Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A doenÃa de Parkinson (DP) à a segunda doenÃa neurodegenerativa mais comum afetando cerca de 1% da populaÃÃo mundial. Fatores ambientais e genÃticos poderÃo interagir e contribuir para o desenvolvimento da doenÃa. A 6-hidroxidopamina (6-OHDA) à uma neurotoxina que age em neurÃnios catecolaminÃrgicos, atravÃs da formaÃÃo de espÃcies reativas do oxigÃnio e inibiÃÃo do complexo I da cadeia transportadora de elÃtrons. A berberina à um alcalÃide isoquinolÃnico natural, com atividade antioxidante e aÃÃo na membrana mitocondrial. O presente estudo teve como objetivo investigar a atividade citoprotetora da berberina em modelo de degeneraÃÃo celular induzida pela 6-OHDA em cultura de cÃlulas SH-SY5Y. A berberina (10, 25 e 50Âg/mL) foi adicionada as cÃlulas 15 minutos antes da 6-OHDA 50ÂM, apÃs 24 horas foram feitos os testes para avaliaÃÃo da viabilidade celular (MTT e iodeto de propÃdeo- IP), estresse oxidativo (nitrito, TBARS â quantificaÃÃo de malondialdeÃdo), morfologia/apoptose (hematoxilina/eosina, brometo de etÃdeo/laranja de acridina) e potencial transmembrÃnico mitocondrial (rodamina 123). A 6-OHDA reduziu significativamente a viabilidade celular (Controle: MTT= 99,62%, IP= 98,63%; 6-OHDA: MTT=49,79%, IP= 48,80%), aumentou os nÃveis de nitrito (71,8%) e de malondialdeÃdo (27%). Foi observado fragmentaÃÃo e reduÃÃo do volume celular, perda dos neuritos, grande percentagem de cÃlulas apoptÃticas e necrÃticas (Controle: viÃveis= 95,5%, apoptÃticas= 2,67%, necrÃticas= 1,83%; 6-OHDA:viÃveis= 23,75%, apoptÃticas= 61,92, necrÃticas= 14,34%) e elevou em 56% o nÃmero de cÃlulas que apresentam despolarizaÃÃo mitocondrial. A berberina protegeu significativamente (p<0,05) as cÃlulas dos danos induzidos pela 6-OHDA, elevando a viabilidade celular para (MTT: BERB 25 + 6-OHDA= 68,4; BERB 50 + 6-OHDA= 79%. IP: BERB 25 + 6-OHDA= 61; BERB 50 + 6-OHDA= 58%), reduziu os nÃveis de nitrito (BERB 25+ 6-OHDA= 6,16; BERB 50 + 6-OHDA= 6,20 ÂM) e malondialdeÃdo (BERB 25+ 6-OHDA= 8,53; BERB 50 + 6-OHDA= 6,8 ÂM) AlÃm disso, a berberina reduziu as alteraÃÃes na morfologia celular, na morte por apoptose (BERB 25 + 6-OHDA=apoptose-26,51%; BERB 50 + 6-OHDA= apoptose-30,32%) e o nÃmero de cÃlulas com despolarizaÃÃo mitocondrial (BERB 25+ 6-OHDA= 7,58; BERB 50 + 6-OHDA= 12,9%). Esses resultados mostram a citoproteÃÃo pela berberina, por seu efeito antiapoptÃtico, que pode estar relacionado a uma proteÃÃo mitocondrial e uma aÃÃo antioxidante. Deste modo, podemos sugerir que a berberina pode ser explorada como possÃvel agente neuroprotetor para doenÃa de Parkinson. / Parkinsonâs disease is the second more common neurodegenerative sickness and it affects about 1% of the world population. Environment and genetics factors may interact and contribute to the diseaseâs development. The 6-hydroxydopamine (6-OHDA) is a neurotoxin that acts on catecholaminergic neurons throughthe formation of reactive oxygen species and inhibition of the electron transport chainâs complex I. The berberine is a natural isoquinolinium alkaloid with antioxidant activity and action in the mitochondrial membrane. The present study aimed to investigate the cytoprotective activity of berberine in cell degeneration model induced by 6-OHDA in cultured SH-SY5Y cell. Berberine (10, 25 and 50 Âg/mL) was added to the cells 15 minutes before 6-OHDA 50ÂM and, after 24 hours, the tests were made for evaluation of cellular viability (MTT and propidium iodide-IP), oxidative stress (nitrite, TBARS), morphology/apoptosis (hematoxilin/eosin, ethidium bromide/acridine orange) and mitochondrial transmembrane potencial (rhodamine 123). 6-OHDA reduced significantly the cellular viability (Control: MTT=99,62%, IP=98,63%; 6-OHDA: MTT=49,79%, IP= 48,80%), increased the nitrite (71,8%) and the malondialdehyde levels (27%). It was observed fragmentation and reduction of cell volume, loss of neuritis, large percentage of apoptotic and necrotic cells (Control: viable=23,75%, apoptotic=61,92%, necrotic=1,83%; 6-OHDA: viable= 23,75%, apoptotic= 61,92%, necrotic= 14,34%) and of cells with mitochondrial depolarization 56%. Berberine significantly protected (p<0,05) cells from damage induced by 6-OHDA, increasing cell viability (MTT: BERB 25 + 6-OHDA= 68,10  4,49; BERB 50 + 6-OHDA= 78,81 2,31%. IP: BERB 25 + 6-OHDA= 60,38  0,92; BERB 50 + 6-OHDA= 57,45  1,33%), reduced nitrite (BERB 25 + 6-OHDA= 6,16  0,42; BERB 50 + 6-OHDA= 6,20  0,40ÂM) and malondialdehyde levels (BERB 25+ 6-OHDA= 8,53; BERB 50 + 6-OHDA= 6,8 ÂM). Furthermore, berberine reduced morphology cell alterations, apoptotic death (BERB 25 + 6-OHDA= apoptosis-26,51%; BERB 50 + 6-OHDA= apoptosis-30,32%) and number of cells with mitochondrial depolarization (BERB 25+ 6-OHDA= 7,58; BERB 50 + 6-OHDA= 12,9%). These results show that the cytoprotection of berberine, possibly by its antiapoptotic effects, may be related to a mitochondrial protection and/or an antioxidant action. Thus, we suggest that berberine may be prospected as a possible neuroprotective agent for Parkinsonâs disease.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:5610 |
| Date | 30 April 2012 |
| Creators | Camylla Maria Carvalho Moura |
| Contributors | Geanne Matos de Andrade, Hemerson Iury Ferreira MagalhÃes, Luzia Kalyne Almeida Moreira Leal |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Farmacologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.002 seconds