the cardiovascular, renal and endocrine homeostasis, and have been described in the venom of venomous snakes. Crotalus durissus cascavella, a characteristic terrestrial snake of caatinga biome of northeastern Brazil, has in his whole venom an NP (NPCdc), of which are reported vascular and renal effects. The aim of this study was to synthesize NPCdc in solid phase and evaluate its renal actions through isolated kidney perfusion and culture of renal tubular cells of MDCK and LLC-MK2 line. Kidneys from male Wistar rats weighing 250-300 g were surgically excised and perfused with modified Krebs-Henseleit solution with 6 g% of previously dialyzed bovine serum albumin. The effects of NPCdc were investigated in four concentrations (0.03 μg/mL, 0.1 μg/mL, 0.3 μg/mL and 1 μg/mL, n=6). MDCK and LLC-MK2 cells were cultured in RPMI 1640 culture medium supplemented with 10% v/v Fetal Bovine Serum and then evaluated in presence of several concentrations of NPCdc at an incubation period of 24 hours. After this period, cell viability assays were performed. Data were statistically compared considering P<0.05. There was increase in perfusion pressure (PP) in 0.03 μg/mL and reduction in 1 μg/mL. Renal vascular resistance (RVR) was increased at 0.03 μg/mL. Urinary flow (UF) increased in 0.03 μg/mL and decreased in 0.1 μg/mL and 1 μg/mL. The glomerular filtration rate (GFR) was reduced at all the concentrations tested. Osmolar clearance (OsmC) was increased in 0.03 μg/mL and reduced in 0.1 μg/mL and 1 μg/mL. Percentage of the total and proximal tubular transport of sodium (%TNa+ and %pTNa+, respectively) and chloride (TCl-% and pTCl-%, respectively) showed reductions at all concentrations tested. Percentage of the total proximal tubular transport and potassium (%TK+ and pTK+%, respectively) were reduced in 0.03 μg/mL and 0.3 μg/mL. The histopathological analysis revealed the presence of significant morphological changes, such as concentration-dependent hydropic degeneration at all concentrations, along with mild to moderate deposition of proteinaceous material in the tubules in concentration 0.03 μg/mL. In the culture of MDCK and LLC-MK2 cells, however, NPCdc was not able to lower cell viability. These results demonstrate that NPCdc modified all parameters assessed in renal perfusion of isolated kidney, and showed cytotoxic alterations in histopathological analysis, however, not presenting it in cultures of renal tubular cells.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:9269 |
| Date | 19 January 2015 |
| Creators | JoÃo Alison de Moraes Silveira |
| Contributors | Helena Serra Azul Monteiro, Gandhi RÃdis Baptista, Nilberto Robson FalcÃo do Nascimento |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Farmacologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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