O presente trabalho teve como principal objetivo a detecção e caracterização dos genes plasmideais de resistência às quinolonas qnr, aac(6’)-Ib-cr e qepA, , e ainda, os genes blaTEM, blaSHV e blaCTX-M, codificadores de -lactamases de espectro estendido (ESBL) em coleções de enterobactérias isoladas a partir de amostras clínicas obtidas em dois hospitais do estado de Minas Gerais. No período de junho a outubro de 2010, foram isoladas 873 enterobactérias das quais 106 (12%) foram triadas para este estudo por apresentarem diminuição de sensibilidade ao ácido nalidíxico. A identificação bacteriana foi realizada através de testes bioquímicos convencionais e pelo sistema automatizado MicroScan - autoSCAN®-4. O perfil de sensibilidade aos antimicrobianos foi determinado pelo método de disco difusão e a concentração inibitória mínima foi determinada por microdiluição em caldo, como descrito e recomendado pelo “Clinical Laboratory Standards Institute - CLSI”, para os isolados produtores do gene qnr e seus respectivos transconjugantes. A detecção dos genes associados aos mecanismos de resistência estudados e a análise das mutações presentes nos genes cromossômicos gyrA e parC foram realizadas por PCR e sequenciamento. A extração de plasmídeos das bactérias e seus transconjugantes, contendo os determinantes qnr, foi realizada segundo a técnica de Kieser. Os resultados obtidos pela eletroforese em campo pulsado foram interpretados segundo os critérios estabelecidos por Tenover et al., 1995. A coleção bacteriana foi composta por: Escherichia coli (n=61; 57,6%), Enterobacter cloacae (n=23; 21,7%), Klebsiella pneumoniae (n=16; 15,1%), Proteus mirabilis (n=3; 2,8%), Serratia marcescens (n=2; 1,9%) e Proteus vulgaris (n=1; 0,9%). A maioria das enterobactérias (82%) foi isolada de infecções do trato urinário seguido de hemoculturas, swab de secreções, aspirado traqueal e ponta de cateter. De acordo com os critérios do CLSI, 94% (n=100) das enterobactérias foram resistentes ao ácido nalidíxico, 71% (n=75) foram resistentes à ciprofloxacina e 76% (n=81) apresentaram diminuição de sensibilidade a ceftazidima e/ou cefotaxima. A pesquisa de qnr resultou na detecção dos genes qnrB e qnrS em treze isolados, incluindo E. cloacae (n=6), K. pneumoniae (n=5) e E. coli (n=2). O gene qnrB1 foi o mais prevalente, seguido de qnrS1, qnrB2 e qnrB19. Nas amostras qnr positivas, foram detectados 4 isolados positivos para o gene aac(6’)-Ib-cr, 6 isolados para blaSHV, 11 isolados para blaCTX-M e 11 isolados para o gene blaTEM. O determinante qepA não foi detectado. Este trabalho indica a disseminação de mecanismos de resistência às quinolonas mediados por plasmídeos (PMQR) em amostras clínicas no Brasil. A coexistência de genes ESBL e PMQR demonstra a complexidade dos plasmídeos carreando determinantes de resistência entre os membros da família Enterobacteriaceae. / The main objective of this work was to characterize the qnr, aac(6')-Ib-cr and qepA plasmid genes, and also the blaTEM, blaSHV and blaCTX-M genes, encoding for extended spectrum β-lactamases - ESBL in a collection of Enterobacteriacecae isolated from clinical samples obtained in two hospitals in the state of Minas Gerais, Brazil. A total of 873 Enterobacteriaceae were isolated in the period of June to October 2010 of which 106 (12%) were screened for this study showing decreased susceptibility to nalidixic acid. The bacterial identification was performed by conventional biochemical tests and by the automated system MicroScan autoSCAN®-4. The antimicrobial susceptibility profile was determined by diffusion disk and the minimum inhibitory concentration was determined by broth microdilution for the isolates carrying the qnr genes e their respective transconjugantsaccording with the recommendations of the "Clinical Laboratory Standards Institute - CLSI". PCR and sequencing were performed to detect plasmid-mediated quinolone resistant (PMQR) genes as well as the analysis of mutations in chromosomal encoded genes, gyrA and parC by. The extraction of plasmids and their transconjugants containing qnr determinants was performed using the technique of Kieser. The results obtained by pulsed field gel electrophoresis were interpreted according with Tenover et al., 1995. The collection was composed as follow: Escherichia coli (n = 61, 57.6%), Enterobacter cloacae (n = 23, 21.7%), Klebsiella pneumoniae (n = 16, 15.1%), Proteus mirabilis (n= 3, 2.8%), Serratia marcescens (n = 2, 1.9%) and Proteus vulgaris (n = 1, 0.9%). Most of the enterobacteria (82%) was isolated from urinare followed by blood, swab of secretions, tracheal aspirate and catheter tip. A total of 100 (94%) isolates were resistant to nalidixic acid, 75 (71%) were resistant to ciprofloxacin and 81 (76%) showed reduced susceptibility to ceftazidime and/or cefotaxime. The qnr plasmidic determinant research resulted in the detection of qnrB and qnrS genes in 13 isolates, including E. cloacae (n=6), K. pneumoniae (n=5) andE. coli (n=2). QnrB1 was the most prevalent gene, followed by qnrS1, qnrB2 and qnrB19. In four qnr positive isolates also carried the aac(6')-Ib-cr gene, to blaSHV-like (n=6), blaCTX-M (n=11) and blaTEM gene (n=11). The qepA gene was not detected. This work indicates the dissemination of PMQR in clinical specimens in Brazil. The coexistence of ESBL and PMQR genes demonstrate the complexity of plasmids carrying resistant genesamong members of the family Enterobacteriaceae.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:10.254.254.39:tede/306 |
| Date | 14 February 2012 |
| Creators | VIANA, André Luiz Machado |
| Contributors | MINARINI, Luciene Andrade da Rocha, http://lattes.cnpq.br/5226657617185982, ARIOSA, Marília Caixeta Franco, DIAS, Amanda Latércia Tranches, SANTOS, Daniel de Assis |
| Publisher | Universidade Federal de Alfenas, Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Brasil, UNIFAL-MG, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UNIFAL, instname:Universidade Federal de Alfenas, instacron:UNIFAL |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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