Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Fabio Morato Monteiro / Banca: César Roberto Esper / Banca: Marcelo Roncoletta / Resumo: O plasma seminal já foi descrito como benéfico e ao mesmo tempo prejudicial aos espermatozoides e isto está relacionado com o tempo de contato entre eles. A criopreservação do sêmen em touros pode ser prejudicada por exposição contínua dos espermatozoides ao plasma seminal (PS) e a aplicação de métodos para sua remoção pode aumentar a qualidade dos espermatozoides recuperados pós-descongelação, melhorando os resultados de biotécnicas que utilizam sêmen criopreservado. Pelo fato da centrifugação causar muitos danos aos espermatozoides, a filtragem com Sperm Filter® apresenta-se como um novo método de remoção do PS que almeja melhores resultados, porém não foi encontrado relato da sua aplicação em bovinos até o momento. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito dos métodos de centrifugação e filtragem com Sperm Filter® sobre a criopreservação do sêmen bovino. Para isso, o sêmen de 38 touros Nelore foi colhido por eletroejaculação. Após a colheita, o sêmen foi fracionado em três alíquotas iguais para divisão em três grupos: controle (N), em que o sêmen foi diluído com PS; centrifugação (C), em que o PS foi removido por centrifugação a 600 X g por 10 minutos; e filtragem (F), em que o PS foi removido por filtragem com Sperm Filter®. As amostras foram criopreservadas, e pós-descongelação foram avaliados a cinética espermática, a integridade das membranas plasmática e acrossomal, o potencial mitocondrial, o estresse oxidativo e a capacidade fecundante através da produção in vitr... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Seminal plasma has been described as beneficial and harmful to the spermatozoa and this is related to the contact time between them. Cryopreservation of semen from bulls can be undermined by continuous exposure of sperm to the seminal plasma (SP) and the application of methods for removal can increase the quality of post-thaw sperm recovered, improving fertilization. Centrifugation cause a lot of damage to sperm and filtering with Sperm Filter® is a new SP removal method that aims to better results, but has not yet been applied in bull. The aim of this study was to evaluate the effect of the methods of centrifugation and filtering with Sperm Filter® on cryopreservation of bovine semen. For this, semen of 38 Nelore bulls was collected by electroejaculation. Semen was fractioned into three equal aliquots for division into three groups: control (N), wherein the semen was diluted with SP; centrifugation (C), in which the SP was removed by centrifugation at 600 X g for 10 minutes; and filtration (F), in which the SP was removed by filtration with Sperm Filter®. Samples were cryopreserved and was evaluated after thawing sperm kinetics, the integrity of plasma and acrosomal membranes, mitochondrial potential, oxidative stress and the fertilizing capacity by in vitro embryo production (IVP). The kinetics, higher values of the path velocity (P = 0.0005) and progressive speed (P = <0.0001) were observed in the groups C and F and the beat frequency parameters, straightness and linearity... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Lindsay Unno Gimenes / Coorientador: Fabio Morato Monteiro / Coorientador: Moyses dos Santos Miranda / Coorientador: Rinaldo Batista Viana / Banca: Marcílio Nichi / Banca: Rubens Paes de Arruda / Resumo: A criopreservação provoca injúrias aos espermatozoides e necessita de métodos que minimizem esses danos. Embora seja bastante discutida, a remoção do plasma seminal tornou-se uma alternativa para melhorar a qualidade e viabilidade espermática após a congelação e vem sendo utilizada em outras espécies na tentativa de obter bons resultados. O objetivo deste estudo foi comparar a remoção do plasma seminal de bubalinos tanto por filtragem (SpermFilter®) quanto por centrifugação sobre a qualidade do sêmen descongelado de búfalos. Foram utilizados sete touros da raça Murrah, os quais foram submetidos à colheita de sêmen por vagina artificial uma vez por semana. Os ejaculados foram diluídos com Botu-Bov® e fracionados em alíquotas para confrontar três técnicas antes da congelação: grupo C (Criopreservação convencional com plasma seminal), grupo CE (Criopreservação removendo o plasma seminal por centrifugação) e grupo F (Criopreservação removendo o plasma seminal por filtragem). O sêmen fresco foi analisado quanto ao volume, aspecto, cor, concentração (câmara de Neubauer), turbilhonamento, motilidade progressiva, vigor e morfologia espermática. No sêmen descongelado, foram avaliados a cinética espermática pelo CASA, a integridade de membrana plasmática, acrossoma, potencial de membrana mitocondrial e quantificação de EROs por citometria de fluxo e, adicionalmente, foi estimado o grau de peroxidação lipídica pela técnica de TBARS. Os resultados revelam que a remoção de plasma seminal ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cryopreservation promotes injury to sperm and methods to minimize such damage are necessary. Although much discussed, removal of seminal plasma that has been successfully used in other species has become an alternative for improving sperm quality and viability after freezing. The aim of the present study was compare to removal seminal plasma in buffalo both by filtering (SpermFilter®) and by centrifugation on the quality frozen thawed buffalo semen. For this purpose, semen of seven Murrah buffalo-bulls, which were submitted to semen collection by artificial vagina once a week. The samples were diluted with Botu-Bov® and were fractionated in aliquots to confront three techniques before freezing: C group (conventional cryopreservation with seminal plasma), CE group (cryopreservation removing the seminal plasma centrifuge) F group (Cryopreservation removing the seminal plasma with Sperm Filter®). Fresh semen was analyzed for volume, appearance, color, concentration (Neubauer chamber), gross motility, progressive motility, vigor and sperm morphology. In the thawed sperm, sperm kinetics was evaluated by CASA, plasma membrane and acrosomal integrity, mitochondrial membrane potential and estimation of the levels of reactive oxygen species were assigned by flow cytometry and was estimated degree of lipid peroxidation by TBARS technique. The results show that the removal seminal plasma did not improve sperm kinetics, mitochondrial membrane potential and does not modify the degree of l... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-25T16:41:27Z No. of bitstreams: 1 2018_AdalmyrMoraisBorges.pdf: 5438238 bytes, checksum: d936e356826ef0abd06970160cde3b2b (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-31T19:17:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_AdalmyrMoraisBorges.pdf: 5438238 bytes, checksum: d936e356826ef0abd06970160cde3b2b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-31T19:17:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_AdalmyrMoraisBorges.pdf: 5438238 bytes, checksum: d936e356826ef0abd06970160cde3b2b (MD5) Previous issue date: 2018-07-25 / O estudo buscou avaliar diferentes alternativas para o congelamento do sêmen de jundiá amazônico e de pintado e a melhoria da qualidade pos-descongelamento, contribuindo para o desenvolvimento de protocolos para as duas espécies. Entre as abordagens avaliadas foram: (1) a caracterização morfológica dos espermatozoides de jundiá amazônico com o uso de microscopia eletrônica de varredura e de transmissão; (2) a utilização de diferentes agentes crio protetores, para o jundiá amazônico: metanol, dimetilsulfoxido e etilenoglicol a 10%, associados a solução de glicose a 5% e para o pintado: metanol, dimetilsulfoxido e dimetilacetamida a 5%, 7,5% e 10%, associados a solução de BTS a 5%; e (3) a adição de substancias antioxidantes nos meios de congelamento para o pintado: trealose 100 mM, acido ascórbico 1 mM e α-tocoferol 0,1 mM. Para ambas espécies, o sêmen foi envasado em palhetas de 0,25 mL e congelado em vapor de nitrogênio, utilizando botijão dry shipper, e descongelado a 40oC por 12 segundos. No jundiá amazônico, o espermatozoide apresentou o comprimento total de 25,46 } 2,54 μm, cabeça esférica (1,51 } 0,18 μm) ausência de acrossoma, peca intermediaria de formato cônico, ligeiramente assimétrica com presença de vesículas, e comprimento de 0,93 } 0,17 μm, e flagelo com arranjo típico e comprimento de 21,48 } 2,45 μm. O sêmen descongelado apresentou valores mais altos (p<0,05) para duração, vigor e taxa de mobilidade espermática com os crio protetores metanol 10% e dimetilsulfoxido 10% quando comparado com o etilenoglicol 10%. No pintado, o sêmen criopreservado com metanol 7,5% e 10% apresentou valores para duração e taxa de mobilidade maiores (p<0,05) comparado com o dimetilsulfoxido e dimetilacetamida. O tratamento com os três antioxidantes associados proporcionou taxa de mobilidade maior (p<0,05) em relação ao tratamento sem antioxidantes. Para os parâmetros de duração e taxa de mobilidade foi observada interação significativa (p<0,05) entre o acido ascórbico e o α-tocoferol. Assim, os resultados obtidos na criopreservação de sêmen de jundiá amazônico não foram suficientes para estabelecer um protocolo para a espécie. Na criopreservação de sêmen de pintado e recomendado o uso do metanol a 7,5% associado a solução de BTS a 5%, e a adição conjunta dos antioxidantes trealose (100mM), acido ascórbico (1mM) e α-tocoferol (0,1mM). / This study aimed to evaluate different alternatives for the semen freezing of amazon catfish and spotted catfish, contributing to the development of protocols for both species increasing the process efficiency in both species. Among the approaches used are (1) morphological characterization of amazon catfish spermatozoa using scanning and transmission electron microscopy; (2) use of different cryoprotectant agents, 10% methanol, dimethylsulfoxide and ethyleneglycol, associated 5% glucose solution in amazon catfish, and 5%, 7,5% e 10%, methanol, dimethylsulfoxide and dimethyacetamide, associated 5% BTS solution in spotted catfish; and (3) addition of antioxidants in the freezing media, trehalose (100 mM), ascorbic acid (1 mM) and α- tocopherol (0.1 mM) in spotted catfish. In both especies, semen samples were loaded in 0.25 mL plastic straws, frozen in nitrogen vapour (dry shipper) and thawed at 40oC for 12 seconds. In the amazon catfish, fresh spermatozoon was 25.46 } 2.54 μm long, head was spherical (1.51 } 0.18 μm) with no acrosome, midpiece was coneshapped with presence of vesicles, slightly asymmetric, 0.93 } 0.17 μm long and the single fagellum was 21.48 } 2.45 μm long with the typical arrangement. Postthawed semen presented higher values (p<0.05) for duration, vigor and sperm motility rate with cryoprotectants 10% methanol and 10% DMSO, when compared to 10% ethyleneglycol. In the spotted catfish, the cryopreserved semen with 7,5% and 10% methanol presented higher values (p<0.05) for latency time and motility rate compared to dimethylsulfoxide and dimethyacetamide. The treatment with associated antioxidants provided a higher motility rate (p<0.05) compared to the antioxidant-free treatment. For the parameters of latency time and motility rate, a significant interaction (p<0.05) was observed between ascorbic acid and α-tocopherol. In conclusion, the results observed in semen cryopreservation of amazon catfish were not satisfactory to establish a protocol for the specie. For the semen cryopreservation of spotted catfish, it is recommended the use of 7.5% methanol with the 5% BTS solution and the addition of the antioxidants trehalose (100 mM), ascorbic acid (1 mM) and α-tocopherol (0.1 mM).

Orientador: José Antônio Dell'Aqua Junior / Banca: Frederico Ozanan Papa / Banca: André Maciel Crespilho / Resumo: A biotécnica mais utilizada em equinos no Brasil é a inseminação artificial com sêmen refrigerado. Apesar dos avanços, ainda há uma grande variação nos resultados de fertilidade em programas reprodutivos. A carnitina é um composto vitamínico que desempenha um papel importante no metabolismo energético, já que ela garante a produção de energia pelo espermatozoide através do estímulo de vias metabólicas. Além disso, ascarnitinas apresentam potente poder antioxidante, conferindo maior proteção durante o armazenamento.No entanto, sua utilização pós-ejaculação é pouco estudada, já que existem poucos relatos deste tipo de aplicação, sendo nenhum deles em equinos. Devido a isso, este trabalho foi dividido em dois experimentos. O objetivo do experimento 1 foi determinar a concentração ideal l-carnitina (LC) e acetil-l-carnitina (AC) na refrigeração de sêmen equino a 5ºC. No experimento 2, o objetivo foi avaliar os efeitos da melhor dose de LC e AC e sua associação sobre a viabilidade espermática através da citometria de fluxo. No experimento 1 foram utilizados dois ejaculados de 12 garanhões. Após a diluição com Botu-Sêmen® na concentração de 50 x 106 espermatozoides/mL, os ejaculados foram divididos em sete grupos: controle (C), tratado com 5 mmol/L (LC-1), 10 mmol/L (LC-2), 15 mmol/L (LC-3)de LC, tratado com 5 mmol/L (AC-1), 10 mmol/L (AC-2) e 15 mmol/L (AC-3) de AC e após foram refrigerados a 5ºC por 48 horas. Para o experimento 2 foram utilizados os mesmos animais e manipulação dos experimentos anteriores, entretanto, os grupos testados foram: Controle (C), tratado com 10 mmol/L de LC (LC), tratado com 10 mmol/L de AC (AC) e 10 mmol/L de LC + 10 mmol/L AC (LC+AC). A cinética espermática foi avaliada por análise computadorizada do movimento espermático e a integridade de membrana plasmática (IMP) por microscopia de epifluorescência no experimento 1 e 2, entretanto, ... / Abstract: Over the years, technology for cooling semen has developed. However, despite progress, pregnancy rates are still variable between reproductive programs.Carnitine is a vitamin compound which plays an important role in energy metabolism, since it guarantees the sperm energy production by stimulating metabolic pathways. Furthermore, carnitine has a powerful antioxidant effect, providing greater protection to plasma membrane during storage.However, post-ejaculation use is poorly studied, being none in horses. The aim of experiment 1 was determine optimal concentration of lcarnitine (LC) and acetyl-l-carnitine (AC) in equine semen cooled at 5°C. In experiment 2, the objective was evaluate dose effects between LC, AC and their association on sperm viability by flow citometry. Two ejaculates from 12 stallions were used in both experiments. After dilution with Botu-Semen®to 50 x 106 spermatozoa/ml, each ejaculate was split into seven groups: control (C), treated with 5 mmol/L (LC-1), 10 mmol/L (LC -2), 15 mmol/L (LC-3) of LC, treated with 5 mmol /L (AC-1), 10 mmol/L (AC-2) and 15 mmol/L (AC-3) of ACand then cooled at 5°C for 48 hours. In second experiment, groups were divided in: control (C), treated with 10 mmol /l of LC (LC), treated with 10 mmol /L of AC (AC) and 10 mmol/L of LC + 10 mmol/L of AC (LC+AC).In both experiments,sperm kinetics was evaluated by computerized analysis (CASA) and plasma membrane integrity (IMP) by epifluorescence microscopy.Moreover, in experiment 2 were assessed DNA, ROS and Lipid Peroxidation (PEROX) by flow cytometry.All analysis were performed before cooling (T0), 24 (T24) and 48 hours (T48) after. According to the results of first experiment, LC groups had higher IMP and better values of kinetic than control. Groups treated with AC showed higher results of sperm kinetics after 24 hours of refrigeration and IMP in all analysed times. In second experiment, treated groups were ... / Mestre

Orientador: José Maurício Barbanti Duarte / Coorientador: José Maurício Barbanti Duarte / Banca: Arlindo de Alencar Araripe Noronha Moura / Banca: Marcelo Emílio Beletti / Banca: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Lindsay Unno Gimenes / Resumo: Por muito tempo Mazama nemorivaga foi considerado sinonímia de Mazama gouazoubira. Atualmente são consideradas espécies distintas conhecidas como Mazama cinzas brasileiros. Apesar de serem morfologicamente identificados como Mazama, há indícios genéticos que estas duas espécies devam ser separadas em dois novos gêneros. Uma forma de contribuir para resolução desta complexidade taxonômica é caracterizar e descrever detalhadamente cada uma das espécies no intuito de auxiliar os estudos filogenéticos, fundamentais para discutir esse problema. Assim, utilizamos dados sobre as características espermáticas para fazer comparações entre as espécies. Através de análises multivariadas discriminantes, de dados de morfometria espermática, identificamos as principais diferenças entre os espermatozoides das duas espécies. Utilizando as técnicas de eletroforese SDS-PAGE bidimensional e espectrometria de massa ESI-Q Tof, comparamos a constituição de proteínas do plasma seminal. Neste trabalho observamos que existem diferenças importantes na dimensão e no formato da cabeça dos espermatozoides das duas espécies, sendo a área e a largura as principais variáveis que as diferenciam. Através das análises discriminantes conseguinos separá-los adequadamente entre os dois grupos de espécies, M. gouazoubira e M. nemorivaga. Ao compararmos o perfil de proteínas totais do plasma seminal, observamos diferenças na distribuição dos spots no gel de poliacrilamida. Além disso, grupos distintos de proteínas foram identificadas no plasma seminal de cada uma das espécies. Esses resultados demonstraram que M. gouazoubira e M. nemorivaga possuem diferenças significativas nas características seminais, o que reforça a hipótese de que dois novos gêneros devem ser criados para cada uma das espécies estudadas / Abstract: Brazilian gray deers are represent by two species: Gray brocket deer (Mazama gouazoubira) and Amazonian brocket deer (Mazama nemorivaga). They belong to genus Mazama, but there are genetic evidence to separate them into two different genera. To contribute to this discution about Mazama taxonomic complexity, we decide to characterize and describe the seminal plasma, of these species, in detail. We performed multivariate analisis to compare sperm morphometry data and identify the main differences between two species. We also used two-dimensional electrophoresis SDS-PAGE techniques and mass spectrometry ESI-Q TOF to compare the constitution of seminal plasma. As result, we found important differences on dimension and shape of the head sperm, being area and width the main variables that differentiate them. Using discriminant analysis, we properly separate them into two groups of species, M. gouazoubira and M. nemorivaga. Comparing the protein profile of the seminal plasma, we observed differences in the distribution of spots, and were identified different groups of proteins in seminal plasma of the distinct species. These results demonstrated that M. gouazoubira and M. nemorivaga have significant differences in the semen characteristics that reinforce the hypothesis that these two species may be separated into two new genera / Doutor

Orientador: Marco Antônio Alvarenga / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: José Antonio Dell Acqua Junior / Resumo: Nas últimas décadas, muitos estudos têm sido realizados nas diferentes espécies com o intuito de se determinar os fatores envolvidos no processo da fragmentação do DNA espermático. A biologia molecular voltada à área da reprodução tem resultado em inúmeras técnicas para a avaliação da qualidade da cromatina e determinação da fragmentação do DNA espermático. Em trabalhos recentes, um novo teste denominado Halomax® tem se mostrado tão eficiente quanto a outros tradicionais para a avaliação da fragmentação do DNA espermático, apresentando como vantagens a sua praticidade e o fato não requerer o uso de equipamentos de alto custo. O presente experimento teve por objetivo comparar as raças Mangalarga Marchador (MM) e Quarto de Milha (QM) quanto à resistência à refrigeração, bem como utilizar o Teste Dispersão de Cromatina Espermática denominado Halomax® para avaliar a fragmentação da cromatina espermática do sêmen refrigerado dos garanhões dessas raças em duas temperaturas de armazenamento de sêmen refrigerado (5°C e 15°C). Os resultados deste trabalho demonstraram que não houve diferença entre as temperaturas de armazenamento (5°C e 15°C), mostran do que ambas são eficientes na manutenção da viabilidade espermática pelo período de 24 horas para ambas as raças estudadas. Além disso, foi observada uma característica espermática superior dos garanhões da raça Quarto de Milha quando comparada aos da raça Mangalarga Marchador, tanto nos parâmetros de velocidade espermática, avaliado pelo CASA, quanto com relação à fragmentação do DNA espermático, revelando uma maior sensibilidade dos animais da raça Mangalarga ao processo de refrigeração do sêmen / Abstract: Many studies have been conducted in different species in order to determine the factors involved in the process of sperm DNA fragmentation. Molecular biology studies focused on the reproductive area has resulted in several techniques for assessing the quality of chromatin and sperm DNA fragmentation. Recently, a new test called HALOMAX ® has been shown to be as efficient as other traditional assessment of sperm DNA fragmentation, having the advantage of practicality and not require the use of expensive equipment. The aim of this study was to compare breeds Mangalarga and Quarter Horses for cooling resistance and use the Sperm Chromatin Dispersion Test called HALOMAX ® to evaluate the sperm chromatin fragmentation using two cooled semen storage systems (5°C and 15°C). Our results showed no difference between storage systems (5°C and 15°C), showing that both are effective in maintaining sperm viability for a period of 24 hours for both breeds studied. In addition, the Quarter Horse shown superiority in semen quality parameters assessed by CASA and sperm DNA fragmentation when compared with the Mangalarga, revealing higher sensitivity of the Mangalarga stallions for cooling semen / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2013. / Submitted by Larissa Stefane Vieira Rodrigues (larissarodrigues@bce.unb.br) on 2014-11-05T11:13:14Z No. of bitstreams: 1 2013_PaulaLorenaGrangeiraSouto.pdf: 1190405 bytes, checksum: 29802022a038de84ea7e1b6c4dc4ba06 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-11-05T16:22:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_PaulaLorenaGrangeiraSouto.pdf: 1190405 bytes, checksum: 29802022a038de84ea7e1b6c4dc4ba06 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-05T16:22:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_PaulaLorenaGrangeiraSouto.pdf: 1190405 bytes, checksum: 29802022a038de84ea7e1b6c4dc4ba06 (MD5) / O bovino Pantaneiro é uma raça localmente adaptada que se desenvolveu no bioma Pantanal brasileiro ao longo de quase 500 anos sob pressão de seleção natural. Estudos acerca de animais localmente adaptados são essenciais para nortear as ações dos programas de conservação de recursos genéticos animais. Assim, o objetivo deste trabalho foi correlacionar o perfil eletroforético bidimensional das proteínas do plasma seminal com a congelabilidade do sêmen de touros Pantaneiros. Utilizou-se ejaculados de dezoito touros Pantaneiros, divididos em dois grupos: de melhor e de pior congelabilidade. As amostras de sêmen pré- criopreservação foram avaliadas quanto à motilidade, vigor e morfologia espermática e as amostras de sêmen pós-criopreservação, avaliadas quanto à cinética pelo CASA, morfologia, integridade de membrana e acrossoma. As amostras de plasma seminal foram obtidas por centrifugação do sêmen e as proteínas seminais separadas por meio de eletroforese bidimensional em géis de poliacrilamida (SDS-PAGE), corados com Coomassie coloidal G- 250 e analisados por meio do aplicativo PDQuest™. Foram detectados 277 spots nos mapas bidimensionais do plasma seminal de reprodutores Pantaneiros. Nove spots apresentaram associações consistentes e significativas com os parâmetros seminais pós-criopreservação. Destes spots, cinco apresentaram diferença (P<0,05) entre os grupos de melhor e pior congelabilidade do sêmen. A análise multivariada apontou cinco spots correlacionados positivamente com os parâmetros de boa congelabilidade do sêmen. Houve diferenças no perfil proteico do plasma seminal entre os reprodutores de melhor e de pior congelabilidade do sêmen e a análise dos géis revelou uma heterogeneidade nos perfis individuais. Devido à associação dos spots 8305, 9217, 2603, 3514 e 2227 a proteínas encontradas em amostras de sêmen de alta congelabilidade e também relacionadas a eventos benéficos sobre as funções espermáticas, sugere-se que a presença dos mesmos está ligada à melhor congelabilidade do sêmen de touros Pantaneiros. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Pantaneiro cattle is a locally adapted breed that has been developed in the brazilian Pantanal biome over almost 500 years under the pressure of natural selection. Studies on locally adapted breeds are essential to guide the actions of the programs for conservation of animal genetic resources. The aim of this study was to correlate the two-dimensional electrophoretic profile of seminal plasma proteins with semen freezability from Pantaneiro bulls. We used ejaculates from eighteen Pantaneiro bulls divided into two groups: best and worst freezability. The sperm parameters motility, viability and morphology were evaluated before cryopreservation and also were evaluated after cryopreservation and further were evaluated CASA kinetics, integrity membrane and acrosome. Seminal plasma samples were obtained by semen centrifugation and seminal proteins were separated by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The gels were stained with colloidal Coomassie G-250 and analyzed using the PDQuest™. Were detected 277 spots in two-dimensional maps of the seminal plasma of Pantaneiro bulls. Nine spots showed consistent and significant associations with semen parameters after cryopreservation. Five these spots showed differences (P<0.05) between freezability groups. The multivariate analysis showed five spots positively correlated with the semen parameters for good freezability. There were differences in the seminal plasma protein profile between bulls of best and worst semen freezability. The analysis of the gels also revealed heterogeneity in individual profiles. Due the association of spots 8305, 9217, 2603, 3514 and 2227 with proteins found in animals with high freezability of semen and it relating to beneficial events on sperm functions, it is suggested that their presence is linked to better semen freezability of Pantaneiro bulls.

O primeiro experimento, teve o objetivo de comparar os efeitos da indução hormonal na qualidade espermática de Brycon insignis. Foram utilizados 12 reprodutores que tiveram uma alíquota do sêmen coletado e avaliado antes da indução hormonal (Ctrl) e em seguida foram divididos em tratamentos de acordo com o hormônio e dosagem recebida, Extrato de Hipófise de Carpa – EHC (T1 – 2,5 mg/kg-1 de peso vivo), análogos de GnRH sendo aplicado em duas dosagens diferentes (T2 – 0,7 mg/kg-1 de peso vivo e T3 – 1,4 mg/kg-1 de peso vivo). Dentre as análises utilizadas para comparar o efeito da indução e dos hormônios utilizados foram; taxa de motilidade – Ctrl (95%), T1 (100%), T2 (100%) e T3 (98%), onde foi observado um ligeiro aumento e concentração espermática – Ctrl (11,52 x109), T1 (4,37 x109), T2 (4,34 x109) e T3 (4,01 x109), que pode ser observado uma redução na concentração após a indução hormonal. No entanto a utilização de indutores hormonais não altera negativamente as características seminais de piabanha. No segundo experimento, o objetivo foi de avaliar a qualidade do sêmen diluído com três diluidores e resfriado a temperatura de 6 °C durante um período de 120 horas. Foram utilizados 32 machos, o liquido seminal era dividido em quatro tratamentos; sem diluição, diluído com BTS®, HBSS e ACP®, na proporção de 1:4 (sêmen:diluidor), as avaliações eram realizadas para; motilidade espermática, tempo de motilidade, morfologia espermática e vigor, no momento da diluição (tempo 0) e nos tempos seguintes de 24, 48, 72, 96 e 120 horas após a diluição. A taxa de fertilização e eclosão foi coletada apenas no momento da diluição do sêmen. Os resultados apontam que a diluição é eficaz para conservação do sêmen de C. macropomum, porém ainda por um curto período de tempo. A recomendação é que esse procedimento seja realiado com o diluidor BTS® por até 72 horas. No terceiro experimento, o objetivo foi classificar por meio de análise de clusters os reprodutores C. macropomum após a criopreservação seminal como sendo de baixo ou alto potencial de congelabilidade e correlacionar com as características do sêmen fresco e fenotípicas. Foram utilizados 25 machos, o sêmen de cada animal foi submetido ao mesmo protoloco de criopreservação que era composto de BTS®+DMF (90:10), e o sêmen diluído na proposção de 1:4. Os resultados demonstram que mesmo sobre as mesmas condições o liquido seminal apresenta diferentes variações, e através da análise de clusters foi possível diferenciar a formação de três grupos de reprodutores (G1, G2, G3). O G1 foi classificado como sendo de alta qualidade espermática após a criopreservação, porém as correlações demonstram que os animais com menor tamanho de cabeça apresentam FR melhores após a criopreservação, e possivelmente a MT pode ser utilizada como pré indicador de congelabilidade para reprodutores C. macropomum. / The first experiment aimed to compare the effects of hormonal induction on the spermatic quality of Brycon insignis. 12 broodstocks that had an aliquot of the semen collected and evaluated before to hormonal induction (Ctrl) were used and then divided into treatments according to the hormone and dosage received, Carpal Hypophysis Extract - EHC (T1 - 2.5 mg/Kg-1 live weight), GnRH analogs being administered in two different dosages (T2 - 0.7 mg/kg-1 live weight and T3 - 1.4 mg/kg-1 live weight). Among the analyzes used to compare the effect of induction and hormones used were: motility rate, that showed a slight increase, Ctrl (95%), T1 (100%), T2 (100%) and T3 (98%) and sperm concentraction wich may be observed a reduction, Ctrl (11.52 x109), T1 (4.37 x109), T2 (4.34 x109) and T3 (4.01 x109). However, the use of hormone inducers does not negatively affect the seminal characteristics of piabanha. In the second experiment, the objective was to evaluate the quality of semen of the Colossoma macropomum diluted with three extenders and cooled to 6 °C for a period of 120 hours. 32 males were used, the seminal fluid was divided into four treatments; Without dilution, diluted with BTSTM, HBSS and ACPTM, at the ratio of 1:4 (semen:extender), evaluations were performed for; Sperm motility, sperm motility and vigor, at the time of dilution (time 0) and at the following times of 24, 48, 72, 96 and 120 hours after dilution. The rate of fertilization and hatching was collected only at the time of the semen dilution. The results indicate that the dilution is effective for the conservation of semen of C. macropomum, but still for a short period of time. The recommendation is that this procedure be performed with the BTSTM thinner for up to 72 hours. In the third experiment, the objective was to classify by means of clusters analysis the C. macropomum broodstock after seminal cryopreservation as being of low or high freeze potential and to correlate with the characteristics phenotypic and fresh semen. 25 males were used, the semen from each animal was submitted to the same cryopreservation protocol that was composed of BTSTM+DMF (90:10), and the semen diluted in the 1:4 ratio. The results show that even on the same conditions, the seminal fluid presents different variations, and through the analysis of clusters it was possible to differentiate the formation of three broodstock groups (G1, G2, G3). G1 was classified as being of high spermatic quality after cryopreservation, but correlations show that animals with smaller head sizes have better fertilization rate after cryopreservation, and possibly motility time can be used as a pre-freeze indicator for C. macropomum.

Orientador: Cesar Roberto Esper / Banca: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: José Octavio Jacomini / Banca: Renato Campanarut Barnabé / Banca: Francisco Guilherme Leite / Resumo: Avaliou-se a influência das estações reprodutiva e não reprodutiva in vivo sobre a fertilidade e in vitro pedizer a qualidade do sêmen de caprinos das raças Boer e Alpina em duas etapas. A primeira foi conduzida na FMVZ - Botucatu e FCAV Jaboticabal. Selecionou-se nove caprinos das raças Boer e Alpina mantidos em criação intensiva e sob luminosidade natural. Estudou-se as características seminais, congelabilidade do sêmen, e testes para predição da fertilidade como: integridade do DNA, análises computadorizadas da motilidade e morfometria espermática, avaliação da peça intermediária e a integridade de membrana de 71 ejaculados no outono e 64 na primavera. Amostras de sangue foram colhidas nas duas estações, para mensuração da testosterona plasmática. Na segunda etapa, 164 cabras SRD foram inseminadas com o sêmen colhido na primeira etapa. Aplicou-se ANOVA seguida do teste de comparação múltipla de Tukey-Kramer para cada uma das variáveis, teste T de Student e qui-quadrado. Nas características seminais, observaram-se diferenças estatísticas (P<0,01) para o volume e concentração espermática. A morfologia espermática apresentou-se dentro da normalidade. As taxas de fertilidade para as fêmeas inseminadas foram 26,74, 19,77 e 34,62 e 29,49, com sêmen colhido no outono e primavera, para as raças Boer e Alpina, respectivamente. Não houve diferença de fertilidade dos machos Os testes de fertilidade mostraram que a integridade da cromatina apresentou menos de 10% de espermatozóides danificados. A motilidade espermática, os índices de atividade citoquímica e a integridade de membrana plasmática diferiram estatisticamente (P<0,01) nas amostras pós-colheita e pós-descongelação, entretanto, sem diferença entre as estações. A morfometria da cabeça e a quantificação de testosterona não apresentaram diferenças estatísticas (P<0,01) entre as amostras... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The season breeding and non-breeding influence on in vivo and in vitro fertility of Boer and Alpine Bucks was evaluated two steps. The first was conducted at FMVZ - Botucatu and FCAV - Jaboticabal. Nine bucks of Boer and Alpine breed were selected and kept under intensive production regimen and natural luminosity. The seminal characteristics, freezing and fertility prediction tests was evaluated using: DNA integrity, sperm motility computer analysis, head morphometric, middle piece evaluation and membrane integrity of 71 ejaculates on autumn and 64 on spring. Blood samples were collected in both for seasons to measurement of plasmatic testosterone (PT). In second step, 164 female goats, without defined breed, were insemination with the semen collected in the first step. ANOVA was applied followed by the Tukey-Kramer multiple comparison tests for each of the characteristics. T-Student and Chi-square tests were performed and for PT and fertility rate (FR). For seminal characteristics evaluation, statistical differences (P<0.01) were observed for volume and concentration. The spermatic morphological analysis showed normal patterns. The FR for pregnancy were 26.74, 19.77, 34.62 and 29.49, for semen that was collected in Autumn and Spring, to Boer and Alpine breeds respectively. There was no difference in males' fertility. Prediction fertility tests showed less than 10% of damaged spermatozoon on chromatin integrity evaluation. Spermatic motility parameters, citochemistry activity rates and integrity membrane plasmatic were statistically different (P<0.01) in samples after-collection and after-thawing, however, between seasons differences were not seen. The head morphometry and the testosterone quantification did not show statistical differences (P>0.01) between the samples. It was concluded that Boer and Alpine breeds did not differ in fertility, when used for artificial insemination, in Autumn and Spring. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-03Bitstream added on 2014-06-13T19:43:41Z : No. of bitstreams: 1 bittencourt_rf_dr_botfmvz.pdf: 2402327 bytes, checksum: fd3294b446a90eae988a29bec85c0499 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia e o efeito dos crioprotetores glicerol (GLI) e dimetilacetamida (DMA) em duas concentrações (3 e 6%), em meio diluidor com e sem trealose (TRE), associada ou não ao EDTA, sobre a viabilidade espermática pós-descongelação. Para tanto, foram utilizadas quarenta e nove amostras de sêmen de 20 carneiros da raça Santa Inês. Os estudos foram divididos em três experimentos. O primeiro comparou as duas concentrações de GLI em meio com ou sem a TRE, associada ou não ao EDTA. O segundo experimento avaliou a DMA em duas concentrações (3 e 6%) em meio com ou sem TRE, associada ou não ao EDTA. O terceiro experimento testou os dois diluidores com os melhores resultados in vitro no experimento 1 e os dois do experimento 2. Todos os experimentos tiveram os parâmetros da cinética espermática avaliados subjetivamente e pela análise computadorizada (CASA). A análise da viabilidade espermática foi realizada através da associação das sondas fluorescentes iodeto de proprídio, JC-1 e FITC-PSA. Para a análise estatística das características avaliadas, foi empregado o programa estatístico (SAS), versão 5.0 (1996). A DMA a 6% apresentou toxicidade e a 3% demonstrou baixo efeito crioprotetor sobre o espermatozóide ovino. A adição da TRE promoveu efeito negativo sobre a cinética espermática, entretanto melhorou os níveis de integridade das membranas espermáticas pós-descongelação. O diluidor com GLI a 6% sozinho foi o protocolo mais eficaz para a manutenção da integridade espermática, entretanto a taxa de prenhez das fêmeas não diferiu entre os grupos / The objective of this study was to evaluate the efficacy and the effect of the cryoprotectants glycerol (GLY) and dimethyl acetamide (DMA) in two grades (3 and 6%) in extender with and without trehalose (TRE) extender associated or not with EDTA, on the post-thawing sperm viability. For that, they were used forty nine semen samples of 20 rams of the Santa Inês breed. The studies were divided into three experiments. The first one compared the two GLY grades (3 and 6%) in extender with or without TRE, associated or not with EDTA. The second experiment evaluated the DMA at two concentrations (3 e 6%) in medium with or without TRE, associated or not with EDTA. The third one tested the two extenders with the best in vitro results in experiment 1 and the two from experiment 2. All experiments had the kinetics sperm parameters evaluated subjectively and by computer analysis (CASA). The sperm viability evaluation was performed through the multiple sperm parameter staining with propidium iodide, JC-1 and FITC-PSA. For the statistical analysis of the characteristics evaluated was used the statistical package (SAS), version 5.0 (1996). The DMA at 6% was toxic and at 3% had a poor cryoprotective effect for ram semen. The addition of TRE promoted negative effect on sperm kinetics, entertain improved levels of sperm membranes integrity post-thawing. The extender with GLI at 6% alone was the best protocol for maintaining the sperm integrity, however the pregnancy rates of the ewes did not present difference (P>0.05) among the groups