SILVEIRA, João Alison de Moraes. Efeitos renais e alterações morfológicas causadas pelo peptídeo natriurético sintético do veneno Crotalus durissus cascavella. 2015. 90 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-04-10T15:36:20Z
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Previous issue date: 2015 / Natriuretic Peptides (NPs) have significant interest in regulating the cardiovascular, renal and endocrine homeostasis, and have been described in the venom of venomous snakes. Crotalus durissus cascavella, a characteristic terrestrial snake of caatinga biome of northeastern Brazil, has in his whole venom an NP (NPCdc), of which are reported vascular and renal effects. The aim of this study was to synthesize NPCdc in solid phase and evaluate its renal actions through isolated kidney perfusion and culture of renal tubular cells of MDCK and LLC-MK2 line. Kidneys from male Wistar rats weighing 250-300 g were surgically excised and perfused with modified Krebs-Henseleit solution with 6 g% of previously dialyzed bovine serum albumin. The effects of NPCdc were investigated in four concentrations (0.03 μg/mL, 0.1 μg/mL, 0.3 μg/mL and 1 μg/mL, n=6). MDCK and LLC-MK2 cells were cultured in RPMI 1640 culture medium supplemented with 10% v/v Fetal Bovine Serum and then evaluated in presence of several concentrations of NPCdc at an incubation period of 24 hours. After this period, cell viability assays were performed. Data were statistically compared considering P<0.05. There was increase in perfusion pressure (PP) in 0.03 μg/mL and reduction in 1 μg/mL. Renal vascular resistance (RVR) was increased at 0.03 μg/mL. Urinary flow (UF) increased in 0.03 μg/mL and decreased in 0.1 μg/mL and 1 μg/mL. The glomerular filtration rate (GFR) was reduced at all the concentrations tested. Osmolar clearance (OsmC) was increased in 0.03 μg/mL and reduced in 0.1 μg/mL and 1 μg/mL. Percentage of the total and proximal tubular transport of sodium (%TNa+ and %pTNa+, respectively) and chloride (TCl-% and pTCl-%, respectively) showed reductions at all concentrations tested. Percentage of the total proximal tubular transport and potassium (%TK+ and pTK+%, respectively) were reduced in 0.03 μg/mL and 0.3 μg/mL. The histopathological analysis revealed the presence of significant morphological changes, such as concentration-dependent hydropic degeneration at all concentrations, along with mild to moderate deposition of proteinaceous material in the tubules in concentration 0.03 μg/mL. In the culture of MDCK and LLC-MK2 cells, however, NPCdc was not able to lower cell viability. These results demonstrate that NPCdc modified all parameters assessed in renal perfusion of isolated kidney, and showed cytotoxic alterations in histopathological analysis, however, not presenting it in cultures of renal tubular cells. / Os Peptídeos Natriuréticos (NPs) têm significativa participação na regulação na homeostasia cardiovascular, renal e endócrina, e têm sido descritos nos venenos de serpentes peçonhentas. A Crotalus durissus cascavella, uma serpente terrícola característica da caatinga do Nordeste do Brasil, possui em seu veneno total um NP (NPCdc), ao qual são relatados efeitos vasculares e renais. O objetivo desse trabalho foi sintetizar em fase sólida o NPCdc e avaliar suas ações renais através da perfusão de rim isolado e em cultura de células tubulares renais da linhagem MDCK e LLC-MK2. Rins de ratos Wistar machos, pesando entre 250-300 g, foram excisados cirurgicamente e perfundidos com solução de Krebs-Henseleit modificada com 6% p/v de albumina bovina previamente dialisada. Foram investigados os efeitos do NPCdc em quatro concentrações (0,03 µg/mL; 0,1 µg/mL; 0,3 µg/mL e 1 µg/mL; n=6). As células MDCK e LLC-MK2 foram cultivadas em meio de cultura RPMI 1640 suplementado com 10% v/v de Soro Bovino Fetal e então avaliadas na presença do NPCdc em diversas concentrações em um período de incubação de 24 horas. Após esse período, foram realizados ensaios de viabilidade celular. Os dados foram comparados estatisticamente considerando P<0,05. Houve aumento na pressão de perfusão (PP) em 0,03 µg/mL e redução em 1 µg/mL. A resistência vascular renal (RVR) apresentou aumento em 0,03 µg/mL. O fluxo urinário (FU) aumentou em 0,03 µg/mL e diminuiu em 0,1 µg/mL e 1 µg/mL. O ritmo de filtração glomerular (RFG) encontrou-se diminuído nas quatro concentrações testadas. O clearance osmolar (COsm) apresentou-se aumentado em 0,03 μg/mL e reduzido em 0,1 μg/mL e 1 μg/mL. O percentual de transporte tubular total e proximal de sódio (%TNa+ e %TpNa+, respectivamente) e cloreto (%TCl- e %TpCl-, respectivamente) apresentaram reduções nas quatro concentrações testadas. Já o percentual de transporte tubular total e proximal de potássio (%TK+ e %TpK+, respectivamente) apresentaram-se reduzidos em 0,03 μg/mL e 0,3 μg/mL. A análise histopatológica mostrou a presença de alterações morfológicas significativas, como degeneração hidrópica concentração-dependente em todas as concentrações, juntamente com discreta a moderada deposição de material proteáceo nos túbulos na concentração de 0,03 μg/mL. Na cultura de células MDCK e LLC-MK2, porém, o NPCdc não foi capaz de diminuir a viabilidade celular. Esses resultados demonstram que o NPCdc modificou todos os parâmetros avaliados na perfusão de rim isolado, além de revelar alterações de caráter citotóxico na análise histopatológica dos mesmos, todavia, não as apresentando em culturas de células tubulares renais.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.repositorio.ufc.br:riufc/11268 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Silveira, João Alison de Moraes |
| Contributors | Monteiro, Helena Serra Azul |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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