Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-20Bitstream added on 2014-06-13T20:42:45Z : No. of bitstreams: 1 cavalcante_wlg_dr_botib.pdf: 540446 bytes, checksum: aa99d8f07bfca51a15835afc3dc14831 (MD5) / As fosfolipases A2 (PLA2s) que apresentam substituição do resíduo de aspartato pelo de lisina na posição 49, PLA2s Lys49 homólogas, são importantes componentes miotóxicos dos venenos de serpentes da família Viperidae. Estas proteínas induzem severa mionecrose através de um mecanismo cálcio-independente. Tradicionalmente, as PLA2s Lys49 são classificadas como miotoxinas não-neurotóxicas, visto que não causam paralisia quando injetadas in vivo, mesmo em doses elevadas. No entanto, vários estudos in vitro demonstram que as PLA2s Lys49 dos venenos de serpentes do gênero Bothrops induzem bloqueio neuromuscular em preparações isoladas. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi avançar no conhecimento do mecanismo da ação paralisante in vitro destas toxinas. Para tanto, foram caracterizadas as atividades da MjTX-II, isolada do veneno da Bothrops moojeni, em preparações frênico-diafragma de camundongos, através de estudos miográfico, eletrofisiológico e morfológico. Os efeitos desta toxina foram comparados com os da PrTX-I e da BthTX-I, isoladas do veneno da Bothrops pirajai e da Bothrops jararacussu, respectivamente. Além disto, foi avaliada a capacidade da suramina e do extrato aquoso de Casearia sylvestris em neutralizarem as ações destas toxinas. Os resultados obtidos mostraram que a MjTX-II, da mesma forma que a BthTX-I e a PrTX-I, induziu efeitos miotóxico e bloqueador neuromuscular na preparação frênico-diafragma de camundongos. O estudo eletrofisiológico revelou a atividade despolarizante das três toxinas na membrana da fibra muscular, bem como a habilidade da MjTX-II em induzir aumento na freqüência dos potenciais de placa motora terminal em miniatura. A pré-incubação com e extrato aquoso de Casearia sylvestris neutralizou as atividades miotóxica e bloqueadora neuromuscular das três toxinas. De forma similar, a pré-incubação com... / Phospholipases A2 (PLA2s) with a lysine substituting for the highly conserved aspartate 49, Lys49 PLA2 homologues, are important myotoxic components in venoms from snakes of Viperidae family. These proteins induce conspicuous myonecrosis by a catalytically-independent mechanism. Traditionally, the Lys49 PLA2 homologues are classified as non-neurotoxic myotoxins given their inability to cause paralytic effect when injected in vivo, even at relatively high doses. However, a series of in vitro studies has shown that several Lys49 PLA2 homologues from Bothrops snake venoms induce neuromuscular blocking activity on nerve-muscle preparations in vitro. Therefore, the aim of this work was to advance in the understanding of the mechanisms underlying the in vitro paralyzing action of these proteins. Thus, we characterized the activities of MjTX-II, from Bothrops moojeni venom, in mice phrenic-diaphragm preparation by means of myographical, electrophysiological and morphological approaches. The effects of this toxin were compared with those of PrTX-I and BthTX-I, from Bothrops pirajai and Bothrops jararacussu venoms, respectively. Besides this, we evaluated the ability of suramin and the aqueous extract of Casearia sylvestris in neutralizing the actions of these toxins. The results showed that the MjTX-II, as well as BthTX-I and PrTX-I, induced myotoxic and neuromuscular blocking activities in phrenic-diaphragm preparation of mice. The electrophysiological study revealed the depolarizing activity of these toxins in the muscle fiber membrane and the ability of MjTX-II to increase the frequency of miniature endplate potentials. The pre-incubation with the aqueous extract of Casearia sylvestris neutralized both myotoxic and neuromuscular blocking activities of all toxins. Similarly, the pre-incubation with suramin neutralized the activities of MjTX-II. Taken together, these findings suggest that the ... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-18Bitstream added on 2014-06-13T20:01:50Z : No. of bitstreams: 1 santos_kr_dr_botfmvz.pdf: 1297936 bytes, checksum: 0c88aa25df17aa96c68c3329b1304d67 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / No Brasil, o gênero Strongyloides inclui duas espécies parasitas de répteis: Strongyloide ophidiae e Strongyloides cruzi. A primeira foi descrita em serpente Mastigodryas bifossatus e a segunda em lagartixa Hemidactylus mabouya. Na descrição de S. ophidiae apenas a fêmea partenogenética foi caracterizada em 1929 e, desde então, nenhum outro relato sobre esta espécie foi publicado. Estudos moleculares foram realizados com o objetivo de contribuir para a caracterização de Strongyloides spp. foram realizados, porém estes não incluíram S. ophidae. No presente estudo foi realizada a caracterização morfológica e molecular de S. ophidiae coletados em serpentes da região de Botucatu, Estado de São Paulo, Brasil. De um total de 125 animais, apenas quatro encontraram-se parasitados por S. ophidiae, porém fêmeas partenogenéticas foram recuperadas de apenas um animal. Coproculturas foram realizadas para obtenção das larvas L1, L2 e L3, bem como machos e fêmeas de vida livre, os quais foram morfologicamente analisados. Os produtos da PCR apresentaram 350 pb e as seqüências de nucleotídeos (número de acesso Genbank EU287935) isoladas deste nematódeo de Oxyrhopus guibei apresentaram 98% de identidade com Strongyloides procyonis (número de acesso AB272234.1 e AB205054.1) e 97% de identidade com Strongyloides cebus, Strongyloides stercoralis, Strongyloides sp. “ex snake” e Strongyloides fuelleborni (Genbank AB277236.1, AF279916.2, AJ417031.1 e AJ407030.1, respectivamente). A análise filogenética das espécies da família Strongyloididae e Rhabdiasidae demonstrou que, embora apresente 97% de similaridade com outras espécies, S. ophidiae encontra-se isolado em um ramo da árvore filogenética, caracterizando uma identidade diferente em relação a outras espécies analisadas. O presente estudo caracterizou morfológica e molecularmente S. ophidiae, parasita de serpentes da região de Botucatu, São Paulo, Brasil. / In Brazil the genus Strongyloides includes two reptile parasite: S. ophidiae and S. cruzi. The former was described in Mastigodryas bifossatus snake and the other in Hemidactylus mabouya gecko. In the description of S. ophidiae just the partenogenetic females was characterized in 1929 and, ever since, no other report about this species was published. Molecular studies for the characterization of Strongyloides spp. were reported, however these did not include S. ophidae. In the present study the morphological and molecular characterization of S. ophidiae obtained from snakes in Botucatu region, São Paulo State, Brazil was accomplished. Among the 125 studied animals only four snakes were found infected by S. ophidiae, however partenogenetic females were recovered in only one animal. Fecal exams had been performed for obtaining L1, L2 and L3 larvae, as well as free-living males and females, which were morphologically analyzed. PCR products amplified from S. ophidiae partenogenetic female samples presented about 350 bp. Nucleotide sequences (Genbank accession numbers EU287935) isolates from these nematodes from Oxyrhopus guibei presented 98% identity with Strongyloides procyonis (Genbank acession number AB272234.1 and AB205054.1) and 97% identity with Strongyloides cebus, Strongyloides stercoralis, Strongyloides sp. ex snake and Strongyloides fuelleborni (Genbank AB277236.1, AF279916.2, AJ417031.1 and AJ407030.1, respectively). The analysis of the phylogenetic relationship among the species of Strongyloididae and Rhabdiasidae demonstrated that, although there are similarity above 97% with the other species, S. ophidiae was allocated in an isolated branch of the phylogenetic tree, characterizing a different identity in relation to other species analyzed. The present study contributed for the morphological and molecular characterization of S. ophidae from the Botucatu region, São Paulo State, Brazil.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T20:41:37Z : No. of bitstreams: 1 nogueira_rmb_dr_botfmvz.pdf: 1409163 bytes, checksum: 77f246cac8ac22e33da1c78a59c32e6e (MD5) / O presente trabalho teve por objetivo avaliar os aspectos clínico, laboratorial, histopatológico e tratamento na intoxicação experimental com o veneno da serpente Crotalus durissus terrificus em cães. Foram utilizados 21 cães, adultos, sem raça definida, divididos em três grupos com sete animais: grupo I - somente veneno; grupo II - veneno + cinco ampolas de soro antiofídico + fluidoterapia; grupo III - veneno + cinco ampolas de soro antiofídico + fluidoterapia + alcalinização da urina. O veneno da serpente Crotalus durissus terrificus liofolizado e reconstituído em solução salina foi inoculado pela via subcutânea, na dose de 1mg/kg de peso vivo, na face lateral da coxa do membro posterior esquerdo dos cães dos grupos I, II e III. Os animais foram submetidos às avaliações clínica, hematológica, hemostática, urinálise, bioquímica sérica, hemogasometria, pressão arterial sistólica, eletrocardiograma e mielograma. Três animais de cada grupo foram eutanasiados e foram colhidas amostras do tecido muscular para avaliação histopatológica. Os resultados mostraram a eficácia da soroterapia na neutralização do veneno e mostrou que o veneno da serpente Crotalus durissus terrificus provoca alterações clínica, hematológica, hemostática, de urinálise, hemogasométrica, da pressão arterial sistólica, do mielograma e histopatológica nos cães. Não houve evidências de alterações eletrocardiográficas e bioquímica. / This work evaluated the clinical, laboratorial, histological and treatment in the experimental intoxication with the venom of the Crotalus durissus terrificus snake in dogs. Twenty-one adults (mixed breed) dogs divided in three groups with seven animals were used: group I - only venom; group II - venom + five bladders of anti-ophidic serum + fluid therapy; group III - venom + five bladders of anti-ophidic serum + fluid therapy + alkalization of the urine. The lyophilized venom of the Crotalus durissus terrificus snake was reconstituted in saline solution and inoculated subcutaneous, in the dose of 1mg/kg B.W., in the lateral face of the left thigh of the dogs of the groups I, II and III. The animals were submitted to clinical, hematological evaluation, hemostatic, urinalysis, biochemical, blood gas analysis, systolic arterial pressure, electrocardiogram and mielograma. Three animals of each group were eutanasied and samples from the muscular tissue and popliteal lymphonode were collected for hitopatological evaluation. The results showed the effectiveness of the serum therapy in the neutralization of the venom and it showed that the venom of the Crotalus durissus terrificus snake causes clinical, hematological, hemostatic, of urinary, hemogasometric changes, of the systolic arterial pressure, of the mielograma and histopathological in the dogs. There were no evidences of alterations eletrocardiografic and biochemical alterations.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-19Bitstream added on 2014-06-13T18:39:04Z : No. of bitstreams: 1 matayoshi_pm_me_botfmvz.pdf: 3681017 bytes, checksum: f1870e3236cf8dcb421bbce2949ab641 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivou-se caracterizar o ciclo reprodutivo sazonal de 28 cascavéis adultas Crotalus durissus terrificus (14 machos e 14 fêmeas), recém chegadas da natureza, provenientes da região de Botucatu - SP. Para tanto, foram realizadas avaliações ultrassonográficas do sistema reprodutor e dosagens séricas de progesterona e testosterona. As coletas e os exames foram realizados em diferentes meses do ano (abril, julho, outubro e janeiro), representando as quatro estações climáticas. As fêmeas que apresentaram crescimento folicular também foram avaliadas nos meses de setembro e dezembro de 2010, e abril de 2011 para melhor acompanhamento da dinâmica folicular e evolução gestacional. Foi possível identificar e caracterizar ultrassonograficamente estruturas reprodutivas como testículos, folículos prévitelogênicos e vitelogênicos, embriões e ovos atrésicos. Os testículos apresentaram maior comprimento em janeiro. Os maiores níveis séricos de testosterona foram observados em janeiro e abril, pico da espermatogênese e fase de cópula, respectivamente. Os folículos vitelogênicos em crescimento foram visibilizados nas avaliações de abril e julho. As ovulações e as gestações iniciaram em setembro e outubro, onde foi observado um aumento nos níveis séricos de progesterona que se mantiveram altos durante toda a gestação, decaindo após o parto. As gestações duraram aproximadamente quatro meses e os nascimentos ocorreram entre dezembro e janeiro. As fêmeas em período não reprodutivo apresentaram folículos pré-vitelogêncios e níveis baixos de progesterona em todas as avaliações / This study aimed to characterize the seasonal reproductive cycle of 28 adult Crotalus durissus terrificus rattlesnakes (14 males and 14 females) newly arrived from the wild in the region of Botucatu, SP. For this purpose, we performed sonographic evaluations of their reproductive system and measurement of progesterone and testosterone from serum samples. Blood collections and examinations were conducted in different months of the year (April, July, October and January), which represented the four seasons. Females that had follicular growth were also evaluated in September and December of 2010 and April 2011 for better monitoring of the follicular dynamics and pregnancy evolution. It was possible to identify and characterize by ultrasound reproductive structures like testes, previtellogenic and vitellogenic follicles, atretic eggs and embryos. The testes showed greater length in January. The higher serum levels of testosterone were observed in January and April, which represented the peak phase of spermatogenesis and mating, respectively. Vitellogenic growing follicles were seen in evaluations in April and July. Ovulations and pregnancies started in September and October, when serum progesterone levels increased, and then remained high throughout pregnancy, decreasing after birth. The pregnancies lasted about four months and births occurred between December and January. Females in nonreproductive period had previtellogenic follicles and low levels of progesterone in all evaluations

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1763_1.pdf: 7224900 bytes, checksum: a45df66ab6cb50efe0d902c354613b7e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Serpentes mantidas em cativeiro estão susceptíveis a diversas alterações cutâneas, incluindo descoloração das escamas devido a múltiplos fatores. O presente trabalho se propôs analisar a pele de 15 serpentes da subespécie Crotalus durissus cascavella mantidas em cativeiro na UFPE durante 31 meses, investigar a possibilidade de contaminação bacteriológica desses animais, bem como comparar ultraestruturalmente as referidas lesões com escamas pretas, brancas e marrons de espécimes saudáveis. Dentre os 15 animais experimentais, sete já apresentavam lesões acrômicas cutâneas no início do estudo, as quais foram primeiramente visualizadas em cativeiro. Tanto as amostras de sangue quanto às de pele foram submetidas aos procedimentos de investigação bacteriológica e análise em microscopia eletrônica de transmissão, respectivamente. Ao final da análise, o número de serpentes enfermas aumentou de forma linear, atingindo 14 animais; enquanto o número de lesões do plantel aumentou exponencialmente (618%). A maioria das lesões foi observada no dorso da região rostro-cloacal das serpentes, surgindo em média com 0,45 cm² e alcançando 20,70 cm². As lesões cutâneas em sua fase inicial apresentaram-se discrômicas, originando-se na borda e entre as escamas e se expandindo horizontalmente, principalmente, na região dorsal. Os resultados das análises do soro das serpentes descartaram a possibilidade de contaminação por bactérias do gênero Treponema. Os resultados ultraestruturais das escamas controles evidenciaram diferenças no perfil epidérmico-dérmico de acordo com a coloração das mesmas, variação na densidade de melanóforos e a presença de guanóforos restritos a derme nas escamas marrom e branca. Nas escamas acrômicas observou-se desarranjo nas células da epiderme, destruição nuclear progressiva dos melanócitos epidérmicos e dérmicos, a presença de corpúsculos de inclusão intranucleares semelhantes a colônias virais e diversas partículas intranucleares e intracitoplasmáticas em células epidérmicas anucleadas. Os resultados revelam um processo crônico de despigmentação, semelhante ao vitiligo, que pode ter sido causado por um agente viral

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:29:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1796_1.pdf: 1268360 bytes, checksum: 056da2c8a53aa20d68faf2b92fd2e473 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Por razão de Os sertões se firmarem como um dos livros mais importantes da cultura brasileira, sua escritura está sujeita a inúmeros retornos, sejam por meios de textos críticos ou ficcionais. Diante de revisitações, as mais variadas possíveis dentro de contextos sociais e ficcionais específicos, é preciso compreender neste movimento de leitura, ao qual um texto está sujeito, que numa perspectiva hermenêutica, além de reconstruir a ressonância deixada pelo texto nas recepções ao longo do tempo, esta latitude interpretativa não deixa de também estar atenta à manifestação de como o sentido dessa obra se constitui no leitor contemporâneo. Analisar comparativamente Os sertões (1902), de Euclides da Cunha, e A casca da serpente (1989), de José J. Veiga, designa apresentar a relação intertextual entre os discursos, esclarecendo como o romance do escritor goiano ressignifica aspectos estéticos e ideológicos, colocandose como antidiscurso de um texto fundado na filosofia positivista e nas teorias científicas de raça em vigor no fim do século XIX. Pensar a reescritura como ressignificação é conceber que a natureza histórica de um texto está na atualização deste texto no percurso de suas recepções. Tratase de uma rememoração crítica atuando em favor da continuidade cultural

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:55:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Larice de Fatima Machado Couto.pdf: 1078794 bytes, checksum: 88c9ca87ed2a680efb3ed2b71f05cee0 (MD5) Previous issue date: 2006-06-23 / Até recentemente, a conservação do Cerrado tem sido negligenciada e tentativas de estabelecer áreas prioritárias para conservação foram baseadas em critérios subjetivos. As estratégias de conservação da biodiversidade devem passar por uma avaliação inicial dos processos ecológicos e evolutivos que geraram e mantém a diversidade de espécies em uma dada região, ou local. No presente trabalho, foram utilizados dados macroecológicos de distribuição de 129 espécies de serpentes do Cerrado para avaliar padrões espaciais na riqueza, bem como para propor uma estratágia de conservação para essas espécies. Os pontos de ocorrência foram mapeados em uma Grid de 181 células com resolução de 1º, abrangendo todo a Bioma Cerrado. Verificou-se que as variáveis ambientais explicam apenas 34,65% (r² = 0.346) da variação na riqueza de serpentes do Cerrado. Para seleção de áreas prioritárias, verificou-se que são necessárias 14 quadrículas do bioma para representar todas as espécies de serpentes do Cerrado no mínimo uma vez. Células com menor custo estão concetradas principalmente no sudoeste do bioma. Os resultados demonstram que é possível gerar redes que contenham todas as espécies de serpentes e, ao mesmo tempo, menor quantidade de ocupação humana, visando minimizar conflitos entre desenvolvimento e conservação. Entretanto, esses resultados devem ser considerados preliminares e estudos mais detalhados são necessários para avaliar os padrões de riqueza de serpentes do Cerrado e estabelecer unidades de conservação, visto que, para a maioria das espécies, o conhecimento sobre distruição e taxonomia é incompleto.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-15Bitstream added on 2014-06-13T18:26:28Z : No. of bitstreams: 1 cardoso_ff_me_botib.pdf: 693511 bytes, checksum: ce598a499b044fd23ed66dd6f42f2f0a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os acidentes envolvendo as serpentes do gênero Bothrops se destacam no Brasil e em outros países da América Latina, representando 90% das notificações. O envenenamento botrópico é caracterizado por intensa mionecrose local que não é eficientemente neutralizada pelo único tratamento disponível, isto é, a soroterapia. Como conseqüência, em casos graves, este acidente pode levar a amputação de membros, desabilitando a vítima. Os principais responsáveis pelo desenvolvimento da mionecrose são proteínas com estruturas homólogas às enzimas fosfolipases A2 (PLA2s). Entre essas se destacam as variantes cataliticamente inativas que apresentam como característica um resíduo de lisina na posição 49 (Lys49-PLA2s). Tradicionalmente, as Lys49-PLA2s são consideradas miotoxinas não-neurotóxicas, uma vez que não induzem paralisia in vivo. No entanto, em preparações isoladas, tal efeito é observado. Recentemente, sugeriu-se que a paralisia muscular in vitro, da mesma forma que a lesão muscular, resultaria da atividade desestabilizadora de membrana da fibra muscular induzida por estas toxinas. O presente estudo teve como objetivo investigar a relação entre os efeitos miotóxico e paralisante das Lys49-PLA2s e contribuir para o esclarecimento do mecanismo de ação e da relação estrutura/atividade dessas toxinas. Sendo assim, realizaram-se estudos miográficos e morfológicos em preparações neuromusculares de camundongos utilizando a PrTX-I (Lys49-PLA2 isolada do veneno de Bothrops pirajai) e potenciais inibidores vegetais (ácido rosmarínico, ácido caféico e ácido aristolóquico). Os resultados obtidos mostraram as diferentes capacidades dos compostos vegetais em neutralizar os efeitos miotóxico e paralisante da PrTX-I. Assim, o ácido rosmarínico neutralizou ambos os efeitos eficientemente... / Accidents caused by Bothrops snake genus stand out in Brazil and other Latin American countries, representing 90% of notifications. Bothropic envenoming is characterized by intense local myonecrosis, not effectively neutralized by serum therapy, the only available treatment. As a result, in severe cases, these accidents can lead to amputation of limbs, disabling the victim. The main responsibles for myonecrosis development are proteins with homologous structures from enzymes phospholipase A2 (PLA2s). Among these stand out catalytically inactive variants that have a characteristic lysine residue at position 49 (Lys49-PLA2s). Traditionally, Lys49-PLA2s myotoxins are considered non-neurotoxic, since they do not induce paralysis in vivo. However, this effect is observed in isolated preparations. It was recently suggested that muscle paralysis in vitro, as well as muscle injury, would result from the destabilizing activity of the muscle fiber membrane induced by these toxins. This study aimed to investigate the relationship between paralyzing and myotoxic effects of Lys49-PLA2s and contribute to the elucidation of the mechanism of action and structure/activity relationship of these toxins. Therefore, myographical and morphological studies were performed in neuromuscular preparations of mice using PrTX-I (Lys49-PLA2 isolated from Bothrops pirajai venom) and potential inhibitors from plants (rosmarinic acid, caffeic acid and aristolochic acid) as experimental tools. The results showed the different skills of plant compounds to neutralize myotoxic and paralyzing effects of PrTX-I. Thus, the rosmarinic acid efficiently neutralized both effects, whereas caffeic acid only partially inhibited the... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-18Bitstream added on 2014-06-13T20:31:20Z : No. of bitstreams: 1 saad_e_me_botfm.pdf: 33538599 bytes, checksum: 7da3936c04f4568697b6251d1fd6b720 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O veneno de Bothrops jararaca é constituído de misturas complexas de toxinas e entre os principais componentes estão as lectinas, metaloproteinases, serinoproteinases, desintegrinas, fosfolipases e os peptídeos. Esta composição pode variar de acordo com a idade, o sexo e a região da serpente. Este trabalho avaliou a variação individual do veneno de Bothrops jararaca da região de Botucatu – São Paulo, por meio da sua caracterização enzimática, bioquímica e farmacológica. Foram utilizados testes in vitro e ensaios biológicos. As atividades dos venenos foram comparadas ao Veneno Referência Nacional. A dosagem protéica apresentou variações entre os grupos de serpentes adultas (80% proteínas) e filhotes (40% proteínas). O perfil eletroforético apresentou perfis similares, geralmente com massas moleculares de 50 a 25 kDa, porém com variações intraespecíficas. O RP-HPLC revelou variações na concentração das proteínas. Na atividade coagulante não houve variação entre os grupos formados por adultos, no entanto, houve uma grande variação entre os grupos de filhotes e Veneno Referência Nacional, sendo estes mais coagulantes. A atividade hemorrágica mostrou maior atividade nos venenos de animais adultos, principalmente em machos recém chegados da natureza. Entretanto, os filhotes mantidos em regime de cativeiro apresentaram valores elevados, ficando muito próximos aos valores obtidos de machos adultos. Na atividade edematogênica, verificou-se um aumento do edema em todos os grupos de estudo não sendo possível avaliar se houve uma variação ontogenética entre os grupos estudados. Na dose letal média (DL50) houve uma grande variação de toxicidade em relação aos venenos, sendo as fêmeas cativas, três vezes mais tóxicas comparadas aos filhotes. Os resultados deste estudo ilustram a complexidade intra e interespecífica presentes em venenos de serpentes... / Bothrops jararaca venom comprises a complex mixture of toxins. Among its main components are: lectins, metalloproteinases, serine proteinases, disintegrins, phospholipases, and peptides. The venom composition can be present age, sex and region variation. This present study evaluated the individual variation of Bothrops jararaca venom in Botucatu region, São Paulo state, through enzymatic, biochemical and pharmacological characterizations of snake venoms which employed in vitro techniques and in vivo analysis. Venoms actions were compared with those of the National Venom Reference. Protein dosage varied between adult (80% proteins) and newborn (40% proteins). The electrophoretic profiles were similar, usually presenting molecular masses from 25 to 50 kDa; however, intraspecies variations were present. Due to the complexity of the technique, it was not possible to detect the individual chromatographic variations by means of RP-HPLC revealed individual protein variations on venom composition. There was no variation in the coagulant activity among adult groups; however, a great variation was observed between newborn groups and the National Venom Reference, the latter showing higher coagulant activity. Venoms from adult animals revealed greater hemorrhagic activity, mainly in newly captured males. Nevertheless, newborn kept in captivity also presented elevated hemorrhagic activity, close to that of adult males. Regarding the edematous activity, there was edema increase in all studied groups, therefore, it was not possible to evaluate if ontogenetic variations were present among studied animals. Concerning the median lethal dose (LD50), a great variation in venom toxicity was observed and captive females were three times more toxic when compared to newborn. Our findings showed the intraand interspecies complexity of snake venoms possibly represented by ontogenetic, sexual and environmental... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-09-26T13:15:00Z No. of bitstreams: 2 Tese - Kayena Delaix Zaqueo.pdf: 7739033 bytes, checksum: 806f81f900a0ed32e6a2052560d17a5f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-09-26T13:15:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Kayena Delaix Zaqueo.pdf: 7739033 bytes, checksum: 806f81f900a0ed32e6a2052560d17a5f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-26T13:15:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Kayena Delaix Zaqueo.pdf: 7739033 bytes, checksum: 806f81f900a0ed32e6a2052560d17a5f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-08-07 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Snake venoms are formed by organic and inorganic compounds and result in a complex product of biological nature which present as main objectives the detention, death and the promotion of initial digestion of its prey. In addition, presents a vast potential for exploration of molecules with pharmaceutical applications. Among organic compounds protease should be highlighted due its ability to cause changes on hemostatic system. Snake venoms serine proteases (SVSPs) are a class of proteases that act on different factors of the coagulation cascade. One SVSPs class is described as thrombin-like (SVTLEs) by mimicking some thrombin activities and displays coagulant ability in vitro through the degradation of fibrinogen chains α and/or β. The objectives were (i) to characterize structurally BpirSP-39 previously isolated from Bothrops pirajai venom and (ii) to isolate and characterize the first serine protease (SP) of B. brazili. Studies of this magnitude are justified because they can provide important information on the involvement of proteins during envenoming, which can contribute to a better understanding of the mechanisms of action of these enzymes. Primary and tertiary structures model of both isolated SPs were elucidated. BpirSP-39 presented 224 amino acids and has high identity when compared to other SVSPs. BbrzSP-32 was obtained from B. brazili venom after two chromatographic steps (affinity and reverse phase) and its primary structure showed 240 amino acid residues. Both SPs characterized are enzymes which may take the SP’s structure of Agkistrodon halys (PDB ID: 4E7N), an enzyme used as a model for molecular modeling. The enzymes are glycoproteins globular and monomeric with two α-helices and two barrels formed by sheet-β. BbrzSP- 32 showed 36 kDa of relative molecular mass and its absolute mass was confirmed by mass spectrometry as 32,520 Da. It present 79.48% identity when compared to other SVSPs and was able to degrade the α-chain of fibrinogen, in vitro models, and is considered a SVTLE-A. It showed a dose-dependent activity in the process of degradation of fibrin networks demonstrating greater specificity for this activity when compared to its thrombolytic action. BbrzSP-32 demonstrated proteolysis activity on gelatin and chromogenic substrates for serine proteases and thrombin-like enzymes (S- 2288 and S-2238 respectively), besides having coagulant activity on human plasma. 13 After pre-incubation with PMSF and benzamidine the coagulants and proteolytic activities on S-2288 and S-2238 substrate were reduced. BbrzSP-32 shows stability against pH and temperature variations, demonstrating optimum activity between 30 and 40 °C and in the pH range 7.5 to 8.5. The enzyme does not induce or interferes with the clotting washed platelets. When incubated with parasites Trypanosoma cruzi or Leishmania infantum, promastigotes and the epimastigote forms, respectively, and S. epidermidis (gram positive-bacteria), the enzyme presented to cytotoxic on microorganisms, furthermore, was able to reduce the biofilm formation by the bacteria species. Both SPs present potential biotechnological. / Os venenos de serpentes são constituídos por compostos orgânicos e inorgânicos, resultando em um produto biológico eficiente e de natureza complexa, que tem como principais objetivos a imobilização, morte e a promoção da digestão inicial das presas. Além disso, apresentam um enorme potencial para prospecção de moléculas com aplicação farmacológica. Dentre os compostos orgânicos destacam-se as proteínas, principalmente as proteases, pois apresentam capacidade em alterar o sistema hemostático. As serinoproteases dos venenos de serpentes (SVSPs) pertencem à classe de proteases que agem sobre diferentes fatores da cascata de coagulação. Uma das classes de SVSPs é descrita como trombina-símile (SVTLEs) por mimetizar algumas atividades da trombina, exibindo capacidade coagulante in vitro por intermédio da degradação das cadeias α e/ou β do fibrinogênio. Os objetivos do trabalho foram (i) caracterizar estruturalmente a BpirSP-39 isolada previamente do veneno de Bothrops pirajai e (ii) isolar e caracterizar a primeira serinoprotease (SP) do veneno de B. brazili. Estudos dessa magnitude justificam-se, pois podem trazer importantes informações sobre a participação das proteínas durante o envenenamento, podendo auxiliar no melhor conhecimento sobre os mecanismos de ações destas enzimas. As estruturas primárias, bem como, os modelos tridimensionais de ambas SPs isoladas foram elucidados. A BpirSP-39 possui 224 aminoácidos e apresenta elevada identidade com outras SVSPs. A BbrzSP-32 foi obtida do veneno de B. brazili após duas etapas cromatográficas (afinidade e fase reversa) e sua estrutura primária apresentou 240 resíduos de aminoácidos. Ambas as enzimas caracterizadas podem assumir a estrutura da SP de Agkistrodon halys (PDB ID: 4E7N), proteína utilizada como modelo para a modelagem molecular, sendo glicoproteínas monoméricas globulares com duas α- hélices e dois barris formados por folhas-β. Com relação à BbrzSP-32, por intermédio de eletroforese foi obtida a massa molecular relativa (36 kDa), sendo sua massa absoluta confirmada por espectrometria de massa como 32.520 Da. A BbrzSP-32 possui identidade de até 79,48% quando comparada a outras SVSPs e foi capaz de, em modelos in vitro, degradar a cadeia α do fibrinogênio, sendo considerada uma SVTLE11 A. Possui atividade dose dependente no processo de degradação de redes de fibrina, demonstrando maior especificidade por essa atividade quando comparada à sua ação trombolítica. Apresenta atividade de proteólise sobre gelatina e substratos cromogênicos, para serinoproteases e enzimas trombina-símile (S-2288 e S-2238, respectivamente), além de possuir atividade coagulante sobre o plasma humano. As atividades de proteólise sobre os substratos S-2288 e S-2238, bem como, coagulantes, foram reduzidas por PMSF e benzamidina e, em menor proporção por EDTA. A BbrzSP-32 apresenta relativa estabilidade frente a variações de pH e temperatura, demonstrando maiores atividades entre 30 e 40 ºC e, em intervalo de pH 7,5 à 8,5. A enzima não induz ou interfere na coagulação de plaquetas lavadas. Quando incubada com os parasitos Trypanosoma cruzi e Leishmania infantum, nas formas epimastigota e promastigota, respectivamente, e bactérias gram-positiva da espécie Staphylococcus epidermidis, apresentou-se citotóxica sobre os microrganismos, além disso, foi capaz de reduzir o biofilme formado pela espécie de bactéria. Ambas SPs apresentam potenciais biotecnológicos.