Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2013. / Submitted by Larissa Stefane Vieira Rodrigues (larissarodrigues@bce.unb.br) on 2014-11-05T11:13:14Z No. of bitstreams: 1 2013_PaulaLorenaGrangeiraSouto.pdf: 1190405 bytes, checksum: 29802022a038de84ea7e1b6c4dc4ba06 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-11-05T16:22:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_PaulaLorenaGrangeiraSouto.pdf: 1190405 bytes, checksum: 29802022a038de84ea7e1b6c4dc4ba06 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-05T16:22:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_PaulaLorenaGrangeiraSouto.pdf: 1190405 bytes, checksum: 29802022a038de84ea7e1b6c4dc4ba06 (MD5) / O bovino Pantaneiro é uma raça localmente adaptada que se desenvolveu no bioma Pantanal brasileiro ao longo de quase 500 anos sob pressão de seleção natural. Estudos acerca de animais localmente adaptados são essenciais para nortear as ações dos programas de conservação de recursos genéticos animais. Assim, o objetivo deste trabalho foi correlacionar o perfil eletroforético bidimensional das proteínas do plasma seminal com a congelabilidade do sêmen de touros Pantaneiros. Utilizou-se ejaculados de dezoito touros Pantaneiros, divididos em dois grupos: de melhor e de pior congelabilidade. As amostras de sêmen pré- criopreservação foram avaliadas quanto à motilidade, vigor e morfologia espermática e as amostras de sêmen pós-criopreservação, avaliadas quanto à cinética pelo CASA, morfologia, integridade de membrana e acrossoma. As amostras de plasma seminal foram obtidas por centrifugação do sêmen e as proteínas seminais separadas por meio de eletroforese bidimensional em géis de poliacrilamida (SDS-PAGE), corados com Coomassie coloidal G- 250 e analisados por meio do aplicativo PDQuest™. Foram detectados 277 spots nos mapas bidimensionais do plasma seminal de reprodutores Pantaneiros. Nove spots apresentaram associações consistentes e significativas com os parâmetros seminais pós-criopreservação. Destes spots, cinco apresentaram diferença (P<0,05) entre os grupos de melhor e pior congelabilidade do sêmen. A análise multivariada apontou cinco spots correlacionados positivamente com os parâmetros de boa congelabilidade do sêmen. Houve diferenças no perfil proteico do plasma seminal entre os reprodutores de melhor e de pior congelabilidade do sêmen e a análise dos géis revelou uma heterogeneidade nos perfis individuais. Devido à associação dos spots 8305, 9217, 2603, 3514 e 2227 a proteínas encontradas em amostras de sêmen de alta congelabilidade e também relacionadas a eventos benéficos sobre as funções espermáticas, sugere-se que a presença dos mesmos está ligada à melhor congelabilidade do sêmen de touros Pantaneiros. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Pantaneiro cattle is a locally adapted breed that has been developed in the brazilian Pantanal biome over almost 500 years under the pressure of natural selection. Studies on locally adapted breeds are essential to guide the actions of the programs for conservation of animal genetic resources. The aim of this study was to correlate the two-dimensional electrophoretic profile of seminal plasma proteins with semen freezability from Pantaneiro bulls. We used ejaculates from eighteen Pantaneiro bulls divided into two groups: best and worst freezability. The sperm parameters motility, viability and morphology were evaluated before cryopreservation and also were evaluated after cryopreservation and further were evaluated CASA kinetics, integrity membrane and acrosome. Seminal plasma samples were obtained by semen centrifugation and seminal proteins were separated by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The gels were stained with colloidal Coomassie G-250 and analyzed using the PDQuest™. Were detected 277 spots in two-dimensional maps of the seminal plasma of Pantaneiro bulls. Nine spots showed consistent and significant associations with semen parameters after cryopreservation. Five these spots showed differences (P<0.05) between freezability groups. The multivariate analysis showed five spots positively correlated with the semen parameters for good freezability. There were differences in the seminal plasma protein profile between bulls of best and worst semen freezability. The analysis of the gels also revealed heterogeneity in individual profiles. Due the association of spots 8305, 9217, 2603, 3514 and 2227 with proteins found in animals with high freezability of semen and it relating to beneficial events on sperm functions, it is suggested that their presence is linked to better semen freezability of Pantaneiro bulls.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-23T19:26:27Z No. of bitstreams: 1 2018_PaulaLorenaGrangeiraSouto.pdf: 2276578 bytes, checksum: 7c790f11bfc3aa7cf2eac6c91bc4d69c (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-29T16:49:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_PaulaLorenaGrangeiraSouto.pdf: 2276578 bytes, checksum: 7c790f11bfc3aa7cf2eac6c91bc4d69c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-29T16:49:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_PaulaLorenaGrangeiraSouto.pdf: 2276578 bytes, checksum: 7c790f11bfc3aa7cf2eac6c91bc4d69c (MD5) Previous issue date: 2018-08-23 / O objetivo deste estudo foi comparar a qualidade seminal de touros localmente adaptados com touros de raça comercial criados na região do Planalto Sul Catarinense e analisar as relações com a adaptação climática. Características da morfologia externa dos touros, respostas fisiológicas e proteínas do plasma seminal foram investigadas no verão e no inverno. Em cada estação houve três coletas de sêmen por touro e as amostras foram avaliadas para motilidade total e vigor, concentração espermática, viabilidade das membranas e defeitos da célula. O plasma seminal foi obtido por centrifugação e submetido à proteômica por shotgun para identificação das proteínas. Dados ambientais como temperatura e umidade relativa do ar, temperatura do globo negro (BGT), índice de temperatura e umidade (ITU) e os índices de conforto térmico foram obtidos. As condições climáticas diferiram significativamente entre as estações. No Capítulo 2, concluiu-se que touros Crioulo Lageano e Angus apresentaram qualidade seminal similar e satisfatória ao longo do ano. Temperatura do ar, BGT e ITU foram os principais fatores que potencialmente afetariam as características espermáticas. No Capítulo 3, foi possível concluir que os touros experimentaram estresse térmico moderado no verão, o que levou a mudanças fisiológicas significativas, porém a normotermia foi mantida o que mostrou boa adaptação às condições climáticas da região estudada. Características de morfologia externa do animal foram as mais importantes para explicar as respostas fisiológicas, enquanto que no inverno prevaleceram as características climáticas. No Capítulo 4, determinou-se que houve efeito de raça e de estação sobre a abundância de proteínas no plasma seminal. Sugerese que as proteínas diferencialmente abundantes fazem parte dos mecanismos envolvidos com a adaptação climática e manutenção da homeostase dos touros. Este estudo contribui para o conhecimento sobre a fisiologia do trato reprodutivo de touros de raças localmente adaptadas e argumentam em favor da utilização das mesmas na cadeia pecuária. / This study aimed to compare the semen quality of locally adapted bulls with bulls of a commercial breed raised at Southern Highlands of Santa Catarina, as well as, to analyse the relationships with climate adaptation. Characteristics of the external morphology of the animals, physiological responses and proteins in the seminal plasma were investigated in summer and in winter. Semen samples were obtained three times in each season, from all bulls, and analysed for sperm motility, vigor, number of sperm per millilitre, sperm membrane status and sperm defects. Seminal plasma was obtained by centrifugation and the proteins identified by shotgun proteomics. Environmental data, such as air temperature, air humidity, black globe temperature (BGT), temperature humidity index (THI) and thermal comfort indexes were obtained. Climate conditions differed significantly between seasons. Chapter 2 unveiled that the semen quality of Crioulo Lageano and Angus bulls was similar and satisfactory across the year. Air temperature, BGT and THI were considered the most important factors that could affect seminal traits. In Chapter 3, it was possible to conclude that the bulls experienced moderate heat stress in summer, which led to significant physiological responses, but they were able to maintain normothermia, showing good adaptation to the climate conditions at the region studied. External morphological characteristics were highly important to explain physiological responses in summer, whereas in winter the climatic features prevailed. In Chapter 4, it was determined that season and breed influenced on the abundance of the proteins in seminal plasma. We suggest that the differentially abundant proteins are part of a range of mechanisms that participate in climate adaptation and homeostasis maintenance of the sires. This study contributes to the knowledge about the male physiology in locally adapted cattle and argues in favour of the use of them in the livestock breeding systems.

Considerando-se que a leptospirose pode ser transmitida pela inseminação artificial e a existência de possíveis falhas na Instrução Normativa vigente do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento-MAPA, quanto ao controle desta enfermidade em touros em serviço reprodutivo em Centrais de lnseminação Artificial -CIA, e ainda pelas baixas taxas na FIV em vista da presença de microbiota autóctone no sêmen industrializado, o presente trabalho propôs avaliar: l-a microbiota autóctone presente nas amostras de muco prepucial e sêmen quanto a sazonalidade e a idade (&lt;4 e &ge;4 anos) de touros de uma CIA; 2-0 efeito do tratamento com protocolos antibióticos adicionados ao extensor: A - gentamicina (250 ug/ml.), tilosina (50 ug/rnl.); lincomicina (150 ug/ml.), espectinomicina (300 ug/ml.; B -penicilina (500 UI), estreptomicina (500 UI), lincomicina (150 ug/ml.), espectinomicina (300 ug/ml.); CI- sulfato de amicacina (500 ug/rnl.); C2 - sulfato de amicacina (1500 ug/ml. ) e C3 - sulfato de amicacina (2500 ug/ml.) sobre a microbiota presente nas amostras de sêmen; 3-0 efeito dos protocolos de antibióticos (A, B, C I, C2, C3) sobre esperrnatozóide através do teste de integridade de membrana.; 4-0 efeito bactericida dos protocolos A, B e C2 adicionados ao extensor, sobre o sêmen experimentalmente contaminado com Leptospira spp. sorovares Hardjo (estirpes Hardjoprajitno e Hardjobovis) e Wolffi (estirpe 3705), pelo cultivo microbiológico e Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), comparando-as entre si. Das amostras de sêmen e muco prepucial de oito touros de uma CIA, observou-se correlação entre os gêneros bacterianos detectados no cultivo bacteriológico das amostras de muco prepucial e sêmen na mesma colheita, não houve diferença entre a microbiota quanto à idade dos animais e a sazonalidade das colheitas; os protocolos antibióticos (A, B, Cl , C2, C3) não interferiram na integridade de membrana citoplasmática dos espermatozóides; protocolos A e C3 mostraram maior redução na microbita do sêmen, embora sem significado estatístico; PCR foi mais sensível que o cultivo na detecção de Leptospira spp. de amostras de sêmen experimentalmente contaminadas, entretanto a diminuição na freqüência de resultados positivos na PCR, em amostras de sêmen contaminadas com três estirpes de Leptospira spp e tratadas com os protocolos A, B ou C2, está relacionada a fatores intrínsecos da técnica e não ao efeito bactericida dos antibióticos empregados. O cultivo bacteriológico revelou baixa sensibilidade no isolamento de estirpes de Leptospira spp em sêmen experimentalmente contaminado com 106 bactérias/mL. A transmissão de leptospiras pelo sêmen industrializado de touros doadores em ClA é principalmente dependente da concentração de leptospiras excretadas no momento da colheita. A PCR confirma ser uma ferramenta fundamental na detecção da presença de leptospiras no sêmen de touros doadores em Centrais de Inseminação Artificial, devendo ser empregada em pelo menos duas colheitas na quarentena, e posteriormente no monitoramento do animal / Considering that leptospirosis can be transmitted by the artificial insemination route and the existence of possible fails on current Normative Instruction of the Ministerio de Agricultura, Pecuária e Abastecimento- MAPA, for the control of this disease in bulls in reproductive service in Artificial Insemination Centers-AIC, and still for the low rates due to the presence of autoctone microbiota in the industrialized semen affecting the production of embryos by in vitro fertilization, the present study aimed to evaluate the autoctone microbiota presented in preputial mucus and semen samples according to season (falls and dry) and bull ages (&lt;4 e &ge;4 years) from the AIC; the effect of the treatment with antibiotic protocols added to the semen extensor: A- gentamicine (250 ug/rnl.), tilosine (50 11gim L); lincomicine (150 ug/rnl.); espectinomicine (300 11gim L; B- penicillin (500 UI); estreptomicine (500 UI); lincomicine (150 ug/ml.); espectinomicine (300 ug/ml.); C 1 amicacine sulphate (500 ug/ml.); C2- amicacine sulphate (1500 ug/rriL) and C3- amicacine sulphate (2500 ug/ml.) on microbiota presents in the semen samples; the effect of the antibiotic protocols (A, B, C I, C2, C3) on spermatozoa by the test of membrane integrity; the bactericidal effect of the antibiotic protocols A, B and C2 added to the extensor, on the semen experimentally contaminated with Leptospira spp. serovars Hardjo (strains Hardjoprajitno and Hardjobovis) and Wolffi (strain 3705), for the bacteriological culture and polimerase chain reaction (PCR), comparing themselves. Of the samples of preputial mucus and semen samples of eight bulls of an AlC it was observed correlation among bacterial Genera detected by the bacteriological culture of preputial mucus and semen in the same collection; but it was not observed difference relative to animal age groups and seasons of the year. The antibiotic protocols (A, B, Cl, C2, C3) had no effect on the integrity of cytoplasmic membrane of the spermatozoa. C3 showed greater reduction on semen microbita, but no statistically significant. PCR was more sensible than the bacteriological culture in the detention of Leptospira spp. from semen samples experimentally contaminated, however the reduction on the frequency of positive results by PCR was not related to bactericidal effect of the antibiotic protocols, maybe it was due to intrinsic factors of this method. The bacteriological culture showed very low sensitivity to isolate Leptospira spp. from experimental contaminated semen with 106 bacterias/mL. The transmission of leptospires by industrialized semen from donor bulls of AlC depend mainly on the concentration of leptospires excreted at the moment of the semen collection. The PCR confirms to be a fundamental tool for the detention of leptospires in the semen of donor bulls in AlC, and must be used at least twice during the quarantine, and for the animal monitoring during service time

Considerando-se que a leptospirose pode ser transmitida pela inseminação artificial e a existência de possíveis falhas na Instrução Normativa vigente do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento-MAPA, quanto ao controle desta enfermidade em touros em serviço reprodutivo em Centrais de lnseminação Artificial -CIA, e ainda pelas baixas taxas na FIV em vista da presença de microbiota autóctone no sêmen industrializado, o presente trabalho propôs avaliar: l-a microbiota autóctone presente nas amostras de muco prepucial e sêmen quanto a sazonalidade e a idade (&lt;4 e &ge;4 anos) de touros de uma CIA; 2-0 efeito do tratamento com protocolos antibióticos adicionados ao extensor: A - gentamicina (250 ug/ml.), tilosina (50 ug/rnl.); lincomicina (150 ug/ml.), espectinomicina (300 ug/ml.; B -penicilina (500 UI), estreptomicina (500 UI), lincomicina (150 ug/ml.), espectinomicina (300 ug/ml.); CI- sulfato de amicacina (500 ug/rnl.); C2 - sulfato de amicacina (1500 ug/ml. ) e C3 - sulfato de amicacina (2500 ug/ml.) sobre a microbiota presente nas amostras de sêmen; 3-0 efeito dos protocolos de antibióticos (A, B, C I, C2, C3) sobre esperrnatozóide através do teste de integridade de membrana.; 4-0 efeito bactericida dos protocolos A, B e C2 adicionados ao extensor, sobre o sêmen experimentalmente contaminado com Leptospira spp. sorovares Hardjo (estirpes Hardjoprajitno e Hardjobovis) e Wolffi (estirpe 3705), pelo cultivo microbiológico e Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), comparando-as entre si. Das amostras de sêmen e muco prepucial de oito touros de uma CIA, observou-se correlação entre os gêneros bacterianos detectados no cultivo bacteriológico das amostras de muco prepucial e sêmen na mesma colheita, não houve diferença entre a microbiota quanto à idade dos animais e a sazonalidade das colheitas; os protocolos antibióticos (A, B, Cl , C2, C3) não interferiram na integridade de membrana citoplasmática dos espermatozóides; protocolos A e C3 mostraram maior redução na microbita do sêmen, embora sem significado estatístico; PCR foi mais sensível que o cultivo na detecção de Leptospira spp. de amostras de sêmen experimentalmente contaminadas, entretanto a diminuição na freqüência de resultados positivos na PCR, em amostras de sêmen contaminadas com três estirpes de Leptospira spp e tratadas com os protocolos A, B ou C2, está relacionada a fatores intrínsecos da técnica e não ao efeito bactericida dos antibióticos empregados. O cultivo bacteriológico revelou baixa sensibilidade no isolamento de estirpes de Leptospira spp em sêmen experimentalmente contaminado com 106 bactérias/mL. A transmissão de leptospiras pelo sêmen industrializado de touros doadores em ClA é principalmente dependente da concentração de leptospiras excretadas no momento da colheita. A PCR confirma ser uma ferramenta fundamental na detecção da presença de leptospiras no sêmen de touros doadores em Centrais de Inseminação Artificial, devendo ser empregada em pelo menos duas colheitas na quarentena, e posteriormente no monitoramento do animal / Considering that leptospirosis can be transmitted by the artificial insemination route and the existence of possible fails on current Normative Instruction of the Ministerio de Agricultura, Pecuária e Abastecimento- MAPA, for the control of this disease in bulls in reproductive service in Artificial Insemination Centers-AIC, and still for the low rates due to the presence of autoctone microbiota in the industrialized semen affecting the production of embryos by in vitro fertilization, the present study aimed to evaluate the autoctone microbiota presented in preputial mucus and semen samples according to season (falls and dry) and bull ages (&lt;4 e &ge;4 years) from the AIC; the effect of the treatment with antibiotic protocols added to the semen extensor: A- gentamicine (250 ug/rnl.), tilosine (50 11gim L); lincomicine (150 ug/rnl.); espectinomicine (300 11gim L; B- penicillin (500 UI); estreptomicine (500 UI); lincomicine (150 ug/ml.); espectinomicine (300 ug/ml.); C 1 amicacine sulphate (500 ug/ml.); C2- amicacine sulphate (1500 ug/rriL) and C3- amicacine sulphate (2500 ug/ml.) on microbiota presents in the semen samples; the effect of the antibiotic protocols (A, B, C I, C2, C3) on spermatozoa by the test of membrane integrity; the bactericidal effect of the antibiotic protocols A, B and C2 added to the extensor, on the semen experimentally contaminated with Leptospira spp. serovars Hardjo (strains Hardjoprajitno and Hardjobovis) and Wolffi (strain 3705), for the bacteriological culture and polimerase chain reaction (PCR), comparing themselves. Of the samples of preputial mucus and semen samples of eight bulls of an AlC it was observed correlation among bacterial Genera detected by the bacteriological culture of preputial mucus and semen in the same collection; but it was not observed difference relative to animal age groups and seasons of the year. The antibiotic protocols (A, B, Cl, C2, C3) had no effect on the integrity of cytoplasmic membrane of the spermatozoa. C3 showed greater reduction on semen microbita, but no statistically significant. PCR was more sensible than the bacteriological culture in the detention of Leptospira spp. from semen samples experimentally contaminated, however the reduction on the frequency of positive results by PCR was not related to bactericidal effect of the antibiotic protocols, maybe it was due to intrinsic factors of this method. The bacteriological culture showed very low sensitivity to isolate Leptospira spp. from experimental contaminated semen with 106 bacterias/mL. The transmission of leptospires by industrialized semen from donor bulls of AlC depend mainly on the concentration of leptospires excreted at the moment of the semen collection. The PCR confirms to be a fundamental tool for the detention of leptospires in the semen of donor bulls in AlC, and must be used at least twice during the quarantine, and for the animal monitoring during service time

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_karina_lemos_goularte.pdf: 3530828 bytes, checksum: ee940571a94dfd9dfaf6d9f911e7e113 (MD5) Previous issue date: 2014-02-17 / Although more than 12 million doses of bull frozen semen were sold in Brazil in 2012, the production process of the doses sold by the artificial insemination centers registered in the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply is not yet standardized. The hypothesis of the present study is that the design and implementation of a hazard analysis and critical control points (HACCP) system in a bull artificial insemination center can identify steps potentially harmful to the viability of semen doses, to decrease their rejection and to improvement their final quality, after the adoption of preventive and process control measures. The implementation of the HACCP system identified hazardous steps for the quality of the produced semen doses, leading to a reduction in their contamination during processing (P<0.05). There was also an increase in progressive motility and plasma membrane and acrosome integrity of spermatozoa (P<0.05) after implementing the HACCP system, which resulted in reduced rejection of semen batches and doses (P<0.05) and decreased production costs. Thus, the execution of the HACCP system standardized the production process of bull frozen semen, with improved sperm quality and reduction in both rejection of doses and costs to the industry. Additionally, during the sandwich doctorate program at the University of Calgary (Canada), the involvement of angiotensin converting enzyme in the capacitation process and in vitro fertilization in cattle was evaluated. After blocking the enzyme s activity by the specific inhibitor captopril, there were similar levels of tyrosine phosphorylation and cleavage and embryonic development until the blastocyst stage in comparison with the control group (P>0.05). Therefore, the present study suggests that the angiotensin converting enzyme is neither required for sperm capacitation nor involved in in vitro fertilization in cattle. / Apesar de o Brasil ter comercializado mais de 12 milhões de doses de sêmen bovino no ano de 2012, ainda não existe um padrão de processamento das doses comercializadas pelos estabelecimentos cadastrados pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. A hipótese do presente trabalho é de que a elaboração e a implantação de um sistema de Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (APPCC) para um centro de coleta e processamento de sêmen bovino seja capaz de identificar as etapas potencialmente danosas para a viabilidade das doses, diminuir a sua rejeição e melhorar a sua qualidade final, a partir da adoção de medidas preventivas e de controle do processo. A implantação do sistema APPCC identificou as etapas que apresentavam perigos para a qualidade das doses de sêmen produzidas, ocorrendo redução na contaminação durante o seu processamento (P<0,05), Também houve um incremento na motilidade progressiva e na integridade das membranas plasmática e acrossomal dos espermatozóides (P<0,05) após a implantação do sistema APPCC, bem como uma redução na rejeição de partidas e doses de sêmen (P<0,05), o que se refletiu em uma diminuição dos custos de produção. Assim, a utilização do sistema APPCC resultou na padronização do processo de produção de sêmen bovino congelado, com incremento da qualidade seminal, redução na rejeição de doses e nos custos para a indústria. Adicionalmente, durante o programa de doutorado sanduíche na Universidade de Calgary (Canadá),foi avaliado o envolvimento da enzima conversora da angiotensina no processo de capacitação espermática e fertilização in vitro em bovinos. Após o bloqueio da atividade da enzima com o inibidor específico captopril,observou-se níveis semelhantes de fosforilação da proteína tirosina e de clivagem e desenvolvimento embrionário até o estágio de blastocisto, em comparação com o controle (P>0,05). Portanto, o presente estudo sugere que a enzima conversora da angiotensina não é necessária para o processo de capacitação espermática nem está envolvida na fertilização in vitro, em bovinos.

Submitted by Michele Mologni (mologni@unoeste.br) on 2018-11-22T11:15:18Z No. of bitstreams: 1 Camila Dutra de Souza Francisquini.pdf: 2946141 bytes, checksum: d4a8301da20ac5338becde2b5af3e95b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-22T11:15:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Camila Dutra de Souza Francisquini.pdf: 2946141 bytes, checksum: d4a8301da20ac5338becde2b5af3e95b (MD5) Previous issue date: 2018-10-10 / In regions of tropical climate, mating occurs during warmer months, bulls are subject to environmental variations that interfere with their fertility and reproductive efficacy of the herd. The use of some biotechnologies contributes to the efficiency of the production system and to evaluate the fertilization potential of a semen sample, be it fresh, chilled or frozen. A combination of several analyzes and seminal assay methods offers greater accuracy to define a complex functionality. For Chapter 1, the objectives of the study were: (1) to evaluate the effect of the seasons on the surface temperature of the scrotum and ocular globe, the semen quality and plasma concentration of testosterone from Nellore bulls raised extensively, (2) to verify the plasma protein composition (3) investigate the relationships of these proteins with seminal parameters, surface temperatures of the scrotum and THI. Nellore bulls (n = 20) were evaluated with two data collections with a 30-day interval within each season of the year. Infrared thermography (FLIR E40®) with image analysis (FLIR tools software) for spermatic cord (SCT), proximal pole of the testis (PPT), distal pole of the testis (DPT), tail of the epididymis (TeT) and scrotal temperature gradient (TG), and semen collected and analyzed for quantitative and qualitative characteristics. Blood samples were collected by venipuncture of the jugular to obtain the plasma concentration of testosterone by radioimmunoassay (RIA). The seminal plasma proteins were identified by electrophoresis on SDS-PAGE. The temperature-humidity index (THI) calculated per season. The TG was higher (P <0.05) in autumn (5ºC) and winter (4.4ºC) compared to spring (3.4ºC) and summer (3.7ºC). The THI of spring (73.5) and summer (72) differed (P <0.05) from autumn (64.5) and winter (59.6) and there were correlations (P <0.01) with SCT (0.54), TeT (0.74), PPT (0.71), DPT (0.72) and TG (-0.35). Similarly, MOT (61.5%) and VIG (2.7) in spring were lower in relation to autumn and winter (P <0.05). The plasma concentration of testosterone was higher (P <0.05) in the autumn, in relation to the other seasons of the year. Seminal plasma proteins of 20, 55 and 66KDa contributed positively to seminal quality. The concentration of the protein with 50KDa was high in all seasons, being considered indispensable for the fertility of the bulls. In the spring and summer seasons, in which the THI exceeded the value of 72, there was a decrease in progressive motility and spermatic vigor. The summer and fall, the seasons that presented greater percentages of major and total sperm defects. Ocular globe and scrotal surface temperatures increased in spring and summer and the thermal gradient and testosterone plasma concentration decreased in the same seasons, concluding that the thermal stress with THI above 72 in the spring and summer seasons was sufficient for negatively affect the reproduction of Nelore bulls raised in pasture in the tropics. The chapter 2, the objectives of the study were: (1) assess the quality of refrigerated beef semen transported by 3 hours, passive systems of transport of semen BotuBOX® and BotuFLEX®, diluted in TRIS and BotuBOV®; and (2) evaluate the spermatic kinetics, oxidative stress, mitochondrial potential and cell membrane integrity and acrossomal bovine semen after thawing, diluted in TRIS and BotuBOV® and transported in passive systems semen transport BotuBOX® and BotuFLEX®. The six bulls semen of Nellore breed (Bos taurus indicus), cooled and frozen in 2 extenders TRIS and BotuBOV® and transported in 2 cooling systems BotuBOX® and BotuFLEX®. In a semen sample refrigerated was made a subjective analysis of motility (MOT) and sperm vigor (VIG) and in the sample frozen-thawed, computer-assisted sperm analysis (CASA) and flow cytometry, evaluation of integrity of plasma membrane and acrossomal (IPAM), production of superoxide (O2-) and integrity of cells (IC). On after cooled analysis, the MOT of semen in the BotuBOV® and BotuFLEX® (69.4%) and TRIS and BotuFLEX® (62.9%), were higher (P < 0.05) when compared to the TRIS and BotuBOX®. The largest (P < 0.05) MOT (45.9%) observed in subjective analysis, TM (47.3%) and PM (37%) in the CASA, IPAM (29%), IC (19.8%) and lower production of the O2- (82%) found in the samples frozen-thawed diluted in BotuBOV® extender and transported in the BotuFLEX® system. We conclude that the diluted semen in the BotuBOV® and transported on BotuBOX® or BotuFLEX®, and diluted TRIS extender and transported on BotuFLEX® maintained the viability for using the cooled semen, as well as employment for freezing. The association between the BotuBOV® diluent and refrigerated transport of semen BotuFLEX® presented best effect on the frozen semen in regard to kinetics parameters, integrity of plasma and acrossomal membranes and oxidative stress reduction. / Em regiões de clima tropical, o acasalamento ocorre durante os meses mais quentes, os touros estão sujeitos às variações ambientais que interferem com a sua fertilidade e eficácia reprodutiva do rebanho. A utilização de algumas biotecnologias colabora para a eficiência do sistema de produção e avaliar o potencial de fertilização de uma amostra de sêmen, seja ela fresca, refrigerada ou congelada e Uma combinação de várias análises e métodos de avalição seminal oferece maior acurácia para definir uma complexa funcionalidade. Para o capítulo 1, os objetivos do estudo foram (1) avaliar o efeito das estações do ano na temperatura da superfície do escroto e do globo ocular, na qualidade do sêmen e concentração plasmática de testosterona de touros Nelore criados extensivamente, (2) verificar a composição proteica do plasma seminal em cada estação do ano e as proteínas com maior frequência e (3) investigar as relações dessas proteínas com parâmetros seminais, temperaturas da superfície do escroto e ITU. Touros Nelore (n=20) foram avaliados com duas coletas de dados com intervalo de 30 dias dentro de cada estação do ano, sendo realizados: termografia infravermelha (FLIR E40®) com análise de imagens (software FLIR tools) para cordão espermático (TCE), polo proximal do testículo (PPT), polo distal do testículo (PDT, cauda do epidídimo (TCEp) e gradiente de temperatura escrotal (GT). O sêmen foi coletado e analisado quanto às características quantitativas e qualitativas. Amostras de sangue foram coletadas por venopunção da jugular para obter a concentração plasmática de testosterona por radioimunoensaio (RIA). As proteínas do plasma seminal foram identificadas por eletroforese em SDS-PAGE. O índice de temperatura-umidade (ITU) por estação do ano. O GT foi maior (P<0.05) no outono (5ºC) e inverno (4.4ºC) comparado a primavera (3.4ºC) e verão (3.7ºC). O ITU da primavera (73.5) e verão (72) diferiram (P<0,05) do outono (64.5) e inverno (59.6) e houveram correlações (P<0,01) com TCE (0.54), TCEp (0.74), PPT (0.71), PDT (0.72) e GT (-0.35). Assim como, motilidade espermática (61.5%) e vigor (2.7) na primavera foram inferiores, em relação ao outono e inverno (P<0.05). A concentração plasmática de testosterona foi superior (P<0,05) no outono, em relação às demais estações do ano. As bandas proteicas do plasma seminal de 20, 55 e 66KDa contribuíram de forma positiva para a qualidade seminal. A concentração da banda com 50KDa foi elevada em todas as estações, sendo considerada indispensável para a fertilidade dos touros. Nas estações primavera e verão, nas quais o ITU excedeu o valor de 72, observou-se decréscimo na motilidade progressiva e vigor espermático. O verão e outono, as estações que apresentaram maiores porcentagens de defeitos espermáticos maiores e totais. As temperaturas do globo ocular e da superfície do escroto aumentaram na primavera e verão e o gradiente térmico e a concentração plasmática de testosterona diminuiu nas mesmas estações, concluindo que o estresse térmico com ITU acima de 72, nas estações primavera e verão, foi suficiente para afetar negativamente a reprodução de touros Nelore criados a pasto nos trópicos. Para o capítulo 2, Os objetivos do estudo foram: (1) avaliar a qualidade do sêmen bovino refrigerado transportado por 3 horas, nos sistemas passivos de transporte de sêmen BotuBOX® e BotuFLEX®, diluídos nos meios TRIS e BotuBOV®; e (2) avaliar a cinética espermática, estresse oxidativo, potencial mitocondrial e integridade de membrana plasmática e acrossomal do sêmen bovino pós-descongelação, diluídos nos meios TRIS e BotuBOV® e transportados nos sistemas passivos de transporte de sêmen BotuBOX® e BotuFLEX®. O sêmen de seis touros da raça Nelore (Bos taurus indicus), refrigeradas e congeladas em 2 meios diluentes TRIS e BotuBOV® e transportados em 2 sistemas de refrigeração BotuBOX® e BotuFLEX®. Em uma amostra de sêmen refrigerado foi realizada a análise subjetiva de motilidade (MOT) e vigor (VIG) e na amostra pós-descongelação, realizada a análise computadorizada da motilidade espermática (CASA) e por citometria de fluxo, avaliação de integridade de membrana plasmática e acrossomal (MPA), produção de superóxido (O2) e células íntegras (CI). Na análise pós-refrigeração, a MOT do sêmen na associação BotuBOV® e BotuFLEX® (69.4%) e TRIS e BotuFLEX® (62.9%), foram maiores (P<0.05) quando comparado à TRIS e BotuBOX®. A maior (P<0.05) MOT (45.9%) observada na análise subjetiva, MT (47.3%) e MP (37%) no CASA, MPAI (29%), CI (19.8%) e menor produção de O2- (82%) encontrados nas amostras pós-descongelação diluídas em meio BotuBOV® e transportados no sistema BotuFLEX®. Concluímos que o sêmen diluído no meio BotuBOV® e transportado na BotuBOX® ou BotuFLEX®, e diluído em meio TRIS e transportado na BotuFLEX® mantiveram a viabilidade seminal para uso do sêmen refrigerado, bem como o emprego para a congelação. A associação entre o meio diluente BotuBOV® e o sistema de transporte refrigerado de sêmen BotuFLEX® apresentou melhor efeito sobre o sêmen congelado em relação aos parâmetros de cinética espermática, integridade de membrana plasmática e acrossomal e redução do estresse oxidativo.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-26Bitstream added on 2014-06-13T19:38:31Z : No. of bitstreams: 1 crespilho_am_me_botfmvz.pdf: 507525 bytes, checksum: a1c92f545e77b50838125fbea8dfddd6 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A despeito das inúmeras variáveis que influenciam direta e indiretamente a fertilidade das fêmeas bovinas, a qualidade das amostras seminais exerce um papel importante na determinação das taxas de concepção dos programas de inseminação artificial. Os objetivos dessa pesquisa foram comparar a efetividade de dois diluidores de criopreservação de sêmen bovino no processamento de amostras seminais apresentando diferentes concentrações espermáticas em relação aos índices de congelabilidade determinados laboratorialmente (Experimento I) e as taxas de concepção proporcionadas por cada metodologia quando utilizada em programas de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) em bovinos (Experimento II). No Experimento I foram utilizados 14 ejaculados de diferentes touros da raça Nelore. Cada ejaculado foi fracionado em oito alíquotas iguais, submetidas a criopreservação com os diluidores Tris-gema de ovo-frutose (meio TRIS) e MKA nas concentrações de 12, 25, 50 e 100 milhões de espermatozóides totais por mililitro de meio, formando oito grupos experimentais em função das variáveis diluidor e concentração. As amostras foram descongeladas a 46 ºC por 20 segundos, avaliando-se os padrões de motilidade através do método computadorizado (CASA), integridade de membrana plasmática (IMP), resistência ao teste de termorresistência rápido (TTR) e taxa de recuperação e IMP após seleção espermática pela técnica de swim-up. Para o Experimento II foram selecionados sete touros utilizados no Experimento I, obtendo-se um ejaculado de cada animal por eletroejaculação... / Although there are many variables which directly or indirectly influence female bovine fertility, the quality of sperm samples plays a important role in the determination of conception rates in artificial insemination programs. The aim of the present study was to compare the efficiency of two bovine semen extenders for sperm freezing with different spermatic concentrations in the freezability determined by lab tests (Experiment I), and conception rates after fixed time artificial insemination (FTAI; Experiment II). In Experiment I 14 ejaculates of different Nelore bulls were used. Each ejaculate was splitsampled in to eight equal parts and then submitted to cryopreservation with Tris-egg yolk fructose (TRIS) and MKA extenders, at concentrations of 12, 25, 50 and 100 millions spermatozoa per milliliter forming eight experimental groups. The samples were thawed at 46 ºC for 20 seconds, and the following parameters were evaluated: sperm motility and movement (by computer-assisted semen analysis - CASA), sperm membrane integrity (SMI), resistance to the fast thermoresistance test (TT), recovery rate and sperm membrane integrity after sperm selection through swim-up technique. Seven of 14 bulls used in Experiment I were selected for Experiment II, and semen was collected from each of the animals by electroejaculation. The seven ejaculates obtained were mixed (semen pool) and cryopreserved, thus forming eight experimental groups according to the freezing extenders and sperm concentrations/straws: TRIS 12, 25, 50 and 100, and MKA 12, 25, 50 and 100...(Complete abstract, click electronic address below)