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Análise imuno-fenotípica de animais nod: estudo da proteção ao diabetes tipo I mediada pelo T. cruzi e da indução pela ciclofosfamida

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-11-06T19:03:45Z
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Previous issue date: 2013 / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Os animais NOD representam o principal modelo experimental de estudo do diabetes
autoimune. Apesar do progressivo número de estudos realizados, muitos aspectos
imunes da promoção e regulação desta doença continuam obscuros. Utilizando o
modelo (pela primeira vez aqui descrito) de proteção induzida pelo T. cruzi, bem como
o modelo de aceleração pela ciclofosfamida, fizemos um estudo imuno-fenotípico em
animais NOD com o objetivo de elucidar mecanismos imunes responsáveis pela
regulação do diabetes tipo I. Demonstramos que a infecção de camundongos NOD com
o T. cruzi os protege do desenvolvimento do diabetes. Estes animais desenvolvem uma
resposta ao parasita caracterizada por uma pobre expansão de células T CD8 efetoras,
bem como uma menor migração destas para os sítios parasitários. Estudo do perfil de
citocinas mostraram ainda uma reduzida produção inicial de IFN no baço, mas elevada
produção tardia nos tecidos inflamados, comparado a animais BALB/c. Estes dados,
associados a uma maior produção inicial de IL-10 por esplenócitos, justificam a maior
susceptibilidade à infecção observada nos animais NOD. O estudo de populações
celulares com atividade regulatória mostrou que há aumento de Treg no início da
infecção. Contudo a proteção ao diabetes desencadeada pelo T. cruzi não se correlaciona
ao número de células Treg, pois há uma redução destas ao longo da infecção. Este fato,
associado à observação de que a ciclofosfamida é incapaz de induzir diabetes nos
animais infectados, apontaram para um papel limitado destas células na proteção ao
diabetes pelo T. cruzi. Entretanto, houve aumento de células Gr1+, e a depleção destas
reverte a proteção ao diabetes causada pela infecção, além de induzir a expansão de
células T CD8+ efetoras e sua produção de IFN. Verificamos ainda, que níveis
aumentados da expressão de PD-L1 relacionaram-se com a proteção ao diabetes
proporcionado pelo T. cruzi, enquanto níveis reduzidos se relacionaram ao seu
desenvolvimento espontâneo. Contudo, o tratamento com ciclofosfamida não reduz a
expressão de PD-L1 em linfócitos, mas induz rapidamente o diabetes em animais NOD
não infectados e leva a uma drástica diminuição de células Tregs CD25+ esplênicas. Os
resultados, aqui tomados em conjunto, apontam para um complexo mecanismo de
controle do diabetes, que envolve diferentes populações celulares que atuam de maneira
variada com o modelo estudado. / The NOD mice are the most used experimental model for the study of autoimmune
diabetes. Despite progressive number of studies, many aspects about the immune
regulation and disease onset remains unclear. Using our model (described here for the
first time) of diabetes protection induced by T. cruzi, as well as cyclophosphamide
acceleration, we performed a immunophenotypic analysis of NOD animals, aiming to
elucidate the immune mechanisms responsible for regulation of type I diabetes. We
demonstrated that infection of NOD mice with T. cruzi protects them from diabetes
onset. These mice develop a poor expansion of effector CD8 T cells in response to
parasite, and have lower percentage of those lymphocytes in inflammatory sites, when
compared to BALB/c mice. Cytokine profile's analysis also revealed a reduced initial
production of IFN in spleen, but high late production in inflamed tissues. Those data
associated to an elevated production of IL-10 by spleen cells could explain the increased
susceptibility observed in infected NOD mice. Further analysis showed an increased
Treg cells rates early after infection, followed by a progressive reduction thereof along
infection. This fact, coupled with the observation that cyclophosphamide is unable to
induce diabetes in infected mice, indicates a limited role for these cells in diabetes
protection by T. cruzi. However, increased Gr1 + cells numbers was also found in
infected mice, and its depletion reverses the protection of diabetes related to infection.
That reversion was associated to an expansion of effector CD8 + T cells and their
production of IFN. We also found that increased expression of PD-L1 were also
related to diabetes protection provided by T. cruzi infection, while low levels were
related to spontaneous diabetes development. Treatment with cyclophosphamide
however did not reduce PD-L1 expression on lymphocytes, despites rapidly set diabetes
in NOD uninfected animals. On the other hand, cyclophosphamide leads to a drastic
decrease of CD25 + Treg cells in the spleen of NOD mice. These results, taken together,
point to a complex mechanism of diabetes control, which involves different cell
populations acting variously with the model.

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/7224
Date January 2013
CreatorsPessina, Daniel Huber
ContributorsNomizo, Auro, Sant'Anna, Osvaldo Augusto Brasil Esteves de, Neves, Neuza Maria Alcantâra, Cardillo, Fabíola
PublisherCentro de Pesquisas Gonçalo Moniz
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguagePortuguese
Detected LanguagePortuguese
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Sourcereponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ
Rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess

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