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Perfil proteico do plasma seminal de touros pantaneiros e sua relação com a congelabilidade do sêmen / Protein profile of the seminal plasma of pantaneiro bulls and their relation with semen freezability

Souto, Paula Lorena Grangeira 18 December 2013 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2013. / Submitted by Larissa Stefane Vieira Rodrigues (larissarodrigues@bce.unb.br) on 2014-11-05T11:13:14Z No. of bitstreams: 1 2013_PaulaLorenaGrangeiraSouto.pdf: 1190405 bytes, checksum: 29802022a038de84ea7e1b6c4dc4ba06 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-11-05T16:22:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_PaulaLorenaGrangeiraSouto.pdf: 1190405 bytes, checksum: 29802022a038de84ea7e1b6c4dc4ba06 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-05T16:22:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_PaulaLorenaGrangeiraSouto.pdf: 1190405 bytes, checksum: 29802022a038de84ea7e1b6c4dc4ba06 (MD5) / O bovino Pantaneiro é uma raça localmente adaptada que se desenvolveu no bioma Pantanal brasileiro ao longo de quase 500 anos sob pressão de seleção natural. Estudos acerca de animais localmente adaptados são essenciais para nortear as ações dos programas de conservação de recursos genéticos animais. Assim, o objetivo deste trabalho foi correlacionar o perfil eletroforético bidimensional das proteínas do plasma seminal com a congelabilidade do sêmen de touros Pantaneiros. Utilizou-se ejaculados de dezoito touros Pantaneiros, divididos em dois grupos: de melhor e de pior congelabilidade. As amostras de sêmen pré- criopreservação foram avaliadas quanto à motilidade, vigor e morfologia espermática e as amostras de sêmen pós-criopreservação, avaliadas quanto à cinética pelo CASA, morfologia, integridade de membrana e acrossoma. As amostras de plasma seminal foram obtidas por centrifugação do sêmen e as proteínas seminais separadas por meio de eletroforese bidimensional em géis de poliacrilamida (SDS-PAGE), corados com Coomassie coloidal G- 250 e analisados por meio do aplicativo PDQuest™. Foram detectados 277 spots nos mapas bidimensionais do plasma seminal de reprodutores Pantaneiros. Nove spots apresentaram associações consistentes e significativas com os parâmetros seminais pós-criopreservação. Destes spots, cinco apresentaram diferença (P<0,05) entre os grupos de melhor e pior congelabilidade do sêmen. A análise multivariada apontou cinco spots correlacionados positivamente com os parâmetros de boa congelabilidade do sêmen. Houve diferenças no perfil proteico do plasma seminal entre os reprodutores de melhor e de pior congelabilidade do sêmen e a análise dos géis revelou uma heterogeneidade nos perfis individuais. Devido à associação dos spots 8305, 9217, 2603, 3514 e 2227 a proteínas encontradas em amostras de sêmen de alta congelabilidade e também relacionadas a eventos benéficos sobre as funções espermáticas, sugere-se que a presença dos mesmos está ligada à melhor congelabilidade do sêmen de touros Pantaneiros. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Pantaneiro cattle is a locally adapted breed that has been developed in the brazilian Pantanal biome over almost 500 years under the pressure of natural selection. Studies on locally adapted breeds are essential to guide the actions of the programs for conservation of animal genetic resources. The aim of this study was to correlate the two-dimensional electrophoretic profile of seminal plasma proteins with semen freezability from Pantaneiro bulls. We used ejaculates from eighteen Pantaneiro bulls divided into two groups: best and worst freezability. The sperm parameters motility, viability and morphology were evaluated before cryopreservation and also were evaluated after cryopreservation and further were evaluated CASA kinetics, integrity membrane and acrosome. Seminal plasma samples were obtained by semen centrifugation and seminal proteins were separated by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The gels were stained with colloidal Coomassie G-250 and analyzed using the PDQuest™. Were detected 277 spots in two-dimensional maps of the seminal plasma of Pantaneiro bulls. Nine spots showed consistent and significant associations with semen parameters after cryopreservation. Five these spots showed differences (P<0.05) between freezability groups. The multivariate analysis showed five spots positively correlated with the semen parameters for good freezability. There were differences in the seminal plasma protein profile between bulls of best and worst semen freezability. The analysis of the gels also revealed heterogeneity in individual profiles. Due the association of spots 8305, 9217, 2603, 3514 and 2227 with proteins found in animals with high freezability of semen and it relating to beneficial events on sperm functions, it is suggested that their presence is linked to better semen freezability of Pantaneiro bulls.
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Pesquisa de novo método de congelação para preservação do sêmen de ovinos Santa Inês / Search for new method for freezing semen santa ines sheep

Lima, Fátima Revia Granja January 2010 (has links)
LIMA, Fátima Revia Granja. Pesquisa de novo método de congelação para preservação do sêmen de ovinos Santa Inês. 2010. 136 f. Tese (doutorado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2010. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-04-07T19:52:38Z No. of bitstreams: 1 2010_tese_frglima.pdf: 473036 bytes, checksum: b67fbda7b592feb111eebf33bdb65cc2 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-25T19:38:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_tese_frglima.pdf: 473036 bytes, checksum: b67fbda7b592feb111eebf33bdb65cc2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-25T19:38:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_tese_frglima.pdf: 473036 bytes, checksum: b67fbda7b592feb111eebf33bdb65cc2 (MD5) Previous issue date: 2010 / Three experiments were carried out aiming to evaluate the influence of different factors on parameter of post-thawing semen motility and pregnancy index of rams. The first one showed the influence of extender type (skim milk, HEPES and TRIS), freezing temperature (-79oC, -90oC and -120oC) and final concentration of sperm (600 x 106, 800 x 106 and 1000 x 106 sperm per mL) on semen motility parameters of Santa Ines rams. The second one experiment evaluated the influence of egg yolk types (chicken and quail) and its percentage (10% and 20%) on the characteristics of motility of frozen semen of rams. The last one experiment evaluated the effect of two artificial insemination techniques (cervical and laparoscopic) on pregnancy rate of ewes of two farms. Pregnancy rate were compared within and between farms. Body condition score and parturity order influence on pregnancy rate was also analyzed. The results of experiment 1 showed that using milk extender, motility and speed of sperm were different (P<0.05 on -79°C temperature) when compared to other temperatures. Considering HEPES extender, the temperature of -90°C was lower compared to the others. Using TRIS extender, there was no difference between freezing temperatures, but the motility was higher when compared to the other extenders, at all temperatures evaluated. Considering sperm percentage, progressive motility and fast speed as variables, the concentration of 600 x 106sperm per mL proved to be higher (P<0.05) than 800 x 106 sperm per mL. Considering the mean velocity of rapid sperm trajectory(VAPR), the extender skim milk used at a temperature of -79°C presented a lower percentage when compared to other temperatures. However, TRIS extender was higher (P>0.05) when compare to the others. No difference was detected (P>0.05) between concentrations considering the other extenders. In experiment 2, the percentage of motile sperm was different (P<0.05) using TRIS extender (10% of chicken egg yolk). The variables progressive motility and rapid motility of spermatozoa presented the best rates, using TRIS (10% of chicken egg yolk) and did not differ (P>0.05) from TRIS (10% of quail egg yolk). It was observed a higher percentage (P<0.05) of sperm with head defects in the treatments with the highest percentage of egg yolk (20%), independently of the yolk type used. There was no statistical difference (P>0.05) in other morphological sperm changes. In experiment 3, artificial insemination type influenced on pregnancy rate, even with frozen semen, showing superior results (P<0.05) using laparoscopic via, on both farms. There was no effect (P>0.05) of parturity order on insemination techniques, on both farms. However, the body condition score (ECC) influenced the insemination using cervical via, on farm 1. Therefore, it was concluded that TRIS extender, at a freezing temperature of -79°C and final concentration of 600 x 106 sperm per mL, proved to be the freezing protocol more suitable for Santa Ines rams semen, using the TK 3000 equipment. The percentage of 10% of chicken egg yolk was the best to preserve sperm motility parameters, however the egg yolk of quail showed up as an alternative to be added to the semen extender. Despite the in vitro evaluation of frozen semen in this experiment have been satisfactory, it was not enough to increase the pregnancy rates of inseminated females. It was also concluded that laparoscopy technique is the most indicated when frozen semen is used, in ovine species. / Foram realizados três experimentos com o objetivo de avaliar a influência de diferentes fatores sobre os parâmetros de motilidade do sêmen e taxas de gestação em ovinos. No primeiro experimento, foi verificado a influência do tipo de diluidor (Leite desnatado, HEPES e TRIS), temperatura de congelação (-79 oC, -90 oC, -120 oC) e concentração final dos espermatozóides (600 x 106, 800 x 106, 1000 x 106 espermatozóides por mL) sobre os parâmetros de motilidade do sêmen de ovinos Santa Inês. No segundo experimento, avaliou-se a influência dos tipos de gema de ovo (galinha caipira e codorna) e sua porcentagem (10% e 20%) sobre as características de motilidade do sêmen congelado de ovino. No terceiro experimento, avaliou-se o efeito de duas técnicas de inseminação artificial (via cervical e laparocópica) sobre a taxa de gestação de ovelhas de duas fazendas. As taxas de gestação foram comparadas dentro e entre as fazendas, sendo verificado também se estas foram influenciadas pela ordem de parto e escore corporal. Os resultados do experimento 1 mostraram que no diluidor Leite, a motilidade e a percentagem de espermatozóides rápidos diferiram na temperatura de -79 oC em relação às demais temperaturas. No diluidor HEPES, a temperatura de -90 oC foi inferior às demais. No diluidor TRIS, não houve diferença significativa entre as temperaturas de congelação, entretanto a motilidade foi superior aos demais diluidores em todas as temperaturas testadas. A concentração de 600 x 106 sptz/ mL para as variáveis percentagens de espermatozóides móveis, motilidade progressiva e velocidade rápida mostrou-se superior à de 800 x 106 sptz/ mL e 1000 x 106 sptz/ mL. Para a variável velocidade média da trajetória do espermatozóide rápido (VAPR), o diluidor Leite desnatado na temperatura de -79 oC apresentou superioridade às demais temperaturas, sendo o diluidor TRIS (10% de gema de ovo de galinha) superior aos demais. Não foram observadas diferenças estatísticas entre as concentrações nos demais diluidores. No experimento 2, a percentagem de espermatozóides móveis foi significativamente superior no diluidor TRIS (10% de gema de ovo de galinha). As variáveis motilidade progressiva e motilidade de espermatozóides rápidos apresentaram as melhores taxas no TRIS (10% de gema de ovo de galinha) e não diferiram estatisticamente do TRIS (10% de gema de ovo de codorna). Observou-se maior percentagem de espermatozóides com defeitos de cabeça nos tratamentos com maior percentual de gema de ovo (20%), independente do tipo de gema. Não houve diferença estatística com relação às outras alterações morfológicas espermáticas. No experimento 3, o tipo de inseminação artificial influenciou a taxa de prenhez, mesmo com sêmen congelado, mostrando resultados superiores pela via laparoscópica nas duas fazendas. Não houve efeito da ordem de parto e escore corporal para inseminação cervical em ambas as fazendas. Entretanto, estas variáveis influenciaram a inseminação via laparoscopia na Fazenda 2. Portanto, pode-se concluir que o diluidor TRIS, na temperatura de congelação de -79 oC e concentração final de 600 x 106 sptz/ mL, mostrou-se o protocolo de congelação, em equipamento TK 3000, mais apropriado para sêmen de carneiros Santa Inês. A percentagem de 10% de gema de ovo de galinha caipira foi a que melhor preservou os parâmetros de motilidade espermática, no entanto, a gema de ovo de codorna mostrou-se como uma alternativa a ser adicionada no diluidor de sêmen. Apesar da avaliação in vitro do sêmen congelado neste experimento ter sido satisfatória, este não foi suficiente para elevar as taxas de gestação das fêmeas inseminadas. Concluiu-se, ainda, que a técnica de laparoscopia é a mais indicada quando se usa sêmen congelado na espécie ovina.
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Criopreservação de sêmen de jundiá amazônico (Leiarius marmoratus) e pintado (Pseudoplatystoma corruscans) / Semen cryopreservation of amazon catfish (Leiarius marmoratus) and spotted catfish (Pseudoplatystoma corruscans)

Borges, Adalmyr Morais 22 February 2018 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-25T16:41:27Z No. of bitstreams: 1 2018_AdalmyrMoraisBorges.pdf: 5438238 bytes, checksum: d936e356826ef0abd06970160cde3b2b (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-31T19:17:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_AdalmyrMoraisBorges.pdf: 5438238 bytes, checksum: d936e356826ef0abd06970160cde3b2b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-31T19:17:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_AdalmyrMoraisBorges.pdf: 5438238 bytes, checksum: d936e356826ef0abd06970160cde3b2b (MD5) Previous issue date: 2018-07-25 / O estudo buscou avaliar diferentes alternativas para o congelamento do sêmen de jundiá amazônico e de pintado e a melhoria da qualidade pos-descongelamento, contribuindo para o desenvolvimento de protocolos para as duas espécies. Entre as abordagens avaliadas foram: (1) a caracterização morfológica dos espermatozoides de jundiá amazônico com o uso de microscopia eletrônica de varredura e de transmissão; (2) a utilização de diferentes agentes crio protetores, para o jundiá amazônico: metanol, dimetilsulfoxido e etilenoglicol a 10%, associados a solução de glicose a 5% e para o pintado: metanol, dimetilsulfoxido e dimetilacetamida a 5%, 7,5% e 10%, associados a solução de BTS a 5%; e (3) a adição de substancias antioxidantes nos meios de congelamento para o pintado: trealose 100 mM, acido ascórbico 1 mM e α-tocoferol 0,1 mM. Para ambas espécies, o sêmen foi envasado em palhetas de 0,25 mL e congelado em vapor de nitrogênio, utilizando botijão dry shipper, e descongelado a 40oC por 12 segundos. No jundiá amazônico, o espermatozoide apresentou o comprimento total de 25,46 } 2,54 μm, cabeça esférica (1,51 } 0,18 μm) ausência de acrossoma, peca intermediaria de formato cônico, ligeiramente assimétrica com presença de vesículas, e comprimento de 0,93 } 0,17 μm, e flagelo com arranjo típico e comprimento de 21,48 } 2,45 μm. O sêmen descongelado apresentou valores mais altos (p<0,05) para duração, vigor e taxa de mobilidade espermática com os crio protetores metanol 10% e dimetilsulfoxido 10% quando comparado com o etilenoglicol 10%. No pintado, o sêmen criopreservado com metanol 7,5% e 10% apresentou valores para duração e taxa de mobilidade maiores (p<0,05) comparado com o dimetilsulfoxido e dimetilacetamida. O tratamento com os três antioxidantes associados proporcionou taxa de mobilidade maior (p<0,05) em relação ao tratamento sem antioxidantes. Para os parâmetros de duração e taxa de mobilidade foi observada interação significativa (p<0,05) entre o acido ascórbico e o α-tocoferol. Assim, os resultados obtidos na criopreservação de sêmen de jundiá amazônico não foram suficientes para estabelecer um protocolo para a espécie. Na criopreservação de sêmen de pintado e recomendado o uso do metanol a 7,5% associado a solução de BTS a 5%, e a adição conjunta dos antioxidantes trealose (100mM), acido ascórbico (1mM) e α-tocoferol (0,1mM). / This study aimed to evaluate different alternatives for the semen freezing of amazon catfish and spotted catfish, contributing to the development of protocols for both species increasing the process efficiency in both species. Among the approaches used are (1) morphological characterization of amazon catfish spermatozoa using scanning and transmission electron microscopy; (2) use of different cryoprotectant agents, 10% methanol, dimethylsulfoxide and ethyleneglycol, associated 5% glucose solution in amazon catfish, and 5%, 7,5% e 10%, methanol, dimethylsulfoxide and dimethyacetamide, associated 5% BTS solution in spotted catfish; and (3) addition of antioxidants in the freezing media, trehalose (100 mM), ascorbic acid (1 mM) and α- tocopherol (0.1 mM) in spotted catfish. In both especies, semen samples were loaded in 0.25 mL plastic straws, frozen in nitrogen vapour (dry shipper) and thawed at 40oC for 12 seconds. In the amazon catfish, fresh spermatozoon was 25.46 } 2.54 μm long, head was spherical (1.51 } 0.18 μm) with no acrosome, midpiece was coneshapped with presence of vesicles, slightly asymmetric, 0.93 } 0.17 μm long and the single fagellum was 21.48 } 2.45 μm long with the typical arrangement. Postthawed semen presented higher values (p<0.05) for duration, vigor and sperm motility rate with cryoprotectants 10% methanol and 10% DMSO, when compared to 10% ethyleneglycol. In the spotted catfish, the cryopreserved semen with 7,5% and 10% methanol presented higher values (p<0.05) for latency time and motility rate compared to dimethylsulfoxide and dimethyacetamide. The treatment with associated antioxidants provided a higher motility rate (p<0.05) compared to the antioxidant-free treatment. For the parameters of latency time and motility rate, a significant interaction (p<0.05) was observed between ascorbic acid and α-tocopherol. In conclusion, the results observed in semen cryopreservation of amazon catfish were not satisfactory to establish a protocol for the specie. For the semen cryopreservation of spotted catfish, it is recommended the use of 7.5% methanol with the 5% BTS solution and the addition of the antioxidants trehalose (100 mM), ascorbic acid (1 mM) and α-tocopherol (0.1 mM).

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