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Detection and quantification of Mycobacterium leprae by real time PCR from environmental samples of Cearà municipalities / DetecÃÃo e quantificaÃÃo de Mycobacterium leprae pela tÃcnica de PCR em tempo real em amostras ambientais de municÃpios do CearÃ

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A hansenÃase à uma doenÃa infecciosa crÃnica e granulomatosa responsÃvel por afetar a pele e os nervos perifÃricos, sendo ocasionada pelo Mycobacterium leprae, um agente intracelular obrigatÃrio incapaz de ser cultivado em meios de cultura axÃnicos. No ano de 2012, foram detectados 232.857 casos novos no mundo, sendo desses 33.303 (14, 30%) detectados somente no Brasil. O Estado do Cearà diagnosticou 2.066 casos novos sà no ano de 2012, com um coeficiente detecÃÃo geral de 24,0/100.000 habitantes. A transmissÃo da doenÃa està relacionada com eliminaÃÃo dos bacilos provenientes de pacientes multibacilares atravÃs do trato respiratÃrio superior e, como a bactÃria fica em suspensÃo no ar, ocorre a posterior contaminaÃÃo de outra pessoa. A existÃncia de casos clÃnicos da doenÃa nos quais os pacientes nÃo tiveram nenhum contato anterior com portadores de hansenÃase e, ainda, Ãreas com casos prÃximos de fontes de Ãgua sugere infecÃÃo do ser humano com fontes ambientais. Por isso, atualmente, pesquisa-se a possÃvel interferÃncia de fatores ambientais e animais silvestres na transmissÃo da hansenÃase, como solo, Ãgua, vegetaÃÃo e tatus. O ambiente funcionaria como uma espÃcie de reservatÃrio, permitindo que o bacilo permaneÃa infeccioso apÃs longos perÃodos fora do corpo humano. Este estudo tem como objetivo principal detectar e quantificar bacilos de M. leprae por qPCR em amostras de Ãguas ambientais provenientes de municÃpios cearenses. Foram coletadas cinco rÃplicas de cada um dos 30 reservatÃrios selecionados, totalizando 149 amostras. O DNA total foi extraÃdo atravÃs de kit especÃfico para amostras ambientais de acordo com as recomendaÃÃes do fabricante. Posteriormente, foi realizado a amplificaÃÃo do gene 16S rRNA de M. leprae atravÃs de qPCR com o uso do kit SYBR Green PCR Master Mix. Utilizou-se uma curva padrÃo com concentraÃÃes conhecidas de plasmÃdeo pIDTBlue 16SrRNAMlep para quantificar o DNA presente nas amostras ambientais. As amostras ambientais do municÃpio de Juazeiro do Norte e as amostras clÃnicas provenientes de pacientes atendidos no CDREM foram genotipadas e subtipadas por PCR-RFLP. O DNA de M. leprae foi detectado em todos os municÃpios estudados. Do total de 149 amostras de Ãgua analisadas, 81 (54,4%) foram positivas para a pesquisa de DNA. O nÃmero de cÃpias de M. leprae se manteve no intervalo de 1,42 x 10-1 a 1,44 x 10+2 . A maioria das amostras clÃnicas apresentou genÃtipo 4 (64%) enquanto que 100% das amostras de Juazeiro do Norte foram SNP 4. Com relaÃÃo a subtipagem, o SNP 4-N foi o mais presente dentre as amostras analisadas. Este estudo indica a existÃncia de DNA de M. leprae nas amostras de Ãguas ambientais, mostrando fundamentalmente a presenÃa de bacilos nas Ãguas analisadas. TambÃm relata que a maioria das cepas de M. leprae das fontes ambientais estudadas à do mesmo subtipo das isoladas do homem. Dessa forma, sÃo necessÃrios mais estudos a fim de ampliar o conhecimento da influÃncia da Ãgua na transmissÃo da hansenÃase.

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:9562
Date20 March 2015
CreatorsMaisa Viana de Holanda
ContributorsCristiane Cunha Frota, Cibele Barreto Mano de Carvalho, Fernando Schemelzer de Moraes Bezerra, Rodrigo Maranguape Silva da Cunha
PublisherUniversidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Patologia, UFC, BR
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguagePortuguese
Detected LanguagePortuguese
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis
Formatapplication/pdf
Sourcereponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC
Rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess

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