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Previous issue date: 2016-08-05 / Os métodos de seleção espermática são utilizados com o objetivo de isolar uma maior população de espermatozoides morfologicamente melhor, além de permitir a capacitação destes, incrementando a taxa de embriões produzidos in vitro. Entre os métodos de seleção, o mais utilizado comercialmente na produção in vitro (PIV) de embriões bovinos é o método de Gradiente Descontínuo de Percoll® (GDP). No entanto, apesar da praticidade desta técnica, a etapa de centrifugação é prejudicial, sendo responsável por danos estruturais as células espermáticas, bem como a diminuição da motilidade e da taxa de recuperação, interferindo assim, nas taxas de fecundação in vitro (FIV). Este estudo objetivou avaliar a centrifugação com amortecimento utilizando uma solução de iodixanol durante a seleção espermática para a PIV de embriões bovinos. No experimento I, o sêmen foi descongelado e dividido em quatro grupos, e os espermatozoides submetidos a separação espermática pelo método de GDP com ou sem a solução colóide; sendo o amortecimento testado na primeira (C1), segunda (C2) ou ambas centrifugações (C1-2). Em seguida, foram avaliadas a taxa de recuperação, a cinética espermática, e a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs). No experimento II foi avaliada a taxa de fecundação e a cinética de desenvolvimento embrionário dos grupos C e C1, que foram os tratamentos que demonstraram os melhores resultados para a cinética espermática, taxa de recuperação e análise bioquímica no primeiro experimento. Neste estudo, o grupo com amortecimento obteve um aumento na taxa de fecundação e clivagem, quando comparado ao grupo controle (60,5 vs 48,55 e 80,0 vs 64,7%, respectivamente). Com base nestes resultados foi possível concluir que o uso de 9
uma solução de amortecimento durante a etapa de centrifugação para a seleção espermática permitiu a preservação da cinética e da integridade da membrana dos espermatozoides, sem reduzir a taxa de recuperação. Adicionalmente, foi demonstrado pela primeira vez que o uso da centrifugação com amortecimento incrementa, não apenas a taxa de fecundação e clivagem, mas também o número de embriões que clivam mais cedo. / In order to optimize bovine in vitro fertilization (IVF), sperm selection methods have been used to isolate sperm subpopulations with high fertilizing capacity for use in animal breeding. Among the methods of sperm selection, the most common method used is the Discontinuous Percoll® Gradients (DPG). However, again despite the practicality of this technique, the centrifugation step is harmful, accounting for structural damage in sperm and decrease in motility and sperm recovery rate, as well as interfering with in vitro fertilization rates. This study aimed to evaluate the cushioned centrifugation using an iodixanol solution on sperm selection for in vitro production (IVP) of bovine embryos. In experiment I, the thawed semen was divided into four groups and the sperm subjected to the separation method by discontinuous Percoll® gradients with and without a colloid solution, where the cushioning was tested in the first (C1), second (C2), and both centrifugations (C1-2). Then, the recovery rate, sperm kinetics, and production of reactive oxygen species (ROS) were evaluated. Experiment II evaluated the fertilization rate and embryonic development kinetics of C and C1 groups; who were the treatments that have shown the best results for motion kinetics, recovery rate, and biochemical analysis in Experiment I. In this assay, the group with cushioning obtained an increase in the fertilization and cleavage rate when compared with the control (60.5 vs 48.55 and 80.0 vs 64.7%, respectively). With this study, we can conclude that the use of a cushion solution during centrifugation on sperm selection had preserved the motion properties of spermatozoa and the 11
integrity of the sperm membrane without lowering the recovery rate. Furthermore, it was demonstrated for the first time that the use of cushioned centrifugation increases not only the cleavage rate but the number of embryos previously cleaved.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:10.1.0.46:riu/498 |
| Date | 05 August 2016 |
| Creators | Pavin, Cecilia Isabel Inês Urquiza Machado |
| Contributors | Leivas, Fabio Gallas, Brum, Daniela dos Santos |
| Publisher | Universidade Federal do Pampa |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UNIPAMPA, instname:Universidade Federal do Pampa, instacron:UNIPAMPA |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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