SILVEIRA, João Alison de Moraes. Efeitos renais e alterações morfológicas causadas pelo peptídeo natriurético sintético do veneno Crotalus durissus cascavella. 2015. 90 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-04-10T15:36:20Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_jamsilveira.pdf: 3286291 bytes, checksum: e25f6b6fad964a5696721f871a9fda1c (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-04-10T15:37:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_jamsilveira.pdf: 3286291 bytes, checksum: e25f6b6fad964a5696721f871a9fda1c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-10T15:37:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_jamsilveira.pdf: 3286291 bytes, checksum: e25f6b6fad964a5696721f871a9fda1c (MD5) Previous issue date: 2015 / Natriuretic Peptides (NPs) have significant interest in regulating the cardiovascular, renal and endocrine homeostasis, and have been described in the venom of venomous snakes. Crotalus durissus cascavella, a characteristic terrestrial snake of caatinga biome of northeastern Brazil, has in his whole venom an NP (NPCdc), of which are reported vascular and renal effects. The aim of this study was to synthesize NPCdc in solid phase and evaluate its renal actions through isolated kidney perfusion and culture of renal tubular cells of MDCK and LLC-MK2 line. Kidneys from male Wistar rats weighing 250-300 g were surgically excised and perfused with modified Krebs-Henseleit solution with 6 g% of previously dialyzed bovine serum albumin. The effects of NPCdc were investigated in four concentrations (0.03 μg/mL, 0.1 μg/mL, 0.3 μg/mL and 1 μg/mL, n=6). MDCK and LLC-MK2 cells were cultured in RPMI 1640 culture medium supplemented with 10% v/v Fetal Bovine Serum and then evaluated in presence of several concentrations of NPCdc at an incubation period of 24 hours. After this period, cell viability assays were performed. Data were statistically compared considering P<0.05. There was increase in perfusion pressure (PP) in 0.03 μg/mL and reduction in 1 μg/mL. Renal vascular resistance (RVR) was increased at 0.03 μg/mL. Urinary flow (UF) increased in 0.03 μg/mL and decreased in 0.1 μg/mL and 1 μg/mL. The glomerular filtration rate (GFR) was reduced at all the concentrations tested. Osmolar clearance (OsmC) was increased in 0.03 μg/mL and reduced in 0.1 μg/mL and 1 μg/mL. Percentage of the total and proximal tubular transport of sodium (%TNa+ and %pTNa+, respectively) and chloride (TCl-% and pTCl-%, respectively) showed reductions at all concentrations tested. Percentage of the total proximal tubular transport and potassium (%TK+ and pTK+%, respectively) were reduced in 0.03 μg/mL and 0.3 μg/mL. The histopathological analysis revealed the presence of significant morphological changes, such as concentration-dependent hydropic degeneration at all concentrations, along with mild to moderate deposition of proteinaceous material in the tubules in concentration 0.03 μg/mL. In the culture of MDCK and LLC-MK2 cells, however, NPCdc was not able to lower cell viability. These results demonstrate that NPCdc modified all parameters assessed in renal perfusion of isolated kidney, and showed cytotoxic alterations in histopathological analysis, however, not presenting it in cultures of renal tubular cells. / Os Peptídeos Natriuréticos (NPs) têm significativa participação na regulação na homeostasia cardiovascular, renal e endócrina, e têm sido descritos nos venenos de serpentes peçonhentas. A Crotalus durissus cascavella, uma serpente terrícola característica da caatinga do Nordeste do Brasil, possui em seu veneno total um NP (NPCdc), ao qual são relatados efeitos vasculares e renais. O objetivo desse trabalho foi sintetizar em fase sólida o NPCdc e avaliar suas ações renais através da perfusão de rim isolado e em cultura de células tubulares renais da linhagem MDCK e LLC-MK2. Rins de ratos Wistar machos, pesando entre 250-300 g, foram excisados cirurgicamente e perfundidos com solução de Krebs-Henseleit modificada com 6% p/v de albumina bovina previamente dialisada. Foram investigados os efeitos do NPCdc em quatro concentrações (0,03 µg/mL; 0,1 µg/mL; 0,3 µg/mL e 1 µg/mL; n=6). As células MDCK e LLC-MK2 foram cultivadas em meio de cultura RPMI 1640 suplementado com 10% v/v de Soro Bovino Fetal e então avaliadas na presença do NPCdc em diversas concentrações em um período de incubação de 24 horas. Após esse período, foram realizados ensaios de viabilidade celular. Os dados foram comparados estatisticamente considerando P<0,05. Houve aumento na pressão de perfusão (PP) em 0,03 µg/mL e redução em 1 µg/mL. A resistência vascular renal (RVR) apresentou aumento em 0,03 µg/mL. O fluxo urinário (FU) aumentou em 0,03 µg/mL e diminuiu em 0,1 µg/mL e 1 µg/mL. O ritmo de filtração glomerular (RFG) encontrou-se diminuído nas quatro concentrações testadas. O clearance osmolar (COsm) apresentou-se aumentado em 0,03 μg/mL e reduzido em 0,1 μg/mL e 1 μg/mL. O percentual de transporte tubular total e proximal de sódio (%TNa+ e %TpNa+, respectivamente) e cloreto (%TCl- e %TpCl-, respectivamente) apresentaram reduções nas quatro concentrações testadas. Já o percentual de transporte tubular total e proximal de potássio (%TK+ e %TpK+, respectivamente) apresentaram-se reduzidos em 0,03 μg/mL e 0,3 μg/mL. A análise histopatológica mostrou a presença de alterações morfológicas significativas, como degeneração hidrópica concentração-dependente em todas as concentrações, juntamente com discreta a moderada deposição de material proteáceo nos túbulos na concentração de 0,03 μg/mL. Na cultura de células MDCK e LLC-MK2, porém, o NPCdc não foi capaz de diminuir a viabilidade celular. Esses resultados demonstram que o NPCdc modificou todos os parâmetros avaliados na perfusão de rim isolado, além de revelar alterações de caráter citotóxico na análise histopatológica dos mesmos, todavia, não as apresentando em culturas de células tubulares renais.

AMORA, Daniela Nascimento. Estudos dos efeitos renais do veneno da serpente Crotalus durrissus collilineatus. 2005. 100 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2005. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-09T16:25:34Z No. of bitstreams: 1 2005_dis_dnamora.pdf: 2079060 bytes, checksum: 4c0e0d1661e484a80753314f168cfcd4 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-12T12:12:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_dis_dnamora.pdf: 2079060 bytes, checksum: 4c0e0d1661e484a80753314f168cfcd4 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-12T12:12:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_dis_dnamora.pdf: 2079060 bytes, checksum: 4c0e0d1661e484a80753314f168cfcd4 (MD5) Previous issue date: 2005 / Crotalus durissus collilineatus is a snake usually found in semideciduous forest, the Cerrado region and its bites constitutes an important health problem. The most serious systemic change and primary cause of death is acute renal failure although the mecanisms of the damaging effects are not totally understood. We investigated the biological effects promoted by Crotalus durissus collilineatus crude venom and its fractions crotoxin and phopholipase A2. The toxic effects of C d collilineatus crude venom were evaluated by the histopathological analysis of organs such as heart, kidney, brain, lung and liver. Wistar rats were inoculated intraperitoneally with C d collilineatus crude venom. The liver showed steatosis and microvacuolation.The other organs showed normal morphological aspects. Renal effects were evaluated by the isolated perfused rat kidney method.The crude venom used at the lowest dose (10µg) increased perfusion pressure (PP), urinary flow (UF), and glomerular filtration rate (GFR), with maximal effect at 120min (PP: control(120) 110.3+/-3.69; venom(120) 126.8+/-10.2; UF: control(120) 0.19+/-0.03; venom(120) 0.23+/-0.06; GFR: control(120) 0.79+/-0.07; venom(120) 1.17+/-0.4). There was no effect on the percent of sodium tubular transport (%TNa+), the percent of potassium tubular transport (%TK+) and the percent of chloride tubular transport (%TCl-) The highest dose of the crude venom (30µg) caused a significantly decrease in PP (control(120) 110.3±3.69; venom(120) 96.7±8.1), RVR (control(120) 6.42±0.78; venom(120)4.8±0.56), UF (control(120) 0.19±0.03; venom(120) 0.12±0.01) and GFR (control(120) 0.79±0.07; venom(120)0.53±0.09). There was not effect on the percent of electrolytes tubular transport (%TNa+, %TK+ and %TCl-). Crotoxin (10mcg) produced a decrease in GFR (control(120) 0.79±0.07; crotoxin(120) 0.31±0.10), while PP, RVR and UF remained stable. Crotoxin also reduced %TK+ (control(120) 69.94±6.49; crotoxin(120) 33.28±4.78) and %TCl- (control(120) 79.53±2.67; crotoxin (120) 64.62±6.93) with maximal effect at 120min. Kidney perfused with phospholipase A2 (PLA2) showed a decrease in GFR (control(120) 0.79±0.07; PLA2 (120) 0.52±0.07) at 120min, whereas PP, RVR, UF and %TNa+ remained stable. PLA2 also reduced %TK+ (control(120) 69.94±6.49; PLA2 (120) 56.26±6.81) and %TCl- (control(60) 82.25±2.72; PLA2 (60) 75.04±4.26) at 60min. These results altogether indicate that Crotalus durissus collilineatus venom caused significative alterations in the renal parameters as well as hepatic damage. / A serpente Crotalus durissus collilineatus é encontrada na região do Cerrado e o acidente causado por esta espécie constitui um problema de saúde pública. A insuficiência renal aguda é a alteração sistêmica mais séria, apesar dos seus mecanismos não serem completamente esclarecidos. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos biológicos produzidos pelo veneno bruto de Crotalus durissus collilineatus e pelas frações crotoxina e fosfolipase A2. Foi realizado o estudo da toxicidade aguda do veneno bruto de C d collilineatus, através da análise histológica de coração, cérebro, rins, pulmões e fígado de ratos tratados com doses crescente do veneno. Nesse estudo foi observada a presença de alterações hepáticas como microvacualização e esteatose, enquanto os demais órgãos apresentaram aspectos normais. Os efeitos renais foram avaliados através do método de perfusão de rim isolado de rato. O veneno bruto, usado na dose de 10µg, causou um aumento na pressão de perfusão (PP), no fluxo urinário (FU) e no ritmo de filtração glomerular (RFG), com efeito máximo aos 120min (PP: controle(120) 110,3+/-3,69; veneno(120) 126,8+/-10,2;FU: controle(120) 0,19+/-0,03; veneno(120) 0,23+/-0,06; RFG: controle(120) 0,79+/-0,07; veneno(120) 1,17+/-0,4). Essa dose não produziu alterações no transporte tubular de sódio (%TNa+), potássio (%TK+) e de cloreto (%TCl-). A dose mais elevada de veneno bruto (30µg) causou um decréscimo significativo, com efeito máximo, aos 120min, na PP(controle(120) 110,3+/-3,69; veneno(120) 96,7+/-8,1), na RVR (controle(120) 6,42+/-0,78; veneno(120) 4,8+/-0,56), no FU (controle(120) 0,19+/-0,03; veneno(120) 0,12+/-0,01) e no RFG (controle(120) 0,79+/-0,07; veneno(120) 0,53+/-0,09). Não ocorreram alterações no transporte tubular de eletrólitos. A fração crotoxina não produziu alterações no RFG (controle(120) 0,79+/-0,07; crotoxina(120) 0,31+/-0,10). Esta fração também reduziu os %TK+ (controle(120) 69,94+/-6,49; crotoxina(120) 33,28+/-4,78) e %TCl- (controle(120) 79,53+/-2,67, crotoxina(120) 64,62+/-6,93). O grupo perfundido com FLA2 apresentou um decréscimo no RFG (controle(120) 0,79+/-0,07; FLA2 (120) 0,52+/-0,07), enquanto a PP, a RVR, o FU e o %TNa+ permaneceram estáveis. Foram observadas reduções no %TK+ aos 120min (controle(120) 69,94+/-6,49; FLA2(120) 56,26+/-6,81) e aos 60min, no %TCl- (controle(60) 82,25+/-2,72; FLA2(60) 75,04+/-4,26). Foi observada degeneração hidrópico vacuolar e a presença de material proteináceo nos túbulos renais, na análise histológica dos rins perfundidos tanto com veneno bruto quanto com as frações. Estes resultados indicam que o veneno de Crotalus durissus collilineatus causou alterações significativas nos parâmetros renais e nos aspectos morfológicos hepáticos.

As cascavéis são classificadas como grupo monofilético contendo dois gêneros descritos ao grupo: Crotalus ssp. e Sistrurus ssp., os quais surgiram no México a aproximadamente 20 milhões de anos, colonizando então, praticamente todo o continente americano. Fatores como dieta, dimorfismo sexual, ontogenia, mutações e distribuição geográfica podem influenciar na composição dos venenos e consequentemente no envenenamento. O presente trabalho tem como objetivo caracterizar o perfil proteico, bem como as propriedades enzimáticas e imunológicas dos venenos de algumas espécies e subespécies de Crotalus ssp. (C. atrox, C. scutulatus scutulatus, C. viridis viridis, C. vegrandis, C. durissus cascavella, C. d. collilineatus e C. d. terrificus). Os resultados indicaram pouca variabilidade entre os perfis eletroforéticos dos venenos, contudo as diferenças foram na concentração relativa das proteínas. A análises proteômica identificou alguns componentes dos venenos e serinopeptidases, metalopeptidases e fosfolipases A2 foram as mais abundantes. Além disso, por zimografia, observou-se que todos os venenos analisados apresentaram atividade proteolítica e que os venenos norte-americanos em todos os zimogramas foram mais hidrolíticos. Em caseína, a atividade enzimática dos venenos foi menos intensa comparado aos outros substratos. Em relação às gelatinases das amostras estudadas, pôde ser observado inibição da atividade enzimática induzida por alguns componentes utilizando EDTA, principalmente nos venenos de C. atrox e C. vegrandis. Em relação à inibição das serinopeptidases, foi observado que todas as gelatinases dos venenos crotálicos apresentaram inibição total ou parcial da atividade hidrolítica. Houve variabilidade entre as hialuronidases encontradas dos venenos crotálicos, tanto em relação à massa das enzimas e intensidade da degradação, quanto em diferentes pHs. Nos ensaios enzimáticos quantitativos (azocaseinolítico fosfolipásico e peptidásico) os venenos Norte Americanos demonstraram conter mais proteases em relação aos venenos Sul Americanos. Por Western Blotting, as amostras reagiram com os anticorpos presentes nos soros anti-crotálico e anti-botrópico, apresentando reatividade antigênica cruzada entre as amostras homólogas e heterólogas. Além disso, houve imunoreatividade entre o soro anti-jararagina e alguns componentes de todos os venenos crotálicos norte-americanos. / The rattlesnakes are classified as a monophyletic group containing two genera referring to the group: Crotalus ssp. and Sistrurus ssp., which arose in Mexico 20 millions of years ago, colonizing then, practically all the American continent. Some scientific works indicate that factors such as diet, sexual dimorphism, ontogeny, mutations and distribution may influence the composition of the venoms and consequently the poisoning. The present work aims to characterize the enzymatic and immunological properties of the venoms of some species and subspecies of Crotalus ssp. (C. atrox, C. scutulatus scutulatus, C. viridis viridis, C. vegrandis, C. durissus cascavella, C. collilineatus and C. d. terrificus). The results indicated few variability among the electrophoretic profiles of the venoms, however the differences were in the relative concentration of the proteins. The proteomic analysis identified serinopeptidases, metallopeptidases and phospholipases A2, which were the most abundant components of the venoms. In addition, zymography assays indicate that the all the venoms showed proteolytic activity, furthermore, the North American venoms, presented more hydrolysis in all zimograms. The caseinolytic activity was less intense compared with other substrates. Regarding the gelatinolytic activity of the samples, inhibition of the enzymatic activity of some components could be observed using EDTA, mainly in the C. atrox and C. vegrandis venoms. Partial or total inhibition was observed of the serinopeptidases activity of the crotalic gelatinases. Among the hyaluronidases, variations between crotalic venoms, in relation to the enzymes mass and degradation intensity were identified. In addition, when incubated at different pHs, the hyaluronidase profile presented different patterns in the activity. In the quantitative enzymatic assays (azocaseinolytic phospholipasic, peptidasic) the North American venoms displayed higher activity in relation to the South American venoms. In the Western Blotting assays, the samples reacted with antibodies present in the Brazilian anti-crotalic and bothropic sera, indicating cross-reactive antigenicity between the homologous and heterologous samples. Besides that, there was immunoreactivity between the anti-jararrhagin serum and some components of all North American crotalic venoms.

A administração sistêmica da peçonha bruta da cascavel Sul-Americana (Crotalus durissus terrificus, Cdt) induz prejuízos de memória espacial em ratos, sugerindo a ocorrência de dano hipocampal. No presente estudo, foram utilizadas técnicas In vivo e In vitro, a fim de testar os potenciais efeitos centrais do veneno de Cdt e da crotoxina (CTX), principal neurotoxina componente da peçonha bruta da serpente. Foram investigados (1) efeitos comportamentais da administração sistêmica e intrahipocampal do veneno de Cdt e da CTX envolvendo diferentes versões do labirinto aquático de Morris; (2) a morte neuronal, o curso temporal e a ação protetora do soro anticrotálico à exposição de culturas organotípicas de hipocampo a doses crescentes (0,05-1 &mu;g/mL) do veneno bruto de Cdt e de CTX, por meio da coloração fluorescente por Iodeto de propídeo (PI) (que reflete a morte neuronal); e (3) alguns dos possíveis mecanismos fisiopatológicos do envenenamento experimental em culturas de hipocampo utilizando o antagonista de receptores AMPA de glutamato, NBQX, à administração de 0,05 &mu;g/mL do veneno bruto de Cdt, para avaliar a possível participação do glutamato e seus receptores na morte neuronal. A administração sistêmica e intrahipocampal do veneno bruto de cascavel em ratos promoveu marcados prejuízos de memória espacial de referência e operacional. Diferentemente, a CTX promoveu prejuízos comportamentais apenas quando a administração foi intrahipocampal. As culturas expostas ao veneno bruto apresentaram dano sobretudo nas células piramidais de CA1, enquanto as culturas incubadas com CTX não apresentaram danos. Essa seletividade em relação ao CA1 foi mais proeminente nas doses baixas. O soro anticrotálico preveniu a morte neuronal quando administrado até uma hora após a exposição do veneno. O NBQX preveniu parcialmente o dano em CA1 indicando a participação de receptores AMPA de glutamato na cascata de eventos que subjazem os danos a estas células causados pela peçonha bruta de Cdt. Estes achados podem contribuir para a tanto para elucidação dos mecanismos quanto para a conduta utilizada durante o envenenamento crotálico / Systemic administration of the South American rattlesnake (Crotalus durissus terrificus, Cdt) venom in rats permanently disrupts performance in hippocampus-dependent spatial memory tasks, thus indicating the occurrence of damage to this brain area. In vivo and In vitro approaches were employed in the present study to investigate the effects of the venom and its main compound, crotoxin (CTX). We investigated (1) behavioral effects after both systemic and intrahipocampal administration of either venom or CTX in rats on performance in different versions of the Morris\' water maze task; (2) neuronal death, evaluated by the intensity of propidium iodide (PI) fluorescence (neurotoxicity of the venom and of CTX, and the protection by the antivenom, on organotypic hippocampal slice cultures, were evaluated by comparing slices exposed to venom and (1) slices treated only with vehicle - negative control - and (2) slices incubated with 1 mM glutamate - positive control for maximal neuronal death), and the time course of neurotoxic effects of 0.05-1 &mu;g/mL of crude Cdt venom and CTX, and the Brazilian anticrotalid serum on organotypic hippocampal slice cultures; and (3) provide an initial screening of the mechanisms underlying the venom action on cultured hippocampal slices, using the AMPA receptor antagonist NBQX and the crude venom at 0.5 &mu;g/mL dose, to test whether the neuronal damage is mediated by glutamate following the experimental envenomation. Both systemic and intrahippocampal administration of Cdt venom induces permanent disruption of spatial reference memory and spatial working memory in rats. In contrast, CTX only promoted behavioral effects when administered intrahippocampally. Slices exposed to Cdt venom, but not to CTX, exhibited substantial neuronal damage. This effect was particularly prominent in the CA1 sub-field at lower concentrations of the venom. The antivenom prevented damage when applied until 1 hour after the exposure of the venom. The NBQX partially prevented damage to CA1, thus indicating that AMPA receptors play a role in the damage caused by the Cdt venom. These findings may be helpful in the elucidation and management of rattlesnake envenomation

Apesar de fatores como o regime climático, aspectos reprodutivos e a disponibilidade de presas interferirem na atividade das serpentes, muito pouco se sabe a respeito dos mecanismos de ação desses fatores sobre a atividade. O objetivo desse estudo foi o de investigar as variações diárias e sazonais na atividade de uma população de cascavéis (Crotalus durissus), em uma área de Cerrado do Estado de São Paulo. Os dados foram obtidos a partir de capturas feitas por procura com veículo, encontros ocasionais e pelo monitoramento de indivíduos equipados com rádiostransmissores ou carretéis de linha. A atividade foi maior em dias mais quentes e mais úmidos. Os resultados revelaram que as cascavéis passam a maior parte do dia em repouso enquanto que a noite a atividade predominante é a caça. A atividade de caça foi mais freqüentemente observada na estação seca, possivelmente por coincidir com o período em que há maior necessidade metabólica provavelmente em função da reprodução. Os deslocamentos foram pouco freqüentes, especialmente na estação seca. As cascavéis apresentaram pico de atividade diária entre 18:00 e 20:59h, sendo que na estação seca concentraram sua atividade no período mais quente do dia e da noite. A atividade não respondeu às flutuações na abundância de presas capturadas em armadilhas de interceptação e queda. Os estudos sobre os movimentos estão intimamente atrelados ao conhecimento da direção, extensão e freqüência com que ocorrem os deslocamentos dos animais. Considerando que o ambiente é composto por um mosaico de microambientes, os movimentos permitem que os indivíduos explorem as porções mais adequadas às suas necessidades. O objetivo desse estudo foi descrever os deslocamentos diários e sazonais, bem como a área de uso de uma população de cascavéis, Crotalus durissus, numa área de Cerrado do Estado de São Paulo. Indivíduos de cascavéis foram monitorados por rádio-rastreamento e por carretéis de linha. Animais com maior tamanho corpóreo apresentaram tendência a realizar deslocamentos diários mais longos, distanciando-se mais do ponto inicial da captura. Não houve diferenças entre os deslocamentos médios diários e área de uso entre os sexos. A área de uso foi menor na estação chuvosa. Ambos os sexos apresentaram deslocamento real cerca de duas vezes maior do que a medida da distância em linha reta entre pontos consecutivos. Para ambos os sexos a fidelidade ao sítio foi maior na estação seca. Também nessa estação, as cascavéis apresentaram áreas de uso maiores. Aparentemente as condições climáticas da estação seca (temperatura e umidade relativa do ar mais baixas) não levaram a uma redução na atividade, mas sim a uma concentração dos deslocamentos nos períodos mais quentes do dia. A seleção e o uso do ambiente traz conseqüências diretas na taxa de ingestão de presas, sucesso reprodutivo e, no caso dos ectotérmicos, na manutenção da temperatura corpórea. O uso do ambiente depende não só de características individuais mas também da heterogeneidade do ambiente, além de fatores microclimáticos e do padrão de cobertura vegetal. No presente estudo, o uso do ambiente por indivíduos de cascavéis (Crotalus durissus) foi avaliado em um fragmento de Cerrado no estado de São Paulo. De um modo geral as cascavéis se mostraram generalistas quanto ao ambiente térmico. Entretanto, na estação chuvosa as cascavéis exibiram preferência por substratos mais frios durante o dia e mais quentes durante a noite. As cascavéis utilizaram predominantemente a superfície do solo tendo sido mais freqüentemente observadas sob arbustos. A localização das serpentes no ambiente esteve associada à presença de árvores, arbustos, substrato menos exposto e mais sombreado. Os indivíduos realizaram deslocamentos mais longos nas áreas de campo cerrado e áreas de brejo. Essa característica, aliada à baixa seletividade térmica do ambiente, pode contribuir para que as cascavéis colonizem áreas desmatadas, desde que haja um sombreamento do substrato e cobertura vegetal semelhantes aqueles encontrados em fisionomias do Cerrado. / The snake activity has been associated with climatic conditions, reproduction and prey availability. However, there is no detailed information about how those factors act on snake activity. The objective of this study was describe daily and seasonal variations in activity of a south-america rattlesnake (Crotalus durissus) population in a Cerrado fragment on state of São Paulo. Data was obtained from encounters of snakes on road survey, occasional encounters and use of radio-transmitters and thread-bobbins device. The snakes activity was higher in warmer and moister days. This study shows that rattlesnakes spend most part of the day resting and most part of the night in ambush posture (foraging). Foraging was more common on dry season, probably in function of energetic needs of reproduction. Movements was uncommon, specially on dry season. The snakes reveled a peak of activity between 18:00 and 20:59 h. Daily activity keeps concentrated to the warmest party of the day and night on dry season. There was no relation between snake activity and fluctuations on abundance of small rodents by captures on pitfall-traps. Ecological studies of movements are highly dependent on knowledge about the direction, extension, and frequency of animal movements. Since the environment is composed by a mosaic of microhabitats, movements allow individuals to explore portions of the environment that are more adequate to their needs. The purpose of this study was to describe daily and seasonal movements and the habitat use for a population of the South American rattlesnake, Crotalus durissus. The population studied inhabit a Cerrado area in the state of São Paulo, southeastern Brazil. Snakes were tracked with radio transmitters and thread-bobbins. Larger animals tended to show longer daily movements, moving farther from the initial site of capture. There were no differences in average daily movements and home-range sizes between sexes. Both sexes moved distances twice longer than that calculated by drawing a strait line between consecutive points. Site fidelity was higher in the dry season for both sexes. During the dry season, home-range was larger when compared to the wet season. Weather conditions during the dry season, such as low temperature and low air humidity, did not seem to cause a reduction in snake activity, but a concentration of movements during the warmest periods of the day Habitat use and habitat selection affects individual food intake, reproductive fitness and, for ectotherms, body temperature control. Habitat use depends on both animal characteristics and environmental heterogeneity (microclimatic and vegetation cover aspects). In this study habitat use was investigated in a population of the South-american rattlesnake (Crotalus durissus) in a Cerrado fragment in the state of São Paulo, southeastern Brazil. In general, snakes were thermal generalists. However, they showed substrate temperature preferences at the rainy season, when they selected colder substrates by the day and warmer substrates at night. Rattlesnakes were predominantly active on the surface and more frequently encountered under bushes. The presence of snakes on habitat was related to the presence of tress, bushes, unexposed and high shaded substrates. Snakes moved higher distances on campo cerrado and temporary flooded areas. This characteristic associated with low thermal selectivity could make rattlesnakes apt to colonize deforested areas were shade level and vegetation cover are similar to the Cerrado.

A serpente Crotalus durissus , popularmente conhecida como cascavel, pertence à família Viperidae, e como a maioria dos viperídeos, é uma espécie vivípara. Este estudo teve como objetivo descrever a histologia do oviduto de fêmeas adultas e do saco vitelino e cordão umbilical de fetos em estágios gestacionais avançados de Crotalus durissus . A placenta de Crotalus durissus é constituída pela aposição do epitélio de revestimento do oviduto com a membrana corio-alantoidina que recobre o hemisfério embrionário do ovo. Estas se interdigitam sutilmente e separando a membrana corio-alantoidinana e o revestimento do oviduto está um remanescente da casca do ovo, chamada de membrana da casca. Quando avaliada a distribuição das fibras do sistema colágeno na placenta corio-alantoidina observamos que as fibras se distribuem irregularmente formando arcabouços de sustentação para os vasos e conferindo maior resistência nas regiões próximas a superfície logo abaixo do epitélio coriônico. Em estágios avançados de gestação, a parede do oviduto de Crotalus durissus apresenta-se como uma estrutura delgada, composta por um epitélio com células cuboidais, repousando em uma lâmina própria constituída por tecido conjuntivo. A mucosa do oviduto de Crotalus durissus apresenta regiões com projeções semelhantes à vilos, sustentados por eixos de fibras colágenas. Em estágios avançados de gestação, a face voltada para o feto do saco vitelino está revestida por um epitélio de células colunares grandes com núcleo posicionado basalmente, apresentando grânulos eosinófilicos. O conteúdo vitelino é, basicamente, constituído por depósitos celulares ricos em proteína e muito eosinofílicos. A distribuição do vitelo parece apresentar uma organização em forma de cachos de uvas sendo os ramos constituídos por trabéculas de células que trazem consigo vasos sanguíneos. Em Crotalus durissus , o cordão umbilical promove a conexão entre os tecidos maternos e os fetos, sendo uma estrutura ricamente vascularizada, constituído por duas artérias e uma veia e o ducto alantoide, envoltos por um tecido mucoide (mesenquimal) / The snake Crotalus durissus, popularly known as rattlesnake, belongs to the family Viperidae, and like most viperids, is a viviparous species. This study aimed to describe the oviduct histology of adult females and yolk sac and umbilical cord of fetuses in advanced stages of pregnancy in Crotalus durissus. The Crotalus durissus placenta is formed by affixing the oviduct epithelium lining with chorio-alantoidina membrane covering the embryonic hemisphere of the \"egg\". These interdigitate subtly and separating the chorioalantoidinana membrane and the oviduct of the coating is one of the eggshell remnant, called the shell membrane. When evaluated the distribution of collagen fibers in the system chorio-alantoidina placenta observed that the fibers forming irregularly distributed support frameworks for vessels and providing greater resistance in the regions near the surface just below the chorionic epithelium. In advanced stages of pregnancy, the wall of the oviduct in Crotalus durissus appears as a thin structure made up of a cuboidal epithelium with cells, resting on a lamina consists of connective tissue. The mucosa of the oviduct of Crotalus durissus presents regions with projections similar to the villi, supported by shafts of collagen fibers. In advanced stages of pregnancy, the fetus side facing the yolk sac is coated by a large columnar epithelial cells with basally placed core, with eosinophilic granules. The yolk contents basically comprised of cellular rich protein deposits, and eosinophilic. The distribution of the calf seems to present an organization in a \"bunch of grapes\" being the groups consisting of trabecular cells bring with blood vessels. In Crotalus durissus, the umbilical cord promotes the connection between fetal and maternal tissues and is a highly vascularized structure, consisting of two arteries and one vein, and the allantoic duct, surrounded by a mucoid tissue (mesenchymal)

As cascavéis são classificadas como grupo monofilético contendo dois gêneros descritos ao grupo: Crotalus ssp. e Sistrurus ssp., os quais surgiram no México a aproximadamente 20 milhões de anos, colonizando então, praticamente todo o continente americano. Fatores como dieta, dimorfismo sexual, ontogenia, mutações e distribuição geográfica podem influenciar na composição dos venenos e consequentemente no envenenamento. O presente trabalho tem como objetivo caracterizar o perfil proteico, bem como as propriedades enzimáticas e imunológicas dos venenos de algumas espécies e subespécies de Crotalus ssp. (C. atrox, C. scutulatus scutulatus, C. viridis viridis, C. vegrandis, C. durissus cascavella, C. d. collilineatus e C. d. terrificus). Os resultados indicaram pouca variabilidade entre os perfis eletroforéticos dos venenos, contudo as diferenças foram na concentração relativa das proteínas. A análises proteômica identificou alguns componentes dos venenos e serinopeptidases, metalopeptidases e fosfolipases A2 foram as mais abundantes. Além disso, por zimografia, observou-se que todos os venenos analisados apresentaram atividade proteolítica e que os venenos norte-americanos em todos os zimogramas foram mais hidrolíticos. Em caseína, a atividade enzimática dos venenos foi menos intensa comparado aos outros substratos. Em relação às gelatinases das amostras estudadas, pôde ser observado inibição da atividade enzimática induzida por alguns componentes utilizando EDTA, principalmente nos venenos de C. atrox e C. vegrandis. Em relação à inibição das serinopeptidases, foi observado que todas as gelatinases dos venenos crotálicos apresentaram inibição total ou parcial da atividade hidrolítica. Houve variabilidade entre as hialuronidases encontradas dos venenos crotálicos, tanto em relação à massa das enzimas e intensidade da degradação, quanto em diferentes pHs. Nos ensaios enzimáticos quantitativos (azocaseinolítico fosfolipásico e peptidásico) os venenos Norte Americanos demonstraram conter mais proteases em relação aos venenos Sul Americanos. Por Western Blotting, as amostras reagiram com os anticorpos presentes nos soros anti-crotálico e anti-botrópico, apresentando reatividade antigênica cruzada entre as amostras homólogas e heterólogas. Além disso, houve imunoreatividade entre o soro anti-jararagina e alguns componentes de todos os venenos crotálicos norte-americanos. / The rattlesnakes are classified as a monophyletic group containing two genera referring to the group: Crotalus ssp. and Sistrurus ssp., which arose in Mexico 20 millions of years ago, colonizing then, practically all the American continent. Some scientific works indicate that factors such as diet, sexual dimorphism, ontogeny, mutations and distribution may influence the composition of the venoms and consequently the poisoning. The present work aims to characterize the enzymatic and immunological properties of the venoms of some species and subspecies of Crotalus ssp. (C. atrox, C. scutulatus scutulatus, C. viridis viridis, C. vegrandis, C. durissus cascavella, C. collilineatus and C. d. terrificus). The results indicated few variability among the electrophoretic profiles of the venoms, however the differences were in the relative concentration of the proteins. The proteomic analysis identified serinopeptidases, metallopeptidases and phospholipases A2, which were the most abundant components of the venoms. In addition, zymography assays indicate that the all the venoms showed proteolytic activity, furthermore, the North American venoms, presented more hydrolysis in all zimograms. The caseinolytic activity was less intense compared with other substrates. Regarding the gelatinolytic activity of the samples, inhibition of the enzymatic activity of some components could be observed using EDTA, mainly in the C. atrox and C. vegrandis venoms. Partial or total inhibition was observed of the serinopeptidases activity of the crotalic gelatinases. Among the hyaluronidases, variations between crotalic venoms, in relation to the enzymes mass and degradation intensity were identified. In addition, when incubated at different pHs, the hyaluronidase profile presented different patterns in the activity. In the quantitative enzymatic assays (azocaseinolytic phospholipasic, peptidasic) the North American venoms displayed higher activity in relation to the South American venoms. In the Western Blotting assays, the samples reacted with antibodies present in the Brazilian anti-crotalic and bothropic sera, indicating cross-reactive antigenicity between the homologous and heterologous samples. Besides that, there was immunoreactivity between the anti-jararrhagin serum and some components of all North American crotalic venoms.

Apesar de fatores como o regime climático, aspectos reprodutivos e a disponibilidade de presas interferirem na atividade das serpentes, muito pouco se sabe a respeito dos mecanismos de ação desses fatores sobre a atividade. O objetivo desse estudo foi o de investigar as variações diárias e sazonais na atividade de uma população de cascavéis (Crotalus durissus), em uma área de Cerrado do Estado de São Paulo. Os dados foram obtidos a partir de capturas feitas por procura com veículo, encontros ocasionais e pelo monitoramento de indivíduos equipados com rádiostransmissores ou carretéis de linha. A atividade foi maior em dias mais quentes e mais úmidos. Os resultados revelaram que as cascavéis passam a maior parte do dia em repouso enquanto que a noite a atividade predominante é a caça. A atividade de caça foi mais freqüentemente observada na estação seca, possivelmente por coincidir com o período em que há maior necessidade metabólica provavelmente em função da reprodução. Os deslocamentos foram pouco freqüentes, especialmente na estação seca. As cascavéis apresentaram pico de atividade diária entre 18:00 e 20:59h, sendo que na estação seca concentraram sua atividade no período mais quente do dia e da noite. A atividade não respondeu às flutuações na abundância de presas capturadas em armadilhas de interceptação e queda. Os estudos sobre os movimentos estão intimamente atrelados ao conhecimento da direção, extensão e freqüência com que ocorrem os deslocamentos dos animais. Considerando que o ambiente é composto por um mosaico de microambientes, os movimentos permitem que os indivíduos explorem as porções mais adequadas às suas necessidades. O objetivo desse estudo foi descrever os deslocamentos diários e sazonais, bem como a área de uso de uma população de cascavéis, Crotalus durissus, numa área de Cerrado do Estado de São Paulo. Indivíduos de cascavéis foram monitorados por rádio-rastreamento e por carretéis de linha. Animais com maior tamanho corpóreo apresentaram tendência a realizar deslocamentos diários mais longos, distanciando-se mais do ponto inicial da captura. Não houve diferenças entre os deslocamentos médios diários e área de uso entre os sexos. A área de uso foi menor na estação chuvosa. Ambos os sexos apresentaram deslocamento real cerca de duas vezes maior do que a medida da distância em linha reta entre pontos consecutivos. Para ambos os sexos a fidelidade ao sítio foi maior na estação seca. Também nessa estação, as cascavéis apresentaram áreas de uso maiores. Aparentemente as condições climáticas da estação seca (temperatura e umidade relativa do ar mais baixas) não levaram a uma redução na atividade, mas sim a uma concentração dos deslocamentos nos períodos mais quentes do dia. A seleção e o uso do ambiente traz conseqüências diretas na taxa de ingestão de presas, sucesso reprodutivo e, no caso dos ectotérmicos, na manutenção da temperatura corpórea. O uso do ambiente depende não só de características individuais mas também da heterogeneidade do ambiente, além de fatores microclimáticos e do padrão de cobertura vegetal. No presente estudo, o uso do ambiente por indivíduos de cascavéis (Crotalus durissus) foi avaliado em um fragmento de Cerrado no estado de São Paulo. De um modo geral as cascavéis se mostraram generalistas quanto ao ambiente térmico. Entretanto, na estação chuvosa as cascavéis exibiram preferência por substratos mais frios durante o dia e mais quentes durante a noite. As cascavéis utilizaram predominantemente a superfície do solo tendo sido mais freqüentemente observadas sob arbustos. A localização das serpentes no ambiente esteve associada à presença de árvores, arbustos, substrato menos exposto e mais sombreado. Os indivíduos realizaram deslocamentos mais longos nas áreas de campo cerrado e áreas de brejo. Essa característica, aliada à baixa seletividade térmica do ambiente, pode contribuir para que as cascavéis colonizem áreas desmatadas, desde que haja um sombreamento do substrato e cobertura vegetal semelhantes aqueles encontrados em fisionomias do Cerrado. / The snake activity has been associated with climatic conditions, reproduction and prey availability. However, there is no detailed information about how those factors act on snake activity. The objective of this study was describe daily and seasonal variations in activity of a south-america rattlesnake (Crotalus durissus) population in a Cerrado fragment on state of São Paulo. Data was obtained from encounters of snakes on road survey, occasional encounters and use of radio-transmitters and thread-bobbins device. The snakes activity was higher in warmer and moister days. This study shows that rattlesnakes spend most part of the day resting and most part of the night in ambush posture (foraging). Foraging was more common on dry season, probably in function of energetic needs of reproduction. Movements was uncommon, specially on dry season. The snakes reveled a peak of activity between 18:00 and 20:59 h. Daily activity keeps concentrated to the warmest party of the day and night on dry season. There was no relation between snake activity and fluctuations on abundance of small rodents by captures on pitfall-traps. Ecological studies of movements are highly dependent on knowledge about the direction, extension, and frequency of animal movements. Since the environment is composed by a mosaic of microhabitats, movements allow individuals to explore portions of the environment that are more adequate to their needs. The purpose of this study was to describe daily and seasonal movements and the habitat use for a population of the South American rattlesnake, Crotalus durissus. The population studied inhabit a Cerrado area in the state of São Paulo, southeastern Brazil. Snakes were tracked with radio transmitters and thread-bobbins. Larger animals tended to show longer daily movements, moving farther from the initial site of capture. There were no differences in average daily movements and home-range sizes between sexes. Both sexes moved distances twice longer than that calculated by drawing a strait line between consecutive points. Site fidelity was higher in the dry season for both sexes. During the dry season, home-range was larger when compared to the wet season. Weather conditions during the dry season, such as low temperature and low air humidity, did not seem to cause a reduction in snake activity, but a concentration of movements during the warmest periods of the day Habitat use and habitat selection affects individual food intake, reproductive fitness and, for ectotherms, body temperature control. Habitat use depends on both animal characteristics and environmental heterogeneity (microclimatic and vegetation cover aspects). In this study habitat use was investigated in a population of the South-american rattlesnake (Crotalus durissus) in a Cerrado fragment in the state of São Paulo, southeastern Brazil. In general, snakes were thermal generalists. However, they showed substrate temperature preferences at the rainy season, when they selected colder substrates by the day and warmer substrates at night. Rattlesnakes were predominantly active on the surface and more frequently encountered under bushes. The presence of snakes on habitat was related to the presence of tress, bushes, unexposed and high shaded substrates. Snakes moved higher distances on campo cerrado and temporary flooded areas. This characteristic associated with low thermal selectivity could make rattlesnakes apt to colonize deforested areas were shade level and vegetation cover are similar to the Cerrado.

A administração sistêmica da peçonha bruta da cascavel Sul-Americana (Crotalus durissus terrificus, Cdt) induz prejuízos de memória espacial em ratos, sugerindo a ocorrência de dano hipocampal. No presente estudo, foram utilizadas técnicas In vivo e In vitro, a fim de testar os potenciais efeitos centrais do veneno de Cdt e da crotoxina (CTX), principal neurotoxina componente da peçonha bruta da serpente. Foram investigados (1) efeitos comportamentais da administração sistêmica e intrahipocampal do veneno de Cdt e da CTX envolvendo diferentes versões do labirinto aquático de Morris; (2) a morte neuronal, o curso temporal e a ação protetora do soro anticrotálico à exposição de culturas organotípicas de hipocampo a doses crescentes (0,05-1 &mu;g/mL) do veneno bruto de Cdt e de CTX, por meio da coloração fluorescente por Iodeto de propídeo (PI) (que reflete a morte neuronal); e (3) alguns dos possíveis mecanismos fisiopatológicos do envenenamento experimental em culturas de hipocampo utilizando o antagonista de receptores AMPA de glutamato, NBQX, à administração de 0,05 &mu;g/mL do veneno bruto de Cdt, para avaliar a possível participação do glutamato e seus receptores na morte neuronal. A administração sistêmica e intrahipocampal do veneno bruto de cascavel em ratos promoveu marcados prejuízos de memória espacial de referência e operacional. Diferentemente, a CTX promoveu prejuízos comportamentais apenas quando a administração foi intrahipocampal. As culturas expostas ao veneno bruto apresentaram dano sobretudo nas células piramidais de CA1, enquanto as culturas incubadas com CTX não apresentaram danos. Essa seletividade em relação ao CA1 foi mais proeminente nas doses baixas. O soro anticrotálico preveniu a morte neuronal quando administrado até uma hora após a exposição do veneno. O NBQX preveniu parcialmente o dano em CA1 indicando a participação de receptores AMPA de glutamato na cascata de eventos que subjazem os danos a estas células causados pela peçonha bruta de Cdt. Estes achados podem contribuir para a tanto para elucidação dos mecanismos quanto para a conduta utilizada durante o envenenamento crotálico / Systemic administration of the South American rattlesnake (Crotalus durissus terrificus, Cdt) venom in rats permanently disrupts performance in hippocampus-dependent spatial memory tasks, thus indicating the occurrence of damage to this brain area. In vivo and In vitro approaches were employed in the present study to investigate the effects of the venom and its main compound, crotoxin (CTX). We investigated (1) behavioral effects after both systemic and intrahipocampal administration of either venom or CTX in rats on performance in different versions of the Morris\' water maze task; (2) neuronal death, evaluated by the intensity of propidium iodide (PI) fluorescence (neurotoxicity of the venom and of CTX, and the protection by the antivenom, on organotypic hippocampal slice cultures, were evaluated by comparing slices exposed to venom and (1) slices treated only with vehicle - negative control - and (2) slices incubated with 1 mM glutamate - positive control for maximal neuronal death), and the time course of neurotoxic effects of 0.05-1 &mu;g/mL of crude Cdt venom and CTX, and the Brazilian anticrotalid serum on organotypic hippocampal slice cultures; and (3) provide an initial screening of the mechanisms underlying the venom action on cultured hippocampal slices, using the AMPA receptor antagonist NBQX and the crude venom at 0.5 &mu;g/mL dose, to test whether the neuronal damage is mediated by glutamate following the experimental envenomation. Both systemic and intrahippocampal administration of Cdt venom induces permanent disruption of spatial reference memory and spatial working memory in rats. In contrast, CTX only promoted behavioral effects when administered intrahippocampally. Slices exposed to Cdt venom, but not to CTX, exhibited substantial neuronal damage. This effect was particularly prominent in the CA1 sub-field at lower concentrations of the venom. The antivenom prevented damage when applied until 1 hour after the exposure of the venom. The NBQX partially prevented damage to CA1, thus indicating that AMPA receptors play a role in the damage caused by the Cdt venom. These findings may be helpful in the elucidation and management of rattlesnake envenomation

Orientadores: Gilberto de Nucci, Fabíola Taufic Monica Iglesias / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T01:00:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_RenataLopes_M.pdf: 1896765 bytes, checksum: 79601ac40320374fce18c0c0436647a0 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O fato da cópula em serpentes ser muito prolongada, chegando a mais de 20 horas, sem que os mecanismos farmacológicos estejam conhecidos, motivou o nosso grupo a estudar o hemipênis de Crotalus durissus terrificus (cascavel). Diferentemente do observado em corpo cavernoso de outros mamíferos, o relaxamento induzido pela estimulação elétrica foi mais duradouro, além de resistente a ação da neurotoxina tetrodotoxina (TTX) em hemipênis de Crotalus. Uma hipótese inicial aventada foi que este canal, cuja cinética de abertura e fechamento é mais lenta, seria o responsável pelo relaxamento duradouro e, portanto, pelo coito mais prolongado. Baseado nestes resultados, e considerando que a resistência à TTX e duração prolongada também foram observadas na contração induzida pela estimulação elétrica, o objetivo do presente projeto foi caracterizar através de experimentos funcionais in vitro a contração mediada por agonistas ou pela estimulação elétrica. Os experimentos funcionais foram divididos em cinco etapas: 1) contração frente a noradrenalina, adrenalina e dopamina; contração frente a estimulação elétrica ou fenilefrina na presença de 2) tetrodotoxina (TTX), fentolamina e guanetidina; 3) neurotoxinas seletivas para os canais de sódio ou cálcio dependentes de voltagem; 4) após a troca de cloreto de sódio pela N-metil-D-glucamina (NMDG) e 5) determinação na noradrenalina triciada após estimulação elétrica em corpo cavernoso de Crotalus (CCC) e de coelho (RbCC). Em CCC todas as catecolaminas produziram contração dependente da concentração, sendo este efeito reduzido na presença de fentolamina. A estimulação elétrica induziu contração que foi dependente da frequência tanto em RbCC como em CCC, sendo esta contração devido, principalmente, à liberação de catecolaminas, uma vez que tanto a fentolamina como guanetidina praticamente aboliram esta resposta. Surpreendentemente, diferente de RbCC, em CCC a substituição equimolar de NaCl por N-metil-D-glucamina (NMDG) não causou nenhuma alteração na amplitude de contração frente a estimulação elétrica. Os anestésicos locais bupivacaína e ropivacaína reduziram significantemente a contração induzida pela estimulação elétrica em CCC e RbCC, enquanto a veratridina, um ativador deste canal, causou contração que foi dependente da liberação de catecolamina. Na presença das neurotoxinas GVIIA ou MVIIA pudemos observar uma redução de, aproximadamente, 50 % na contração induzida pela estimulação elétrica em CCC e RbCC. As toxinas para os canais de sódio ou cálcio não interferiram na contração induzida pela fenilefrina. Em relação aos experimentos com noradrenalina triciada não foi detectado nenhum sinal de radioatividade no sobrenadante de CCC após a estimulação elétrica, indicando a baixa sensibilidade do método ou a liberação de outra catecolamina. Por outro lado, em RbCC na presença de TTX, NMDG e na ausência de Ca+2 houve uma redução significativa na fração de [3H]-noradrenalina liberada após o estímulo elétrico, indicando a participação do influxo de sódio e de cálcio na neurotransmissão adrenérgica no RbCC. Os experimentos funcionais sugerem que em CCC a liberação de catecolaminas independe do influxo de sódio, porém é dependente do influxo de cálcio / Abstract: The snake's coitus may last up to 20 hours, although the pharmacological mechanism remains unknown. Conversely to mammalian corpus cavernosum (CC), the relaxation induced by electrical field stimulation (EFS) in Crotalus corpus cavernosum (CCC) was long-lasting and resistant to tetrodotoxin (TTX). Since TTX-resistant sodium current has much slower activation and inactivation kinetics than TTX-sensitive sodium current, one may speculate that the prolonged coitus was due to persistent sodium channel activation, and thus nitric oxide release. Based on these results and considering that TTX-resistant was also observed in EFS-induced contraction, the aim of this study was to characterize the contraction in CCC. The functional assays were divided in five steps: 1) concentration response curve to noradrenaline, adrenaline and dopamine in the absence and presence of phentolamine; contraction induced by electrical field stimulation (EFS) or phenylephrine (PE) in the presence of 2) TTX, phentolamine or guanetidine; 3) of blockers for voltage gated sodium- or calcium channels; 4) EFS- and PE-induced contraction after NaCl replacement by N-methyl-D-glucamine (NMDG); 5) quantification of titrated [3H] noradrenaline after EFS in RbCC and CCC. Noradrenaline, adrenaline, dopamine and EFS induced contraction, which were practically abolished in the presence of phentolamine or guanethidine in RbCC and CCC. Surprisingly, low sodium levels did not affect EFS-induced contraction in CCC, but abolished in RbCC. The sodium channel activator, veratridine induced contraction in both RbCC and CCC being this response abolished in the presence of phentolamine. Local anaesthetics, ropivacaine and bupivacaine and the neuronal N-type calcium channel blocker, GVIA and MVIIA reduced by, approximately, 50 % EFS-induced contraction, without affecting the contraction by PE. In CCC no radioactivity was detected after EFS stimulation, whereas in RbCC TTX, sodium or calcium ions removal a significant reduction on [3H]-noradrenaline release was observed. Our results suggest that EFS-induced contraction was independent on sodium influx, but rather dependent on calcium influx / Mestrado / Farmacologia / Mestra em Farmacologia