El factor de la necrosis tumoral, TNF-alfa, es una citocina pleiotrópica implicada en un amplio espectro de respuestas inflamatorias y del sistema inmune. El efecto biológico del TNF-alfaestá mediado por dos receptores de membrana, el receptor 1 de TNF, TNFR1 y el receptor 2 de TNF, TNFR2. Estos dos receptores se pueden presentar como receptores solubles formados a partir del procesamiento proteolítico de la región extracelular del receptor de membrana. Se han descrito concentraciones elevadas de receptor soluble de TNFR2 en el suero de múltiples patologías inflamatorias. En este trabajo, describimos por primera vez una isoforma de RNAm de TNFR2 humano, producida por splicing alternativo, a la que le faltan los exones 7 y 8 que codifican la mayor parte de la región citoplasmática y parte del domininio intracitoplasmático de la proteina. El splicing alternativo de los dos exones produjo un cambio en la pauta de lectura, lo que llevó a la aparición de un nuevo codón de parada tras 6 nuevos aminoácidos. Se obtenía de este modo, un cDNA que codificaba una proteína de TNFR2 formada por la misma región extracelular y los mismos 5 primeros aminoácidos del dominio transmembrana, que el TNFR2 nativo, seguidos de 6 nuevos aminoácidos como único extremo carboxilo terminal. El estudio de la expresión de la proteína en células tranfectadas con el cDNA de esta isoforma, mostró la naturaleza soluble de esta proteína. La proteína poseía un peso molecular de aproximadamente 42 KDa. En un ensayo de citotoxicidad inducida por TNF-alfa, se mostró que esta isoforma podía bloquear la apoptosis inducida por TNF-alfa lo que sugiere su función reguladora de la acción del TNF como antagonista de su función biológica. Se desarrolló un ELISA que cuantifica el receptor soluble generado por splicing alternativo. Y se determinaron las concentraciones de receptor soluble producido por splicing alternativo en el suero de individuos sanos y en pacientes de diferentes patologías inflamatorias. Nuestros datos muestran que el receptor soluble producido por splicing alternativo está presente en el suero de individuos sanos a bajas concentraciones y a concentraciones elevadas en sujetos con sepsis y artritis reumatoide. Se determinó que existe una asociación negativa entre el receptor soluble producido por splicing alternativo y varios componentes del síndrome metabólico y también con la resistencia a la insulina.Por otro lado, se observó que los pacientes de artritis reumatoide con valores muy elevados de isoforma, presentaban, probablemente una mejor respuesta a la terapia con anticuerpos anti-TNF-alfa.
Identifer | oai:union.ndltd.org:TDX_UB/oai:www.tdx.cat:10803/2989 |
Date | 26 January 2005 |
Creators | Láinez Mas, Begoña |
Contributors | Fernández-Real Lemos, José Manuel, López Soriano, Francisco J., Universitat de Barcelona. Departament de Bioquímica i Biologia Molecular (Divisió III) |
Publisher | Universitat de Barcelona |
Source Sets | Universitat de Barcelona |
Language | Spanish |
Detected Language | Spanish |
Type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis, info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
Format | application/pdf |
Source | TDX (Tesis Doctorals en Xarxa) |
Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess, ADVERTIMENT. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs. |
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